常用病原学检测课件

3200 Base Pair Genome
HBV DNA Polymerase
HBsAg
Both comprised of HBsAg
HBV nomenclature
• HBV: hepatitis B virus • HBsAg: hepatitis B virus surface antigen • HBsAb: hepatitis B virus surface antibody • HBcAg: hepatitis B virus core antigen • HBcAb: hepatitis B virus core antibody • HBeAg: hepatitis B virus e antigen • HBeAb: hepatitis B virus e antibody
病毒感染的微生物学检查法
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ELISA for HIV antibody
Microplate ELISA for HIV antibody: coloured wells indicate reactivity
病毒的数量与感染性测定
•蚀斑测定：准确滴定病毒感染性的方法
–蚀斑（Plaque） –每个蚀斑是由一个有感染性病毒颗粒形成，称为蚀斑形成单位 （Plaque forming unit，PFU）。病毒的感染量用PFU/ml表示
HBV virion
The infectious virion is called the DANE particle.
HBV Viral Genome Organization
HBcAg HBeAg
Hepatocyte receptor bindng site
Protein that transactivates transcriptional promotors
②分离培养
大多数细菌的形态与染色并无显著特异性，因此需要分离培 养。如肠道杆菌均为G-杆菌，菌落形态亦相同。 培养特征：化脓性链球菌---小而透明、溶血环。
②分离培养
• 生化试验：如肠道杆菌进行乳 糖发酵试验。
• 血清学试验：已知抗体测抗原 或已知抗原测病人血清中相应 的抗体。如玻片凝集，鉴定菌 种和型。
革兰染色法（Gram Stain）
由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。 1.步骤
革兰阳性菌
(Gram positive bacteria)
涂片
结晶紫 碘液 染色 媒染
酒精 脱色
革兰阴性菌
(Gram negative bacteria)
复红 复染
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①直接涂片染色镜检
适用于具有特征性形态和染色性的病原菌,如葡萄球 菌、脑膜炎奈瑟菌、抗酸染色阳性的结核分枝杆菌等。
• 动物试验：测定细菌的毒力、 病原菌的分离和鉴定。
原理：已知③抗体血测清未知学抗诊原进断行病原菌的鉴定或用
已知抗原检测患者体液中有无相应特异性抗体和其 效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。
标本：双份血清标本，恢复期血清抗体效价比急性 期升高≥4倍者方有意义。单份血清效价超过一定 标准才有诊断意义。
临床病原学检查
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临床病原体检查目的
临床病原体检查目的: 是确定感染的发生和性质，在疾病早期提供
恰当的治疗方案，并采取有效的预防措施， 防止感染传播造成的危害。
各种不同病原体的实验诊断方法遵 循以下基本原则
1.正确、规范采集和运送标本。 2.直接显微镜查见病原体或检出病原体抗原，借助分子 生物学的方法检测病原体核酸，结合病人的病史、症状 或体征，快速作出初步诊断。 3.初步诊断同时，对病原体进行分离与鉴定。 4.检测机体对病原体的免疫产物。 5.参与临床选择抗菌药物，指导和监控微生物的治疗方 案，避免 耐药菌株的产生。
种类：凝集试验、沉淀试验、中和试验、补体结合 试验。
常用的血清学诊断方法
类型
诊断应用举例
直接凝集试验 伤寒和副伤寒（肥达试验）、立克次体（外斐试验）、 钩端螺旋体（显微凝集试验）
乳胶凝集试验 检测脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌等抗体
沉淀试验
梅毒（VDRL、RPR试验）
补体结合试验 检测Q热柯克斯体等抗体
酸杂交技术、PCR技术、DNA芯片技术等）
细菌感染检查检验特点
•通过对标本直接显微镜检，病原菌的分离培养鉴定， 病原菌的抗原检测，核酸检测和细菌感染后机体免 疫应答产物的测定及药物的测定及药物敏感性试验， 对细菌感染性疾病可作出及时、准确的病原学诊断。
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Diagnosis Strategy for Bacterial Infection
中和试验 ELISA
风湿热（抗O试验） 广泛用于病原体的诊断和流行病学调查
玻片凝集试验
试管凝集试验
酶联免疫吸附试验
④细菌的快速鉴定
API细菌数值鉴定系统
PCR技术
姬姆萨染色衣原体包涵体
HSV病毒
被支原体感染的精子
梅毒螺旋体
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检测程序
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病毒感染的微生物学检查法
Diagnosis Strategy for Viral Infection
病原学诊断
细菌学诊断 病毒学诊断 真菌学诊断
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致病菌的检验程序和常用项目
形态学检查
直接涂片 染色镜检
初步诊断
分离培养 形态特征
（常规培养或
生化试验
特殊培养）
血清学试验 动物实验
明 确
血清学诊断
诊
（凝集试验、 沉淀反应、免疫标记技术等）
细菌的快速鉴定
断
药 物 敏 感 试
验
(微生物数字编码分类鉴定法、血培养自动化检测系统、核
体液
ห้องสมุดไป่ตู้
体液
体液
粪便
传播途径 粪-口
慢性感染 否 基因组类型 ssRNA
经皮肤/ 经粘膜
是
dsDNA
经皮肤/ 经粘膜
是
ssRNA
经皮肤/ 经粘膜
是
ssRNA
粪-口
否 ssRNA
Hepatitis B Virus
• 乙型肝炎的病原体 • 在全世界广泛流行，估计全球半数以上人
口已被HBV感染过，5%的人口为HBV慢性感 染 • 中国：乙肝高发区，人群HBsAg的检出率达 9.8%
•50%感染量（ID50）或50%组织细胞感染量（TCID50）
–不能准确地测定感染性病毒颗粒的数量
乙型肝炎的病原学诊断
病毒性肝炎- 背景
病毒性肝炎
Hepatitis Virus
A
E 肠道传播
NANB
BD
C 肠道外传播
F, TTV ? 其他
病毒性肝炎类型
A
B
C
D
E
传染源
粪便
血液/
血液/
血液/
血源性物质/ 血源性物质/ 血源性物质/