常用病原学检测课件
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临床病原学检查知识PPT课件
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13
那些有正常菌群寄居的腔道分泌物，涂片镜检虽不 能确定诊断，但对进一步检出的步骤、采用的方法 和分离鉴定病原体所需培养基有重要提示作用，如 在米泔水样便的悬滴片动力检查，发现有运动活泼 的鱼群样弧菌，常提示弧菌科细菌感(thiosulfatecitrate-bile saltssucrose，TCBS)选择培养基。组织标本和疱疹分泌 物涂片经瑞特染色后，查见多核巨细胞和核内嗜酸 性包涵体可早期诊断疱疹病毒感染。临床上不常规 应用电镜检查，但对某些病毒感染有确诊价值，如 婴幼儿急性胃肠炎腹泻粪便电镜下查见车轮状的双 层衣壳病毒颗粒即可诊断为轮状病毒感染。常用的 电镜技术有超薄切片标本电镜观察、负染标本电镜 观察和免疫电镜技术。
临床病原学检查
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1
不同病原体(细菌、螺旋体、支原体、放线菌、
衣原体、立克次体、病毒、真菌、原虫、蠕虫)
所致感染性疾病的实验诊断方法各有其特点，
但几乎都遵循以下基本原则：①正确、规范采
集和运送标本；②通过直接显微镜查见病原体
或检出病原体抗原成分；③借助分子生物学的
方法检测病原体核酸；④利用免疫学方法检测
机体对病原体抗原成分产生的免疫产物；⑤对
病原体进行分离与鉴定。在完成病原体的检出
和鉴定任务后，结合病人的病史、症状或体征，
快速作出诊断。并积极参与临床选择抗微生物
药物，指导和监控微生物的治疗方案，避免耐
药菌株的产生。
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2
标本采集和运送 ：
根据各种病原体所致感染性疾病的病程确定 标本采集的时间、部位和种类。所有采集的 标本均置于无菌或清洁容器中，不能接触消 毒剂和抗菌药物。 标本必须注明姓名、年 龄、性别、采集日期、临床诊断、检验项目 等。标本采集后应按要求处理，立即送往病 原学实验室，对于烈性传染病材料的运送需 专人护送。
临床病原学检查ppt详解.
DNA/RNA——PCR、DNA探针杂交技术
第18页，共48页。
第二节 细菌耐药性检查
第19页，共48页。
一.抗微生物药物敏感性试验（AST）
1.定义：对敏感性不能预测的临床分离菌 株进行药敏试验，以指导临床选择治疗 药物和了解区域或医院内常见病原菌耐 药性变迁，有助于临床经验性治疗选药。
第20页，共48页。
医院感染检查
7.医院感染常见病原菌监测
尿液标本
病原菌——大肠埃希菌，变形杆菌，肺
炎克雷伯氏菌，肠球菌，金黄色葡萄球 菌，铜绿色假单胞菌
菌落计数>104/ml以上——尿路感染
第41页，共48页。
医院感染检查
7. 医院感染常见病原菌监测
痰（咽拭子）培养 病原菌——肺炎链球菌，肺炎克雷伯氏
菌，大肠埃希菌，肠球菌，金黄色葡萄 球菌，铜绿色假单胞菌等
• 封闭性脓肿：无菌注射器穿刺抽取
第12页，共48页。
二.病原体检查的基本方法
1.临床标本细菌检验一般程序
第13页，共48页。
一般程序
标本
直接涂片，染色镜检 分离培养
需氧培养
二氧化碳培养
观察菌落形态
单个菌落
血清学鉴定
生化鉴定
确定致病菌发出报告
增菌培养 厌氧培养
涂片、染色镜检 药敏试验
第14页，共48页。
（优选）临床病原学检查课件
第1页，共48页。
掌握：感染性疾病的诊断和治疗原则 熟悉：感染性疾病病原学实验诊断及抗
生素治疗的主要实验室监测方法 了解：病原学诊断的重要性，现代感染的
类型和病原微生物的变迁
第2页，共48页。
病原体检查的作用
1.感染性疾病的明确诊断 2.通过药敏试验指导临床合理用药 3.病原体监控和耐药性监控
第18页，共48页。
第二节 细菌耐药性检查
第19页，共48页。
一.抗微生物药物敏感性试验（AST）
1.定义：对敏感性不能预测的临床分离菌 株进行药敏试验，以指导临床选择治疗 药物和了解区域或医院内常见病原菌耐 药性变迁，有助于临床经验性治疗选药。
第20页，共48页。
医院感染检查
7.医院感染常见病原菌监测
尿液标本
病原菌——大肠埃希菌，变形杆菌，肺
炎克雷伯氏菌，肠球菌，金黄色葡萄球 菌，铜绿色假单胞菌
菌落计数>104/ml以上——尿路感染
第41页，共48页。
医院感染检查
7. 医院感染常见病原菌监测
痰（咽拭子）培养 病原菌——肺炎链球菌，肺炎克雷伯氏
菌，大肠埃希菌，肠球菌，金黄色葡萄 球菌，铜绿色假单胞菌等
• 封闭性脓肿：无菌注射器穿刺抽取
第12页，共48页。
二.病原体检查的基本方法
1.临床标本细菌检验一般程序
第13页，共48页。
一般程序
标本
直接涂片，染色镜检 分离培养
需氧培养
二氧化碳培养
观察菌落形态
单个菌落
血清学鉴定
生化鉴定
确定致病菌发出报告
增菌培养 厌氧培养
涂片、染色镜检 药敏试验
第14页，共48页。
（优选）临床病原学检查课件
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掌握：感染性疾病的诊断和治疗原则 熟悉：感染性疾病病原学实验诊断及抗
生素治疗的主要实验室监测方法 了解：病原学诊断的重要性，现代感染的
类型和病原微生物的变迁
第2页，共48页。
病原体检查的作用
1.感染性疾病的明确诊断 2.通过药敏试验指导临床合理用药 3.病原体监控和耐药性监控
临床免疫学与病原学检查课件
（一）血清抗链球菌溶血素“O”试 验
链球菌溶血素“O” 是一种A群溶血性链球菌的 毒素，属蛋白质，能溶解红细胞，杀伤白细胞和血 小板，它具有抗原性，可使人产生相应抗体，称抗 链球菌溶血素“O” （anti-streptolysin “O” ,ASO） ，也叫抗O或ASO。
一般当机体受到A群溶血性链球菌感染2-3周， 血清中出现抗O，这种抗体滴度直至病愈后数月到 半年才下降至正常水平。
一、肝炎标志物的检测： 1．甲型肝炎病毒标志物的检测
（1）甲型肝炎病毒抗原和RNA测定： ELISA和RT-PCR法
（2）甲型肝炎病毒抗体测定：ELISA （3）甲型肝炎病毒抗体IgM阳性表明机体
正在感染甲肝，它是早期诊断甲肝的 特异性指标。而IgG阳性提示既往感 染，可作为流行病学调查的指标。
HAV 病毒图谱
乙肝血清转换图
HBsAg HBsAb HBeAg HBeAb HBcAb
1+ -
--
2+ - + -
3+ - + -
4+ -
-+
5-
-
-+
6-
-
--
7- + - +
8- + - -
9- + - -
10 + + + -
- 携带者 - 急性感染早期,HBV复制活跃 + 急性或慢性感染,复制活跃 + 急性或慢性感染,复制减弱或停止 + 既往感染,未出现表抗,窗口期 + 既往感染,未出现表抗,窗口期 + 恢复期 + 恢复期 - 病后或接种疫苗后获得性免疫 + 不同亚型的感染
病原学诊断PPT课件
第八章 病原学诊断
细菌学诊断 病毒学诊断 真菌学诊断
1
细菌学诊断
Diagnosis of bacteria
2019/8/27
2
细菌学诊断
病原菌检测
细菌学诊断：以检测病原菌及其抗原、产物 病原菌抗原检测
或核酸为目的。
其他检测法：PCR等
血清学诊断：以检测患者血清中特异抗体为目的。
3
病原菌检测
复染：碱性美兰
8
细菌分离和鉴定
分离培养是微生物学诊 断的金标准，是最可靠的传 统诊断技术。
细菌学诊断
9
致病菌的检验程序
细菌学诊断
普通琼脂平板
血平板
标本 选择培养基 观分培察菌离养涂落片性、状染、色溶、血镜性检、色素——初步鉴别
挑取可疑菌落
生化反应测定
纯培养
血清学鉴定
10
致病菌的检验程序
培养特征 形态特征 生化试验 血清学试验 动物试验 药物敏感试验
缽袸谾湏渴奝氰怑恗鷙坪犣溪墂阆誂
鼣崓狺匭尭猥珃鄯足惌缡挷媪晗去唴
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炒鐛穃玲鸒偆谬镋蹌触砒戻乸暼涀婕
东犿躲舏蓬旧鬘清偐聮冖埊佁湘詫嵅
织竞釕矅哇鳍德蝺蝫谲嚏獞燸辻玅嵼
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2019/8/27
34
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细菌学诊断 病毒学诊断 真菌学诊断
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细菌学诊断
Diagnosis of bacteria
2019/8/27
2
细菌学诊断
病原菌检测
细菌学诊断：以检测病原菌及其抗原、产物 病原菌抗原检测
或核酸为目的。
其他检测法：PCR等
血清学诊断：以检测患者血清中特异抗体为目的。
3
病原菌检测
复染：碱性美兰
8
细菌分离和鉴定
分离培养是微生物学诊 断的金标准，是最可靠的传 统诊断技术。
细菌学诊断
9
致病菌的检验程序
细菌学诊断
普通琼脂平板
血平板
标本 选择培养基 观分培察菌离养涂落片性、状染、色溶、血镜性检、色素——初步鉴别
挑取可疑菌落
生化反应测定
纯培养
血清学鉴定
10
致病菌的检验程序
培养特征 形态特征 生化试验 血清学试验 动物试验 药物敏感试验
缽袸谾湏渴奝氰怑恗鷙坪犣溪墂阆誂
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2019/8/27
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细菌与病毒的病原学检查法PPT课件
血凝抑制试验
病毒+红细胞 血凝现象
病毒+抗体+红细胞 血凝现象消失
用于流感病毒、副流感病毒的诊断、流行 病学调查及鉴定病毒的型和亚型。
ELISA法：HSV、CMV、EB病毒等
蛋白印迹技术：用已知物学检查法：病原体检查，核 酸检测，抗原、抗体检测 ➢病毒感染的微生物学检查法：电镜检查，病毒 的分离培养和鉴定，核酸检测，抗原、抗体检测
病毒抗原的检测：HIV和HBV抗原
病毒核酸的检测
A
B
C
A：未感染的成纤维细胞。 B：单纯疱疹病毒感染后使细胞变圆。 C：呼吸道合胞病毒感染后出现细胞融合。
五、病毒抗体的检测：
中和试验：
阳性：可能以前有过隐性感染，用于 流行病学调查。
补体结合试验：
用已知病毒的可溶性抗原检测病人血
清中有无相应抗体，作为近期感染的 指标。
三、病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标
细胞的变化：CPE 红细胞吸附（HAd）： 红细胞凝集： 病毒干扰作用：风疹病毒，埃可病毒,Vero细
胞。
中和试验（NT）：是病毒在活体内或细胞培
养中被特异性抗体中和而失去感染性的一种试验
空斑形成试验：蚀斑形成单位（PFU），感染
性病毒的滴度用PFU/ml表示。
四、病毒成分的检测
取双份血清，抗体效价比早期高4倍以上有意
义。
二、病毒分离培养的方法
1、动物接种
常用动物：小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、猴
等；
接种途径：皮下、皮内、脑内、腹腔、静
脉等接种；
观察：动物出现感染症状，取病变组织进
一步检查
2、鸡胚培养：孵化9～14天的鸡胚
接种途径有：绒毛尿囊膜、羊膜腔、尿囊
《病原学诊断与防治》PPT课件
寄生虫的诊断
通过粪便检查、血液检查、组织活检等方法进行诊断。
防治方法
使用驱虫药、改善饮食卫生、加强环境卫生等措施。
其他病原体的诊断与防治
其他病原体的诊断
根据不同病原体特点，采用相应的检测方法进行诊断。
防治方法
针对不同病原体采取相应的防治措施，如使用抗真菌药物、抗病毒药物等。
04
病原学防治策略与措施
病原体防治新技术研究进展
基因编辑技术
基因编辑技术如CRISPR-Cas9等在病原体防 治中具有广泛应用前景，可用于编辑病原体 基因、抑制病原体复制或增强宿主免疫应答 等。
新型疫苗技术
新型疫苗技术如mRNA疫苗等在病原体防治 中具有重要价值，可快速开发针对新型病原 体的疫苗，提高疫苗接种覆盖率和保护率。
寄生虫
依赖宿主生存，可引起 消化道、神经系统等疾
病。
病原体的传播方式与途径
01
02
03
04
空气传播
通过飞沫、尘埃等传播，如流 感病毒。
接触传播
通过直接或间接接触传播，如 皮肤感染。
食物传播
通过污染的食物或水源传播， 如霍乱弧菌。
生物媒介传播
通过昆虫、动物等媒介传播， 如疟原虫。
02
病原学诊断方法
03
常见病原体的诊断与防治
细菌的诊断与防治
细菌的诊断
通过细菌培养、显微镜检查、免疫学 检测等方法进行诊断。
防治方法
使用抗生素、提高免疫力、改善环境 卫生等措施。
病毒的诊断与防治
病毒的诊断
通过病毒分离、抗原检测、核酸检测 等方法进行诊断。
防治方法
使用抗病毒药物、疫苗接种、提高免 疫力等措施。
寄生虫的诊断与防治
通过粪便检查、血液检查、组织活检等方法进行诊断。
防治方法
使用驱虫药、改善饮食卫生、加强环境卫生等措施。
其他病原体的诊断与防治
其他病原体的诊断
根据不同病原体特点，采用相应的检测方法进行诊断。
防治方法
针对不同病原体采取相应的防治措施，如使用抗真菌药物、抗病毒药物等。
04
病原学防治策略与措施
病原体防治新技术研究进展
基因编辑技术
基因编辑技术如CRISPR-Cas9等在病原体防 治中具有广泛应用前景，可用于编辑病原体 基因、抑制病原体复制或增强宿主免疫应答 等。
新型疫苗技术
新型疫苗技术如mRNA疫苗等在病原体防治 中具有重要价值，可快速开发针对新型病原 体的疫苗，提高疫苗接种覆盖率和保护率。
寄生虫
依赖宿主生存，可引起 消化道、神经系统等疾
病。
病原体的传播方式与途径
01
02
03
04
空气传播
通过飞沫、尘埃等传播，如流 感病毒。
接触传播
通过直接或间接接触传播，如 皮肤感染。
食物传播
通过污染的食物或水源传播， 如霍乱弧菌。
生物媒介传播
通过昆虫、动物等媒介传播， 如疟原虫。
02
病原学诊断方法
03
常见病原体的诊断与防治
细菌的诊断与防治
细菌的诊断
通过细菌培养、显微镜检查、免疫学 检测等方法进行诊断。
防治方法
使用抗生素、提高免疫力、改善环境 卫生等措施。
病毒的诊断与防治
病毒的诊断
通过病毒分离、抗原检测、核酸检测 等方法进行诊断。
防治方法
使用抗病毒药物、疫苗接种、提高免 疫力等措施。
寄生虫的诊断与防治
支原体肺炎诊断及病原学检测ppt演示课件
了解肺部炎症情况，排除其他 肺部疾病。
1. 收集病史
了解患者症状、体征及既往病 史，包括发热、咳嗽、咳痰、 肺部听诊等。
3. 实验室检查
进行血常规、尿常规、CRP、 血沉等检查，以评估病情严重 程度及排除其他感染。
5. 病原学检测
采集患者咽拭子、痰液等标本 进行支原体培养及核酸检测， 以确定病原体。
特点包括起病缓慢、 症状较轻，如咳嗽、 发热等，与感冒相似 。
流行病学及危害
流行病学
MP主要通过飞沫传播，可引起群 体性感染。
危害
可导致严重的呼吸系统感染，甚 至危及生命。
临床表现及诊断
01
02
03
临床表现
咳嗽、发热、胸痛、气促 等。
诊断
根据症状、体征和影像学 检查进行诊断。
实验室检查
血清MP-IgM抗体阳性可 协助诊断。
鉴别诊断及排除标准
1. 与病毒性肺炎鉴别
支原体肺炎与病毒性肺炎在症状和体征上有相似之处，但 病毒性肺炎通常病程较短，对症治疗有效，而支原体肺炎 病程较长，需要使用抗生素治疗。
2. 与细菌性肺炎鉴别
细菌性肺炎通常白细胞和中性粒细胞比例升高，使用抗生 素治疗有效，而支原体肺炎使用抗生素治疗有效。
3. 排除其他病原体感染
尽管糖皮质激素和丙种球蛋白等免疫抑制剂在治疗重症患者中取得一定效果，但对于免疫 调节治疗的最佳方案仍需进一步研究。
未来研究展望及发展趋势
诊断技术的进一步发展
未来，随着生物技术的不断发展，期待有更快速、简便且准确的诊断方法问世，以便早期准确诊断支原体肺炎。
新药研发与治疗策略改进
针对耐药性问题，开发新的药物和改进治疗策略势在必行。未来研究应关注新药的研发及不同药物之间的协同作用， 提高治疗效果。
1. 收集病史
了解患者症状、体征及既往病 史，包括发热、咳嗽、咳痰、 肺部听诊等。
3. 实验室检查
进行血常规、尿常规、CRP、 血沉等检查，以评估病情严重 程度及排除其他感染。
5. 病原学检测
采集患者咽拭子、痰液等标本 进行支原体培养及核酸检测， 以确定病原体。
特点包括起病缓慢、 症状较轻，如咳嗽、 发热等，与感冒相似 。
流行病学及危害
流行病学
MP主要通过飞沫传播，可引起群 体性感染。
危害
可导致严重的呼吸系统感染，甚 至危及生命。
临床表现及诊断
01
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临床表现
咳嗽、发热、胸痛、气促 等。
诊断
根据症状、体征和影像学 检查进行诊断。
实验室检查
血清MP-IgM抗体阳性可 协助诊断。
鉴别诊断及排除标准
1. 与病毒性肺炎鉴别
支原体肺炎与病毒性肺炎在症状和体征上有相似之处，但 病毒性肺炎通常病程较短，对症治疗有效，而支原体肺炎 病程较长，需要使用抗生素治疗。
2. 与细菌性肺炎鉴别
细菌性肺炎通常白细胞和中性粒细胞比例升高，使用抗生 素治疗有效，而支原体肺炎使用抗生素治疗有效。
3. 排除其他病原体感染
尽管糖皮质激素和丙种球蛋白等免疫抑制剂在治疗重症患者中取得一定效果，但对于免疫 调节治疗的最佳方案仍需进一步研究。
未来研究展望及发展趋势
诊断技术的进一步发展
未来，随着生物技术的不断发展，期待有更快速、简便且准确的诊断方法问世，以便早期准确诊断支原体肺炎。
新药研发与治疗策略改进
针对耐药性问题，开发新的药物和改进治疗策略势在必行。未来研究应关注新药的研发及不同药物之间的协同作用， 提高治疗效果。
细菌病原学检查PPT课件
L/O/G/O
细菌病原学检查
微生物
概念
微生物是存在于自然界
的一大群形体微小，结构简 单，肉眼直接看不见，必须 借助光学显微镜或电子显微 镜放大数百倍或数万倍才能
种类
病毒 细菌 放线菌 螺旋体 立克次氏体 支原体 衣原体 真菌和原虫
观察的微小生物。
标本采集
标本采集的一般原则：早期采集、无菌操作、根据目的 菌的特征用不同的方法采集、采集适量的标本、安全采集
采集方法
采集清洁中段尿，最好留取早 晨清洁中段尿标本 ，嘱咐患者睡前 少饮水，清晨起床后用肥皂水清洗 会阴部，女性应用手分开大阴唇， 男性应翻上包皮，仔细清洗，再用 清水冲洗尿道口周围；开始排尿， 将前段尿排去，中段尿约10-20ml直 接排入专用的无菌容器中，立即送 检，2小时内接种。该方法简单、 易行，是最常用的尿培养标本收集 方法，但很容易受到会阴部细菌污 染，应由医护人员采集或在医护人 员指导下由患者正确留取。
采血量
自动化仪器要求成人采血量是8-10ML/瓶，儿童1-5ML/瓶，手工配制培养基要 求血液和肉汤之比为1：5-1：10，以稀释血液中的抗菌药物、抗体等杀菌物质。
血液
血培养次数和采血时间
只要怀疑血液细菌感染，应立刻采集，采血培养应该尽量在使用抗菌药物之前 进行，在24小时内采集2-3次做血培养（一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为 单份，血培养）。入院前2周内接受 抗菌药物的患 者选用 能中和或吸附抗菌药物 的培养基。对间歇性寒战高热或体温高峰到来之前0。5-1小时采集血液，或于寒战 或发热后1小时进行。 特殊的全身性和局部感染患者采血培养的建议： 1、可疑急性原发性菌血症、真菌菌血症、脑膜炎、骨髓炎、关节炎或肺炎， 应在不同部位采集2-3份血标本 。 2、不明原因发热，如隐性脓肿，伤寒和波浪热，先采集2-3份血标本，24-36小 时后估计体温升高之前（通常在下午）再采集2 份以上， 3、可疑菌血症或真菌菌血症，但血培养持续阴性，应改变培养方法，以获得 罕见的或苛养的微生物。 4、可疑细菌性心内膜炎，在1-2小时内采集份血标本，如果24小时后阴性，再 采集2份血标本 。
细菌病原学检查
微生物
概念
微生物是存在于自然界
的一大群形体微小，结构简 单，肉眼直接看不见，必须 借助光学显微镜或电子显微 镜放大数百倍或数万倍才能
种类
病毒 细菌 放线菌 螺旋体 立克次氏体 支原体 衣原体 真菌和原虫
观察的微小生物。
标本采集
标本采集的一般原则：早期采集、无菌操作、根据目的 菌的特征用不同的方法采集、采集适量的标本、安全采集
采集方法
采集清洁中段尿，最好留取早 晨清洁中段尿标本 ，嘱咐患者睡前 少饮水，清晨起床后用肥皂水清洗 会阴部，女性应用手分开大阴唇， 男性应翻上包皮，仔细清洗，再用 清水冲洗尿道口周围；开始排尿， 将前段尿排去，中段尿约10-20ml直 接排入专用的无菌容器中，立即送 检，2小时内接种。该方法简单、 易行，是最常用的尿培养标本收集 方法，但很容易受到会阴部细菌污 染，应由医护人员采集或在医护人 员指导下由患者正确留取。
采血量
自动化仪器要求成人采血量是8-10ML/瓶，儿童1-5ML/瓶，手工配制培养基要 求血液和肉汤之比为1：5-1：10，以稀释血液中的抗菌药物、抗体等杀菌物质。
血液
血培养次数和采血时间
只要怀疑血液细菌感染，应立刻采集，采血培养应该尽量在使用抗菌药物之前 进行，在24小时内采集2-3次做血培养（一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为 单份，血培养）。入院前2周内接受 抗菌药物的患 者选用 能中和或吸附抗菌药物 的培养基。对间歇性寒战高热或体温高峰到来之前0。5-1小时采集血液，或于寒战 或发热后1小时进行。 特殊的全身性和局部感染患者采血培养的建议： 1、可疑急性原发性菌血症、真菌菌血症、脑膜炎、骨髓炎、关节炎或肺炎， 应在不同部位采集2-3份血标本 。 2、不明原因发热，如隐性脓肿，伤寒和波浪热，先采集2-3份血标本，24-36小 时后估计体温升高之前（通常在下午）再采集2 份以上， 3、可疑菌血症或真菌菌血症，但血培养持续阴性，应改变培养方法，以获得 罕见的或苛养的微生物。 4、可疑细菌性心内膜炎，在1-2小时内采集份血标本，如果24小时后阴性，再 采集2份血标本 。
微生物第八章病原学诊断与防治PPT课件
▪ 用已知的细菌或抗原检测患者体液中有无相应特异性抗体 和其效价的动态变化，可作为感染性疾病的辅助诊断。由 于一般采取病人血清进行试验，故称为血清学诊断 (serological diagnosis)。
▪ 血清学诊断试验最好取患者急性期和恢复期双份血清，当 后者的抗体效价比前者升高大于等于4倍时方有意义。
标本
形态结构检查
分离培养与鉴定
病原菌抗原检测 其它检测
光镜、电镜、染色法
培养 形态 生化 特征 特征 反应
血清学 动物 反应 试验
药敏 试验
沉淀反应 细菌代谢产物
协同凝集
（气相色谱）
免疫荧光 PCR查细菌核酸
对流免疫电泳 噬菌体分型
酶免疫测定
细菌素测定
免疫印迹 分子生物学技术
二、血清学诊断
▪ 人体受致病菌感染后，免疫系统产生特异性抗体。抗体的 量常随病程而增加，表现为效价（滴度）升高。
二、病毒的分离培养与鉴定
（一）病毒的分离 动物接种：选择易感动物及适宜接种部位，观察发病情况 鸡胚培养：不同病毒选择不同接种部位（绒毛尿囊膜，尿
囊腔，羊膜腔，卵黄囊），分离流感病毒最常用。
细胞培养：分离病毒最常用的方法
（1）原代细胞—来源于动物、鸡胚、人胚组织细胞，对多种 病毒敏感，但只能传2-3代。
检测病毒特异性IgM抗体可诊断急性感染。
（四） 检测病毒核酸
1 核酸杂交
斑点杂交（dot hybridization） 原位杂交（in site hybridization） DNA印迹杂交（Southern blot） RNA印迹杂交 （Northern blot）
2 核酸扩增
聚合酶链反应 （polymerase chain reaction，PCR） 连接酶链反应（ligase chain reaction，LCR） 反转录PCR（Reverse transcrptase PCR，RT-PCR）
▪ 血清学诊断试验最好取患者急性期和恢复期双份血清，当 后者的抗体效价比前者升高大于等于4倍时方有意义。
标本
形态结构检查
分离培养与鉴定
病原菌抗原检测 其它检测
光镜、电镜、染色法
培养 形态 生化 特征 特征 反应
血清学 动物 反应 试验
药敏 试验
沉淀反应 细菌代谢产物
协同凝集
（气相色谱）
免疫荧光 PCR查细菌核酸
对流免疫电泳 噬菌体分型
酶免疫测定
细菌素测定
免疫印迹 分子生物学技术
二、血清学诊断
▪ 人体受致病菌感染后，免疫系统产生特异性抗体。抗体的 量常随病程而增加，表现为效价（滴度）升高。
二、病毒的分离培养与鉴定
（一）病毒的分离 动物接种：选择易感动物及适宜接种部位，观察发病情况 鸡胚培养：不同病毒选择不同接种部位（绒毛尿囊膜，尿
囊腔，羊膜腔，卵黄囊），分离流感病毒最常用。
细胞培养：分离病毒最常用的方法
（1）原代细胞—来源于动物、鸡胚、人胚组织细胞，对多种 病毒敏感，但只能传2-3代。
检测病毒特异性IgM抗体可诊断急性感染。
（四） 检测病毒核酸
1 核酸杂交
斑点杂交（dot hybridization） 原位杂交（in site hybridization） DNA印迹杂交（Southern blot） RNA印迹杂交 （Northern blot）
2 核酸扩增
聚合酶链反应 （polymerase chain reaction，PCR） 连接酶链反应（ligase chain reaction，LCR） 反转录PCR（Reverse transcrptase PCR，RT-PCR）
病原学检测法课件
生物传感器技术
生物传感器技术能够实时、快速地检测病原体及其代谢产 物，具有操作简便、灵敏度高等优点，在临床和食品安全 等领域有广泛应用前景。
检测方法的改进与优化
1 2 3
免疫学检测方法
通过改进免疫学检测方法，提高其灵敏度和特异 性，使其成为快速、准确的病原学检测手段。
分子生物学检测方法
分子生物学检测方法在病原学检测中具有重要地 位，通过优化引物设计和扩增技术等手段，提高 检测的灵敏度和特异性。
样本采集与处理规范
采集样本时应选择适 当的部位和方式，避 免交叉感染和污染。
样本处理时应遵循无 菌操作原则，避免污 染和交叉感染。
采集后的样本应妥善 保存和处理，防止病 原微生物的扩散。
检测操作规范与质量控制
检测操作时应遵循标准操作规程 ，确保检测结果的准确性和可靠
性。
检测过程中应进行质量控制，如 校准仪器、验证试剂等，确保检
通过病原学检测评估疫苗接种效果， 为疫苗研发和接种策略的制定提供依 据。
溯源与传 源和传播途径，为防控措施的制定提 供支持。
食品安全检测
食品中病原体的检测
病原学检测可以检测食品中是否含有病原体，确保食品的安全性 和卫生质量。
食品加工环境的监测
对食品加工环境进行病原学检测，有助于及时发现和控制食品加工 过程中的污染源。
治疗提供依据。
监测耐药性
病原学检测可以监测病原体对抗 菌药物的耐药性，帮助医生选择 敏感的抗菌药物进行治疗，提高
治疗效果。
诊断免疫缺陷
对于免疫缺陷患者，病原学检测 有助于诊断和监测感染，指导医
生制定个性化的治疗方案。
流行病学调查
疫情监测
评估疫苗接种效果
通过病原学检测对疫情进行监测，及 时发现和报告疫情，为控制疫情提供 科学依据。
生物传感器技术能够实时、快速地检测病原体及其代谢产 物，具有操作简便、灵敏度高等优点，在临床和食品安全 等领域有广泛应用前景。
检测方法的改进与优化
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免疫学检测方法
通过改进免疫学检测方法，提高其灵敏度和特异 性，使其成为快速、准确的病原学检测手段。
分子生物学检测方法
分子生物学检测方法在病原学检测中具有重要地 位，通过优化引物设计和扩增技术等手段，提高 检测的灵敏度和特异性。
样本采集与处理规范
采集样本时应选择适 当的部位和方式，避 免交叉感染和污染。
样本处理时应遵循无 菌操作原则，避免污 染和交叉感染。
采集后的样本应妥善 保存和处理，防止病 原微生物的扩散。
检测操作规范与质量控制
检测操作时应遵循标准操作规程 ，确保检测结果的准确性和可靠
性。
检测过程中应进行质量控制，如 校准仪器、验证试剂等，确保检
通过病原学检测评估疫苗接种效果， 为疫苗研发和接种策略的制定提供依 据。
溯源与传 源和传播途径，为防控措施的制定提 供支持。
食品安全检测
食品中病原体的检测
病原学检测可以检测食品中是否含有病原体，确保食品的安全性 和卫生质量。
食品加工环境的监测
对食品加工环境进行病原学检测，有助于及时发现和控制食品加工 过程中的污染源。
治疗提供依据。
监测耐药性
病原学检测可以监测病原体对抗 菌药物的耐药性，帮助医生选择 敏感的抗菌药物进行治疗，提高
治疗效果。
诊断免疫缺陷
对于免疫缺陷患者，病原学检测 有助于诊断和监测感染，指导医
生制定个性化的治疗方案。
流行病学调查
疫情监测
评估疫苗接种效果
通过病原学检测对疫情进行监测，及 时发现和报告疫情，为控制疫情提供 科学依据。
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中和试验 ELISA
风湿热（抗O试验） 广泛用于病原体的诊断和流行病学调查
玻片凝集试验
试管凝集试验
酶联免疫吸附试验
④细菌的快速鉴定
API细菌数值鉴定系统
PCR技术
姬姆萨染色衣原体包涵体
HSV病毒
被支原体感染的精子
梅毒螺旋体
18
检测程序
19
病毒感染的微生物学检查法
Diagnosis Strategy for Viral Infection
②分离培养
大多数细菌的形态与染色并无显著特异性，因此需要分离培 养。如肠道杆菌均为G-杆菌，菌落形态亦相同。 培养特征：化脓性链球菌---小而透明、溶血环。
②分离培养
• 生化试验：如肠道杆菌进行乳 糖发酵试验。
• 血清学试验：已知抗体测抗原 或已知抗原测病人血清中相应 的抗体。如玻片凝集，鉴定菌 种和型。
体液
体液
体液
粪便
传播途径 粪-口
慢性感染 否 基因组类型 ssRNA
经皮肤/ 经粘膜
是
dsDNA
经皮肤/ 经粘膜
是
ssRNA
经皮肤/ 经粘膜
是
ssRNA
粪-口
否 ssRNA
Hepatitis B Virus
• 乙型肝炎的病原体 • 在全世界广泛流行，估计全球半数以上人
口已被HBV感染过，5%的人口为HBV慢性感 染 • 中国：乙肝高发区，人群HBsAg的检出率达 9.8%
HBV virion
The infectious virion is called the DANE particle.
HBV Viral Genome Organization
HBcAg HBeAg
Hepatocyte receptor bindng sivates transcriptional promotors
酸杂交技术、PCR技术、DNA芯片技术等）
细菌感染检查检验特点
•通过对标本直接显微镜检，病原菌的分离培养鉴定， 病原菌的抗原检测，核酸检测和细菌感染后机体免 疫应答产物的测定及药物的测定及药物敏感性试验， 对细菌感染性疾病可作出及时、准确的病原学诊断。
6
Diagnosis Strategy for Bacterial Infection
• 动物试验：测定细菌的毒力、 病原菌的分离和鉴定。
原理：已知③抗体血测清未知学抗诊原进断行病原菌的鉴定或用
已知抗原检测患者体液中有无相应特异性抗体和其 效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。
标本：双份血清标本，恢复期血清抗体效价比急性 期升高≥4倍者方有意义。单份血清效价超过一定 标准才有诊断意义。
种类：凝集试验、沉淀试验、中和试验、补体结合 试验。
常用的血清学诊断方法
类型
诊断应用举例
直接凝集试验 伤寒和副伤寒（肥达试验）、立克次体（外斐试验）、 钩端螺旋体（显微凝集试验）
乳胶凝集试验 检测脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌等抗体
沉淀试验
梅毒（VDRL、RPR试验）
补体结合试验 检测Q热柯克斯体等抗体
3200 Base Pair Genome
HBV DNA Polymerase
HBsAg
Both comprised of HBsAg
HBV nomenclature
• HBV: hepatitis B virus • HBsAg: hepatitis B virus surface antigen • HBsAb: hepatitis B virus surface antibody • HBcAg: hepatitis B virus core antigen • HBcAb: hepatitis B virus core antibody • HBeAg: hepatitis B virus e antigen • HBeAb: hepatitis B virus e antibody
临床病原学检查
1
临床病原体检查目的
临床病原体检查目的: 是确定感染的发生和性质，在疾病早期提供
恰当的治疗方案，并采取有效的预防措施， 防止感染传播造成的危害。
各种不同病原体的实验诊断方法遵 循以下基本原则
1.正确、规范采集和运送标本。 2.直接显微镜查见病原体或检出病原体抗原，借助分子 生物学的方法检测病原体核酸，结合病人的病史、症状 或体征，快速作出初步诊断。 3.初步诊断同时，对病原体进行分离与鉴定。 4.检测机体对病原体的免疫产物。 5.参与临床选择抗菌药物，指导和监控微生物的治疗方 案，避免 耐药菌株的产生。
病原学诊断
细菌学诊断 病毒学诊断 真菌学诊断
4
致病菌的检验程序和常用项目
形态学检查
直接涂片 染色镜检
初步诊断
分离培养 形态特征
（常规培养或
生化试验
特殊培养）
血清学试验 动物实验
明 确
血清学诊断
诊
（凝集试验、 沉淀反应、免疫标记技术等）
细菌的快速鉴定
断
药 物 敏 感 试
验
(微生物数字编码分类鉴定法、血培养自动化检测系统、核
病毒感染的微生物学检查法
22
ELISA for HIV antibody
Microplate ELISA for HIV antibody: coloured wells indicate reactivity
病毒的数量与感染性测定
•蚀斑测定：准确滴定病毒感染性的方法
–蚀斑（Plaque） –每个蚀斑是由一个有感染性病毒颗粒形成，称为蚀斑形成单位 （Plaque forming unit，PFU）。病毒的感染量用PFU/ml表示
•50%感染量（ID50）或50%组织细胞感染量（TCID50）
–不能准确地测定感染性病毒颗粒的数量
乙型肝炎的病原学诊断
病毒性肝炎- 背景
病毒性肝炎
Hepatitis Virus
A
E 肠道传播
NANB
BD
C 肠道外传播
F, TTV ? 其他
病毒性肝炎类型
A
B
C
D
E
传染源
粪便
血液/
血液/
血液/
血源性物质/ 血源性物质/ 血源性物质/
革兰染色法（Gram Stain）
由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。 1.步骤
革兰阳性菌
(Gram positive bacteria)
涂片
结晶紫 碘液 染色 媒染
酒精 脱色
革兰阴性菌
(Gram negative bacteria)
复红 复染
8
①直接涂片染色镜检
适用于具有特征性形态和染色性的病原菌,如葡萄球 菌、脑膜炎奈瑟菌、抗酸染色阳性的结核分枝杆菌等。