三株益生菌的发酵特性。

合集下载

三株口服液

发展状况
A
1994年8月，30万元的注册资金、成立三株实业有限公司；；次年猛跳至23亿元；
第三年就达到了惊人的80亿元；在省会城市，地级市注册了600个子公司，并在县，乡镇建立了2000多个办事处，其营销队伍更是达到15万人。
食用功效
能有效抑制和杀灭胃肠道各种有害菌及病原菌、调理恢复人体消化吸收功能，激活机体吞噬活性、提高机体免疫力，清除体内多余自由基和有害物质，促进机体内组织细胞新陈代谢，提
三级发酵，相互协调、共生共荣；国内首创，世界领先。
益生菌
益生菌是一类对
宿主有益的活性微生物
①乳杆菌类
②双歧杆菌类 ③革兰氏阳性球菌
酸奶
普洱茶
1
2 4
①预防或改善腹泻
3
5
1.增强植物新陈代谢 2.产生抗菌物质 3.有益菌群与土
6
1、源于人体 2、抗胃酸和胆汁
②缓解不耐乳糖症状
③预防生殖系统感染 ④增强人体免疫力
不单是对肠道疾病（如肠炎、结肠炎、十二指肠溃疡等）有
非常好的疗效，同时对胃部疾病（如胃炎、胃溃疡、浅表性胃炎、胃胀、胃痛等）有非常好的治疗效果和预防作用。
优势特点
每100ml含200亿益生
三级共生发酵技术菌，是酸奶益生菌含量的200倍
多菌株全面调理
肠胃微生态平衡，效果更突出
国际专利技术（欧盟27国专利、韩国专利）生产
3、抗龋齿菌和致病菌
4、对人体安全 5、具有临床证实的各保健作用
⑤促进肠道消化系统健康壤中放线菌等共 ⑥降低血清胆固醇生共殖 ⑦帮助吸收营养成分
常德事件
1996年6月3日，湖南常德市77岁的退休职工陈伯顺，因患老年性尿频，买了十瓶三株口服液回家，服用治病。但服到第四六瓶时，已全身红肿；服到第八瓶，老人家居然全身溃烂。湖南汉寿县第二人民医院诊断为“三株药物高蛋白过敏症”。时三株公司董事长吴炳新坚信三株没有毒性， 30万元完全是敲诈，根本不予理彩，同时，吴炳新相信法院会给他一个公正的判级人民法院宣判消费者陈伯顺系服用三株

乳酸菌抗氧化特性和耐酸耐胆盐特性的研究

安徽农业大学硕士学位论文乳酸菌抗氧化特性和耐酸耐胆盐特性的研究姓名：周晓莹申请学位级别：硕士专业：微生物学指导教师：张明; 陈晓琳2011-06乳酸菌在发酵过程中能产生超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶及NADH氧化酶，这使得乳酸菌具有防癌能力及提高机体免疫力的能力。

含有乳酸菌的微生态制剂在养殖业、乳制品及医药等方面有着广泛的应用。

本文重点研究三株乳酸菌的抗氧化性及耐胆盐、耐酸特性。

本实验研究超声波破粹仪处理的样品与未处理样品的抗氧化性。

首先，采用脱氧核糖氧化法测定各样品对·OH的消除率。

在60mmol/L 2-脱氧-D-核糖的体系中，菌株1以处理的发酵液对·OH的消除率最强，最高消除率为83. 4%，其他两株菌在本实验中对·OH无清除作用。

再次，采用邻苯三酚氧化法测定各样品对O2·的消除率。

在2. 5mmol/L邻苯三酚的体系中，菌株1、菌株5、菌株34分别以处理的菌体、处理的发酵液及未处理的菌体对O2·的消除率最高，最高消除率分别为96. 5%、86. 3%及88. 8%。

在0. 12mmol/L DPPH的体系中，菌株1、菌株5、菌株34分别以处理的上清液、未处理的菌体及未处理的菌体对DPPH的消除率最高，最高消除率分别为82. 8%、92. 6%及70. 4%。

在抗脂质过氧化性方面，以5%亚油酸为脂质，测定各样品对亚油酸的抑制率。

菌株1、菌株5、菌株34都以处理的菌体对亚油酸的抑制率最高，且抑制率分别为5. 6%、10. 1%及7. 0%。

在5% DTNB体系中，菌株1、菌株5、菌株34的无细胞提取物内TTG含量分别为5. 0×10-6mol/L，6. 6×10-6mol/L及3. 4×10-6mol/L。

采用SOD试剂盒、GSH-PX试剂盒分别测定样品内的SOD、GSH-PX含量。

菌株1、菌株5、菌株34都以上清液内SOD含量最高，最高含量分别为3. 05U、3. 65 U及3. 28 U；菌株1、菌株5、菌株34分别以菌体、菌体及上清液内GSH-PX 含量最高，且最高含量分别为194. 52U、124. 68U及49. 71U。

几种常用益生菌简介

几种常用益生菌简介1、两歧双歧杆菌（Bifidobacterium bifidum）形态及培养特征：菌体外形呈高度变化的棒状，分叉、弯曲、不规则状。

在固体培养基上厌氧培养时菌落成圆形，微凸起，具有乳白色、不透明光滑粘液性表面。

革兰氏阳性，但随发酵时间变化可能出现异常；要求有机氮作氮源，最适生长温度36-38℃，≤20℃或≥45℃不生长；最适pH6-7，pH≤5.5生长缓慢或不生长。

培养基：TPY培养基或GAM 培养基或BS培养基应用范围：酸奶、乳酸菌饮料、奶酪、肉制品发酵、火腿香肠发酵、蔬菜发酵、大豆乳发酵、绿豆乳发酵、果汁发酵、谷物发酵、薯类发酵、酿酒；生产含益生菌奶粉、各类食品、各类饮品、各类乳制品、保健品、制成胶囊、压成片剂、粉状冲剂等。

动物、家畜、家禽、鱼饲料添加剂，用于猪、牛、鸡饮用水等，代替抗生素，减少药物在体内的残留量。

生物学功能：保持肠道微生态平衡，改善胃肠功能，润肠通便，使肠道处于健康状态。

2、青春双歧杆菌（Bifidobacterium adolescentis）形态及培养特征：呈短弯曲棒状，有时双歧棒状。

菌落光滑、凸圆、边缘完整、乳白色、闪光并具有柔软的质地，厌氧，在有氧的的斜面上不生长，但对氧的敏感性因菌种不同而异。

最适生长温度35-37℃，≤20℃或≥46.5℃不生长；培养基：TPY培养基或GAM 培养基或BS培养基应用范围：酸奶、乳酸菌饮料、奶酪、大豆乳发酵、绿豆乳发酵、果汁发酵、；生产含益生菌奶粉、各类食品、各类饮品、各类乳制品、保健品、制成胶囊、压成片剂、粉状冲剂等。

动物、家畜、家禽、鱼饲料添加剂，用于猪、牛、鸡饮用水等，代替抗生素，减少药物在体内的残留量。

生物学功能：保持肠道微生态平衡，改善胃肠功能，润肠通便，使肠道处于健康状态。

3、长双歧杆菌（Bifidobacterium.longum）形态及培养特征：呈长、弯曲、棒状或球棒状，革兰氏染色性质可变，菌落隆起、光滑或起伏状，直径2-5mm,发光或粘液外表。

三株乳酸菌形态特征的研究

lactic acid bacteria；morphology；planting Gram staining method
乳酸菌是一类可以发酵碳水化合物产生乳酸的细菌统称[1]，是日常生活中最常见、应用最广泛的一类菌，目前乳酸菌分为 43 个属，共有 373 个种和亚种[2]。嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus）和保加利亚乳杆菌（Lactobacillus bulgaricus）作为最经典的酸奶发酵剂菌种，二者常一起用于酸奶生产，通过共生作用相互促进，大大提高生长速度并改善了酸奶的品质。 [3-5] 而植物乳杆菌（Lactobacillus plan原 tarum）可以有效预防冠心病和动脉粥样硬化等心血管疾病[6]，嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌和植物乳杆菌三者以 1∶1∶1 的比例搭配发酵乳类不会产生拮抗作用[7]。乳酸菌的益处渐渐被人们所认识，再加上人类健康意识的不断提高，乳酸菌的利用程度也大大提高[8]。但不是每个生长阶段的乳酸菌涂片都展现乳酸菌典型的形态，乳酸菌是革兰氏阳性菌[9]，可以根据其生长曲线培养不同生长时间段的菌群进行革兰氏染色、涂片观察，以便更好地观察和认识乳酸
mophilus and Lactobacillus plantarum were smear observed by activated and cultured until the second generation，then inoculated into the medium. They were cultivated from 8 h to 24 h and Gram stained once every 2 h，and compared their morphological changes under microscope after planting and Gram staining. All of them were Gram positive and smears showed blue purple. They were at the end of the logarithmic phase cultured from 16 h to 18 h and showed typical morphological features. It should be paid attention to control of fungus age and dyeing time in the process of Gram staining.

发酵剂对发酵香肠微生物变化的影响

（．％）葡萄糖（．％）黑胡椒粉（．％）硝酸２７，０３，０２，
钾（．１％பைடு நூலகம்）００５。
１材料与方法
１１发酵剂制作．
原料混合后，成三份，份不加发酵剂做对照分一
（简称对照组）一份接种发酵剂Ｓ（称Ｓ组）一，。简，
关键词发酵香肠发酵剂微生物变化
发酵香肠是把调味品、以及切碎的瘦肉和脂盐
藏于４Ｅ，为发酵剂用于发酵香肠生产。＇作
表１发酵剂木糖葡萄球菌ＣＳ３ＣＲ０和１２、３１
乳酸菌１１的特性和发酵剂组成
生乳酸、乙酸，ｐ使Ｈ值下降，而影响发酵香肠技术从特性和微生物稳定性。葡萄球菌和微球菌通过发酵
碳水化合物，硝酸盐分解，白质分解和脂肪分解等蛋
生化反应，加产品颜色稳定性，少组织恶臭、增减腐败，减少处理时间，促进风味发展等。自然发酵香肠作为野生菌种乳酸菌与葡萄球菌、球菌的保存者，微大量的菌株被分离出来，根据他们的生化特性来并筛选具有优势的发酵剂，而保证人工接种发酵剂从
每个批次分别无菌操作取样１ｇ转移到无菌袋０，中，加人９ｍＬ无菌生理盐水，０用均质机均质９ｓ用０，

益生菌的发酵原理

益生菌的发酵原理益生菌的发酵原理是指通过合适的温度、时间和微生物菌种等条件，使含有益生菌的基质发生发酵作用，从而增加益生菌的数量和活性。

益生菌的发酵原理主要包括以下几个方面：第一，选择合适的益生菌菌种。

不同的益生菌菌种具有不同的生长需求和特性，因此在发酵过程中需要选择适宜的菌种。

常见的益生菌菌种包括乳酸菌、双歧杆菌、酵母菌等，它们能够在合适的条件下迅速繁殖。

第二，提供合适的基质。

发酵过程中，益生菌需要适当的营养物质来生长和繁殖。

常用的基质包括牛奶、果汁、大豆、麦麸等。

这些基质中含有丰富的糖类、蛋白质、维生素和矿物质等营养物质，为益生菌提供了生长的必要条件。

第三，调节温度和pH值。

益生菌的生长和发酵对温度和pH值有一定的要求，因此在发酵过程中需要控制这两个因素。

一般来说，乳酸菌的适宜生长温度在30左右，而酵母菌则较适应较低的温度。

此外，不同的益生菌对pH值的要求也不同，一般在4-6之间。

第四，控制发酵时间。

发酵时间的长短影响着益生菌的繁殖速度和产生的代谢产物。

一般来说，益生菌的发酵过程需要一定的时间，以确保菌种得到充分的生长和繁殖。

益生菌的发酵过程中，微生物菌种通过代谢过程产生一些有益物质。

首先，益生菌通过分解基质中的复杂碳水化合物，如淀粉、纤维素等，产生一些发酵产物，例如有机酸、醇类、气体等。

这些产物可以改善基质的口感和风味，提高其营养价值。

其次，益生菌发酵还能合成一些有益物质。

例如，乳酸菌能够产生乳酸和双歧酸，这些物质能够调节肠道微生物群落，抑制有害菌的生长，并提高机体的免疫力。

另外，益生菌发酵还能产生一些维生素、酶和其他有益物质，如细胞因子、激素和抗氧化物质等，这些物质对人体健康有着积极的作用。

综上所述，益生菌的发酵原理主要包括菌种选择、适宜的基质提供、温度和pH 值的控制，以及合适的发酵时间。

通过以上的发酵过程，益生菌能够快速繁殖，并产生一系列有益物质，从而发挥保健和健康调节的作用。

这也是益生菌产品在保健食品和医药领域得以广泛应用的原因之一。

三株乳酸菌形态特征的研究

三株乳酸菌形态特征的研究作者：乌素杨晓艳班瑞来源：《农产品加工·下》2019年第06期摘要：选取3株乳酸菌分别为保加利亚酸乳杆菌（Lactobacillus bulgaricus）、嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus）和植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum），活化菌株并培养至第2代，接种到培养基中，待菌生长到8，10，12，14，16，18，20，22，24 h，对菌种进行制片和革兰氏染色，对比3株乳酸菌的形态变化。

3株乳酸菌的所有涂片都呈现蓝紫色，证明3株乳酸菌均为革兰氏阳性菌。

3株乳酸菌在培养16～18 h时，为对数期末期，革兰氏染色试验菌体呈现典型形态。

在对菌体染色过程中，应注意控制好菌龄和脱色时间。

关键词：乳酸菌;形态;制片革兰氏染色中图分类号：Q93-33 ; ; 文献标志码：A ; ; doi：10.16693/ki.1671-9646（X）.2019.06.043Abstract：In this experiment，three kinds of Lactic acid bacteria which were Lactobacillus bulgaria，Streptococcus thermophilus and Lactobacillus plantarum were smear observed by activated and cultured until the second generation，then inoculated into the medium. They were cultivated from 8 h to 24 h and Gram stained once every 2 h，and compared their morphological changes undermicroscope after planting and Gram staining. All of them were Gram positive and smears showed bluepurple. They were at the end of the logarithmic phase cultured from 16 h to 18 h and showed typical morphological features. It should be paid attention to control of fungus age and dyeing time in the process of Gram staining.Key words：lactic acid bacteria;morphology;planting Gram staining method乳酸菌是一类可以发酵碳水化合物产生乳酸的细菌统称[1]，是日常生活中最常见、应用最广泛的一类菌，目前乳酸菌分为43个属，共有373个种和亚种[2]。

三株益生芽孢杆菌的16SrDNA测序鉴定

齐，培养 72 h 可见淡红色色素；显微镜下，革兰氏阳 EU871707、EU871708。
性，菌体杆状，芽孢椭圆中生，孢囊无明显膨胀，无伴
将得到的 16S rDNA 序列提交到 NCBI通培养基上培养初期菌落库中进行 BLAST 在线分析。Kb003 菌株在前 109 个命
特征、生理生化特性鉴定方法与现代分子生物学技术 16S rDNA 基因序列分析相结合，对无锡阿尔宝尔生物工程有限公司从动物肠道分离并保存的三株芽孢杆菌 Kb003、Nor3075 和 JD008 菌株进行鉴定，为该三株菌株开发成动物微生态制剂的应用和对调整动物
料协会发布了可以直接饲喂动物的微生物种类有 42 种，我国农业部 1999 年 6 月公布可直接饲喂动物的微生物种类有 12 种。由于用芽孢杆菌研制成微生态制剂的特点是芽孢杆菌产品以内生的孢子存在，抗逆性强，能耐酸碱和耐高温、高压，在饲料加工和储存过程中不易失活；芽孢杆菌在生长繁殖过程中能产生多种有效的酶促活性，一些酶常是畜禽不具有的；芽孢杆菌为需氧菌或兼性厌氧菌，培养要求的营养物质简
菌株 Kb003 + － + + + －－ + － + + －－ + + －－ + + + + + +
菌株 Nor3075 + － + + + － + + － + + + － + + －－ + + + + + +
菌株 JD008 + － + + + + － + + + + + + + －－－ + + + + + －

三株乳酸菌生理功能特性的分析

* 通讯作者：罗红霞，教授，博士，研究方向为食品微生物食品质量监控。
乳杆菌和乳酸片球菌三株乳酸菌菌株的产酸速率、耐酸性能、耐胆盐性能、消化酶耐受性和抑菌性能进行对比分析，为功能性乳酸菌的开发以及实际应用奠定基础。
１材料与方法
1.1.1 试验菌株三株乳酸菌，分别为植物乳杆菌（Lactobacillus
将菌株按 2%接种量接种至灭菌并有不同胆盐含量的 MRS 中，分别含有 0.1%和 0.3%牛胆盐，以不含胆盐的 MRS 为对照，37℃培养 24h，测定活菌数。 1.2.6 消化酶的耐受性试验
在灭菌的 MRS 液体培养基中分别加入 1%（W/ V）的胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶，以不添加相应消化酶的 MRS 培养基为对照。分别接种 2% （V/V）乳酸菌新鲜培养物，于 37℃培养，分别于板菌落计数。计算存活率。 1.2.7 抑菌试验
试验所用 MRS 固体培养基、MRS 肉汤，购于北京陆桥技术股份有限公司。
1.2.1 活菌计数法取 100μL 培养液或样品处理液加入到 900μL
灭菌生理盐水，依次做 10 倍梯度稀释，选取三个适当的连续稀释倍数，用移液枪吸取 10μL 稀释液进行平板计数，每个稀释度做 3 个平行。 1.2.2 生长曲线测定
冻存的甘油管三株乳酸菌室温溶化后分区划线接种于 MRS 固体培养基，37℃静置培养 24h，然后挑取单菌落，接种于 50mL 三角瓶（装液 50mL）， 37℃静置培养 8~12h 左右，测定其ＯD（620），再次接种于 50mL 三角瓶（装液 50mLMRS 肉汤，接种量
２０１6·１９
FEED ADDITIVE 饲料添加剂
三株乳酸菌生理功能特性的分析

三株药用乳酸杆菌的生理生化特征研究

三株药用乳酸杆菌的生理生化特征研究王洋洋;王震;何希宏;刘浩【摘要】[目的]研究3株药用乳酸杆菌的生理生化特征.[方法]观察3株乳杆菌L2、L3、L8在不同培养基上的生长形态及生长状况,并对其进行革兰氏染色、甲基红和V-P试验及乳酸和过氧化氢鉴定,最后观察它们对不同糖类的利用情况.[结果]菌株L2、L3、L8均为革兰氏阳性菌,且与GAM培养基相比,其在MRS培养基上的生长状况更为良好；L2、L3、L8的甲基红试验均为阳性,V-P试验均为阴性,且都产过氧化氢、乳酸,但乳酸产量3株菌之间无明显差别;L2、L3、L8对不同糖类的利用情况基本相似.[结论]该研究为L2、L3、L8的进一步药用化奠定了基础.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2013(041)008【总页数】4页(P3310-3313)【关键词】乳酸杆菌;生理生化试验;药用化【作者】王洋洋;王震;何希宏;刘浩【作者单位】天津科技大学生物工程学院,工业发酵微生物教育部重点实验室,天津300457;天津科技大学生物工程学院,工业发酵微生物教育部重点实验室,天津300457;天津科技大学生物工程学院,工业发酵微生物教育部重点实验室,天津300457;天津科技大学生物工程学院,工业发酵微生物教育部重点实验室,天津300457【正文语种】中文【中图分类】S188乳酸杆菌是一类能使糖类发酵产生乳酸的细菌，因发酵糖产生大量乳酸而命名，是一群生活在机体内益于宿主健康的微生物，具有维护人体健康和调节免疫功能的作用。

它是健康妇女阴道中的优势菌群，对维持阴道正常菌群的平衡起关键的作用。

多项研究［1－2］表明，健康妇女阴道内乳杆菌检出率为50%～80%，明显高于细菌性阴道病(BV)患者;其中产H2O2乳杆菌是健康妇女阴道内优势菌。

该研究对3株乳酸杆菌的基本生理生化特征、乳酸产量及是否产H2O2进行初步研究，旨在为进一步把乳杆菌作为治疗细菌性阴道病原料制成活菌制剂提供试验理论依据。

发酵饲料中常用微生物菌株及其生长条件

发酵饲料中常用微生物菌株及其生长条件简介发酵饲料中的微生物菌株对于提高饲料的营养价值和消化能力起着重要作用。

本文介绍了常用的微生物菌株及其适宜的生长条件，以帮助饲料生产者选择适合的菌株和优化发酵过程。

常用微生物菌株1. 酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）：酵母菌是一种常见的饲料添加剂，能够分解饲料中的复杂碳水化合物，提高饲料的可消化性。

适宜的生长条件包括温度在25°C-40°C之间，pH值在4.5-6.0之间，以及适当的氧气供应。

2. 乳酸菌（Lactobacillus spp.）：乳酸菌是一类产酸菌，能够产生有益的有机酸，抑制有害菌的生长，增强动物的免疫能力。

适宜的生长条件包括温度在35°C-40°C之间，pH值在5.0-6.5之间，以及适当的氧气供应。

3. 纤维降解菌（Fibrobacter spp.）：纤维降解菌主要负责分解饲料中的纤维素和木质素，提供动物所需的能量和营养物质。

适宜的生长条件包括温度在39°C-41°C之间，pH值在6.0-6.7之间，以及适当的氧气供应。

4. 放线菌（Actinomycetes）：放线菌具有广谱的抗生素产生能力，可抑制饲料中的有害微生物。

适宜的生长条件包括温度在25°C-30°C之间，pH值在6.0-8.0之间，以及适当的氧气供应。

5. 醋酸菌（Acetobacter spp.）：醋酸菌能够将饲料中的糖类转化为有机酸，促进饲料的发酵和保存。

适宜的生长条件包括温度在25°C-30°C之间，pH值在4.0-5.0之间，以及适当的氧气供应。

结论选择适宜的微生物菌株并提供其适宜的生长条件对于发酵饲料的生产至关重要。

饲料生产者应根据饲料成分以及目标效果来选择合适的菌株，并注意提供适宜的温度、pH值和氧气供应等生长条件，以保证发酵过程的顺利进行。

西藏灵菇中产胞外多糖假肠膜明串珠菌发酵性能及流变学特性研究

长期，适于发酵乳制品生产，其中菌株Ｒ５发酵酸乳的组织状态、风味的感官评分为８６分，明显优于其他两株菌。流变学特性表明，三株茵制备的发酵乳的袁观黏度都随剪切时间的延长而降低，呈现剪切稀释的流动特征，黏度大小依次
为Ｒ５＞Ｒ２＞Ｒ１；均能够形成触变环，为正触变性流体，Ｒ１发酵乳与Ｒ５发酵乳触变环面积相近，分别为２３０１．７２、
Ｆｅｒｍｅｎｔａｂｉｌｉｔｙａｎｄｒｈｅｏｌｏｇｉｃｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆ
ｔｈｒｅｅｓｔｒａｉｎｓｏｆｅｘｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇＬｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃｐｓｅｕｄｏｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓｆｒｏｍＴｉｂｅｔａｎｋｅｉｒｆ
ＹＡＮＧＸｉ — ｊｕａｎ１，２．ＺＨＡＮＧＪｉｅ一．ＤＡＮＧＢｉｎ＇ ’ （１．ＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＦｏｒｅｓｔｒｙ，ＱｉｎｇｈａｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉｎｉｎｇ８１００１６，Ｃｈｉｎａ；２．ＱｉｎｇｈａｉＴｉｂｅｔａｎＰｌａｔｅａｕＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＡｇｒｉｃ — ＰｒｏｄｕｃｔＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇ。ＱｉｎｇｈａｉＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＦｏｒｅｓｔｙ，ｒＸｉｎｉｎｇ８１００１６，Ｃｈｉｎａ）

5种发酵菌株生产羊肉发酵肠的发酵特性初步研究

‘ Ｔｅｒｌｕ０ｌｒｗｔｔｇｕｉ２～ｈｙａｅａｐｔｏｇｏｈｓａｅｄｒｇ２ｌｇｎ
２ｈｉｏａｒｃｎｉｏａｄｔ０。．ｈｔｒｅ６ｎｉｏｄｔｎｎａ３Ｃｔｅｈｅｎｉ
维普资讯
种发酵菌株生产羊肉发酵肠的发酵特性初步研究
张德权 ’刘思产品加工研究所北京１０９２西南大学食品学院重庆４０１）０４．００７６
ｓｌａｄｈｙａｌａｅｔｅａｉｙｆｅｍｎｉａｔ，ｎｔｅｌｖｈｂｌｏｆｒｅｔｇｈｉｔｎ
ｓｇｒ０ｌｔｃ．ｕｎａａｉｙｏｅａｏｕａｔａｉａｉｂｔｏｃｐｂｉｆｍｔｂ－ｃｃｄｌｔｌｉｐｏｅｎａｏｐｐｉｎｆｔｙａｉ．ｉｎｒｔｉａｄｆｔｔｅｔｅａｄａｔｃｚｇｎｄｄ
发酵肠生产的核心技术在于发酵剂，通常良好的发酵剂应该具备以下特点：食盐耐受性和亚硝酸盐耐受性强，即在浓度为６％的ＮＣ和ｌＯｐａ１Ｏｐｍ
ｓｕｉｉｈｐｐｒＴｅｅｕｔｓｏｅｔａｔｄｄｎｅａｅ．ｈｒｓｌｓｈｗｄｈｔｅｔ
Ａｂｔａｔｔｒｅｕｕｅｉｈｋｙｆｐｏｅｓｇｅ－ｓｒｃ：Ｓａｔｒｃｌｒｓｓｅｅｏｒｃｓｉｆｒｔｔｎ
ｍｎｅｔｏａｓｇ．ｈｙｌｔｈｒｃｅ－ｅｔｄｍｕｔｎｓｕａｅＴｅｚｍｏｉｃａａｔｒｙｃｉｉｆｉｅｙｉｌｍｅｔＳａｃｒｕｔｒｓｅｅｓｃｏｆｔｐａｔｓｖｃａＣｒｅｃｌｅｗｒｕ

乳酸菌抑霉菌菌株的筛选及应用

乳酸菌抑霉菌菌株的筛选及应用于向荣;汤小宁;于清琴;孔健;钱洋【摘要】本实验从保存的乳酸菌菌株中筛选出了抑霉菌效果好、抑菌谱较广的三株乳酸菌（2025b、2026b1、6-1-1），研究了三株乳酸菌菌株发酵液的详细性质，包括生长曲线的绘制，发酵过程中pH值的变化情况，发酵液对蛋白酶的稳定性，发酵液对高温的稳定性，测试了发酵液随着储存时间的延长形成的抑菌能力变化情况。

利用筛选出的三株乳酸菌（2025b、2026b1、6-1-1）发酵产生的无菌发酵液进行面包防腐实验和葡萄炭疽病和白腐病病菌抑菌试验，发现乳酸菌发酵液对面包保鲜期限的延长效果明显，对葡萄炭疽病和白腐病的病菌抑制效果明显。

%In the experiment,three strains of lactic acid bacteria(2025b,2026b1,6-1-1) were selected in the all Lactic acid bacteria strains saved , which had an effective bacteriostasis and broad antifungal spectrum.The qualities of the fermentation broth of the three Lactic acid bacteria ,were studied including the growth curve of Lactobacillus , the change of pH value during Ferment , the stability of fermentation broth towards protease ,and the stability of fermentation broth towards high temperature .Besides,how the antibacterial activities of fermentation broth change was tested when the storage time was prolonged .The sterile formentalion mediam was made by the tree strains of lactic acid bacteria (2025b、2026b、6-1-1) to conduct the experiments about bread preservation and grape anthracnose inhibition and grape white rot of bacteriostasis ,it is found that the fermentation broth benefits both breadpreservation and antibacterial effect of grape anthracnose and grape white rot .【期刊名称】《山东轻工业学院学报（自然科学版）》【年(卷),期】2013(000)003【总页数】5页(P46-50)【关键词】乳酸菌;发酵液;抑菌;炭疽病;白腐病【作者】于向荣;汤小宁;于清琴;孔健;钱洋【作者单位】山东省酿酒葡萄科学研究所，山东济南250100;山东省酿酒葡萄科学研究所，山东济南250100;山东省酿酒葡萄科学研究所，山东济南250100;山东大学生命科学院，山东济南250100;山东大学生命科学院，山东济南250100【正文语种】中文【中图分类】Q939.90 引言乳酸菌作为益生菌,是传统的发酵菌株,是公认的安全级(Generally Recognized as Safe,GRAS)菌株.在提高食品风味方面,乳酸菌发酵所产生的乳酸及多种风味物质赋予食品良好的品质;在食品安全与健康方面,乳酸菌分泌的次生代谢产物细菌素或类细菌素被广泛应用于食品防腐和防治某些传染性疾病[1].近年来乳酸菌的生物防腐方面相关研究很多,生物防腐是指通过利用天然或人工添加的微生物群落及其抑菌产物来延长食品储藏期限,增加食品的安全性.食品保藏中的面包储藏经常会污染各种霉菌(主要是米曲霉和青霉),这种污染可以通过红外线或者微波放射来防止,也可以改善储存环境和加入霉菌抑制物,比如说酒精,丙酸和乙酸.其中,丙酸及丙酸盐在延长食品保存期限中广泛应用.欧洲化学防腐剂在面包中的最高允许使用量较低,丙酸盐和山梨酸酯盐的允许使用浓度被分别限制在0.3%和0.2%,在浓度为0.3%的丙酸盐存在条件下,许多面包中的霉菌仍可以生长,证明此浓度的丙酸盐并不足以保持产品的新鲜[2].乳酸菌对霉菌抑制作用的研究相对较少,本研究利用筛选出的抑菌效果好,抑菌谱较广的三株乳酸菌(2025b、2026b1、6-1-1)发酵产生的无菌发酵液进行面包保存实验,发现乳酸菌发酵液对面包保鲜期限的延长效果明显,为食品保存提供了一条新的安全途径.乳酸菌在葡萄病菌防治方面报道的较少.葡萄炭疽病和白腐病是葡萄两种主要真菌病害,以前生产中主要采用化学农药进行防治,但大量使用存在环境污染和农药残留的风险.随着人们对生态保护和食品安全意识的加强,采用生物方法已是葡萄病害综合防治的重要环节.王敏等人[3]报道了生物防霉剂防治葡萄贮运期病害研究的初步结果,确定了生物防霉剂对各种病害的有效抑制浓度,测定结果表明生物防霉剂的防治效果优于对照用药多菌灵的防治.本文筛选了具有抑制霉菌生长能力的乳酸菌发酵物对葡萄炭疽病和白腐病病菌进行了抑菌试验,以探索有益微生物制剂在葡萄病害防治方面的新途径.1 材料与方法1.1 材料供试菌种为实验室保存菌种,面包为超市购买、葡萄病原菌采自于仲宫和蓬莱葡萄基地.1.2 方法1.2.1 霉菌孢子液的制备取实验室保存的霉菌,接种在PDA培养基斜面上,置于30℃恒温培养箱中培养5~10 d至斜面上长出大量孢子,将含有0.05%(V/V)的Tween 80溶液,加入试管中,剧烈震荡,将此孢子液置于100 mL的三角瓶中,震荡10 min,用无菌纱布过滤除去营养菌体.使用血球计数板计数,并用无菌水将此孢子液的浓度调整至106个孢子/mL,备用.1.2.2 乳酸菌发酵液的制备将乳酸菌以1%接种量接种,置于37℃恒温培养箱静置培养36 h至乳酸菌生长达到稳定期后期,将发酵液以8000xg转速离心10 min,取上清液置于-80℃冰箱中冷冻12 h左右,用冷冻干燥机将发酵液冷冻干燥,根据浓缩倍数选择一定体积的浓度为10 mM的乙酸溶液将冻干后的固体重新溶解,将浓缩后的乳酸菌发酵液用无菌滤器过滤,得到无菌发酵液,备用.1.2.3 抑制霉菌乳酸菌的初步筛选以黑曲霉作为指示菌对实验室保存的乳酸菌使用双层平板法进行初步筛选.用MRS 培养基倒入培养皿制作下层平板,用乳酸菌在下层平板上划两条2 cm长的直线,置于37℃恒温培养箱中培养24 h,将5 mL孢子浓度为104个孢子/mL的PDA半固体培养基倒在下层平板上,轻轻摇晃使上层培养基均匀分布于整个平板,将平板水平放置20 min左右,待其彻底凝固时置于30℃恒温培养箱培养48 h.检验乳酸菌周围抑菌圈.根据抑菌圈大小为抑菌效果做出评价.1.2.4 乳酸菌生长曲线的测定将2025b、2026b1、6-1-1三株乳酸菌以1%接种量接种于试管中,置于37℃恒温培养箱静置培养,在乳酸菌生长至2~12 h之间时,每1 h取样测定其OD600吸光度,之后分别在乳酸菌生长至14 h、16 h、20 h、24 h、30 h、36 h、50 h 的时间点取样测定其OD600吸光度,每个样品设有3组平行实验,记录结果并绘制生长曲线.1.2.5 乳酸菌生长过程中pH值变化曲线将乳酸菌以1%的接种量接种于试管中,置于37℃恒温培养箱静置培养,在乳酸菌生长0至36 h之间时,每6 h取样测定其pH值,以MRS培养基的pH值作为乳酸菌培养初始pH值,每个品设有3组平行实验,记录乳酸菌生长过程中pH值变化曲线.1.2.6 抑霉菌物质的热稳定性和蛋白酶处理稳定性测定抑菌物质的热稳定性是将发酵液置于100℃水浴中处理5 min.然后用液体管培养法检测其抑霉菌活力.胃蛋白酶处理稳定性测定,首先测定发酵液初始pH并记录,将无菌发酵液用浓度为1 M盐酸溶液调节pH至2.0,加入胃蛋白溶液使酶的终浓度达到1 mg/mL,37℃处理1 h,置于水浴锅内煮沸5 min终止反应,调节pH至发酵液初始pH,用液体管培养法检测其抑霉菌活力,以未处理发酵液作为对照.胰蛋白酶处理稳定性测定,首先测定发酵液初始pH并记录,将无菌发酵液用1 M NaOH溶液调节pH至8.0,加入胰蛋白溶液使酶的终浓度达到1 mg/mL,37℃处理1 h,置于水浴锅内煮沸5 min终止反应,调节pH至发酵液初始pH,用液体管培养法检测其抑霉菌活力,以未处理发酵液作为对照.利用以上方法测定了菌株2025b、2026b1和6-1-1三株菌发酵液抑霉菌物质的热稳定性和蛋白酶处理稳定性.1.2.7 浓缩发酵液储存稳定性实验(1)制备菌株2025b、2026b1和6-1-1三株菌的浓缩发酵液,方法见1.2.2(2)将样品分为两个平行组,分别标记并储存于4℃,-20℃冰箱.(3)于0 d、4 d、7 d、14 d 时分别取样品,以 MRS培养基和无菌水作为对照,用琼脂扩散法、打孔法,检测其抑菌活性.(4)记录抑菌圈大小并绘制抑菌曲线.1.2.8 面包保存实验取30 μL保种管储存的菌株2025b、2026b1和6-1-1三株菌的菌液分别接种在5 mL MRS培养基中,37℃静置培养,活化过夜.以1%接种量将活化好的菌液分别接种在5 mL MRS培养基中,每株菌接种两管,37℃静置培养36 h.将乳酸菌发酵液以8000 g转速离心10 min,取上清,再用无菌滤器彻底除去其中乳酸菌菌体.用喷雾器分别向10片面包表面均匀喷洒含孢子的无菌水,MRS培养基对照和无菌发酵液,面包片分组情况见表1.表1 面包储藏实验面包片处理方式分组 MRS培养基对照组无菌水对照组 2025b 无菌发酵液 2026b1无菌发酵液 6-1-1无菌发酵液喷洒物质3 mL MRS培养基+6 μL 孢子液3 mL无菌水+6 μL 孢子液3 mL 202b无菌发酵液+6 μL 孢子液3 mL 2026b1无菌发酵液+6 μL孢子液3 mL 6-1-1无菌发酵液+6 μL孢子液1.2.9 葡萄病原菌抑制试验将从葡萄基地采集的病原菌进行分离纯化,得到两种病菌,分别为炭疽病和白腐病.利用双层平板法,测定了三株乳酸菌发酵液对葡萄炭疽病、白腐病的抑菌作用.首先要用MRS培养基倒入培养皿制作下层平板,用乳酸菌在下层平板上划两条2 cm长的直线,置于37℃恒温培养箱中培养24 h,将5 mL病原菌孢子浓度为104个孢子/mL的PDA半固体培养基倒在下层平板上,轻轻摇晃使上层培养基均匀分布于整个平板,将平板水平放置20 min左右,待其彻底凝固时置于30℃恒温培养箱培养48h.检验乳酸菌周围抑菌圈.根据抑菌圈大小为抑菌效果做出评价.2 结果与分析2.1 具有霉菌抑制能力乳酸菌的筛选以实验室保存的黑曲霉作为指示菌,双层平板法筛选实验室保存的13株乳酸菌,结果发现2025b、2026b1和6-1-1三株菌株抑霉菌能力最强,如图1所示.图1 2025b、2026b1和6-1-1三株菌对黑曲霉的抑制效果2.2 乳酸菌的生长曲线经筛选出具有较强抑霉菌能力的乳酸菌菌株2025b、2026b1和6-1-1的生长曲线如图2所示.从曲线中看出三株菌在36 h处达到稳定期中后期,根据相关文献和预实验结果表明,乳酸菌稳定期中后期产生抑制霉菌物质的量最大,因此选取36 h乳酸菌发酵液作为抑霉菌发酵液抑菌效果更理想.图2 2025b、2026b1和6-1-1三株菌48 h生长曲线2.3 乳酸菌生长过程中pH值变化菌株2025b、2026b1和6-1-1三株菌发酵过程中pH值变化曲线如图3所示.从图中可以看出,随着培养时间的延长,三株乳酸菌的pH值在0至9 h之间急剧下降,在18 h之后基本稳定,Lb.fermentum 2025b和6-1-1两株菌保持在pH=4.3左右,Lb.plantrum 2026 b1 pH保持在3.7左右,推测乳酸菌发酵造成低pH环境会对霉菌的生长产生影响.图 3 2025b、2026b1、6-1-1 三株菌36 h发酵pH值变化曲线2.4 浓缩发酵液储存稳定性由下面的图4、图5可以看出,乳酸菌2025b、2026b1两株菌发酵液在不同温度下储存比较稳定,而Lb.fermentum 6-1-1发酵液储存7 d后抑菌能力下降显著. 图4 14 d内发酵液4℃储存稳定性图5 14 d内发酵液-20℃储存稳定性2.5 面包储存试验结果面包储存7 d后,在无菌水对照组中有较少量的霉菌菌体菌体产生,MRS对照组中霉菌菌体较多.发酵液组无霉菌菌体生长(见图6).当面包储存至12 d时,无菌水对照组和MRS对照组已经长出了厚厚的真菌菌体层,菌株2025b的发酵液有一定抑菌效果,菌株2026b1效果非常明显,6-1-1效果比较好(见图7),总体来说抑菌效果比较理想.图6 面包储藏7d后霉菌生长情况图7 面包储藏12d后霉菌生长情况2.6 葡萄病菌抑制效果由表2可以看出,3种乳酸菌对葡萄炭疽病和白腐病病原菌的抑制效果均为"强抑制力",说明它们都能够强烈抑制炭疽病和白腐病病菌的生长.表2 乳酸菌2025b、2026b1和6-1-1对葡萄炭疽病和白腐病病菌的抑制效果注:+++:强抑制力;++:中等抑制力.+:弱抑制力.+++ +++ +++6-1-1葡萄炭疽菌+++ +++ +++葡萄白腐菌病原菌乳酸菌2025b 2026b13 结论(1)乳酸菌在发酵过程中,产生一些具有抑制其他微生物生长的代谢产物,具有生物防腐效应,因此,筛选产生具有较强抑菌活力的乳酸菌并测试其菌种及发酵液的基本性质是首要任务.由于近年来生物防腐的相关研究很多,但乳酸菌对霉菌抑制作用的研究相对较少,本文选择了筛选具有抑制霉菌生长能力的乳酸菌并研究其特性,首先以黑曲霉作为指示菌,从实验室保存的13种乳酸菌中,筛选出了3株具有抑菌谱广并且抑菌活性很强的乳酸菌2025b、2026b1、6-1-1,对其基本性质进行了详细研究,绘制了这3株乳酸菌的48 h生长曲线和发酵36 h的pH变化曲线,参考3株菌特点,确定了培养36 h后乳酸菌生长达到稳定期中后期,发酵液中所含的抑菌物质达到最高点;检测其发酵液的温度稳定性发现100℃高温处理5 min,3株乳酸菌的发酵液抑菌能力基本无影响.蛋白酶稳定性实验发现其中Lb.fermentum 6-1-1发酵液的抑菌活性对蛋白酶敏感.储存稳定性实验发现Lb.fermentum 6-1-1的发酵液随着储存时间的延长其抑制霉菌活力下降.(2)面包储存7 d后,在无菌水对照组中有较少量的霉菌菌体菌体产生,MRS对照组中霉菌菌体较多.发酵液组无霉菌菌体生长.当面包储存至12 d时,无菌水对照组和MRS对照组已经长出了厚厚的真菌菌体层,菌株2025b的发酵液有一定抑菌效果,菌株2026b1效果非常明显,6-1-1效果比较好,总体来说抑菌效果比较理想,证明了乳酸菌作为替代化学防腐剂的可能性[4].(3)3种乳酸菌对葡萄炭疽病和白腐病病原菌的抑制效果均为"强抑制力",说明它们都能够强烈抑制炭疽病和白腐病病菌的生长.由3种乳酸菌组成的制剂在防治葡萄病害方面应该有很好的应用前景.参考文献:[1] De V L,Leroy F.Bacteriocins from lactic acidbacteria:production,purification and foodapplications[J].Journalofmolecular microbiology and biotechnology,2007,13(4):194-199.[2] Lavermicocca P,Valerio F,Visconti A.Antifungal activity of phenyllactic acid against molds isolated from bakery products[J].Applied and Environmental Microbiology,2003,69(1):634-640.[3] 王敏,杨德山,刘丹.生物防霉剂防治葡萄贮运期病害研究[J].中国农学通报,2006,22(12):348-350.[4] Schnürer J,Magnusson J.Antifungal lactic acid bacteria as biopreservatives[J].Trends in Food Science&Technology,2005,16(1):70-78.。

三株酵本草核心技术和产品介绍4

歧特生冲剂
歧特生—肠道双歧杆菌的促生剂。
歧特生，生双岐；肠年轻，毒不存；
身体健，肌肤美。
三宝汤－发酵中药静心汤

对妇女更年期综合症、各种原因造成的情绪紧张、失眠、神经衰弱、各种精神抑郁症有奇效。本方经三株医院长期临床验证，众多患者亲快速改变便秘症状，不腹泻、不腹痛，不损害肠胃功能，无依赖性，健康排毒。 2、调理肠道菌群平衡，减少毒素进入血液，增强排除体内毒素。 3、调理内环境，排便的轻松和畅快，吃饭、睡觉、神状况改变。 4、调理内分泌，调整气血平衡，消费者面色红润，有光泽，面部色斑、痘痘等影响美容问题逐步消失。
长期服用，保持良好的身体内环境，菌群平衡、气血平衡、内分泌平衡，由内而外健康美。
百亿益生菌－健康排毒，成就女性由内而外的健康美。

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

聪
培养温度（℃）
图６培养温度与活蔺数的关系
发酵时Ｎ（ｈ１
图３
Ｑ。生长曲线
２．２．４初始ｐＨ对生长的影响调节培养基初始ｐＨ分别为４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８培养２４ｈ，测定ｏＤ锄，查ｏＤ锕与菌体工作曲线，绘制发酵液初始ｐＨ
与活菌数的关系曲线。
毫
凸
由图７可知，保加利亚乳杆菌Ｂ。发酵液初始ｐＨ为５．３～５．８时发酵效果最优，起始ｐＨ过低或过高，都不利于乳酸菌生长，５．５时所获得的活菌最多。为４．０８ｘ１０９ｅｆｕ／ｍＬ。双歧杆菌Ｓ．最适初始ｐＨ为６．８－７．３，
ｌ咝
Ｓｃｉｅｎｃｅａｎｄ黪’
：
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ矿Ｆｏｏｄ
生物三连 …’ 一
一
Ｉｎｄ甜ｔｒｙ
：７
；二
ｋ一～
张强１．马齐１．徐升运’。陈卫峰１，张晴２（１．陕西省科学院酶工程研究所，陕西西安７１０６００；２．西安理工大学，陕西西安７１００４８）
摘要：为获得最大生物量，利用比浊法做标准曲线测定发酵液中的活茵数．研究了三株益生茵的发酵特性。结果表明，双歧杆茵Ｓ。在ｐＨ７．０、１５０ｒ／ｒａｉｎ、３５％条件下发酵２７ｈ活茵为２．１５×１０９ｃｆｕ／ｒａＬ，保加利亚乳杆茵０６在ｐＨ５．５、２００ｒ／ｒａｉｎ、３５＇（ｉ条件下发酵３６ｈ活茵为４．７５Ｘ１０９ｅｆｕ／ｍＬ，嗜热链球茵Ｂ６在ｐＨ７．０、２００ｒ／ｒａｉｎ、４０。Ｃ条件下发酵３０ｈ活茵
（１．ＥｎｚｙｍｅＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓｏｆＳｈａａｎｘｉ，Ｘｉ’卸７１０６００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｘｉ’蛐ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｘｉ’卸７１００４８，Ｃｈｉｎａ）ｏｂｔａｉｎｉｎｇｔｈｅｌａｒｇｅｏｆｔｈｅｂｉｏｍａｓｓ，ｔｈｅｆｅｒｍｅｎｔａｌｉｏｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｔｈｒｅｅｐｒｏｂｉｏｔｉｃｅｗｅｒｅ
中图分类号：１踟ｌ－３
文献标识码：Ａ
文章编号：１００２－０３０６（２００９）０５—０１７８－０３
益生茵是一种可通过改变肠道菌群平衡而对动物施加有利影响的活的微生物添加剂【‘’２１。益生菌的活细胞数量需要达到１０６ｃｆｕ／ｇ，但是在某些情况下，只要益生菌活细胞数在食品保质期内不低于１０５ｅｆｕ／ｇ也被认为能达到益生效果，几个世界食品组织提出的官方标准是最低１０６—１０７ｅｆｕ／ｇ¨。ｏ。２００３年中国卫生部制定的《乳酸菌饮料卫生标准》规定的活性乳酸茵指标在出厂时达到１０７ｃｆｕｆｍＬ，销售过程有活菌检出即可№】。因此，提高益生菌的活菌数是提升益生茵制品品质的重要途径。本文采用比浊法测定活菌数，研究了自选的三株益生菌的发酵特性。
１．２培养基Ｆ．８】１．２．１双歧杆菌斜面培养基蛋白胨３％，酵母膏０．５％，牛肉膏ｌ％，ＮａＣｌ１％，可溶性淀粉０．１％，葡萄糖４％，Ｋ：ＨＰＯ。０．６％，新鲜牛奶５０％，ｐＨ７．１－７．２。液体种子培养基：蛋白胨１．５％，葡萄糖１．５％，酵母膏０．４％，牛肉膏０．４％，ＮａＣｌ０．５％Ｎａ＿２ＨＰ０４０．２５％，ｐＨ
菌数。
２结果与讨论
活菌数与ＯＤ６００的关系取适量培养液离心定容，控制吸光度在０．０５— ０．４０的范围内，吸光度与细胞密度呈线性关系。利用血球计数板直接镜检计数，做０Ｄ。与活菌数的工作曲线，结果见图１。
２．１
的接种量分别接人发酵培养基中培养２４ｈ。于６００ｈｍ处测定ｏＤ。，换算成相应的活菌数，绘制接种量与ＯＤ。的关系曲线。由阁５可知，不同接种量对益生菌的活菌数有
Ｘ
ｂａｃｔｅｒｉａｎｕｍｂｅｒｏｆＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒ／ａ
Ｓ．。ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ
ｕｎｄｅｒｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｆ
１０９ｃｆｕ／ｍＬ，ｔｈｅｌｉｖｉｎｇｂａｃｔｅｒｉａｎｕｍｂｅｒｏｆＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｂｕｌｇａｒｉｃｕｓＱ６＇ｆｅｒｍｅｎｔｅｄｕｎｄｅｒｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｆｐＨ５．５，２００ｒ／ｍｉｎ，３５０Ｃｆｏｒ３６ｈ。ｗａｓ４．７５×１０９ｃｆｕ／ｍＬ，ｔｈｅｌｉｖｉｎｇｂａｃｔｅｒｉａ
ｎｕｍｂｅｒｏｆ
Ｘ
ＳｔｒｅｐｔｏｅｏｅｃｕｓｔｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓＢ６，
ｆｅｒｍｅｎｔｅｄｕｎｄｅｒｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｆＰ１－１７．０，２００ｒ／ｍｉｎ，加℃，ｆｏｒ３０ｈ，ｗａｓ１．４３
Ｋｅｙ
１０９ｃｆｕ／ｍＬ
ＷＯｒｄｓ：ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ；Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ；Ｓｔｒｅｐｔｏｅｏｅｃｕｓｔｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ；Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ；ｔｕｒｂｉｄｉｍｅｔｒｙ
发酵时间（ｈ）图４
。
ｐＨ７．Ｏ时活菌最多，为１．８ｌ
ｘ
１０９ｃｆｕ／ｍＬ。嗜热链球
Ｂ。生长曲线
菌Ｑ。最适初始ｐＨ为６．８－７．３，ｐＨ７．０时活菌最多，为
０．７２×１０９ｃｆｕ／ｍＬ。
由图可知，ｓ．、Ｑ。、Ｂ６的生物量分别在２７、３６、３０ｈ时达到最大，活菌数目分别达到２．０５×１０９、１．１４ｘ１０’、４．８３×１０９ｃｆｕ／ｍＬ。故以获得最大生物量为目的的发酵时间分别为Ｓ。２７ｈ，Ｑ。３６ｈ，Ｂ。３０ｈ。２．２．２接种量的确定以ｌ％、５％、１０％、１５％、２０％
１．２．３
采用比浊法ｍ测定发酵液中微生物的数量。取１０ｍＬ菌液，在５０００ｒ／ｒａｉｎ的转速下离心分离，将沉淀洗涤后定容至１００ｍＬ。在波长６００ｎｍ下测定其ＯＤ鲫，利用血球计数板直接镜检计数，换算成相应
万方数据
生彻三程———————、丽丽面』型俎
的活菌数，做出光密度一菌数标准曲线。然后，以样品液所测得的光密度，从标准曲线中查出对应的
下的活菌数为２．０４
Ｏ．１Ｏ
１０９ｃｆｕ／ｍＬ，Ｑ。的最佳培养温度为４０。Ｃ，最大活菌数为Ｏ．９０ｘ１０９ｃｆｕ／ｍＬ，Ｂ。的最佳
Ｘ
温度是４０℃，最大活菌数是４．１ｌ
发酵时Ｎ（ｈ１图２
４．５
ｘ
１０９ｅｆｕ／ｍＬ。
Ｓ．生长曲线
３
４
乓３．５
ｂ２
ｘ
０．８Ｏ．７０．６
唁３
５２
§Ｏ．５
８
ｏ．４０．３０．２Ｏ．１Ｏ２８１３１８２４３３４８
生物王程 …。。
’。’
３
差
鲞
己
主
鲞
三量．／少＼．
．一
●’
‘ 一
鬈
！ｉｇ
５５．５６６．５ｐＨ
７
蠡
翼
７．５
８
●
２０
４０
６０
８０
１００
玉米粉替代量（％）
图７
ｐＨ与活菌数的关系
图ｌＯ不同玉米粉替代量对Ｓ。，Ｑ。，Ｂ。生长的影响
趋势，在１５０ｒ／ｒａｉｎ时，所获得的活菌数最多，为２．２７ ×１０９ｅｆｕ／ｍＬ；Ｂ６在１７５ｒ／ｒａｉｎ时所获得的活菌最多，为５．４７×１０９ｅｆｕ／ｍＬ；Ｑ６在１７５ｒ／ｍｉｎ时所获得的活菌最多，为１．０５×１０９ｅｆｕ／ｍＬ。但随着转速的进一步提高，菌体大鼍生长，营养物质消耗过快，而影响菌体生长，使得活菌总数下降。
接种世确定为１０％，Ｑ。为５％。
ｏ
皇
苫
。Ｕ
—Ｊ毒皇ｕｂ一×一瓤惬烬
２ ∞＂如耶∞拍如巧∞：２ｍ，Ｏ
ｏ．ｏｉｏ．０５２ｏ．０８８ｏ．Ｏｌ７ｏ０４２ｏ．０６４ｏ．０４ｏ．１６３ｏ．２７６ ×
籁
ｉ强
０Ｄ啪图１
Ｓ，，Ｑ。，Ｂ。活菌数与０Ｄ鲫的关系
烬
５ｌｏ
１５
２０
２．２发酵条件的选择２．２．１发酵时间的确定每隔２ｈ取样，利用比浊法测定发酵液的０Ｄ。，并绘制０Ｄ。一时间的工作曲线，结果见图２一图４。
为１．４３×１０９ｃｈ／ｍＬ。
关键词：盗生茵，双歧杆茵，嗜热链球茵，保加利亚乳杆茵，比浊法
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｔｈｒｅｅｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ
ＺＨＡＮＧ
Ｑｉａｎ９１，ＭＡＱｉ’，ＸＵＳｈｅｎｇ—ｙｕｎｌ，ＣＨＥＮＷｅｉ—ｆｅｎ９１，ＺＨＡＮＧＱｉｎ９２
ｃｕｒｖｅ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ｌｎｏｒｄｅｒｔｏ
ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ。ａｎｄｔｈｅｇｒｏｗｔｈ
ｏｆ
ｂａｃｔｅｒｉａ
ｗａｓｄｒａｗｎｗｉｔｈ
ｔｕｒｂｉｄｉｍｅｔｒｙ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｌｉｖｉｎｇｐ卜仃．０。１５０ｒ／ｒａｉｎ，３５℃，ｆｏｒ２７ｈ，ｗａｓ２．１５
（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ
收稿日期：２００８—０９—１ｌ作者简介：张强（１９７５～）。男．工程师，主要从事酶工程．发酵工程的研究。基金项目：国莩星火计划项目（２００７ＥＡ８５００３）；陕西省科学院青年基金项目（２００８一Ｋ１６）。
保加利亚乳杆菌斜面培养基蛋白胨１．０％．酵母膏０．５％，牛肉膏１．０％，葡萄糖２．０％，西红柿汁．０％，ｐＨ５．４。液体种子培养基：蛋白胨０．５％，酵母膏０．５％。蔗糖０．５％，乳糖０．５％，醋酸钠０．１５％，ＮａＣＩ１．０％。ｐＨ自然。１．３生物量的测定
２．２．５摇床转速对生长的影响
将菌株分别在０、
１２５、１５０、１７５、２００、２２５ｒ／ｒａｉｎ下培养２４ｈ。测定
０Ｄ锄，绘制转速与活菌数的关系曲线。
由图８可知，ｓ。随着转速的增大而呈明显上升
万方数据
陌面甄丽，７９
＿竺兰兰竺垒
ＳａＬ－ｗｃｅａｎｄ
Ｔｅｃ／，ｎｏ／ｏ母，ｏｆ
Ｆｏｏｄｌｎｄｕｓｔｒｙ。。