单核细胞增生李斯特菌检验 ppt课件
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李斯特菌感染ppt课件
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人主要通过食入软奶酪、未充分加热 的鸡肉、未再次加热的热狗、鲜牛奶、 巴氏消毒奶、冰激凌、生牛排、羊排、 卷心菜色拉、芹菜、西红柿、法式馅 饼、冻猪舌等而感染，约占85-90%的 病例是由被污染的食品引起的。
2、该菌可通过眼及破损皮肤、粘膜进 入体内而造成感染，孕妇感染后通过 胎盘或产道感染胎儿或新生儿,栖居于 阴道、子宫颈的该菌也引起感染，性 接触也是本病传播的可能途径，且有 上升趋势。
3
流行病 学
1、单增李斯特氏菌广泛存在于自然界中， 不易被冻融，能耐受较高的渗透压，在 土壤、地表水、污水、废水、植物、青 储饲料、烂菜中均有该菌存在，所以动 物很容易食入该菌，并通过口腔-粪便的 途径进行传播。据报道，健康人粪便中 单增李氏菌的携带率为0.6-16%,有70% 的人可短期带菌，4-8%的水产品、510%的奶及其产品、30%以上的肉制品 及15%以上的家禽均被该菌污染。
7
潜伏期
在感染后3-70天出现症状，健康成人可出现 轻微类似流感症状，易感者突然发热，剧烈 头痛、恶心、呕吐、腹泻、败血症、脑膜炎、 孕妇出现流产。
单增李氏菌的抗原结构与毒力无关，它的致 病性与毒力机理如下：
1．寄生物介导的细胞内增生，使它附着及进 入肠细胞与巨噬细胞。
2．抗活化的巨噬细胞，单增李氏菌有细菌性 过氧化物歧化酶，使它能抗活化巨噬细胞内 的过氧物（为杀菌的毒性游离基团）分解。
12
防控措施
1、李斯特菌通常存在于潮湿区域和辅助清 洗设备中，例如：地面、排水沟、洗涤池、 天花板、冷凝水、拖把、海绵、盐水冷冻 设备及剥皮机。因此，控制李斯特氏菌的 数量对减少深加工过程中的污染是很有必 要的。
2、控制李斯特菌这类病原菌的最好方法是 降低交叉污染。使原料和成品操作分离， 保持区域干燥，以防细菌生长和减少微生 物扩散。
人主要通过食入软奶酪、未充分加热 的鸡肉、未再次加热的热狗、鲜牛奶、 巴氏消毒奶、冰激凌、生牛排、羊排、 卷心菜色拉、芹菜、西红柿、法式馅 饼、冻猪舌等而感染，约占85-90%的 病例是由被污染的食品引起的。
2、该菌可通过眼及破损皮肤、粘膜进 入体内而造成感染，孕妇感染后通过 胎盘或产道感染胎儿或新生儿,栖居于 阴道、子宫颈的该菌也引起感染，性 接触也是本病传播的可能途径，且有 上升趋势。
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流行病 学
1、单增李斯特氏菌广泛存在于自然界中， 不易被冻融，能耐受较高的渗透压，在 土壤、地表水、污水、废水、植物、青 储饲料、烂菜中均有该菌存在，所以动 物很容易食入该菌，并通过口腔-粪便的 途径进行传播。据报道，健康人粪便中 单增李氏菌的携带率为0.6-16%,有70% 的人可短期带菌，4-8%的水产品、510%的奶及其产品、30%以上的肉制品 及15%以上的家禽均被该菌污染。
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潜伏期
在感染后3-70天出现症状，健康成人可出现 轻微类似流感症状，易感者突然发热，剧烈 头痛、恶心、呕吐、腹泻、败血症、脑膜炎、 孕妇出现流产。
单增李氏菌的抗原结构与毒力无关，它的致 病性与毒力机理如下：
1．寄生物介导的细胞内增生，使它附着及进 入肠细胞与巨噬细胞。
2．抗活化的巨噬细胞，单增李氏菌有细菌性 过氧化物歧化酶，使它能抗活化巨噬细胞内 的过氧物（为杀菌的毒性游离基团）分解。
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防控措施
1、李斯特菌通常存在于潮湿区域和辅助清 洗设备中，例如：地面、排水沟、洗涤池、 天花板、冷凝水、拖把、海绵、盐水冷冻 设备及剥皮机。因此，控制李斯特氏菌的 数量对减少深加工过程中的污染是很有必 要的。
2、控制李斯特菌这类病原菌的最好方法是 降低交叉污染。使原料和成品操作分离， 保持区域干燥，以防细菌生长和减少微生 物扩散。
李斯特菌 PPT课件
• 多发生于发达国家，主要以散发性为主
地区分布
• 新生儿，孕妇，老人50-59岁，免疫缺陷 易感人群 人群
2019/9/13
• 农场动物牛、羊、猪、鸡、马、鹿、鸽 宿主 子、海鸥等均可能为李斯特菌的携带者
5
产单核细胞李斯特菌为需氧或兼性厌氧，感染后患者病死率高 达30％
该 菌 对 各 种 应 激 （低温、高盐、低 ｐＨ、氧 化 应 激 等） 条 件 有 很 强 的 耐 受性，进一步增大了该菌的危害性。此 菌不产生内毒素，可 产 生 一 种 溶 血 性 外 毒 素，对 人 类 致 病 性强
2019/9/13
10
发病机制
• 产单核细胞李斯特菌能产生 ２ 种磷脂酶Ｃ：磷脂酰肌磷 脂酶 Ｃ(ＰＩ－ＰＬＣ）和宽范围的磷脂酶Ｃ（ＰＣ－Ｐ ＬＣ）
• ＰＩ－ＰＬＣ毒性相对较小，对细菌在细胞间扩散作用 不 大，主 要 是 协 同 ＰＣ－ＰＬＣ 发 挥 作 用。 而ＰＣ －ＰＬＣ的功能则较复杂，它使细菌从吞噬泡中逃逸出来， 能破坏宿主细胞的信号通路，能调节细胞因子和化学因子 的合成，还能通过二酰基甘油、神经酰胺、肌醇磷酸盐等 调节细胞的生长、分化、凋亡等
2019/9/13
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临床表现
• 李斯特菌脑膜炎与其他细菌性脑膜炎相似 • 一般起病急，90%病例的首发症状为发热 • 有严重的头痛、眩晕、恶心、呕吐 • 脑膜刺激征明显，且常伴有意识障碍，如木僵、谵妄等亦
可发生抽搐
2019/9/13
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临床表现
• 重症者可在24～48h内昏迷 • 少数起病缓慢，病程较长而有反复 • 如病变累及脑实质则可有脑炎和脑脓肿的表现 • 个别发生脑干炎而呈复视、发音和吞咽困难、面神经瘫痪
胞被吸引到炎症部位，导致炎症清除 • 体液免疫对该菌感染无保护作用，故在细胞免疫
MMFSCNJ出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检验方法
MM_FS_CNJ_03出口食品单核细胞增生李斯特氏菌斜射光镜MM_FS_CNJ_0344 出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检验方法1. 适用范围本方法适用于牛乳、乳制品、水产品、肉及肉制品食品。
其他食品可参照采用。
2. 原理概要单核细胞增生李斯特氏菌是一种能引起人畜共患疾病的致病菌。
在胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂（TS2 YE、选择性培养基（MMA等平板上用45°角斜射光照射可观察到蓝色菌落；水解七叶苷并与柠檬酸铁铵反应产生黑色菌落。
3. 主要试剂和仪器. 主要试剂（包括培养基）胰酪胨大豆酵母浸膏肉汤（TSB-YE （见B1）；胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂（TSA- YE （见B2）; 增菌培养液（EB （见B3 ；选择性培养基（MMA （见B4 ；牛津琼脂（见B5 ；改良缓冲蛋白胨水（MBP （见B6 ；7％羊血琼脂（见B7 ；糖发酵培养基（见B8 ；半固体琼脂；尿素琼脂；硝酸盐培养基；MR- VP培养基；三糖铁琼脂（TSI 。
胰酪蛋白胨（或胰蛋白胨；盐酸吖啶黄素；萘啶酮酸；复达新；甘氨酸酐；氯化锂；苯乙醇；放线菌酮；多粘菌素E；头孢双硫唑甲氧；磷霉素；柠檬酸铁铵；七叶苷；酚红；D—葡萄糖；D—甘露醇；哥伦比亚琼脂；酵母浸膏；牛肉浸膏。
. 仪器微生物学实验室常用设备；解剖镜；斜射灯；平面镜。
4. 过程简述. 样品如为冷冻食品，应于2〜5C解冻，且不超过18h,若不能及时检验，应置于 -15C保存。
非冷冻的易腐样品应尽可能及时检验，若不能及时检验，应置于4C 冰箱保存，在24h 之内检验。
. 前增菌和增菌前增菌：巴氏消毒乳、乳制品、冷冻水产品，冻肉及其它加工食品均应进行前增菌。
无菌操作称取25g样品，加入装有225mL改良缓冲蛋白胨水（MBP的均质杯内，高速均质1〜2min，制成1 : 10样品匀液，转入500ml T口瓶内；液体食品可用吸管吸取25mL样品，加入装有225mL改良缓冲蛋白胨水（MBP的广口内，充分振摇制成1 : 10样品匀液，于30C培养24、48h。
单核细胞增生李斯特菌检验
《动物检疫检验技术专业教学资源库》
单核细胞增生李斯特菌检验
一、生物学特性
形态及染色：该菌为革兰氏阳性短 杆菌，大小约0.5um×1.0um～2.0um， 直或稍弯，两端钝圆，常呈v字型排 列，偶有球状、双球状，兼性厌氧、 无芽胞，一般不形成荚膜，但在营 养丰富的环境中可形成荚膜，在陈 旧培养基中的菌体可呈丝状及革兰 氏阴性，该菌有4根周毛和1根端毛， 但周毛易脱落。
产道感染胎儿或新生儿，栖居于阴道、子宫颈的该菌也引起感染，性接解也是本 病传播的可能途径，且有上升趋势。 临床表现，健康成人个体出现轻微类似流感症状，新生儿、孕妇、免疫缺陷患者 等表现为呼吸急促、呕吐、出血性皮疹、化脓性结膜炎、发热、抽搐、昏迷、自 然流产、脑膜炎、败血症直至死亡。
《动物检疫检验技术专业教学资源库》
《动物检疫检验技术专业教学资源库》
单核细胞增生李斯特菌检验
胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂(TSA-YE)平板
用 途：用于单增李氏菌分纯 、培养。
原 理：胰蛋白胨、多价胨和 酵母浸粉提供氮源、维生素 和生长因子；氯化钠维持均 衡的渗透压；葡萄糖提供碳 源；磷酸氢二钾为缓冲剂。
《动物检疫检验技术专业教学资源库》
动物检疫检验技术 专业教学资源库
动物性食品微生物检验
单核细胞增生李斯特菌检验
主讲人：王福红
单核细胞增生李斯特菌检验
知识目标：
• 理解单核细胞增生李斯特菌的生物学特性。 • 了解单核细胞增生李斯特菌的致病性。 • 掌握单核细胞增生李斯特菌标准检验方法。
能力目标：
• 会制备单核细胞增生李斯特菌检验用培养基。 • 会对单核细胞增生李斯特菌进行检验。
电镜下的李特氏菌
《动物检疫检验技术专业教学资源库》
单核细胞增生李斯特菌检验
单核细胞增生李斯特菌检验
一、生物学特性
形态及染色：该菌为革兰氏阳性短 杆菌，大小约0.5um×1.0um～2.0um， 直或稍弯，两端钝圆，常呈v字型排 列，偶有球状、双球状，兼性厌氧、 无芽胞，一般不形成荚膜，但在营 养丰富的环境中可形成荚膜，在陈 旧培养基中的菌体可呈丝状及革兰 氏阴性，该菌有4根周毛和1根端毛， 但周毛易脱落。
产道感染胎儿或新生儿，栖居于阴道、子宫颈的该菌也引起感染，性接解也是本 病传播的可能途径，且有上升趋势。 临床表现，健康成人个体出现轻微类似流感症状，新生儿、孕妇、免疫缺陷患者 等表现为呼吸急促、呕吐、出血性皮疹、化脓性结膜炎、发热、抽搐、昏迷、自 然流产、脑膜炎、败血症直至死亡。
《动物检疫检验技术专业教学资源库》
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单核细胞增生李斯特菌检验
胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂(TSA-YE)平板
用 途：用于单增李氏菌分纯 、培养。
原 理：胰蛋白胨、多价胨和 酵母浸粉提供氮源、维生素 和生长因子；氯化钠维持均 衡的渗透压；葡萄糖提供碳 源；磷酸氢二钾为缓冲剂。
《动物检疫检验技术专业教学资源库》
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动物性食品微生物检验
单核细胞增生李斯特菌检验
主讲人：王福红
单核细胞增生李斯特菌检验
知识目标：
• 理解单核细胞增生李斯特菌的生物学特性。 • 了解单核细胞增生李斯特菌的致病性。 • 掌握单核细胞增生李斯特菌标准检验方法。
能力目标：
• 会制备单核细胞增生李斯特菌检验用培养基。 • 会对单核细胞增生李斯特菌进行检验。
电镜下的李特氏菌
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单核细胞增生李斯特菌检验
李斯特菌的检验ppt课件
2019
.
11
临床表现
• 感染LM的孕妇多表现有宫内感染并可发 生早产、流产、死胎，预后险恶。产下 的婴儿常在24~72h内死亡。
• 有时可侵犯上呼吸道而呈现咽峡炎的症 状，常伴有局部淋巴腺炎。
• 可引起人的心内膜炎，并可感染皮肤、 眼睛、泌尿道而引起皮肤损伤、结膜炎、 尿道炎等症状。
2019
.
12
18
李斯特菌鉴定
• 除个别菌外，触酶阳性，氧化酶阳 性，水解七叶苷，不水解尿素、明 胶和，其不它产种生类糖H2产S、酸吲。哚。发酵葡萄糖
• 属的鉴定：革兰染色，湿标本中的 翻转运动试验，触酶阳性，发酵D葡萄糖产酸，水解七叶苷，VP阳性， 甲基红阳性。
2019
.
19
李斯特菌鉴定
• 种的鉴定：窄的β溶血环，CAMP表 现和金黄色葡萄球菌有协同溶血作 用，不发酵木糖，微量鉴定系统 API-Listeria（法国生物梅里埃）和 Micro-IDListeria（OrganonTeknika）， 菌落DNA探针杂交。
• 血清型分型确认。
2019
.
20
致病力检测
• 动物试验可用于分离的李斯特菌的潜在 毒力，如小鼠腹膜内接种、兔眼结膜接 种（Anton）试验、鸡胚绒毛膜尿囊接种。 但并非是常规的，因为大多数刚分离出 的单核细胞增生性李斯特菌株都有毒力。
• 已经建立了一种敏感的免疫抑制小鼠模 型，少量的有毒力菌即可导致小鼠在3d 内死亡。
• 脑脊液中及组织中单核细胞增生性李斯特菌的DNA 能以PCR方法检测。应该在专门的实验室中操作， 方法的敏感性、特异性高，当抗生素的使用影响细 菌的分离时尤其有用。
2019
.
41
LM的实验室检测方法
单核细胞增生李斯特菌检验 ppt课件
在李斯特氏菌属的六个种中，只有两种致病菌：单核增 生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌可以引起老鼠和其他动物 发病。但是，其中通常只有单核增生李斯特氏菌和人类的 李斯特氏菌症（listeriosis）相关。因此，李斯特氏菌中最 有检测意义的是单核增生李斯特氏菌。
单增李斯特氏菌能引起人、畜的李斯特氏菌病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和流
一方面血清是进口的，无国产的；另一 方面只存在“O”抗原因子血清，并且各 型之间含有多种共同的抗原因子，因此 其血清学上鉴别意义不大。
2.商业生化鉴定系统的应用 原国标中未涉及，FDA、AOAC标准使用API 10300、Vitek GNI（AOAC 989.13），这些方法都比较成熟，稳定性较好，已 被许多国家和组织的标准采用。
按2009年国家食源性疾病检测网的工作手 册
1.定性检测 2.定量检测
检样 25 g(ml)样品+LB 增菌液225 mL，均质
1
30 ℃±1 ℃，24 h 0.1 mL+10 mL LB 增菌液
2 30 ℃±1 ℃，18 h～24 h
科玛嘉李斯特菌显色培养基 36 ℃±1 ℃，24 h～48 h
将7羊血琼脂平板底面划分为2025个小格从tsaye上挑取菌落刺种到血平板上每格刺种一个菌落并刺种阳性对照菌单增李斯特菌和绵羊李斯特菌和阴性对照菌英诺克李斯于35培养24h48h穿刺时尽量接近底部但不要触到底面同时避免琼脂破裂于明亮处观察洁净的血琼脂平板单增李斯特菌和斯氏李斯特菌在刺种点周围产生狭小的透明溶血环无害李斯特菌无溶血环伊氏利斯特菌产生大的透明溶血环
PALCAM琼脂
接种木糖、鼠李糖，36 ℃±1 ℃，24 h；同时于TSA-YE平板划线纯化，30 ℃±1 ℃，24 h～48 h
单增李斯特氏菌能引起人、畜的李斯特氏菌病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和流
一方面血清是进口的，无国产的；另一 方面只存在“O”抗原因子血清，并且各 型之间含有多种共同的抗原因子，因此 其血清学上鉴别意义不大。
2.商业生化鉴定系统的应用 原国标中未涉及，FDA、AOAC标准使用API 10300、Vitek GNI（AOAC 989.13），这些方法都比较成熟，稳定性较好，已 被许多国家和组织的标准采用。
按2009年国家食源性疾病检测网的工作手 册
1.定性检测 2.定量检测
检样 25 g(ml)样品+LB 增菌液225 mL，均质
1
30 ℃±1 ℃，24 h 0.1 mL+10 mL LB 增菌液
2 30 ℃±1 ℃，18 h～24 h
科玛嘉李斯特菌显色培养基 36 ℃±1 ℃，24 h～48 h
将7羊血琼脂平板底面划分为2025个小格从tsaye上挑取菌落刺种到血平板上每格刺种一个菌落并刺种阳性对照菌单增李斯特菌和绵羊李斯特菌和阴性对照菌英诺克李斯于35培养24h48h穿刺时尽量接近底部但不要触到底面同时避免琼脂破裂于明亮处观察洁净的血琼脂平板单增李斯特菌和斯氏李斯特菌在刺种点周围产生狭小的透明溶血环无害李斯特菌无溶血环伊氏利斯特菌产生大的透明溶血环
PALCAM琼脂
接种木糖、鼠李糖，36 ℃±1 ℃，24 h；同时于TSA-YE平板划线纯化，30 ℃±1 ℃，24 h～48 h
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产等。它广泛存在于自然界中。肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都可被污染。 该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一。 其易感人群主要为孕妇、老人、新生儿和免疫缺陷人群。大多数发达国家人类李斯特菌病 发生率约为每一百万人2-15例，死亡率为13-34% 加拿大由单增李斯特氏菌污染肉制品引发李斯特菌病暴发，导致十几人死亡。很多国家都 已经采取措施来控制食品中的单增李斯特氏菌，并制定了相应的标准。
按2009年国家食源性疾病检测网的工作手 册
1.定性检测 2.定量检测
检样 25 g(ml)样品+LB 增菌液225 mL，均质
1
30 ℃±1 ℃，24 h 0.1 mL+10 mL LB 增菌液
2 30 ℃±1 ℃，18 h～24 h
科玛嘉李斯特菌显色培养基 36 ℃±1 ℃，24 h～48 h
表1 单核细胞增生李斯特菌在选择性平板 上的菌落特征
选择性琼脂平板单核细胞增生李斯特菌科 玛嘉显色培养基菌落为:蓝色，周围有白色 晕圈.
PALCAM琼脂菌落:为灰绿色，小的圆形菌落 ，周围有棕黑色水解圈，有些菌落有黑色 凹陷
L.M在 Chromagar培养基生长特征
L.M在OXA培养基生长特征
协同溶血试验 (cAMP):
在血平板上平行接种金黄色葡萄球菌和马红球菌 (R.equi), 在它们中两者之间垂直接种可疑李斯特菌 , 但不要触及它们, 于30℃培养24h～48 h, 检查平板 中垂直接种点对溶血环的影响。靠近金黄色葡萄 球菌接种点的单核细胞增生李斯特菌的溶血增强, 斯氏李斯特菌（L.seeligeri）的溶血也增强, 而伊氏 李斯特菌（L.ivanovii）在马红球菌附近的溶血增 强。
PALCAM琼脂
接种木糖、鼠李糖，36 ℃±1 ℃，24 h；同时于TSA-YE平板划线纯化，30 ℃±1 ℃，24 h～48 h
木糖-，鼠李糖+ 鉴定
结果报告
增菌培养:LB1增菌液225 mL，于30℃培养24h, 吸取 0.1 mL，加入10mL LB2增菌液中二次增菌。
分离培养:LB2 二次增菌液转种于选择培养基PALCAM 和科玛嘉琼脂平板上，于37℃培养24 h，观察各个平板 上生长的菌落,各个平板上的菌落特征见表1。
单核细胞增生李斯特菌检验 ppt课件
李斯特氏菌属
李斯特氏菌属（Listeria ）普遍存在于环境中，最新的分 类学研究表明，其分为六个种： Ø 单核增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes） Ø 伊氏李斯特氏菌（Listeria ivanovii） Ø 英诺克李斯特氏菌（Listeria innocua） Ø 斯氏李斯特氏菌（Listeria seeligeri） Ø 威氏李斯特氏菌（Listeria welshimeri） Ø 格氏李斯特氏菌（Listeria grayi）
初筛及纯培养
自选择性琼脂平板上分别挑取5个以上典 型或可疑菌落，分别接种在木糖、鼠李 糖发酵管，于37℃培养24h；同时在胰酪 胨大豆琼脂培养基（TSA-YE）平板上划线 纯化，于30℃培养24h-48h。木糖阴性为 蓝色，鼠李糖阳性为黄色，在TSA-YE平板 上可疑菌落为淡蓝色。
单增李斯特氏菌生化性状与其种间的区别
该菌为革兰氏阳性无芽孢杆菌，在纯培养物
中呈短小杆菌，在初龄培养物中呈球杆菌状
，在老龄培养物中呈长丝的长杆菌状，有些
细菌因此而变成革兰氏阴性；为需氧或兼性 厌氧菌，在20～25℃培养时能形成4根鞭毛 ，运动活泼；在37℃培养时无鞭毛，运动消 失。
1.初筛
在我们前期工作中发现，高污染样品在选择 性琼脂平板上可疑菌落较多，为避免漏检和 减少工作量，增加初筛步骤：挑取典型或可 疑菌落接种在木糖、鼠李糖发酵管中，无须 烧环同时TSA-YE平板上划线分离纯菌。
金葡
伊氏李
马红
单核
对小鼠的毒力试验 （可选择）
将符合上述特性的纯培养物接种于TSB-YE中, 于30℃培养24 h, 离心, 弃上清液，用0.85无菌
生理盐水制备成浓度为1010cfu/mL的菌悬液, 取此
菌悬液进行小鼠腹腔注射 3～5只, 每只0.5 mL， 观察小鼠死亡情况。致病株于2～5d 内死亡。 试验时可用已知菌作对照。单核细胞增生利斯 特菌、伊氏利斯特菌（L.ivanovii）对小鼠有致 病性。
动力试验
将TSA-YE平板上的疑似菌落穿刺接种到SIM培 养基中，于30℃培养24h-48h，李斯特菌有动 力，呈伞状生长。
溶血实验：
将7%羊血琼脂平板底面划分为20-25个小格， 从TSA-YE上挑取菌落刺种到血平板上，每格刺 种一个菌落，并刺种阳性对照菌(单增李斯特 菌和绵羊李斯特菌)和阴性对照菌(英诺克李斯 特菌)，
在李斯特氏菌属的六个种中，只有两种致病菌：单核增 生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌可以引起老鼠和其他动物 发病。但是，其中通常只有单核增生李斯特氏菌和人类的 李斯特氏菌症（listeriosis）相关。因此，李斯特氏菌中最 有检测意义的是单核增生李斯特氏菌。
单增李斯特氏菌能引起人、畜的李斯特氏菌病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和流
L.M在PALCA型，很 难与杂菌区分
进口PALCAM 、进口OXA菌落较典型，易与 杂菌区分
CHROMagar菌落较典型，易与杂菌区分， 对高污染食品中的杂菌抑制性较差
染色镜检
将上述可疑纯培养物做革兰氏染色并做湿片 检查; 利斯特菌为革兰氏阳性短杆菌, 大小为 0.4～0.5μm×0.5～2.0μm；用生理盐水制成 菌悬液, 在油镜或相差显微镜下观察, 该菌出 现轻微旋转或翻滚样的运动。
于35℃培养24h-48h，穿刺时尽量接近底部 ，但不要触到底面，同时避免琼脂破裂。
于明亮处观察洁净的血琼脂平板，单增李 斯特菌和斯氏李斯特菌在刺种点周围产生 狭小的透明溶血环，无害李斯特菌无溶血 环，伊氏利斯特菌产生大的透明溶血环。 注意：不要据此来区别李斯特氏各种菌， 仅仅是一种溶血现象。用CAMP试验来确 证李斯特氏各种菌。
按2009年国家食源性疾病检测网的工作手 册
1.定性检测 2.定量检测
检样 25 g(ml)样品+LB 增菌液225 mL，均质
1
30 ℃±1 ℃，24 h 0.1 mL+10 mL LB 增菌液
2 30 ℃±1 ℃，18 h～24 h
科玛嘉李斯特菌显色培养基 36 ℃±1 ℃，24 h～48 h
表1 单核细胞增生李斯特菌在选择性平板 上的菌落特征
选择性琼脂平板单核细胞增生李斯特菌科 玛嘉显色培养基菌落为:蓝色，周围有白色 晕圈.
PALCAM琼脂菌落:为灰绿色，小的圆形菌落 ，周围有棕黑色水解圈，有些菌落有黑色 凹陷
L.M在 Chromagar培养基生长特征
L.M在OXA培养基生长特征
协同溶血试验 (cAMP):
在血平板上平行接种金黄色葡萄球菌和马红球菌 (R.equi), 在它们中两者之间垂直接种可疑李斯特菌 , 但不要触及它们, 于30℃培养24h～48 h, 检查平板 中垂直接种点对溶血环的影响。靠近金黄色葡萄 球菌接种点的单核细胞增生李斯特菌的溶血增强, 斯氏李斯特菌（L.seeligeri）的溶血也增强, 而伊氏 李斯特菌（L.ivanovii）在马红球菌附近的溶血增 强。
PALCAM琼脂
接种木糖、鼠李糖，36 ℃±1 ℃，24 h；同时于TSA-YE平板划线纯化，30 ℃±1 ℃，24 h～48 h
木糖-，鼠李糖+ 鉴定
结果报告
增菌培养:LB1增菌液225 mL，于30℃培养24h, 吸取 0.1 mL，加入10mL LB2增菌液中二次增菌。
分离培养:LB2 二次增菌液转种于选择培养基PALCAM 和科玛嘉琼脂平板上，于37℃培养24 h，观察各个平板 上生长的菌落,各个平板上的菌落特征见表1。
单核细胞增生李斯特菌检验 ppt课件
李斯特氏菌属
李斯特氏菌属（Listeria ）普遍存在于环境中，最新的分 类学研究表明，其分为六个种： Ø 单核增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes） Ø 伊氏李斯特氏菌（Listeria ivanovii） Ø 英诺克李斯特氏菌（Listeria innocua） Ø 斯氏李斯特氏菌（Listeria seeligeri） Ø 威氏李斯特氏菌（Listeria welshimeri） Ø 格氏李斯特氏菌（Listeria grayi）
初筛及纯培养
自选择性琼脂平板上分别挑取5个以上典 型或可疑菌落，分别接种在木糖、鼠李 糖发酵管，于37℃培养24h；同时在胰酪 胨大豆琼脂培养基（TSA-YE）平板上划线 纯化，于30℃培养24h-48h。木糖阴性为 蓝色，鼠李糖阳性为黄色，在TSA-YE平板 上可疑菌落为淡蓝色。
单增李斯特氏菌生化性状与其种间的区别
该菌为革兰氏阳性无芽孢杆菌，在纯培养物
中呈短小杆菌，在初龄培养物中呈球杆菌状
，在老龄培养物中呈长丝的长杆菌状，有些
细菌因此而变成革兰氏阴性；为需氧或兼性 厌氧菌，在20～25℃培养时能形成4根鞭毛 ，运动活泼；在37℃培养时无鞭毛，运动消 失。
1.初筛
在我们前期工作中发现，高污染样品在选择 性琼脂平板上可疑菌落较多，为避免漏检和 减少工作量，增加初筛步骤：挑取典型或可 疑菌落接种在木糖、鼠李糖发酵管中，无须 烧环同时TSA-YE平板上划线分离纯菌。
金葡
伊氏李
马红
单核
对小鼠的毒力试验 （可选择）
将符合上述特性的纯培养物接种于TSB-YE中, 于30℃培养24 h, 离心, 弃上清液，用0.85无菌
生理盐水制备成浓度为1010cfu/mL的菌悬液, 取此
菌悬液进行小鼠腹腔注射 3～5只, 每只0.5 mL， 观察小鼠死亡情况。致病株于2～5d 内死亡。 试验时可用已知菌作对照。单核细胞增生利斯 特菌、伊氏利斯特菌（L.ivanovii）对小鼠有致 病性。
动力试验
将TSA-YE平板上的疑似菌落穿刺接种到SIM培 养基中，于30℃培养24h-48h，李斯特菌有动 力，呈伞状生长。
溶血实验：
将7%羊血琼脂平板底面划分为20-25个小格， 从TSA-YE上挑取菌落刺种到血平板上，每格刺 种一个菌落，并刺种阳性对照菌(单增李斯特 菌和绵羊李斯特菌)和阴性对照菌(英诺克李斯 特菌)，
在李斯特氏菌属的六个种中，只有两种致病菌：单核增 生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌可以引起老鼠和其他动物 发病。但是，其中通常只有单核增生李斯特氏菌和人类的 李斯特氏菌症（listeriosis）相关。因此，李斯特氏菌中最 有检测意义的是单核增生李斯特氏菌。
单增李斯特氏菌能引起人、畜的李斯特氏菌病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和流
L.M在PALCA型，很 难与杂菌区分
进口PALCAM 、进口OXA菌落较典型，易与 杂菌区分
CHROMagar菌落较典型，易与杂菌区分， 对高污染食品中的杂菌抑制性较差
染色镜检
将上述可疑纯培养物做革兰氏染色并做湿片 检查; 利斯特菌为革兰氏阳性短杆菌, 大小为 0.4～0.5μm×0.5～2.0μm；用生理盐水制成 菌悬液, 在油镜或相差显微镜下观察, 该菌出 现轻微旋转或翻滚样的运动。
于35℃培养24h-48h，穿刺时尽量接近底部 ，但不要触到底面，同时避免琼脂破裂。
于明亮处观察洁净的血琼脂平板，单增李 斯特菌和斯氏李斯特菌在刺种点周围产生 狭小的透明溶血环，无害李斯特菌无溶血 环，伊氏利斯特菌产生大的透明溶血环。 注意：不要据此来区别李斯特氏各种菌， 仅仅是一种溶血现象。用CAMP试验来确 证李斯特氏各种菌。