小肠结肠炎耶尔森菌调查

小肠结肠炎耶尔森菌调查
[摘要] 目的了解高密市食品中小肠结肠炎耶尔森菌及动物带菌情况。

方法2006-2010年采集家畜家禽粪便、冷冻食品共2097份，4℃冷增菌后用选择性培养基进行病原菌分离培养并作生化鉴定，将可疑菌株做进一步的血清学鉴定和生物分型及毒力检测。

结果2097份标本中分离出131株小肠结肠炎耶尔森菌，总的检出率为6.25﹪,其中O:3（携带毒力基因ail+、ystA+、rbfc+）和O:9血清型的检出率分别为0.76﹪和1.52﹪。

108株仅携带ystB基因（82.44﹪）；26株不携带任何基因（19.85﹪）。

131株小肠结肠炎耶尔森菌分布在3个生物型，其中生物1A型占74.80﹪;生物3型占1.52﹪;生物4型占0.76﹪。

结论本地区存在致病性小肠结肠炎耶尔森菌，有感染人和动物及引起食源性型疾病的可能，因此必须加大该菌的监测力度，以预防小肠结肠炎耶尔森菌病的感染流行。

[关键词] 小肠结肠炎耶尔森菌；血清分型；生物分型；毒力基因.
小肠结肠炎耶尔森菌广泛分布于自然界，是能在冷藏温度下生长的少数几种肠道致病菌之一［1］，除引起胃肠道症状外，还可引起关节炎，结节性红斑及肠系膜淋巴炎等疾患，甚至引起败血症，造成死亡［2］。

本病以散发为主，但也呈暴发性流行，并有明显的地域性分布。

该菌还是重要的食源性致病菌，国内外均时有报道过油该菌引起的食物中毒，其原因都是食品污染小肠结肠炎耶尔森菌引起的［3，4］，2006-2010年间采集家畜家禽新鲜粪便及各种冷冻食品2097份进行该病原菌的分离鉴定、血清分型、生物分型毒力因子检测，目的是为了了解高密市食品中小肠结肠炎耶尔森菌和动物带菌情况，现将结果报告如下。

1 材料与方法
1.1材料
1.1.1标本来源参照《全国小肠结肠炎耶尔森菌监测方案》，采集宿主动物新鲜粪便、各种冷冻食品共计2097份。

1.1.2主要试剂小肠结肠炎耶尔森菌选择性培养基为美国Acumedia manufactures ,nsing,Michigan 48912 产品；改良磷酸盐缓冲液（PSB）及其他培养基均购自北京陆桥技术有限责任公司；所用抗生素及api 20 E生化条均为在有效期内。

1.2实验方法
1.2.1分离培养取动物粪便标本、冷冻食品5g加入45ml的改良磷酸盐缓冲液（PSB）, 4℃冰箱冷增菌后，分别于第7天、第14天、第21天接种CIN和麦康凯琼脂平板，经26℃48h 培养后观察挑选可疑菌落（在CIN平板上挑取扁平，有明显的边缘，中心为深红色，周围有透明圆环，成“公牛眼”状菌落，在麦康凯平板上挑取无色半透明不粘稠针尖状大小的菌落）做进一步的鉴定。

1.2.2生化鉴定及分型将上述可疑菌落转种改良克氏双糖铁琼脂斜面进行初筛，26℃培养24h，根据改良克氏双糖铁及生化性状：斜面和底层均变黄（少数不发酵或迟缓发酵蔗糖斜面可仍为红色）、不产气、硫化氢阴性、尿素酶阳性、26℃培养24h动力阳性、37℃培养24h 动力阴性，镜检为革兰染色阴性无芽孢球杆状或球状细菌，用法国梅里埃公司生产的api 20 E生化条做进一步的系统生化鉴定。

1.2.3 血清分型对可疑菌株用玻片凝集法进行血清分型，同时设生理盐水作为对照。

1.2.4生物分型将分离到的菌株参照有关文献资料进一步做生物分型1A, 1B ,2 ,3 4 和5型。

1.2.5 毒力相关基因检测利用聚合酶链反应(PCR)方法测定ail、ystA、ystB 、virF、yadA 和rbfc相关毒力基因。

2 结果
2.1标本检出情况2097份样本中共分离到131株小肠结肠炎耶尔森菌，总的检出率为
6.25﹪(131/2097)，其中鸭粪检出率最高为14.7﹪（5/34），冷冻食品检出率最低为0.49﹪（4/811）(表1）。

2.2血清分型131株小肠结肠炎耶尔森菌分布在7个血清型，
其中65株为不确定血清型，定型的血清型中，o:5血清型36
株（27.48﹪）；o:8血清型17株（12.98﹪）；o:9血清型6株
（4.58﹪）；o:7,8血清型4株（3.05﹪）；o:3，o:48，o:19,8
血清型均为1株（0.76﹪）（表2）。

2.3生物分型131株小肠结肠炎耶尔森菌分布在3个生物型，
其中1A型98株（74.80﹪）；生物3型2株（1.52﹪）；生物
4型1株（0.76﹪）；其他30株（22.90﹪）。

2.4毒力分布对分离到的131株小肠结肠炎耶尔森菌分别进行ail、ystA、ystB 、virF、yadA和rbfc相关毒力基因检测，其中1株o:3血清型携带毒力因子ail+、ystA+、rbfc+（0.76﹪）；108株仅携带ystB+基因（82.44﹪）；26株不携带任何基因（19.85﹪)(表3）。

3 讨论
小肠结肠炎耶尔森菌有广泛的分布在自然界中，是一种人畜共患病的病原体，其主要存储宿主为家畜，家禽，鸟类等，在外环境中也可分离到，本地区在动物粪便和冷冻食品中均分离到阳性菌株，其中鸭粪的检出率最高，为14.7﹪，其次是羊粪12.60﹪、猪粪10.82﹪、鸡粪10.46﹪、牛粪9.34﹪，生、熟肉制品0.49﹪。

我国经证实对人有毒力的血清型0：3、O：9、o：5，27、O：6，30、O：7，8、O：l5、O：40［5］本地区分离到的131株小肠结肠炎耶尔森菌分布在7个血清型，o:5血清型36株(27.48﹪)；o:8血清型17株(12.98﹪)；o:9血清型6株(4.58﹪)；o:7,8血清型4株(3.05﹪)；o:3，o:48，o:19,8血清型均为1株(0.76﹪)。

国内主要流行血清型0:3和0:9均分离到，且0:3均携带毒力因子ail+、ystA+、rbfc+，因此，认为本地区存在0:3血清型小肠结肠炎感染流行的可能。

虽然还分离到美洲国家主要流行血清型0:8，但由于其缺乏致病所必须的毒力因子，一般认为是不致病的。

小肠结肠炎耶尔森菌据生化反应可分6个生物型(1A, 1B, 2, 3, 4, 5), 1B和2-5生物型通常认为是致病型的菌株，1A生物型不致病［6］.我们分离到得o:3和0:9血清型分别为生物4型和生物3型，其中1株o:3生物4型血清型携带毒力因子ail+、ystA+、rbfc+；虽然典型的致病性的菌株均携带ail+、ystA+、yadA+、virF+，但小肠结肠炎耶尔森菌在传代过程中毒力质粒是很普遍的，因此也认为致病菌株。

携带ystB+基因生物1A型菌株是这几年检出率比较高的菌株，这部分菌株与致病性的相比显然并不重要，并不是完全没有危害性，在某些条件下仍具有潜在的致病能力，国内外都有非致病性小肠结肠炎耶尔森菌引起的爆发和流行，因此必须引起我们的足够重视。

综上所述，高密地区宿主动物中广泛携带该菌，虽然我们在冷冻食品中没有检出致病性的小肠结肠炎耶尔森菌，但我们在猪粪粪便检测到国内主要流行血清型0:3且携带毒力因子ail+、ystA+、rbfc+，是本地区潜在的传染源，因此应继续加强该菌在本地区监测工作，预防小肠结肠炎耶尔森菌在动物之间的流行造成人群感染。

4 参考文献
［1］杨晋川刘金芳徐静静,等.32株小肠结肠炎耶尔森菌病原学特征[J].中华传染病杂志，2007,25（10）:607-610.
［2］Cover TL, Aber R C. Yersinia enterocolitica[J]. NewEngl J Med，1989，321:16-24. ［3］Wang X, Qiu H, Jin D, et al. O:8 serotype Yersinia enterocolitica strains in China[J].
Int J Food Microbiol,2008, 125:259-266.
［4］Ackers ML，Schoenfeld S，Markman J,et al．An outbreak of Yersinia enterocolitica 0：8 infectiom associated with pasteurised milk[J]．J infect Dis,2000，181：1834-1837．。