小肠结肠炎耶尔森氏菌检验(食品微生物学检验)
小肠结肠炎耶尔森氏菌检验(食品微生物学检验)
A.6.3 试验方法
从琼脂斜面上挑取培养物接种,于26 ℃±1 ℃ 培 养 18h~24h,观 察 结 果。鸟 氨 酸 脱 羧 酶 阳 性 者 由 于 产 碱 ,培 养 基 呈 紫 色 。 阴 性 者 无 碱 性 产 物 ,但 因 葡 萄 糖 产 酸 而 使 培 养 基 变 为 黄 色 。 对 照 管 为 黄 色 。
5
GB 4789.8—2016
A.3 改良 Y 培养基
A.3.1 成分
蛋白胨 氯化钠 乳糖 草酸钠 去氧胆酸钠 三号胆盐 丙酮酸钠 孟加拉红 水解酪蛋白 琼脂 蒸馏水
15.0g 5.0g 10.0g 2.0g 6.0g 5.0g 2.0g 40.0 mg 5.0g 17.0g 1000 mL
A.3.2 制法
1
4 检验程序 小 肠 结 肠 炎 耶 尔 森 氏 菌 检 验 程 序 见 图 1。
GB 4789.8—2016
图1 小肠结肠炎耶尔森氏菌检验程序
5 操作步骤
5.1 增菌 以无菌操作取25g(或25 mL)样品放入含有225 mL 改良磷酸盐缓冲液增菌液的无菌均质杯或均
质袋内,以8000r/min均质1 min或拍击式均质器均质1 min。液体样品或粉末状样品,应振荡混匀。 均质后于26 ℃±1 ℃增菌48h~72h。增菌时间长短可根据对样品污染程度的估计来确定。 5.2 碱处理
2.0g
甘露醇
20.0g
氯化钠
1.0g
去氧胆酸钠
2.0g
硫酸镁
0.01g
琼脂
12.0g
蒸馏水
950 mL
校正 pH 至7.5±0.1,将基础培养基于121 ℃高压灭菌15 min,备用。
A.2.2 Irgasan(二 氯 苯 氧 氯 酚 ):可 用 95% 的 乙 醇 作 溶 剂,溶 解 二 苯 醚,配 成 0.4% 的 溶 液 来 替 代
小肠结肠炎耶尔森氏菌显色培养基使用说明书
小肠结肠炎耶尔森氏菌显色培养基使用说明书用于小肠结肠炎耶尔森氏菌的分离和检测组分科玛嘉小肠结肠炎耶尔森氏菌基础培养基和增补剂各一瓶。
基础培养基：琼脂15.0 g/L 蛋白胨20.0 g/L 盐类 5.0 g/L 色素1.3 g/L 增补剂：0.1 g/LpH值7.0±0.2操作1、基础培养基：取瓶内干粉41.3 g溶于1000 mL去离子水的洁净三角瓶中，充分搅拌混匀。
也可根据需要按照41.3 g/L的比例扩大或缩小制备培养基的量。
2、加热至100℃，不停搅拌，使其完全溶解。
切勿加热超过100℃，切勿121℃高压灭菌。
若使用微波炉加热，应将培养基加热沸腾，立即移出，轻轻摇匀，再放入微波炉加热，观察小气泡变为大气泡，直至完全溶解即可。
切勿使培养基溢出。
3、增补剂：取增补剂0.1g溶于1mL去离子水中，（也可按照0.1g/L的比例扩大或缩小制备增补剂的量），搅拌均匀，使其完全溶解，将增补剂溶液过0.45um滤膜备用。
注：增补剂应现配现用，制备好的增补剂溶液在-20℃可保存15天。
4、把混匀后的增补剂加入到冷却至47℃±2℃的基础培养基中，轻轻摇动使其充分混匀，倾注平皿，使其凝固，晾干备用。
保存该成品平板在室温可保存一天或在冰箱内贮存1个月（2℃~8℃，避光）。
接种划线或涂布接种（冰箱内保存的平板使用前应恢复至室温），在30±1℃恒温条件下需氧培养24h~36h 。
结果性能及局限一些小肠结肠炎耶尔森氏菌在该培养基可能生长较弱。
一些较为罕见的非致病性耶尔森氏菌也可能会淡紫色菌落（伯氏耶尔森菌、莫氏耶尔森氏菌、克氏耶尔森氏菌、罗氏耶尔森氏菌等）。
最终鉴定为致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌需做附加试验。
贮存条件基础干粉贮存于15℃~30℃干燥环境中，增补剂贮存于2℃~8℃环境中，在有效期前使用。
污染处理使用过的培养基需要在121℃灭菌至少20分钟才可以按照有关规定丢弃。
附：供体外诊断使用，产品须专业人员操作。
小肠结肠炎耶尔森氏菌 食物中毒标准
小肠结肠炎耶尔森氏菌是一种常见的细菌，通常通过食物中毒的途径引起疾病。
它主要存在于未经煮沸的水、生鸡蛋、生奶酪等食物中。
一旦食用感染了这种细菌的食物，就会发生食物中毒。
对食物中毒标准的了解，对于我们防范和减少患病风险至关重要。
一、小肠结肠炎耶尔森氏菌的特征1. 菌种特点：小肠结肠炎耶尔森氏菌是一种革兰氏阴性细菌，属于肠道致病细菌。
2. 病原学特性：它主要通过食物中的受污染食品或饮用水传播，引起食物中毒。
3. 临床表现：患者会出现腹泻、发热、腹痛等症状，严重时甚至会导致肠道炎症和肠穿孔。
二、食物中毒标准1. 食品摄入标准：提醒人们要选择放心食材，避免食用生的或未煮熟的食品，特别是生肉和生蛋。
对于农村地区的自来水源不保险的人们，可以通过开水煮沸、消毒等方式确保食品安全。
2. 食品储存标准：要求人们正确储存食物，避免食物受到细菌的污染。
尤其是冰箱的温度要控制在适宜的范围内，避免细菌滋生。
3. 饮食习惯标准：从饮食结构上规避食物中毒，比如不要经常食用生冷食品，不要过量饮酒，不要摄入未经检验的野生水产品等，以减少感染的风险。
三、对主题的个人观点和理解小肠结肠炎耶尔森氏菌食物中毒虽然常见，但只要我们合理科学地饮食，保持良好的卫生习惯，就能有效地预防疾病的发生。
我们应该养成良好的饮食卫生习惯，选择新鲜、熟透的食品，合理搭配膳食，减少饮食中毒的风险。
总结回顾：小肠结肠炎耶尔森氏菌是一种引起食物中毒的致病菌，正确了解食物中毒标准，培养健康的饮食习惯，能够有效预防疾病的发生。
通过对主题的深入了解，我们能够更好地预防和应对食物中毒，保障身体健康。
小肠结肠炎耶尔森氏菌是一种肠道致病细菌，常常引起食物中毒疾病。
这种细菌的传播途径主要是食物中，特别是未经煮沸的水、生鸡蛋、生奶酪等食物中。
一旦食用了被这种细菌污染的食物，就可能出现严重的食物中毒反应。
对于小肠结肠炎耶尔森氏菌及食物中毒的防范和应对至关重要。
小肠结肠炎耶尔森氏菌的特征包括它是一种革兰氏阴性细菌，且主要通过食物传播，引起食物中毒。
小肠结肠炎耶尔森菌感染腹泻的实验室诊断研究
小肠结肠炎耶尔森菌感染腹泻的实验室诊断研究小肠结肠炎耶尔森菌（Yersinia enterocolitica）是一种人畜共患病的病原菌，分布很广泛，近年来引起人们广泛关注。
由于该菌能引起人类感染性腹泻，并且由它感染可引发后遗症，而逐渐受到全球重视。
小肠结肠炎耶尔森菌是一种嗜冷菌，0～4℃仍可繁殖并产生毒素，引起急性胃肠炎型食物中毒，又称“冰箱病”，该菌引起的食物中毒近年来时有报道[1-3]。
耶尔森菌病典型症状为胃肠炎症状、发热，亦可引起阑尾炎。
有的引起反应性关节炎，另一个并发症是败血症，即血液系统感染，尽管较少见，但死亡率较高。
我国小肠结肠炎耶尔森菌的监测工作从2005年开始。
由于医务人员普遍缺乏对本菌的认识，临床医生在对胃肠道腹泻病人进行诊断时往往忽略了此菌感染的可能性，检验人员也很少能为临床诊断提供准确的实验室检测结论。
现就该菌的实验室检测方法进行分析总结。
1 传统的分离培养方法目前检测小肠结肠炎耶尔森菌的金标准仍为分离培养法。
为了防止漏检，提高检出率，必须采用增菌的方法，以使受损伤的小肠结肠炎耶尔森菌得到较好的恢复和繁殖或从污染少量细菌的样品中检出。
由于该菌能在0～4℃生长，采用4℃冷增菌，有利于小肠结肠炎耶尔森菌存活和缓慢繁殖，而对大多数其它细菌不利或保持不变，特别适用于含菌量少的被检材料，同时用改良磷酸盐缓冲液对本菌有一定的选择性，经冷增菌培养后，分别在7d、14d、21d时进行分离，可获得较好的检出效果，虽然增菌时间长，但可提高检出率。
由于小肠结肠炎耶尔森菌较其它革兰氏阴性细菌生长慢，其它细菌在弱选择性琼脂平板上，在22～26℃情况下仍可生长较快，而耶尔森菌往往会被掩盖。
为控制其它细菌过多生长，采用耶尔森菌对弱碱性有较高抵抗力的特点，将其冷增菌后的样液，经弱碱液迅速处理15秒，立即接种选择性平板进行分离，此方法可杀死大部分不耐碱的其它细菌，可提高小肠结肠炎耶尔森菌的检出率。
但是在碱处理过程中，必须严格掌握处理方法，不宜超过时间，以免影响检出效果。
小肠结肠炎耶尔森氏菌显色培养基说明书
广东环凯微生物科技有限公司网址： 地址：广州市黄埔区科学城神舟路788号邮编：510663传真：860288778876产品说明书Product Manual【产品名称】通用名称：小肠结肠炎耶尔森氏菌显色培养基英文名称：Chromogenic Yersinia Enterocolitica Agar【产品编号与包装规格】产品编号产品类型包装规格CRM017干粉1000mL/瓶SR0770冻干配套试剂10支/盒【产品用途】用于致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌的检测与鉴别。
【检验原理】蛋白胨提供氮源、维生素、生长因子；盐类可维持均衡的渗透压，琼脂是培养基凝固剂；抑制剂（配套试剂）抑制杂菌的生长，混合色素与对应的酶发生特异反应，水解底物，释放显色基团，使致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌形成紫红色菌落，非致病性显金属蓝色或受抑制。
称取本品干粉30.4g，加入蒸馏水或纯化水1000mL，搅拌加热煮沸至完全溶解，冷却至50℃备用。
每100mL 培养基基础添加1支配套试剂(SR0770)，混合均匀后倾注无菌培养皿。
【性能特点】该显色培养基能够区分致病性与非致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌，致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌显淡紫色，非致病性显金属蓝色或受抑制。
一些较为罕见的非致病耶尔森氏菌（如：克氏耶尔森氏菌Y.kristensenii ）、一些未能全部抑制的气单胞菌（如：兽生气单胞菌A.bestiarum 、嗜矿泉气单胞菌A.eucrenophila 等）、沙雷氏菌（液化沙雷氏菌S.liquefaciens、变形斑沙雷氏菌S.proteamaculans ）等菌株，也可能出现紫红色菌落。
最终鉴定致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌需做附加试验。
【质量控制】下列质控菌株接种待测试培养基，26±1℃，48h 结果如下：广东环凯微生物科技有限公司网址： 地址：广州市黄埔区科学城神舟路788号邮编：510663传真：************-8619************8602************88778876贮存于2~8℃，避光、干燥处；保质期见产品标签。
猴小肠结肠炎耶尔森氏菌实时荧光PCR快速检测方法的建立
基 因 ）。
Ｔ ｑ ｎ荧光 Ｐ Ｒ试 剂盒（ ａ ａａ， ａ Ｍａ Ｃ Ｔ ｋ ｒ）磁
珠法 Ｄ ＮＡ提 取试 剂盒 （ ｉＦｕ ） Ｂ ｏ ｌｘ ，细菌 裂解 液（ 安 达 １ ． 引物 和探针 根据小 肠 结肠 炎 耶尔森 氏菌 耐 ．３ １
子生物学检测技术具有理论先进 ， 检测过程简便快
Ｐ Ｒ快速检测方法 的建立 Ｃ
温和心 蒋荣华 １王 ， ， 杰１苏 栋 １李世照 １盘 宝进 ２ ， ， ， （． １ 贵港出入境检验检疫局综合 实验室， 贵港 ５ ７ ０ ； ３ １０ ２ 广西出入境检验检疫局检验检疫技术中心， ． 南宁 ５０ ２ ） ３０ １ ［ 摘要］ 目的 建立一种能快速检测猴小肠结肠炎耶 尔森氏菌实时荧光 Ｐ Ｒ方法。方法 Ｃ 以小肠
ｏ ａ ｄ ｒ ｎ ｅ ｔａｉｎ３３× １６ ｆＪｄｔ ｎｓ ｎ ａｄｃ ｃｎｒ ｔ （． ｔ ｏ ｏ ０ ｕｎ ｃ ｏ
３３× １ ｆ ／ ） Ｉ ０ｃｕ ｍ１
Ａ ｒ ０ １ １２ ｐ ． １， （） ２ ３
实验动物与 比较医学 Ｌ ｂ ｒｔｒ Ａｎｍａ ａｄＣ ｍｐｒｔ ｅ ｄｃ ｅ ａ ｏａｏｙ ｉ ｌｎ ｏ ａａｉ Ｍｅｉｉ ｖ ｎ
性关系，试验 重复性 良好 。结论 建立的小肠结肠炎耶 尔森 氏菌实时荧光 Ｐ Ｒ检测方法适用于 Ｃ
猴 小肠 结肠 炎耶 尔森 氏菌 的快 速检 测 。
［ 关键 词］ ； 猴 小肠 结肠 炎耶 尔森 氏菌； 荧光 Ｐ Ｒ； Ｃ 快速检 测 ［ 中图 分类 号】 ９ —３ ［ 献标 识ｔ ］ ［ Ｑ ５３ 文 ｉ Ａ 文章 编号 】 ６ ４５ １（０ ０ —０ ２０ ＿ ｑ １７ —８７２ １）１０９ —４ １
图 ４增菌 ２ ４ｈ荧光 Ｐ Ｒ扩增 曲线 Ｃ
隐藏在冰箱冷冻层的小肠结肠炎耶尔森氏菌
隐藏在冰箱冷冻层的小肠结肠炎耶尔森氏菌冷冻层的小肠结肠炎耶尔森氏菌是一种常见的肠道病原菌，它可以在冰箱的冷冻层中存活并导致食物中毒。
小肠结肠炎耶尔森氏菌（Yersinia enterocolitica）是一种革兰阴性的杆菌，属于耶尔森氏菌属。
它主要存在于动物肠道中，主要感染动物的肠道，但也可以通过食物传播给人类。
它可以在冷藏条件下存活，并且可以在冷冻层中生长繁殖。
人类感染小肠结肠炎耶尔森氏菌通常是通过摄入污染的食物或饮水而引起的。
这些食物包括未加热的肉类、禽类、鱼类和牛奶制品等。
感染后，人们可能会出现恶心、呕吐、腹痛、腹泻和发热等症状。
严重的感染可能导致肠道炎症和其他并发症，如关节炎、心包炎和血液感染。
冷冻层的小肠结肠炎耶尔森氏菌的存活和生长能力主要受到温度和环境因素的影响。
在低温下，小肠结肠炎耶尔森氏菌可以在冷冻层中存活数个月甚至更长时间。
这使得冰箱中的冷冻食品成为潜在的感染来源，特别是食物没有充分加热或未经适当处理的情况下。
由于小肠结肠炎耶尔森氏菌在冷冻条件下存活能力强，感染风险仍然存在。
为了预防小肠结肠炎耶尔森氏菌的感染，应该注意以下几点：1. 处理食物时要注意卫生，避免交叉污染。
使用干净的切菜板、刀具和容器，并将生食和熟食分开处理。
2. 适当加热和烹饪食物。
将肉类、禽类、鱼类等食物加热至内部温度达到70°C以上，确保食物彻底煮熟。
3. 储存食物时要注意温度控制。
将生肉、鱼类和家禽放在冷藏室而不是冷冻层中，以减少小肠结肠炎耶尔森氏菌的存活机会。
4. 定期清洗和消毒冰箱。
清除冰箱冷冻层中的冰霜和食物残渣，并使用适当的消毒剂清洁冰箱内部。
尽管小肠结肠炎耶尔森氏菌可以在冰箱冷冻层中存活，但通过遵守正确的食品安全措施，可以减少感染的风险。
腹泻粪便中小肠结肠炎耶尔森菌检验的价值结果分析
腹泻粪便中小肠结肠炎耶尔森菌检验的价值结果分析发表时间：2020-08-14T07:32:54.887Z 来源：《中国医学人文》(学术版)2020年第6期作者：张杰[导读] 针对腹泻粪便样本开展小肠结肠炎耶尔森菌检验分析，可发现该种细菌的检出率处在较高水平，为临床医生开展相关疾病的诊断工作提供支持。
平阳县第二人民医院 325405【摘要】目的：探讨分析针对腹泻粪便样本中包含的小肠结肠炎耶尔森菌展开检验，在诊断感染性腹泻患者过程中的临床价值。
方法：2019年4月-2020年2月，将我院104例感染性腹泻患者随机等分为两组，每组各52例，为参照组选择运用培养法开展粪便样本耶尔森菌检测，针对研究组选择运用RT-PCR法开展粪便样本耶尔森菌检测，对比两组的阳性检出率。
结果：研究组的阳性检出率19.23%（10/52）高于参照组5.77%（3/52），组间有差异（卡方=4.308，P＜0.05）。
结论：为感染性腹泻患者的粪便样本选择运用RT-PCR法开展耶尔森菌检测，能获取较好效果，值得临床推广。
针对腹泻粪便样本开展小肠结肠炎耶尔森菌检验分析，可发现该种细菌的检出率处在较高水平，为临床医生开展相关疾病的诊断工作提供支持。
【关键词】腹泻粪便检验样本；小肠耶尔森菌检测；临床价值；探讨分析从现代西医病理学基本理论角度展开阐释分析，感染性腹泻是因肠道寄生虫，或者是肠道微生物及其代谢产物作用而引致发生的人体肠道组织内传染性疾病，而小肠结肠炎耶尔森菌属于典型的感染性腹泻疾病致病微生物[1]。
从生物分类学视角展开分析，小肠结肠炎耶尔森菌是可经由革兰染色处理的小杆菌微生物或者是球杆菌微生物，其主要经由粪-口途径完成人体感染过程，其感染后潜伏期持续时间介于3.00-7.00d，其病程持续时间介于1.00-3.00d之间，患者在临床中主要形成和展示出典型的急性胃肠炎疾病症状，或者是肠道外感染性疾病症状，继而导致生命健康水平显著下降[2]。
小肠结肠炎耶尔森菌
1B
2或3
1B 1B 1B
来源 绒鼠 野兔，山羊，大鼠，猴子 人，狗，猪 狗，猫，鼠 人 猪 人 人，猪，鸡肉 人，食物
人，狗，猪，猴子
狗，牛奶，猪，水
人 人，牛奶，注，饮水 人，猪 人，猪 人，猪 人，狗，毛，鼠 人 人，猴子，牛奶 人 人，猴子，牛奶，鼠
地理分布 欧洲、美国 欧洲、美国 欧洲，日本，北美和南美 南非，澳大利亚
咽喉 猪舌 其它
传播途径
人群传播 感染者的便、尿带菌可引起人群间的相互传染，同
时感染者的咽喉、舌、痰和气管分泌物等均带菌，因而不能排除 呼吸道传播可能。
食物传播：被认为是一种食源性病原菌，被污染的水源、奶制品
、肉类、水产品、蔬菜、水果等都可能作为经口感染的传播因子
动物传播：家畜和家禽的广泛感染和长期排菌，直接威胁着接触
我国耶尔森菌病呈现散发状态，部分地区有暴发流 行的报告
流行特征
小肠结肠炎耶尔森菌感染可分为散发与暴 发，但不同类型和规模的暴发似有增长趋
势。1972年3月日本静冈县初级中学发生一 次暴发流行，这是世界上大规模流行的最 早报告。日本是世界暴发流行最多的国家， 其次为美国，此外加拿大、芬兰、前苏联 等国也相继报告过不同类型和规模的暴发。 这些暴发流行多发生在学校和家庭等场所。
家畜类带菌情况
60% 50% 49%
40% 30.0%
30%
24.60%
20%
18.90%
10%
7.9% 7.50% 1.7%
0%
猪
牛
狗
其它
最高 最低
猪是人类的重要的传染源，理由是猪的感染率高， 猪与人类接触密切，故成为人类的传染源是很明 显的。
浅析食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌检测技术研究
浅析食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌检测技术研究摘要：小肠结肠炎耶尔森氏菌是重要的食源性致病菌，如何有效地检测该菌是预防和减少食品安全问题的关键环节。
本文较为系统地介绍了利用常规分离鉴定、免疫学、分子生物学和生物质谱等技术手段检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法，最后对小肠结肠炎耶尔森氏菌检测技术的现状进行分析，并对发展趋势进行了预测。
关键词：耶尔森氏菌；分离鉴定；免疫学技术；分子生物学技术；生物质谱技术Abstract：enterocolitis Jerson Prand is an important foodborne pathogen. How to effectively detect the bacteria is the key link in preventing and reducing food safety. This paper systematically introduces the methods of detecting enterocolitis Jerson Prand by conventional separation and identification，immunology，molecular biology and biological mass spectrometry. Finally，the present situation of the Jerson Prand detection technique of enterocolitis is analyzed，and the trend of the development is predicted.Key words：Jerson S fungus；isolation and identification；immunology technology；molecular biology technology；bio mass spectrometry technology小肠结肠炎耶尔森氏菌（Yersinia enterocolitica）是一种广泛分布的细菌，可存在于生鲜蔬菜、乳和乳制品、肉类、豆制品等食品中。
小肠结肠炎耶尔森氏菌盲样考核X-ABT方案
小肠结肠炎耶尔森氏菌盲样考核X-ABT方案针对小肠结肠炎耶尔森氏菌盲样考核样本，X-ABT系列试剂不但可提供种属检测，也可提供多种毒力基因的检测，既包含荧光检测试剂，也包含普通多重检测试剂，方案多样，满足考核工作的需求，根据2016年考核工作经验，需检测基因包括：种属基因foxA及5种毒力基因ail、ystA、ystB、yadA、virF。
现给出以下方案供参考：方案一：普通PCR检测试剂（首选方案）（1）使用试剂：A2286（小肠结肠炎耶尔森氏菌毒力基因多重PCR检测试剂盒）50T/盒（2）方案介绍：本方案适用于检测平台为普通PCR平台的客户需求，包括琼脂糖凝胶电泳平台或MPS平台。
该试剂可满足客户对于毒力基因的上报需求，如种属基因foxA无需上报（种属鉴定可以使用血清学反应来进行），则该方案可完全满足客户盲样考核需求。
方案二：荧光PCR检测试剂+普通PCR检测试剂（配合使用）（1）使用试剂：A3322（小肠结肠炎耶尔森氏菌及其致病性双重实时荧光PCR检测试剂盒）50T/盒A2286（小肠结肠炎耶尔森氏菌毒力基因多重PCR检测试剂盒）50T/盒（2）方案介绍：本方案适用于荧光PCR平台及普通电泳平台均具备的客户需求，两种试剂盒结合使用，可同时满足客户种属基因及毒力基因的上报需求；A3322用于种属基因的检测，A2286用于毒力基因的检测。
注：（1）竞品情况：目前市售竞品多为单重或者双重，只可检测种属基因foxA及毒力基因ail，目前尚无竞品可以检测其他毒力基因。
（2）上述两种方案涉及到的ABT试剂不作为试用储备。
（3）ABT试剂可检测基因如下：A3322：可检测种属基因foxA及毒力基因ail；A2286：既可检测毒力基因ail、ystA、yadA、virF、ystB，也可进行小肠结肠炎耶尔森氏菌鉴定和O3血清型的筛检。
小肠结肠炎耶尔森菌风险评估国标指南
小肠结肠炎耶尔森菌风险评估国标指南下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
文档下载后可定制修改，请根据实际需要进行调整和使用，谢谢!本店铺为大家提供各种类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by this editor. I hope that after you download it, it can help you solve practical problems. The document can be customized and modified after downloading, please adjust and use it according to actual needs, thank you! In addition, this shop provides you with various types of practical materials, such as educational essays, diary appreciation, sentence excerpts, ancient poems, classic articles, topic composition, work summary, word parsing, copy excerpts, other materials and so on, want to know different data formats and writing methods, please pay attention!小肠结肠炎耶尔森菌风险评估国标指南介绍小肠结肠炎（Yersinia enterocolitica）是一种由耶尔森菌引起的食物中毒性疾病。
耶尔森氏菌检验(详细)
3、自凝性。
1980 年 Laird 等人提出了一种测定本菌毒力的简易方法，即将试验菌接种于二管含 10% 小牛血清的组织培养液内，分别置 22℃和 36+1℃培养，若 22℃培养，菌液混浊，而 37℃培 养，细菌凝结，上层液体透明，即为有毒力的菌株，称为自凝阳性。在检查的 180 株菌中有 25 株阳性，这些阳性菌株均能引起腹泻。
二、流行病学
1、细菌分布
小肠结肠炎耶尔森氏菌分布很广，可存在于生的蔬菜、乳和乳制品、肉类、豆制品、沙 拉、牡蛎、哈和虾。也存在于环境中，如湖泊、河流、土壤和植被。已从家畜、狗、猫、山 羊、灰鼠、水貂和灵长类动物的粪便中分离出该菌。在港湾周围，许多鸟类包括水禽和海鸥 可能是带菌者。
猪的带菌率较高，日本报告检出率为 4%，加拿大为 3.6%，丹麦为 10-17%。在猪中，该 菌最易在扁桃腺中发现。
3、将经 10 天培养的增菌肉汤充分混合，转移 0.1mL 至 1mL 0.5%盐水（含 0.5%KOH）中， 混合 5-10 秒。连续划线于麦康凯平板和 CIN 平板。另取 0.1mL 增菌液至 1mL 0.5%盐水中， 如上在划线前混合 5-10 秒。置平板于 30℃培养 1 天。
B、细菌分离。
5、毒性质粒。
耶氏菌病和小肠结肠炎耶尔森氏菌带有 41-48Mdal 的质粒有关。这被认为是毒性质粒， 即与毒力有关的质粒。有人将失去毒性质粒的 O8、O3 和 O9 型菌株用小鼠作喂饲试验，均不 发病，但用带毒性质粒的 O8 和 O3 型菌株试验时，小鼠则均发生腹泻或死亡。且菌株自凝试 验的结果与毒性质粒的存在与否相一致。
利用环介导恒温扩增方法特异性鉴定食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌
关 键 词 ：耶尔 森 氏菌 ； 速 检 测 ；１ Ｓ ２ Ｓ ｒ Ｎ 间 区 ； 介 导 恒 温 扩 增 快 ６ 一 ３ Ｄ Ａ 环 中 图分 类 号 ： １ Ｑ８ ９ 文 献标 识 码 ： Ａ
环 介导恒 温 扩增 方法 （ ＡＭＰ 是 一种 ２ ０ Ｌ ） ０ ０年 开发 出来 的快速 基 因鉴 定方 法 ， 普通 Ｐ Ｒ 方法 相 ］与 Ｃ 比， 有很 大 优势 ． 具 这种 扩 增方 法 不再 需要 价 格 昂 贵 的 Ｐ Ｒ 仪 和 电泳 仪 等设 备 ， 不需 要 进行 长 时 间 的 Ｃ 更
收 稿 日期 ： ０ ９０ —５ ２ ０—６ １ 基 金 项 目 ： 滓 出 入 境 检 验检 疫 局 项 目（ ｏ８ ０ ８ 天 ｔ ２ —２ ０ ） ｋ 作 者 简 介 ： 玉 龙 （ ９７ ）男 ， 津 人 ， 士 研 究 生 ． 赵 １７一， 天 博
第 ２ 期
赵 玉 龙 等 ： 用 环 介 导 恒 温 扩 增 方 法 特 异 性 鉴定 食 品 中 小 肠 结 肠 炎 耶 尔 森 氏菌 利
（１ 南 开 大 学 生 命 科 学 学 院 ， 津 ３ ０ ７ ；２ ． 天 ０ ０ １ ．天 津 出 入 境 检 验 检 疫局 ， 津 ３ ０ ５ 天 ０ ４ ７）
摘 要 ： 绍 一 种 便捷 、 敏 而 又 特 异 的用 于检 测 治 病 细 菌 小 肠 结 肠 炎 耶 尔 森 氏菌 （ ｅｓ ｉ ｎｅｏｏｉｃ ） 介 灵 Ｙ ｒ ｎａｅｔ ｃｌｉ 的 ｉ ｒ ｔａ
文 章 编 号 ：０ ６ — ９ ２ ２ １ ） ２ ０ ０ — ７ ４ ５７４ （０ ０ ０—０ ８０
小肠耶尔森菌增菌液的选择和典型菌落特征相关问题探讨
小肠耶尔森菌增菌液的选择和典型菌落特征相关问题探讨作者：卜菁周幸张练成张菲菲沈静雯张菊花来源：《食品安全导刊·下旬刊》2019年第02期摘要：根据实验过程中发现的问题，对耶氏菌前增菌液的选择进行探讨，针对分离实验选择性平板上典型菌落特征与标准描述不符的情况进行比对。
关键词：小肠结肠炎耶尔森氏菌;增菌液;实验典型菌落小肠结肠炎耶尔森氏菌（简称耶氏菌）属于肠杆菌科菌属，是一种人畜共患食源性致病菌，广泛存在于肉制品、奶制品[1]等食品中。
在实验室对GB 4789.8-2016[2]进行扩项实验时，针对实验室常用培养基PBS、生理盐水提出猜想：在紧急情况下是否可以用PBS、生理盐水替代PSB作为增菌液使用。
同时发现，在分离培养基上的典型菌落特征和标准描述不相符，为确认这一现象是属于某培养基个性还是所有培养基共性，进行了培养基比对实验。
1 材料与方法1.1 样品市售奶粉、香蕉片、火腿肠，各一份，样品在保质期内。
1.2 试剂1.2.1 菌种小肠结肠炎耶尔森氏菌 ATCC23715（来源于江苏省疾控）。
1.2.2 培养基PBS（北京陆桥，批号：180727）;PSB（北京陆桥，批号：181008）;PCA（北京陆桥，批号：190301）;CIN-1培养基（厂家A、B、C）;改良Y培养基（厂家A、B、C）。
培养基均在保质期内。
1.3 方法1.3.1 增菌液的选择将奶粉、香蕉片、火腿肠样品各分为三份，按1∶10比例，分别接种至PSB、PBS、生理盐水中，向增菌液中接种102 CFU/mL标准菌液，26 ℃培养48 h。
同时向不加样品的PSB、PBS、生理盐水中接种102 CFU/mL标准菌液，26 ℃培养48 h，作为对照。
奶粉、香蕉片、火腿肠样品中不含杂菌。
1.3.2 选择性培养基比对实验根据标准中对不同样品碱处理的要求，选择奶粉、火腿肠两种样品增菌。
奶粉增菌液直接划线至CIN-1培养基（厂家A、B、C）、改良Y培养基（厂家A、B、C）;火腿肠增菌液经碱处理后四区划线接种CIN-1培养基（厂家A、B、C）、改良Y培养基（厂家A、B、C）。
小肠结肠炎耶尔森氏菌检验（食品微生物学检验）
⼩肠结肠炎耶尔森⽒菌检验（⾷品微⽣物学检验）⾷品安全国家标准⾷品微⽣物学检验⼩肠结肠炎耶尔森⽒菌检验1范围本标准规定了⾷品中⼩肠结肠炎耶尔森⽒菌(Y e r s i n i a e n t e r o c o l i t i c a)的检验⽅法三本标准适⽤于⾷品中⼩肠结肠炎耶尔森⽒菌的检验三2设备和材料除微⽣物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:2.1冰箱:0?~4?三2.2恒温培养箱:26??1?⼆36??1?三2.3显微镜:10倍~100倍三2.4均质器三2.5天平:感量0.1g三2.6灭菌试管:16mm?160mm⼆15mm?100mm三2.7灭菌吸管:1m L(具0.01m L刻度)⼆10m L(具0.1m L刻度)三2.8锥形瓶:200m L⼆500m L三2.9灭菌平⽫:直径90mm三2.10微⽣物⽣化鉴定试剂盒或微⽣物⽣化鉴定系统三3培养基和试剂3.1改良磷酸盐缓冲液:见A.1三3.2 C I N-1培养基(C e p u l o d i n I r g a s a nN o v o b i o c i nA g a r):见A.2三3.3改良Y培养基(A g a rY,M o d i f i e d):见A.3三3.4改良克⽒双糖培养基:见A.4三3.5糖发酵管:见A.5三3.6鸟氨酸脱羧酶试验培养基:见A.6三3.7半固体琼脂:见A.7三3.8缓冲葡萄糖蛋⽩胨⽔[甲基红(M R)和V-P试验⽤]:见A.8三3.9碱处理液:见A.9三3.10尿素培养基:见A.10三3.11营养琼脂:见A.11三3.12⼩肠结肠炎耶尔森⽒菌诊断⾎清三4检验程序⼩肠结肠炎耶尔森⽒菌检验程序见图1三图1⼩肠结肠炎耶尔森⽒菌检验程序5操作步骤5.1增菌以⽆菌操作取25g(或25m L)样品放⼊含有225m L改良磷酸盐缓冲液增菌液的⽆菌均质杯或均质袋内,以8000r/m i n均质1m i n 或拍击式均质器均质1m i n三液体样品或粉末状样品,应振荡混匀三均质后于26??1?增菌48h~72h三增菌时间长短可根据对样品污染程度的估计来确定三5.2碱处理除乳与乳制品外,其他⾷品的增菌液0.5m L与碱处理液4.5m L充分混合15s三5.3分离将乳与乳制品增菌液或经过碱处理的其他⾷品增菌液分别接种于C I N-1琼脂平板和改良Y琼脂平板,26??1?培养48h?2h三典型菌落在C I N-1上为深红⾊中⼼,周围具有⽆⾊透明圈(红⾊⽜眼状菌落),菌落⼤⼩为1mm~2mm,在改良Y琼脂平板上为⽆⾊透明⼆不黏稠的菌落三5.4改良克⽒双糖试验分别挑取5.3中的可疑菌落3个~5个,分别接种于改良克⽒双糖铁琼脂,接种时先在斜⾯划线,再于底层穿刺,26??1?培养24h,将斜⾯和底部皆变黄且不产⽓的培养物做进⼀步的⽣化鉴定三5.5尿素酶试验和动⼒观察⽤接种环挑取⼀满环5.4得到的可疑培养物,接种到尿素培养基中,接种量应⾜够⼤,振摇⼏秒钟, 26??1?培养2h~4h三将尿素酶试验阳性菌落分别接种于两管半固体培养基中,于26??1?和36??1?培养24h三将在26?有动⼒⽽36?⽆动⼒的可疑菌培养物划线接种营养琼脂平板,进⾏纯化培养,⽤纯化物进⾏⾰兰⽒染⾊镜检和⽣化试验三5.6⾰兰⽒染⾊镜检将纯化的可疑菌进⾏⾰兰染⾊三⼩肠结肠炎耶尔森⽒菌呈⾰兰⽒阴性球杆菌,有时呈椭圆或杆状,⼤⼩为(0.8µm~3.0µm)?0.8µm5.7⽣化鉴定5.7.1从5.5中的营养琼脂平板上挑取单个菌落接种⽣化反应管,⽣化反应在26??1?进⾏三⼩肠结肠炎耶尔森⽒菌的主要⽣化特征以及与其他相似菌的区别见表1三表1⼩肠结肠炎耶尔森⽒菌与其他相似菌的⽣化性状鉴别表项⽬⼩肠结肠炎耶尔森⽒菌Y e r s i n i ae n t e r o c o l i t i c a中间型耶尔森⽒菌Y e r s i n i ai n t e r m e d i a弗⽒耶尔森⽒菌Y e r s i n i af r e d e r i k s e n i i克⽒耶尔森⽒菌Y e r s i n i ak i r s t e n s e n i i假结核耶尔森⽒菌Y e r s i n i ap s e u d o t u b e r c u l o s i s⿏疫耶尔森⽒菌Y e r s i n i ap e s t i s动⼒(26?)+++++-尿素酶+++++-V-P试验(26?)+++---鸟氨酸脱羧酶++++--蔗糖d++---棉⼦糖-+---d⼭梨醇++++--⽢露醇++++++⿏李糖-++--+注:+阳性;-阴性;d有不同⽣化型三5.7.2如选择微⽣物⽣化鉴定试剂盒或微⽣物⽣化鉴定系统,可根据5.6镜检结果,选择⾰兰阴性球杆菌菌落作为可疑菌落,从5.5所接种的营养琼脂平板上挑取单菌落,使⽤微⽣物⽣化鉴定试剂盒或微⽣物⽣化鉴定系统进⾏鉴定三5.8⾎清型鉴定(选做项⽬)除进⾏⽣化鉴定外,可选择做⾎清型鉴定三在洁净的载玻⽚上加⼀滴O因⼦⾎清,将待试培养物混⼊其内,使成为均⼀性混浊悬液,将玻⽚轻轻摇动0.5m i n~1m i n,在⿊⾊背景下观察反应三如在2m i n内出现⽐较明显的⼩颗粒状凝集者,即为阳性反应,反之则为阴性,另⽤⽣理盐⽔作对照试验,以检查有⽆⾃凝现象;具体操作⽅法可按G B4789.4中沙门⽒菌O因⼦⾎清分型⽅法进⾏三6结果与报告综合以上及⽣化特征报告结果,报告25g(或25m L)样品中检出或未检出⼩肠结肠炎耶尔森⽒菌三附录A培养基和试剂A.1改良磷酸盐缓冲液A.1.1成分磷酸氢⼆钠8.23g磷酸⼆氢钠1.2g氯化钠5.0g三号胆盐1.5g⼭梨醇20.0gA.1.2制法将磷酸盐及氯化钠溶于蒸馏⽔中,再加⼊三号胆盐及⼭梨醇,溶解后校正p H⾄7.6,分装试管,于121?⾼压灭菌15m i n,备⽤三A.2C I N-1培养基A.2.1基础培养基:胰胨20.0g酵母浸膏2.0g⽢露醇20.0g氯化钠1.0g去氧胆酸钠2.0g硫酸镁0.01g琼脂12.0g蒸馏⽔950m L校正p H⾄7.5?0.1,将基础培养基于121?⾼压灭菌15m i n,备⽤三A.2.2I r g a s a n(⼆氯苯氧氯酚):可⽤95%的⼄醇作溶剂,溶解⼆苯醚,配成0.4%的溶液来替代I r g a s a n,待基础培养基冷⾄80?时,加⼊1m L混匀三A.2.3冷⾄50?时,加⼊:中性红(3.0m g/m L)10.0m L结晶紫(0.1m g/m L)10.0m L头孢菌素(1.5m g/m L)10.0m L新⽣霉素(0.25m g/m L)10.0m L最后不断搅拌加⼊10.0m L的10%氯化锶,倾注平⽫三A.3改良Y培养基A.3.1成分蛋⽩胨15.0g氯化钠5.0g乳糖10.0g草酸钠2.0g去氧胆酸钠6.0g三号胆盐5.0g丙酮酸钠2.0g孟加拉红40.0m g⽔解酪蛋⽩5.0g琼脂17.0g蒸馏⽔1000m LA.3.2制法将A.3.1中成分混合,校正p H⾄7.4?0.1三于121?⾼压灭菌15m i n,待冷⾄45?左右时,倾注平⽫三A.4改良克⽒双糖培养基A.4.1成分蛋⽩胨20.0g⽜⾁膏3.0g酵母膏3.0g⼭梨醇20.0g葡萄糖1.0g氯化钠5.0g柠檬酸铁铵0.5g硫代硫酸钠0.5g琼脂12.0g酚红0.025g蒸馏⽔1000m LA.4.2制法将酚红以外的各成分溶解于蒸馏⽔中,校正p H⾄7.4三加⼊0.2%的酚红溶液12.5m L,摇匀,分装试管,装量宜多些,以便得到⽐较⾼的底层三121?⾼压灭菌15m i n,放置⾼层斜⾯备⽤三A.5糖发酵管A.5.1成分⽜⾁膏5.0g。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
分 别 挑 取 5.3 中 的 可 疑 菌 落 3 个 ~5 个 ,分 别 接 种 于 改 良 克 氏 双 糖 铁 琼 脂 ,接 种 时 先 在 斜 面 划 线 ,再 于底层穿刺,26 ℃±1 ℃培养24h,将斜面和底部皆变黄且不产气的培养物做进一步的生化鉴定。
5.5 尿素酶试验和动力观察
用 接 种 环 挑 取 一 满 环 5.4 得 到 的 可 疑 培 养 物 ,接 种 到 尿 素 培 养 基 中 ,接 种 量 应 足 够 大 ,振 摇 几 秒 钟 , 26 ℃±1 ℃培养2h~4h。将尿素酶试验阳性菌落分别接种于两管半固体培养基中,于26 ℃±1 ℃和 36 ℃±1 ℃培养24h。将在26 ℃有动力而36 ℃无动力的可疑菌培养物划线接种营养琼脂平板,进行 纯 化 培 养 ,用 纯 化 物 进 行 革 兰 氏 染 色 镜 检 和 生 化 试 验 。
除乳与乳制品外,其他食品的增菌液0.5 mL 与碱处理液4.5 mL 充分混合15s。
2
GB 4789.8—2016
5.3 分离
将乳与乳制品增菌液或经过碱处理的其 他 食 品 增 菌 液 分 别 接 种 于 CIN-1 琼 脂 平 板 和 改 良 Y 琼 脂 平板,26 ℃±1 ℃培养48h±2h。典型菌落在 CIN-1上为深红色中心,周围具有无色透明圈(红色牛 眼状菌落),菌落大小为1 mm~2 mm,在改良 Y 琼脂平板上为无色透明、不黏稠的菌落。
3 培养基和试剂
3.1 改良磷酸盐缓冲液:见 A.1。 3.2 CIN-1培养基(CepulodinIrgasanNovobiocinAgar):见 A.2。 3.3 改良 Y 培养基(AgarY,Modified):见 A.3。 3.4 改良克氏双糖培养基:见 A.4。 3.5 糖发酵管:见 A.5。 3.6 鸟氨酸脱羧酶试验培养基:见 A.6。 3.7 半固体琼脂:见 A.7。 3.8 缓冲葡萄糖蛋白胨水[甲基红(MR)和 V-P 试验用]:见 A.8。 3.9 碱处理液:见 A.9。 3.10 尿素培养基:见 A.10。 3.11 营养琼脂:见 A.11。 3.12 小肠结肠炎耶尔森氏菌诊断血清。
除 微 生 物 实 验 室 常 规 灭 菌 及 培 养 设 备 外 ,其 他 设 备 和 材 料 如 下 : 2.1 冰箱:0 ℃~4 ℃。 2.2 恒温培养箱:26 ℃±1 ℃、36 ℃±1 ℃。 2.3 显微镜:10倍~100倍。 2.4 均质器。 2.5 天平:感量0.1g。 2.6 灭菌试管:16 mm×160 mm、15 mm×100 mm。 2.7 灭菌吸管:1 mL (具0.01 mL 刻度)、10 mL (具0.1 mL 刻度)。 2.8 锥形瓶:200 mL、500 mL。 2.9 灭菌平皿:直径90 mm。 2.10 微生物生化鉴定试剂盒或微生物生化鉴定系统。
1
4 检验程序 小 肠 结 肠 炎 耶 尔 森 氏 菌 检 验 程 序 见 图 1。
GB 4789.8—2016
图1 小肠结肠炎耶尔森氏菌检验程序
5 操作步骤
5.1 增菌 以无菌操作取25g(或25 mL)样品放入含有225 mL 改良磷酸盐缓冲液增菌液的无菌均质杯或均
质袋内,以8000r/min均质1 min或拍击式均质器均质1 min。液体样品或粉末状样品,应振荡混匀。 均质后于26 ℃±1 ℃增菌48h~72h。增菌时间长短可根据对样品污染程度的估计来确定。 5.2 碱处理
+
+
+
+
+
尿素酶
+
+
+
+
+
V-P 试验(26 ℃)
+
+
+
-
-
鸟氨酸脱羧酶
+
+
+
+
-
蔗糖
d
+
+
-
-
棉子糖
-
+
-
-
-
山梨醇
+
+
+
+
-
甘露醇
+
+
+
+
+
鼠李糖
-
+
+
-
-
注 :+ 阳 性 ;- 阴 性 ;d 有 不 同 生 化 型 。
鼠疫耶 尔森氏菌 Yersinia
pestis d + +
5.7.2 如选择微生物生化鉴定试剂盒或微生物生化鉴定系统,可根据5.6镜检结果,选择革兰阴性球杆 菌 菌 落 作 为 可 疑 菌 落 ,从 5.5 所 接 种 的 营 养 琼 脂 平 板 上 挑 取 单 菌 落 ,使 用 微 生 物 生 化 鉴 定 试 剂 盒 或 微 生
表1 小肠结肠炎耶尔森氏菌与其他相似菌的生化性状鉴别表
项目 动力(26 ℃)
小肠结肠炎 中间型耶
弗氏耶
克氏耶
假结核耶
耶尔森氏菌 尔森氏菌
Байду номын сангаас
尔森氏菌
尔森氏菌
尔森氏菌
Yersinia
Yersinia
Yersinia
Yersinia
Yersinia
enterocolitica intermedia frederiksenii kirstensenii pseudotuberculosis
GB 4789.8—2016
食品安全国家标准
食品微生物学检验 小肠结肠炎耶尔森氏菌检验
1 范围
本 标 准 规 定 了 食 品 中 小 肠 结 肠 炎 耶 尔 森 氏 菌 (Yersiniaenterocolitica)的 检 验 方 法 。 本标准适用于食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的检验。
2 设备和材料
3
GB 4789.8—2016 物生化鉴定系统进行鉴定。 5.8 血清型鉴定(选做项目)
除进行生化鉴定外,可选择做血清 型 鉴 定。在 洁 净 的 载 玻 片 上 加 一 滴 O 因 子 血 清,将 待 试 培 养 物 混入其内,使成为均一性 混 浊 悬 液,将 玻 片 轻 轻 摇 动 0.5 min~1 min,在 黑 色 背 景 下 观 察 反 应。 如 在 2 min 内出现比较明显的小颗粒状凝集者,即为阳性反应,反之则为阴性,另用生理盐水作对照试验,以 检查有无自凝现象;具体操作方法可按 GB4789.4中沙门氏菌 O 因子血清分型方法进行。 6 结果与报告
5.6 革兰氏染色镜检 将 纯 化 的 可 疑 菌 进 行 革 兰 染 色 。 小 肠 结 肠 炎 耶 尔 森 氏 菌 呈 革 兰 氏 阴 性 球 杆 菌 ,有 时 呈 椭 圆 或 杆 状 ,
大 小 为 (0.8μm~3.0μm)×0.8μm 5.7 生化鉴定 5.7.1 从5.5中的营养琼脂平板上挑取单个菌落接种生化反应管,生化反应在26 ℃±1 ℃进行。小肠 结 肠 炎 耶 尔 森 氏 菌 的 主 要 生 化 特 征 以 及 与 其 他 相 似 菌 的 区 别 见 表 1。