婴幼儿食品中阪崎克罗诺杆菌的快速检测
婴幼儿健康的“敌人”食品中阪崎肠杆菌的检测方法
婴幼儿健康的“敌人”-食品中阪崎肠杆菌的检测方法阪崎肠杆菌阪崎肠杆菌是广泛存在于环境中的一种微生物，可以感染婴幼儿并对他们的健康造成严重威胁，阪崎肠杆菌耐热、耐干燥、对渗透压有较强的忍耐力，可长时间生存在干燥的环境中。
阪崎肠杆菌最喜欢袭击1岁以下的婴儿，如果你在冲调、存放奶粉时操作不当，它就可以趁虚而入，婴儿的胃酸PH值比成人高，可以存活在他们的肠道中，并且婴儿血脑屏障未发育完全，阪崎肠杆菌可以轻易进入他们的脑部引发脑膜炎，由阪崎肠杆菌引起的新生儿脑膜炎、菌血症等严重疾病，死亡率高达20-50％。
世界卫生组织建议，您应当使用不低于70℃的热水冲调婴儿配方奶粉，并在2小时内尽快喂哺，如果需要预先冲调，冲调后应快速冷却并且存放在不超过5℃的冰箱内，还要在冲调后24小时内饮用，喂哺前必须重新加热，那些早产、体重低或免疫力低的高风险婴儿，可以使用商业无菌的液态婴儿配方奶，你记住了吗？食品中阪崎肠杆菌的检测方法1 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其它设备和材料如下：1.1 恒温培养箱：25℃±1℃，36℃±1℃，44℃±0.5℃1.2 冰箱：2℃-5℃1.3恒温水浴箱：44℃±0.5℃1.4天平：感量0.1g1.5 均质器1.6 无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）1.7 无菌锥形瓶：容量100mL、250mL、2 000mL1.8 无菌培养皿：直径90mm1.9 pH计或精密pH试纸2 培养基和试剂2.1 缓冲蛋白胨水2.2 改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素2.3 阪崎肠杆菌显色培养基2.4 胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）2.5 API 20E生化鉴定试剂盒2.6 氧化酶试剂3 操作步骤3.1 前增菌和增菌取样前，应消毒检样包装的开启处。
以无菌操作，称取检样100g（mL）加至预热到44℃装有900mL灭菌缓冲蛋白胨水的2 000mL锥形瓶中，缓缓振摇使样品充分溶解，36℃±1℃培养18h±2h。
食品克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验原始记录
食品克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）检验原始记录样品编号：检验开始时间：年月日样品名称：检验完成时间：年月日检测项目：克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）检测依据：GB 4789.40-2016 第一法 第二法一、克罗诺杆菌属定性检验无菌操作称（量）取样品100g或ml置于灭菌锥形中，加入900mL已预热至44℃的缓冲蛋白胨水，摇动充分溶解，36±1℃培养18±2h，移取1mL转种于10mLST-Vm肉汤，44±0.5℃培养24±2h。
轻轻混匀培养物，各取1环，分别划线于两个阪崎杆菌显色培养基平板，36±1℃培养24±2h。
挑取可疑菌落，划线于TSA平板，25±1℃培养48±4h。
观察，挑取可疑菌落进行生化鉴定。
二、克罗诺杆菌属平板计数法无菌操作称（量）取样品100g（ml）、10g（ml）、1g（ml）置于灭菌锥形中，加入900mL、90mL、9mL已预热至44℃的缓冲蛋白胨水，摇动充分溶解，36±1℃培养18±2h，移取1mL转种于10mLST-Vm肉汤，44±0.5℃培养24±2h。
轻轻混匀培养物，各取1环，分别划线于两个阪崎杆菌显色培养基平板，36±1℃培养24±2h。
挑取可疑菌落，划线于TSA平板，25±1℃培养48±4h。
挑取可疑菌落进行生化鉴定。
注：+生长或有可疑菌落；-未生长或无可疑菌落。
计算及结果：定性检验：得100g(mL) 计数法，查MPN检索表，得MPN/g,mL电子天平编号：使用状况试验前：试验后：培养箱编号：使用状况试验前：试验后：检测人：校核人：审核人：。
奶粉中的健康杀手——克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检测标准解读
奶粉中的健康杀手——克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）检测标准解读！克罗诺杆菌属（Cronobacterspp.）是由Iversen等人于2008年建议创立的隶属于肠杆菌科的一个新属，该属是寄生在人和动物肠道内的一种有周生鞭毛、能运动、兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
该菌的发展经历了4个时期：１起初该菌因其产生黄色素，被认为是肠杆菌属中阴沟肠杆菌的生物变形种──黄色阴沟肠杆菌；２1989年，Farmer通过DNA杂交、生化反应、黄色素产生及抗生素敏感性等实验，发现该菌与阴沟肠杆菌有所不同，为此更名为“阪崎肠杆菌”；３2008年，Iversen等人通过荧光扩增片段长度多态性、自动核糖体分型、16SrRNA基因测序、DNA-DNA杂交和表型阵列等多种分子生物学技术研究，将该菌由种（阪崎肠杆菌）扩大为属（克罗诺杆菌属），这个新属包括6个种；４2012年，Joseph等利用16SrRNA基因序列分析和多位点测序技术对克罗诺杆菌属进行分类研究，提出将克罗诺杆菌属分为7个种。
克罗诺杆菌属是一种重要的食源性条件致病菌，可通过污染婴幼儿配方奶粉等食品导致新生儿脑膜炎、菌血症和坏死性小肠结肠炎。
其名字“克罗诺”（Cronos）来源于希腊神话，克罗诺是希腊神话中十二个泰坦巨神之一，传说他的每个孩子一出生就被他一口吃掉，其行为表现和该菌的致病特性很吻合，因此“Cronobacterspp.”被译成“克罗诺杆菌属”。
该菌作为引起婴幼儿死亡的重要条件致病菌，对其相关产品的检测及监管尤为重要，常用的检测方法有：另外，2016年12月23日卫计委发布了新标准GB 4789.40-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）检验》，将于2017年6月23日实施，并将代替GB 4789.40-2010、SN/T 1632.1-2013。
该标准与GB 4789.40-2010相比，主要变化有：1.修改了标准名称标准名称中“阪崎肠杆菌检验”改为“克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）检验”。
阪崎肠杆菌检测标准
阪崎肠杆菌检测标准阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii）是一种常见的致病菌，它可以存在于环境中的多种食品和饮用水中。
由于其对婴儿和免疫系统较弱者具有较高的致病性，因此对阪崎肠杆菌的检测标准显得尤为重要。
本文将介绍阪崎肠杆菌检测的相关标准，以便从事食品生产和检验的相关人员了解和遵循。
首先，阪崎肠杆菌的检测应该遵循国家相关的标准和规定，如《食品安全国家标准食品中阪崎肠杆菌的检验》（GB 4789.41-2016）。
该标准规定了食品中阪崎肠杆菌的检测方法和技术要求，包括样品的采集、处理、培养和鉴定等步骤。
在进行检测时，应当严格按照标准的要求进行操作，以确保检测结果的准确性和可靠性。
其次，阪崎肠杆菌的检测需要使用合适的检测方法和设备。
常见的检测方法包括PCR法、免疫学方法、生化方法等。
在选择检测方法时，应根据实际情况和样品的特点进行合理的选择，以确保检测的准确性和灵敏度。
同时，应使用经过认证的检测设备和试剂，确保其质量和性能符合要求。
另外，阪崎肠杆菌的检测还需要严格控制检测过程中可能存在的污染和干扰因素。
在样品采集、处理和检测过程中，应避免外部环境的污染，确保样品的纯净性和可靠性。
同时，应严格控制实验室环境和操作流程，避免可能对检测结果产生干扰的因素存在。
最后，阪崎肠杆菌的检测结果应当进行合理的解读和评估。
在获得检测结果后，应根据标准的要求进行结果的解读和评估，判断样品中阪崎肠杆菌的存在情况和数量水平。
同时，应根据检测结果进行合理的风险评估和控制措施制定，以保障食品安全和公共健康。
总之，阪崎肠杆菌的检测标准对于食品安全和公共健康具有重要意义。
相关从业人员应当严格遵循国家标准和规定，选择合适的检测方法和设备，严格控制检测过程中的污染和干扰因素，合理解读和评估检测结果，以确保食品的安全和可靠性。
希望本文能够为相关人员提供一定的参考和帮助，促进阪崎肠杆菌检测工作的规范和标准化。
牛奶中阪崎肠杆菌的检测方法
牛奶中阪崎肠杆菌的检测方法引言：阪崎肠杆菌（又称阪崎氏肠杆菌）是一种周身无鞭毛，能运动，无芽孢的兼性厌氧菌，革兰氏阴性杆菌。
1980年由黄色阴沟肠杆菌更名为阪崎肠杆菌。
阪崎肠杆菌能引起严峻的新生儿脑膜炎、小肠结肠炎和菌血症，致死率可达40％～80%，自1961年首次由阪崎肠杆菌引起的新生儿脑膜炎之后，全球范围间续消失感染大事，丹麦、希腊、英国、荷兰、冰岛等国均有报道。
其严峻性已引起世界多国相关部门的重视，阪崎肠杆菌已被世界卫生组织和很多国家确定为引起婴儿死亡的重要条件致病菌。
我国也于2021年5月20日通过了《奶粉中阪崎肠杆菌检测方法》行业标准，并于同年10月实施，我国《婴儿配方食品》和《幼儿配方食品》相关标准规定婴幼儿配方奶粉、食品中禁止检出阪崎肠杆菌等致病菌。
一、阪崎杆菌的生物学特性1 形态染色阪崎肠杆菌属肠杆菌科肠杆菌属, 因此本菌具备肠杆菌基本形态特征: 革兰阴性粗短杆菌，有周身菌毛, 无芽胞, 有动力[1] 。
2 培育特性能在一般养分琼脂、血平板、麦康凯(MAC) 琼脂、伊红美兰(EMB) 琼脂、脱氧胆酸琼脂等多种培育基上生长繁殖。
培育最佳温度25 ～36 ℃ , 在6～45 ℃下都能生长, 某些菌株可在47 ℃下生长[8] 。
在胰蛋白胨琼脂(TSA) 、脑心浸液琼脂(BH I) 及血平板上经25 ～36 ℃培育24 h 后, 形成1. 5 ～2. 5mm, 黄色菌落。
在结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂(VRBG) 能产生紫红色菌落[2]。
二、阪崎杆菌的传统检测方法阪崎肠杆菌检验程序见图1。
1 基本步骤如下：取检样100g（mL）加入已预热至44℃装有900mL缓冲蛋白胨水的锥形瓶中，用手缓缓地摇动至充分溶解，36℃1℃培育18 h2h。
移取1mL 转种于10mL mLST-Vm肉汤，44℃0.5 ℃培育24 h2h。
轻轻混匀mLST-Vm 肉汤培育物，各取增菌培育物1环，分别划线接种于两个阪崎肠杆菌显色培育基平板，36℃1℃培育18 h2 h。
婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌的检测
明进行识别。本次检测中使用的培养基的典型阪崎肠杆菌为蓝-绿色菌落,其它菌
为无色、乳白色或黄色菌落。
培养后挑取至少5个可疑菌落,不足5个时挑取全部可疑菌落, 划线接种于胰蛋白胨大豆琼脂TSA 平板，25℃±1℃培养 48h±4h。
7
分 析 结 果
鉴定
取出培养完成的胰蛋白胨大豆琼脂TSA 平板，直接挑取黄色可疑菌落,进行生 化鉴定。可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统。 用接种管将可疑菌落分别加入生化孔内，每个生化孔内载有风干的底物。在 35~37°C培养18~24小时，参考说明表判读其结果。
乳制品生产与控制
8
乳制品生产与控制
1
国家标准 设备和材料 分析步骤 分析结果
3
GB 4789.40-2016 食品安全国家标
Байду номын сангаас
准 食品微生物学检验
国 家 标
克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）检验
准
4
实 验 设 备 和 材 料
设备和材料
恒温培养箱、冰箱（2℃~5℃）、恒温水浴箱、天平（感量0.1g）、均质器、 振荡器、吸管（1mL、10mL或微量移液器及吸头）、锥形瓶（容量100mL、
200mL、2000mL）、培养皿（直径90mm）、pH计或pH比色管或精密pH试
纸、全自动微生物生化鉴定系统
培养基的制备-样品的稀释和培养
分
析
步 骤
培养基的制备
缓冲蛋白胨水(BPW)、改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素（mLST-Vm)、阪崎
肠杆菌显色培养基（DFI琼脂）、胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)、生化鉴定试剂盒
样品稀释与培养 无菌称取样品100g、10g、1g各三份,分别加入900mL、90mL、9mL已预热至44℃的 缓冲蛋白胨水,轻轻振摇使充分溶解,制成1∶10样品匀液,置36℃±1℃培养18h±2h。 培养完成后分别移取1mL转种于10mL加入了万古霉素的改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉 汤中， 44℃±0.5℃培养24h±2h。
进境婴幼儿配方乳粉中阪崎克罗诺杆菌耐药性测试
表1 菌株基本信息 Table 1 Informations of all E. sakazakii isolates
菌株 CS-1 CS-2 CS-4 CS-5 CS-6 CS-8 CS-9 CS-10 CS-13 CS-14 CS-15 CS-17 CS-18 CS-19 CS-24 CS-25 CS-30 CS-32 CS-33
Keywords Cronobacter sakazakii; drug resistance; whole genome sequence
阪 崎 克 罗 诺 杆 菌 （ Cronobacter saicazato', C. sa/caza/a]')是 克 罗 诺 杆 菌 属 （原 为 阪 崎 肠 杆 菌 ）代
AgaroPower™ 电 泳 仪 [ 柏 奥 易 杰 （北 京 ）科 技 有 限 公 司 ] ; 数 显 恒 温 水 浴 锅 HH-1 ( 金 坛 市 富 华 仪 器 有 限 公 司 ）； 台 式 低 温 高 速 离 心 机 （德国 Eppendorf公 司 ）；恒 温 金 属 水 浴 锅 （北京长安科学 仪 器 厂 ）；超 净 工 作 台 （北 京 东 联 哈 尔滨仪器制造 有 限 公 司 ）；台 式 高 速 离 心 机 （北京泰泽瑞达科技 有 限 公 司 ） ； Nanodrop 2.0 ( 美 国 Thermo公 司 ）； 移 液 枪 （德 国 Eppendorf公 司 ）；Qubit® 2 . 0 突光 计 （美 国 Invitrogen公 司 ）；紫 外 凝 胶 成 像 仪 （德 国 KODAK•公司） ； Agilent 2100 ( 美国 Agilent 公 司 ）；HPS-250生 化 培 养 箱 （哈 尔 滨 市 东 联 电 子 技 术 开 发 有 限 公 司 ）；PCR仪 （ Lab Cycler D-37085 ) (德 国 Senso Quest Gmb H 公 司 ）；VET1K 全自动 微 生 物 分 析 系 统 （法 国 M6rieUx 公 司 ）；二代测序仪 器 Ilumina PE150 ( 美国 Illumina 公 司 ）。
美国热电：奶粉中阪崎肠杆菌检测方法比较
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结晶紫中性红胆盐琼 脂平板培养符合革兰 阴性无芽孢肠杆菌生 化特征
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培养基准备，平板培 养，菌落记数，生化 鉴定
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4-6 天 （1）无特殊设备要求 （2）方法经典可靠 （3）可直观判断细菌 活与死
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（1）检测周期长，费 时费力 （2）在结晶紫中性红 胆盐琼脂平板上，该 菌与肠杆菌科其它某 些 菌 菌 落 形 态 相 似， 可操作性差
结晶紫中性红葡萄糖琼脂 （VRBGA）平板或 显色培养基平板 胰化大豆蛋白琼脂平板
氧化酶试验，革兰氏染色 API 20E 生化鉴定试剂盒 或其他鉴定系统
辅助试验 观察黄色素产生
DžMastercycler®
realplex ᕩЏ߿᧙ 1$3 ̀
- 快速银制荧光定量 PCR 仪
报 告
升降温速度：+ 6℃ / - 4.5℃
Eppendorf 荧光定量 PCR 检测体系
1、 模板 DNA 的制备
从 EE 肉汤中分别提取 1 ml 加到 1.5 ml 无菌离心管中，8000 r/min 离心 5 min，取上清液，加入 50 µl DNA 提取液，混匀后 沸水浴 5 min，12000 r/min 离心 5 min，取上清液以待检测。
奶粉中病源微生物的分子生物学检测
前 言
随着经济的发展以及人们对先进技术掌握的逐步完善，奶粉 中病源微生物导致的安全和健康问题，引起了人们对病源微 生物检测的重视。本文以目前奶粉中最新关注的病源微生物 阪崎肠杆菌的生物学检测为例，借助 Eppendorf 高品质的 实验室仪器家族，帮您构建奶粉中病源微生物检测的分子生 物学平台。 阪崎肠杆菌（ Enterobacter sakazakii ）是人和动 物 肠道 内寄生的一种革兰氏阴性无芽孢杆菌，属肠杆菌科的一种。 该菌在一定条件下可引起人和动物致病，因此被称为条件致 病菌。 2005 年 5 月 20 日，由中国检验检疫科学研究院和天津检 验检疫局牵头完成的《奶粉中阪崎肠杆菌检测方法》行业标 准在京通过审定。该标准的建立为管理部门提供了更有效的 执法依据，为企业质量控制提供了有力的技术手段，对降低 婴幼儿配方奶粉的风险，保证代乳品的安全性具有十分重要 的意义。 多份研究报告表明婴儿配方奶粉是当前发现致婴儿、早产儿 脑膜炎、败血症和坏死性结肠炎的主要感染渠道，故配方奶 粉中阪崎肠杆菌污染问题成为世界瞩目的焦点。
克罗诺杆菌属检验流程 检验过程中常见问题
克罗诺杆菌属检验流程检验过程中常见问题下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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婴幼儿食品源阪崎克罗诺杆菌的3种分型方法
婴幼儿食品源阪崎克罗诺杆菌的3种分型方法
杨秋萍;阎彦霏;张艳;曹晨阳;盛焕精;崔生辉;杨保伟
【期刊名称】《中国食品学报》
【年(卷),期】2022(22)5
【摘要】阪崎克罗诺杆菌污染婴幼儿食品可能导致新生儿和婴幼儿脑膜炎、败血症和坏死性小肠结肠炎,对其健康造成严重威胁。
采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)、多位点序列分型(MLST)和肠杆菌间保守重复序列PCR(ERIC-PCR)对分离于婴幼儿配方乳粉、米粉和辅食中的阪崎克罗诺杆菌进行分子分型,计算3种分型方法的辛普森多样性指数(DI)值,评价3种方法的分型效率,以便精确和快速开展阪崎克罗诺杆菌流行病学研究。
PFGE、MLST和ERIC-PCR可分别将37株阪崎克罗诺杆菌分为35个PFGE基因型、28个ERIC-PCR型和23个序列(ST)型,分型结果的DI值分别为99.55%,96.40%和98.05%。
3种方法对阪崎克罗诺杆菌均具有较高的分型能力,其中PFEG分型能力最高,分型效率最佳。
【总页数】9页(P358-366)
【作者】杨秋萍;阎彦霏;张艳;曹晨阳;盛焕精;崔生辉;杨保伟
【作者单位】西北农林科技大学食品科学与工程学院;富平县检验检测中心(陕西省羊乳产品质量监督检验中心);中国食品药品检定研究院
【正文语种】中文
【中图分类】R44
【相关文献】
1.陕西市售婴幼儿食品中阪崎克罗诺杆菌流行状况及相关特性研究
2.婴幼儿食品中阪崎克罗诺杆菌的快速检测
3.食品中克罗诺杆菌(原阪崎肠杆菌)双重PCR检测方法研究
4.食品中阪崎克罗诺杆菌的药物敏感性及分子分型研究
5.即食食品中阪崎克罗诺杆菌的分离鉴定及分子分型
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婴幼儿食品中阪崎克罗诺杆菌的快速检测李莉; 陈泽辉【期刊名称】《《中国卫生标准管理》》【年(卷),期】2019(010)018【总页数】4页(P4-7)【关键词】阪崎克罗诺杆菌; Lamp; 婴儿配方奶粉; 快速检测; 特异性; 灵敏度【作者】李莉; 陈泽辉【作者单位】厦门市疾病预防控制中心业务质量管理科福建厦门361021; 厦门市疾病预防控制中心检验科福建厦门361021【正文语种】中文【中图分类】R155阪崎克罗诺杆菌，又称阪崎肠杆菌，多寄生于人和动物的肠道中，为食源性致病菌，多来源于婴幼儿食品。
阪崎克罗诺杆菌有鞭毛，兼性厌氧，属于革兰氏阴性无芽孢杆菌[1]。
婴幼儿感染后容易造成新生儿脑膜炎、坏死性结肠炎和败血症等，对尚未发育完全的神经系统造成影响，严重者可导致死亡[2]。
近年来，阪崎克罗诺杆菌感染的发生率呈上升趋势，因而快速检测阪崎肠杆菌，并制定相应的防控方案在公共卫生领域十分重要[3]。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 实验用菌株本研究用到的菌株见表1。
1.1.2 样品与试剂本研究检测采用的样品婴幼儿奶粉，来源于厦门市各超市。
万古霉素试剂：北京陆桥技术股份有限公司。
阪崎肠杆菌核酸快速检测试剂盒：广东环凯微生物科技有限公司。
1.2 主要仪器设备BSC-1500IIA2-X型生物安全柜：济南鑫贝西生物技术有限公司；GNP-9160型、GNP-9080型隔水式恒温培养箱：上海精宏实验设备有限公司；HV-25型高压灭菌器：日本平山制作所株式会社；Pico7500 2415型台式高速离心机：厦门联仪通医疗设备有限公司；EPPENDDO-RF型恒温金属浴：厦门宝能科技有限公司；IKA MS3型漩涡混合仪：福州齐力特实验设备有限公司；BCD-218S DA型海尔冰箱：青岛海尔股份有限公司。
1.3 方法1.3.1 传统分离鉴定应用GB 4789.40-2010方法，取100 mg样品，加到高压灭菌过的，44℃的装有900 mL缓冲蛋白胨水的锥形瓶中，混匀。
在（36±1）℃的环境下培养（18±2）h，移取1 mL转种于装有10 mL的mLST-Vm肉汤，于（44.0±0.5）℃培养（24±2）h。
分离鉴定时，将43.1 g DFI溶于1升蒸馏水，加热煮沸、高压灭菌、冷却，倾注形成DFI平板，取肉汤增菌液划线接种。
划线时将平板分成面积从大到小依次为D、C、B、A的四部分，接种环先涂抹A区，然后依次在B区、C区、D区划线，避免D区划线同A区相接触，最后培养。
1.3.2 Lamp实验首先将1 mL增菌液注入离心管，离心后弃上清，洗涤沉淀后再次离心以至完全去掉上清。
将裂解液加到沉淀中，再于99℃恒温加热10 min，离心得到上清，为粗提取DNA，将其转移到0.2 mL无菌离心管中，置于-20℃冰箱保存备用。
阴性、阳性对照复溶，在初次使用需将80 μL超纯水添加至两组对照的冻干粉中，溶解、混匀，-20℃保存备用。
干粉试剂复溶时，将冻干粉试剂剪成多个检测试剂管，数量为待检测样品数+2，向管中加入20 μL复溶液后保存备用。
扩增时，将恒温设置在63℃，将显色指示剂、待检测样品核酸、阴性对照和阳性对照加到反应管中，反应50 min。
1.3.3 特异性实验选取奇异变形杆菌（CMCC 49005）、阪崎克罗诺杆菌（ATCC 29544）、粪肠球菌（AS.1.2024）、肠炎沙门氏菌（CMCC 50335）、大肠埃希氏菌（ATCC 25922）、金黄色葡萄球菌（ATCC 6538）。
ATCC 29544使用GB 4789.40-2010法增菌，其余5种直接溶于营养肉汤，过夜培养后进行Lamp实验，从而验证特异性。
1.3.4 灵敏度实验将过夜后的人工污染奶粉10倍梯度稀释。
取10只无菌试管，依次为10-1、10-2……10-10，加9 mL的BPW，先吸取1 mL增菌液加到10-1管摇匀，再从10-1管中吸取1 mL至10-2管，依此法稀释至10-10管，每管取1 mL计数，各管均行Lamp实验，从而检测灵敏度。
1.3.5 实际样品检测对购于本地超市的20种婴幼儿配方奶粉采用GB 4789.40-2010法进行阪崎克罗诺杆菌计数，以及试剂盒的快速检测，比较以得出配方奶粉的质量，同时分析Lamp法的实用性。
2 结果与分析2.1 基本情况阪崎克罗诺杆菌菌株培养、稀释后平板计数，如图1所示。
稀释至10-5时，肉眼观察到菌落遍布平板；稀释至10-6时，菌落数分别是227和257 CFU/mL；至10-7时，菌落数分别是24和30 CFU/mL；至10-8时，菌落数分别为2和2 CFU/mL，稀释至10-9后，肉眼不可见菌落。
因此，原菌液浓度是2.0×10-8 CFU/mL。
2.2 特异性实验采用6种标准菌株进行Lamp方法特异性实验的结果，在自然光下，2号管（阪崎克罗诺杆菌）与阳性对照比较为荧光绿，1、3、4、5以及6号管与阴性对照为淡橙色，因而该试剂盒可以特异性地检出阪崎克罗诺杆菌，不可检出奇异变形杆菌（1）、粪肠球菌（3）、金黄色葡萄球菌（4）、肠炎沙门氏菌（5）和大肠埃希氏菌（6）等菌株，重复检测得到相同结果，因此，该试剂盒特异性较高。
2.3 灵敏度实验增菌液经培养，浓度为2.0×108 CFU/mL，将其梯度稀释，浓度依次为2.0×108～2.0×10-4 CFU/mL，进行Lamp实验，稀释至10-7（2.0×101CFU/mL）时结果与阳性对照比，为荧光绿；稀释至10-8及以后，与阴性对照比，为淡橙色，说明该试剂盒检测阪崎克罗诺杆菌的限值为20 CFU/mL。
用DFI计数，稀释至10-6时，尚可检测出菌落，稀释至10-7及之后不能够检出绿色阪崎克罗诺杆菌，表明DFI平板的检出限为200 CFU/mL。
因此，试剂盒灵敏度是平板计数的10倍，本结果经重复检测，得相同结果。
表1 实验用菌株图1 10 倍稀释平板计数2.4 实际样品的检测通过快速检测试剂盒对20份市售婴幼儿配方奶粉检测，样品同阴性对照相比，为淡橙色，表明未检测出阪崎克罗诺杆菌，多次检测均未检出，因此，奶粉符合率是100%。
3 讨论婴幼儿配方奶粉如发生阪崎克罗诺杆菌污染，会严重威胁婴幼儿的生命安全[4]。
目前，我国主要以分离培养检测该菌[5]，其存在检测时间长、对检测人员要求高、易受人为干扰、易交叉污染、不能大批量定量检测等不足[6-7]。
PCR技术虽可改善检测质量，但成本高、程序繁杂、实验室要求、气溶胶等也限制了其在基层的开展[8-9]。
Lamp技术具有较高的灵敏度和特异度，且快速、简单，具有较好的应用前景[10]。
本研究中试剂盒以核酸分子检测为原理，在自然光下可直接比较阴性对照管（淡橙色）及阳性对照管（荧光绿色），快速简便，减少了人为因素引起的误差。
为验证该方法特异性，本研究对6种标准菌株进行检测，结果显示较为理想，加之重复实验，进一步说明检测特异性较高。
传统分离鉴定方法与Lamp法相比，前者步骤较多，自前增菌、增菌培养，到划线接种平板培养需用时4天左右，耗时较长，如未严格无菌操作，也容易出现偏差，结果与王蕊等[11]研究结论相符。
试剂盒法检测人工污染的阪崎克罗诺杆菌，从DNA提取到LAMP扩增结束，共耗时约90分钟。
无需设计引物，缩短了时间，且操作简便，检测成本较低。
同时，结果还显示出试剂盒的灵敏度高于平板。
试剂盒对20份奶粉样品的验证实验，表明Lamp 在实际检测结果与传统方法相同，相比之下，快速检测试剂盒在耗时、操作、携带以及结果判读方面具有显著优势。
综上所述，环介导等温扩增（Lamp）技术在快速检测婴幼儿食品中阪崎克罗诺杆菌中有高灵敏度、高特异性、快速简便、无污染等优势，在基层的快速检测具有很好的应用前景。
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