阪崎肠杆菌研究进展

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阪崎肠杆菌检验技术

食品中阪崎肠杆菌检验
生态分类
一、阪崎肠杆菌概况
阪崎肠杆菌属肠杆菌科，是人和动物肠道中寄生的一种革兰阴性无芽胞杆菌。是肠道正常菌群的一种，在一定条件下可引起人和动物致病。1980年以前命名为黄色阴沟肠杆菌，1980年更名为阪崎肠杆菌。
一、阪崎肠杆菌概况
生态分布家庭、温泉、鼠、苍蝇、植物根围、沉积物，沼泽地、土壤、食品等均有检出阪崎肠杆菌的报导。有报导推测，昆虫可能是阪崎肠杆菌的环境宿主。婴儿配方粉的污染：内在污染：--由加工环境中微生物的存在；加工装置内表面微生物的存在；热处理后，与干燥基粉混合的加入成分中存在的微生物造成。外源性污染：--受阪崎肠杆菌污染的配方粉或调制好的配方奶在较高温度下存放，食用前不加热，或加热不彻底，喂食时间较长等都可导致阪崎肠杆菌有机会生长繁殖，增加患病的危险性。
三、阪崎肠杆菌菌定量检测
1g(mL)×3
取样量 10g(mL)×3
100g(mL)×3
BPW 1：10 稀释
mLST-Vm
DFI、TSA
生化鉴定
报告（MPN值）
操作规程
前增菌选择性增菌显色培养基验证试验结果报告
三、阪崎肠杆菌菌定量检测
各100ml（g)
各10ml（g)
各900ml（g) 各移1ml
900 ml BPW
样品
100mL（g）溶解预热
44℃
36±1℃ 18h±2h
选择性增菌 44±0.5℃
24h±2h
10mL mLST-Vm肉汤
挑取蓝绿色菌落
操作规程 API20E鉴定系统
二、阪崎肠杆菌菌定性检测
TSA平板上直接挑取黄色菌落进行鉴定
结果鉴定
二、阪崎肠杆菌菌定性检测

阪崎肠杆菌_ppt课件

※氧化酶阴性
※过氧化氢酶阳性，并生成黄色菌落
营养成分表
样品
美赞臣安婴儿婴儿配方奶粉
罐装
配料表： 100%进口奶源配料：乳糖、精炼植物油、浓缩乳清蛋白、脱脂奶粉、低聚半乳糖（GOS）、花生四烯酸（ARA）和二十二碳六烯酸（DHA）（来源于单细胞油）、矿物质（碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钾、氯化钾、氯化镁、硫酸亚铁、硫酸锌、硫酸铜、硫酸锰、亚硒酸钠、碘化钾）、玉米糖浆固体、维生素（维生素A、维生素D3、维生素 E、维生素C、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素K1、胆碱、肌醇、烟酰胺、叶酸、泛酸、生物素）、牛磺酸、核苷酸、食品添加剂：磷脂、抗坏血酸棕榈酸酯、氢氧化钙、碳酸氢钾。
44 ℃±0.5 ℃ 培养24h±2h 。
10 mL mLST-Vm 肉汤
36 ℃±1 ℃培养24 h±2 h。
各取增菌培养物1 环，分别划线接种于两个阪崎肠杆菌显色培养基平板
①前增菌和增菌
②分离
挑取1 个～5 个可疑菌落，划线接种于TSA 平板。 25 ℃±1 ℃培养48 h±4 h。
③鉴定
阪崎肠杆菌显色培养基DFI
微生物
菌落颜色
• 阪崎肠杆菌 • 大肠杆菌 • 金黄色葡萄球菌
蓝绿色无色菌落被抑制不生长
培养基和试剂
• 4 、胰蛋白胨大豆琼脂（trypticase soy agar， TSA）：见附录A 中A.3。
• 5 、生化鉴定试剂盒。 • 6、氧化酶试剂：见附录A 中A.4。 • 7、 L-赖氨酸脱羧酶培养基：见附录A 中A.5。 • 8 、L-鸟氨酸脱羧酶培养基：见附录A 中A.6。 • 9 、L-精氨酸双水解酶培养基：见附录A 中A.7

环介导等温扩增技术在食品安全检测领域的应用研究进展

环介导等温扩增技术在食品安全检测领域的应用研究进展范安妮;佘之蕴;张娟;周臣清;梁宇斌【摘要】环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是近年发展起来的一种新型核酸检测技术其采用特异识别靶序列上6个位点的4条引物和一种具有链置换活性的DNA聚合酶,在等温条件下进行核酸扩增,与传统核酸检测技术(PCR法、实时荧光定量PCR法)相比,具有操作简单、特异性强、灵敏度高、可肉眼判读结果等优点核酸检测是食品安全检测技术的一个重要手段,本文综述了LAMP技术在食品微生物检测、转基因成分检测、过敏原成分检测和动物源性成分检测领域的应用研究进展,探讨了LAMP技术在食品检测领域的发展前景,以期为食品快速、高通量检测技术建立提供参考%loop-mediated isothermal amplification(LAMP) is a novel nucleic acid amplification method developed in recent years.The nucleic acid amplification is performed ender isothermal conditions by a set of four specially designed primers and a DNA polymerase with strand displacement pared with the traditional nucleic acid detection technology (PCR and real-time fluorescence quantitative PCR),it has the advantages of easy operation,high specificity,sensitivity and visual interpretation.Nucleic acid detectiou is an important means of food safety detection.This review summarized the application research progresses mainly focused on food safety detection,including food microorganisms testing,genetically modified organisms testing,food allergens testing and food derived ingredients testing.In addition,the perspectives of LAMP in food detectiou were discussed for better and high volume testing in food safety detection.【期刊名称】《食品工业科技》【年(卷),期】2018(039)010【总页数】5页(P330-334)【关键词】环介导等温扩增技术(LAMP);食品安全;检测;核酸扩增【作者】范安妮;佘之蕴;张娟;周臣清;梁宇斌【作者单位】广东产品质量监督检验研究院,广东顺德528300;广东产品质量监督检验研究院,广东顺德528300;广东产品质量监督检验研究院,广东顺德528300;广东产品质量监督检验研究院,广东顺德528300;广东产品质量监督检验研究院,广东顺德528300【正文语种】中文【中图分类】TS207.3核酸扩增是分子生物学研究领域的一项重要技术,目前已广泛应用于医学诊断、食品检测、动植物检验检疫等行业中。

阪崎肠杆菌的研究进展

阪崎肠杆菌研究进展
龙道崎、邹妍、关郁芳、雷丹丹、边伟、胡鹏
目录
概述
生物学特性
检测方法致病性预防和控制
阪崎肠杆菌概述
阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)属肠杆菌科，是人和动物肠道内寄生的一种周生鞭毛、能运动、无芽孢的革兰氏阴性菌，一直以来被称为黄色阴沟肠杆菌 (Enterobacter cloacae)，于1980年以日本细菌学家 Riichi Sakazakii的名字命名。阪崎肠杆菌能引起严重的新生儿脑膜炎、小肠结肠炎和败血症，近年来受到了研究者的广泛关注

阪崎肠杆菌的毒力因子可能是一类肠毒素样化合物。在组织培养过程中一些菌株产生细胞毒效应，且菌株间的毒力作用有差异。细菌内毒素（脂多糖），是构成革兰氏阴性细菌细胞外壁的主要成分。具有热稳定性，能增加小肠上皮细胞通透性，促使细菌侵入肠壁中而致病。

Байду номын сангаас防与控制
预防坚持母乳喂养选择检查合格的奶粉开水冲调婴幼儿配方食品，再次食用前应重新加热。控制制定婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌微生物标准制定加工、使用和操作婴幼儿配方食品的导则制定有效的环境监测计划建立实验室监测网络，对阪崎肠杆菌的来源、传播途径等进行调查研究
阪崎肠杆菌的致病性
阪崎肠杆菌是存在自然环境中的一种
“条件致病菌”，由其引发的危害人群主要是婴儿以及早产儿。偶尔还可引起成人局部感染。
阪崎肠杆菌能引起严重的新生儿脑膜炎、
菌血症和坏死性小肠结肠炎，并可能遗留严重的神经系统后遗症，死亡率20 ％～50％。
阪崎杆菌的致病性
致病机制研究不多，尚不清楚。目前所知阪崎肠杆菌致病性可能与肠毒素和内毒素有关

LAMP法和PCR法对阪崎肠杆菌快速检测的对比探究

LAMP法和PCR法对阪崎肠杆菌快速检测的对比探究作者：颜学伟来源：《中外医学研究》2013年第05期【摘要】目的：研究LAMP法和PCR法在阪崎肠杆菌快速检测中的差异，指导临床在阪崎肠杆菌快速检测中方法的选择。

方法：针对阪崎肠杆菌的OmpA基因，设计相关特异性引物，分别建立LAMP法和PCR法两种检测方法体系对其进行检测，并对两种检测方法的灵敏度进行记录比较；分别采用两种方法对45株阪崎肠杆菌近源菌进行检测，分析比较两种方法的特异性；最后采用两种方法对60份商场奶粉样品进行检测，将检测结果与FDA检测结果进行比较分析。

结果：两种检测方法的灵敏度检测结果显示：LAMP法对阪崎肠杆菌快速检测的敏感度（101 cfu/ml）明显高于PCR法（102 cfu/ml），两者比较差异有统计学意义（P【关键词】 LAMP； PCR；阪崎肠杆菌中图分类号 R33 文献标识码 A 文章编号 1674-6805（2013）5-0001-02阪崎肠杆菌是肠杆菌科的一种，是奶粉（乳）制品中新发现的一种致病菌。

由其可引发婴儿各种疾病，致病机制可能与其侵入、诱导凋亡及肠毒素作用有关[1]。

对于阪崎肠杆菌的检测，最新研究发现LAMP法对阪崎肠杆菌快速检测，灵敏度高、特异性强[2]。

笔者所在医院应用LAMP法和PCR法对阪崎肠杆菌快速检测的进行对比探究，现报道如下。

1 资料与方法1.1 菌株标本所研究的菌株共60株，其中2株阪崎肠杆菌标准菌株是由广东省微生物研究所提供的ATCC51329和ATCC29544，8株阪崎肠杆菌野生菌株是采用FDA传统手段从商场奶粉或果汁中提取出来的；其余在试验中用到的菌株均为本实验室自己保存。

1.2 仪器细菌基因组DNA抽提试剂盒（上海生工生物工程技术服务有限公司），Bst DNA Polymerase（美国NEB公司），betaine（美国Sigma公司），agarose（Promega），DK28D型电热恒温水槽（上海一恒科技有限公司），PCR仪：PTC-200型；美国Bio-rad公司，EPS301电泳仪（瑞典Amersham公司）。

钦州市售婴幼儿食品中阪崎肠杆菌污染状况调查论文

钦州市售婴幼儿食品中阪崎肠杆菌污染状况调查【摘要】目的：了解钦州市售婴幼儿食品阪崎肠杆菌的污染状况，为食品风险评估提供科学依据。

方法：对钦州市内销售的广西区内外生产的婴幼儿食品进行定期随机采购，应用食品安全国家标准食品微生物检验阪崎肠杆菌检验（gb4789.40 -2010）计数法进行检验。

结果：96件样品中共检出13株阪崎肠杆菌，检出率为（13.54%）。

其中24件适合6月龄以下段婴幼儿配方奶粉阪崎肠杆菌的检出率8.33%（2/24），36件适合6月龄以上婴幼儿配方奶粉检出率为11.11%（4/36），36件婴幼儿谷类辅助食品阪崎肠杆菌检出率为19.44%（7/36），阪崎肠杆菌定量结果为0.3～46mpn/100g 不等。

结论：婴幼儿食品中阪崎肠杆菌污染问题值得重视，存在严重安全隐患。

【关键词】市售；婴幼儿食品；阪崎肠杆菌；监测【中图分类号】r155.5 【文献标识码】a 【文章编号】1004-7484（2013）04-0832-02阪崎肠杆菌又名阴沟肠杆菌，为肠杆菌属的一个种，革兰氏阴性杆菌，有周鞭毛，能运动，无芽胞，氧化酶阴性[1]。

是近几年在乳制品中新发现并引起广泛关注的一种致病菌。

它是存在于自然环境中的一种“条件致病菌”，已被世界卫生组织和许多国家确定为引起婴幼儿死亡的重要条件致病茵。

由阪崎肠杆菌引发疾病而导致的死亡率高达40%-80%。

研究表明，婴幼儿配方奶粉是阪崎肠杆菌的主要感染渠道，这已起世界各国的重视。

2004年fao/who在制定婴幼儿配方奶粉标准时，经过风险评估后，将阪崎肠杆菌与沙门氏菌列婴儿配方奶粉的列为a类致病菌[2]。

2004年中国安徽阜阳由阪崎肠杆菌污染的劣质婴儿配方奶粉事件引起了我国政府的高度重视[3]。

卫生部自2005年起，开始对全国婴幼儿配方奶粉进行监测。

为了解钦州市售婴幼儿配方奶粉及婴幼儿辅助食品中阪崎肠杆菌的污染情况，我们于2011年3月至2012年10月对钦州市售的96件婴幼儿食品进行了监测检验，现将结果报告如下：1 材料与方法1.1 材料3 计论阪崎肠杆菌可引起各年龄段人群患病，1岁以下婴儿是该菌感染的高危人群，特别是新出生婴儿，早婴产儿及出生体重偏低和免疫力下降等身体状况较差的婴幼儿易感[4]。

婴幼儿乳粉加工环境中克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）监控方案的构建

食安管理婴幼儿乳粉加工环境中克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）监控方案的构建陶文靖1，赵婷婷2，许冉冉2，张君超1，吴　萍2，董　彬3*（1.北京美正生物科技有限公司，北京 102200；2.光明乳业股份有限公司华东中心工厂，上海 201111；3.北京光明健能乳业有限公司，北京 101300）摘　要：克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）作为婴幼儿配方乳粉中的A类致病菌备受关注。

该菌耐干燥，可长期存在于婴儿奶粉生产环境中。

婴儿配方奶粉加工、运输及销售等环节都有可能污染克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌），因此控制婴幼乳粉加工环境中克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）的污染尤为重要。

本文结合标准法规要求和婴幼儿配方乳粉企业环境监测的经验，构建出加工过程环境中克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）监控基础方案，包括区域划分、采样方案、检测方法、预防措施和纠正措施等，可帮助企业科学有效地控制克罗诺杆菌属的污染风险。

关键词：克罗诺杆菌属；婴幼儿奶粉；加工环境Construction of Monitoring Program for Cronobacter(Enterobacter sakazakii) in Infant Formula ProcessingEnvironmentTAO Wenjing1, ZHAO Tingting2, XU Ranran2, ZHANG Junchao1, WU Ping2, DONG Bin3*(1.Beijing Meizheng Bio-Tech Co., Ltd., Beijing 102200, China; 2.Bright Dairy Co., Ltd., East China Center Factory,Shanghai 201111, China; 3.Beijing Guangming Jianneng Dairy Co., Ltd., Beijing 101300, China) Abstract:Cronobacter (Enterobacter sakazakii) has attracted much attention as a group A pathogenic bacteria in infant formula milk powder. The bacterium is resistant to desiccation and can persist for a long time in the environment of infant milk powder production. Cronobacter (Enterobacter sakazakii) may be contaminated in the processing, transportation and sales of infant formula milk powder. Therefore, the contamination control of Cronobacter (Enterobacter sakazakii) in the processing environment of infant milk powder is particularly important. This paper combines the requirements of standards and regulations and the experience of environmental monitoring in infant formula milk powder enterprises to construct a basic monitoring plan for Cronobacter (Enterobacter sakazakii) in the processing environment, including area division, sampling plan, detection method, preventive measures and corrective measures, etc., can help enterprises to control the risk of Cronobacter more scientifically and eﬀectively.Keywords:Cronobacter; infant formula; processing environment克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）（以下简称“克罗诺杆菌属”）是婴幼儿乳粉中备受关注的食源性致病菌之一，严重危害婴幼儿的健康。

阪崎肠杆菌污染途径

• 检验流程: ①接种缓冲蛋白胨水 : • ②mLST增菌24h • ③接种DFI培养基,37℃，培养 24h • ④接种API20NE
1.3 分离方法 DFI显色培养基上阪崎肠杆菌的菌落特征显色培养基上阪崎肠杆菌的菌落特征显色培养基上
蓝绿色菌落
1.3 分离方法
E. sakazakii 的API 20E结果结果
• 样品修复培养（前增菌）：样品修复培养（前增菌）：无菌称取100g乳粉加）：入500ml预热45℃BP中，混匀，经36℃±1℃培养18-24h。 • 样品肠道增菌培养样品肠道增菌培养：移取10ml 加入90mlEE肉汤中，于36℃±1℃培养18-24h。 • 样品分离培养：取EE增菌肉汤培养物1环，分别样品分离培养：划线接种EMB、MacConKey、 SorbitolMacConKey琼脂平板各1块，置 36℃±1℃培养18-24h。观察3种平板上的菌落形态及不同的生物学特性反应及其差异比较。
DFI培养基存在的问题培养基存在的问题
更快的检测方法? 更快的检测方法
• PCR • Q-PCR
DFI培养基存在的问题培养基存在的问题
荧光PCR结果结果荧光
1.4其他肠杆菌属的检验其他肠杆菌属的检验
• E-M-S法 • 所需培养基： • EMB • MacConKey • SorbitolMacConKey
1.3 分离方法美国FDA 法 – 2002年美国年
• 对加拿大法进行了修改:
– 从10毫升接种到毫升肠杆菌增菌肉汤（EE）。毫升接种到90毫升肠杆菌增菌肉汤毫升接种到毫升肠杆菌增菌肉汤（）。孵育过夜而不是直接涂布平板. 在36oC孵育过夜而不是直接涂布 VRBG 平板孵育过夜 – 可疑菌落接种可疑菌落接种TSA 并在 oC 培养 48-72 hours. 并在25 – 只有产黄色色素的菌落进行 API 20E system实验实验. 实验

为了宝宝的健康——谈婴儿配方食品中的阪崎肠杆菌

为了宝宝的健康
谈婴儿配方食晶｜的阪崎肠杆菌｝Ｉ
口弓耀忠
阪崎肠杆菌是奶粉（）制品中新发观的～种敏痫菌，埘乳一罂儿健沫有…・，定的危害，应引起高度霞视。
婴
幼儿食品一直以来都为大众所关注，２１年４月０１１日起实施的｛－Ａ品安全国家标准婴儿配方食品》
厩腐蝇的地理分布和阪崎肠杆菌感染直接桐关。
２０年７月１０１１日，福建省疾病预防控制中心接到一
消费者投诉，该消费者称其从乳品专卖店购买的一箱进
口利乐包纯牛奶中有一罐已明显膨胀，遂将此罐牛奶送检，要求查明原因。微生物实验室经无菌操作开罐、感官检查、直接图片镜检及细菌培养和鉴定，证实是由阪崎肠杆菌在牛奶中生长所致。２００２年，美国ＦＤＡ在本土一些国际乳业巨头生产的婴儿配方奶粉中检出阪崎肠杆菌。同年，美国惠氏（中国）有限公司生产的爱儿乐妈妈、爱儿素婴儿豆基配方粉因阪崎肠杆菌超标被限令召回。２００２年，德国 “ 乐宝ＨＮ２ ” 婴儿特别配方奶粉美５相关资料显示：阪崎肠杆菌来源于：（）医院：空１气或临床用材料，如听诊器等；（）食物：包括干酪、２发酵面包、豆腐、发酵茶、盐腌肉、肉末等食物；（）加工食品：其中婴儿配方奶粉是婴儿感染阪崎肠杆３菌的主要渠道。

阪崎肠杆菌检测标准

阪崎肠杆菌检测标准1. 引言阪崎肠杆菌〔Hafnia alvei〕是一种革兰氏阴性菌，属于肠杆菌科。

它在自然环境中广泛存在，也可以在人和动物的消化道内找到。

阪崎肠杆菌可以对人类和动物造成感染，引起各种疾病，如泌尿系统感染、呼吸道感染和胃肠道感染等。

为确保食品和饮用水的平安，阪崎肠杆菌的检测标准十分重要。

2. 检测方法2.1 阪崎肠杆菌的培养方法阪崎肠杆菌可以在一般细菌培养基上生长，常用的培养基包括MacConkey琼脂培养基和Eosin Methylene Blue〔EMB〕琼脂培养基。

培养时一般在37°C下孵育24-48小时。

2.2 阪崎肠杆菌的生化检测阪崎肠杆菌可以通过一系列的生化反响进行检测和鉴定。

常用的生化试验包括氧化/发酵葡萄糖试验〔O/F试验〕和酮糖酸盐〔Voges-Proskauer〕试验等。

2.3 阪崎肠杆菌的PCR检测PCR〔聚合酶链式反响〕是一种常用的分子生物学方法，可以快速、准确地检测阪崎肠杆菌。

通过特定的引物在PCR反响中扩增阪崎肠杆菌的DNA片段，然后通过凝胶电泳进行检测和鉴定。

3. 检测标准3.1 食品中阪崎肠杆菌的检测标准根据国家食品平安标准，食品中阪崎肠杆菌的检测标准如下： - 生肉制品：阪崎肠杆菌在每克样品中不得超过10 CFU； - 加工食品：阪崎肠杆菌在每克样品中不得超过100 CFU； - 饮用水：阪崎肠杆菌在每100毫升样品中不得检出。

3.2 环境中阪崎肠杆菌的检测标准根据环境保护标准，阪崎肠杆菌的检测标准如下： - 水质：阪崎肠杆菌在每升水样中不得超过100 CFU； - 空气：阪崎肠杆菌在每立方米空气中不得超过100 CFU； - 土壤：阪崎肠杆菌在每克土壤样品中不得超过1000 CFU。

4. 检测流程4.1 样品采集从食品、饮用水或环境样品中采集足够数量的样品。

使用无菌容器收集，并确保样品处于最正确的保存条件。

4.2 样品处理将采集的样品经过适当的处理，在无菌条件下进行前处理，如制备悬浮液或稀释样品。

阪崎肠杆菌显色培养基说明

规格：可配置1L的培养基干粉。
2. 取样品333克按MPN三管法分别取100克、10克和1克分装在各三个2000ml、250ml和100ml的三角瓶中，在三角瓶中已装有经45℃预热的9/10(样品为1/10)的无菌蒸馏水或缓冲蛋白胨水，摇匀，在36℃培养18-22小时(SN和FDA方法)。
3. 各取10ml上述悬浮液加到装有90mlEE肉汤(022160)/mLST-Vm(022212)的150mL的三角瓶中，在36℃/44℃增菌培养18-22小时。
中文名称：阪崎肠杆菌显色培养基
英文名称：Chromogenic Enterbacter Sakazakii Agar
用途：
供婴儿奶粉以及其它食品中阪崎肠杆菌的鉴定和计数。(GB4789.40-2010和SN/T 1632-2005，ISO标准)
图鉴：
原理：
蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;胆盐抑制革兰氏阳性菌，氯化钠可维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂;硫代硫酸钠和柠檬酸铁铵用于检测硫化氢的产生;显色底物5-溴-4-氯-3-吲哚-ɑ-D 葡萄糖苷与阪崎肠杆菌中的α-葡萄糖苷酶发生反应，水解底物，释放出5-溴-4-氯-3-吲哚基显色基团，在淡黄色平板上产生绿-蓝绿色的菌落。
4. 用划线或涂布法把混匀的肉汤接种到阪崎肠杆菌显色琼脂平板上，35-37℃培养18-24小时。
5. 可使用MicrogenTMGN-ID或API20E或生化管试验，对疑似阪崎肠杆菌菌落进行生化鉴定。
质ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ控制：
本品倾注平皿后呈淡黄色，下列菌株接种后36±1℃培养18-24小时生长情况如下表：
质量控制
配方(每升)：
胰蛋白胨 15g
大豆蛋白胨 5g

GB坂崎肠杆菌检验

2024/6/19 即：不能观察到ES的特征性菌落。
15
显色培养基的选择性较好
• DFI对ES的选择性较好，ES形成的蓝绿色特征性菌落易于辨认，而且：
硫化氢指示剂可以区分ES和产生少量α-葡萄糖苷酶但H2S阳性菌株（如普通变形杆菌）。
ES都可以在DFI平板上生长并产生蓝绿色菌落其他常见菌在DFI平板的菌落颜色
2024/6/19
4
二、培养特征
• G－无芽孢杆菌，兼性厌氧，在6℃-47℃范围内均可生长，适温35-37℃
• 营养要求不高： VRBGA、TSA、NA、MAC、EMB、其他
与其他常见肠杆菌相似
2024/6/19
5
三、生化反应
生化反应 D-山梨醇产生吐温80脂酶细胞外Dnase 氧化酶试验黄色菌落 α-葡萄糖苷酶
Enterobacter sakazakii(ES)
2024/6/19
1
内容
第一部分：一般特征第二部分：流行病学特征第三部分：ES的检验
2024/6/19
2
第一部分：一般特征
命名培养特征生化反应抵抗力增殖能力致病性
2024/6/19
3
一、命名
1980年之前一直被称为黄色阴沟肠杆菌。 • DNA-DNA杂交 • 生化反应 • 黄色素 • 抗生素敏感性
2024/6/19
27
API 20E生化鉴定板典型生化反应图示
API 20E反应编码 3345 373 3305 173 3305 363 3305 373
API 20E结果评价 Excellent identification Excellent identification Very good identification

LAMP在阪崎克罗诺杆菌检测中研究进展

LAMP在阪崎克罗诺杆菌检测中的研究进展王彦人1，焦敬波1，张钧森1，康青1，李萍1，杜欣军1*(1.省部共建食品营养与安全国家重点实验室，天津科技大学食品科学与工程学院，天津，300457)摘要：阪崎克罗诺杆菌（Cronobacter sakazakii）是一类食源性致病菌，可引起新生儿脑膜炎、败血症等疾病。

环介导等温扩增（Loop-Mediated Isothermal Amplification, LAMP）技术是一类新型的恒温核酸扩增技术，具有灵敏度高、耗时短、特异性强、对设备需求低等特点，可与多种检测方法结合应用于食源性致病微生物的检测。

本文旨在阐明LAMP的基本原理并归纳结合不同检测方法的LAMP技术在阪崎克罗诺杆菌快速检测中的研究进展。

关键词：阪崎克罗诺杆菌；环介导等温扩增；快速检测中图分类号：TS201.6Process of Loop-Mediated Isothermal Amplification for Detection inCronobacter sakazakiiWANG Yanren1，JIAO Jingbo1，ZHANG Junsen1，KANG Qing1，LI Ping1，DU Xinjun1*(1. State Key Laboratory of Food Nutrition and Safety, College of Food Science and Engineering, TianjinUniversity of Science and Technology, Tianjin 300457, China)Abastract:Cronobacter sakazakii is a kind of foodborne conditional pathogenic bacteria, which can cause neonatal meningitis, septicemia and other diseases. Loop-mediated isothermal amplification technique (LAMP) is a new type of isothermal nucleic acid amplification technique with high sensitivity, rapidity and low equipment requirements. It can be combined with a variety of detection methods for practical application and has been widely used in the detection of foodborne microorganisms. This paper aims to elucidate the phylogenetic taxonomy of C. sakazakii, the basic principles of LAMP, and to summarize the progress of LAMP technology combined with different detection methods in the detection of C. sakazakii.Keywords: Cronobacter sakazakii, loop-mediated isothermal amplification (LAMP), rapid detection阪崎克罗诺杆菌为克罗诺杆菌属（Cronobacter，主要种型如表1所示）中最为典型的一类食源性致病菌种，易感染全年龄段人群0，致死率高达40~80%0。

食品微生物之检验方法-阪崎肠杆菌之检验

食品微生物之检验方法－阪崎肠杆菌之检验1 适用范围：本方法适用于一般食品及奶粉中阪崎肠杆菌之检验。

2 检验方法：2.1 工作环境：工作平台须宽敞、洁净、光线良好，操作平台光度为100呎烛光以上，密闭室内换气良好，尽可能没有灰尘及流动空气。

每15分钟落菌数不得超过15 CFU／培养皿。

2.2 器具及材料：2.2.1 干热灭菌器。

2.2.2 高压灭菌釜。

2.2.3 搅拌均质器（Blender）或铁胃（Stomacher）：适用于无菌操作者。

2.2.4 天平：可称量到2000 g者，灵敏度为0.1 g；可称量到120 g者，灵敏度为1 mg。

2.2.5 冰箱：能维持5 ± 3℃者。

2.2.6 吸管或吸管尖：已灭菌，1 mL吸管应有0.01 mL之刻度；5 mL及10 mL吸管应有0.1 mL 之刻度。

2.2.7 吸管辅助器（Pipette aid）或微量分注器。

2.2.8 稀释瓶：160 mL，玻璃、聚乙烯（polyethylene）、铁弗龙（Teflon）或其它能耐121℃湿热灭菌20分钟以上之塑料材质，附螺旋盖。

2.2.9 培养皿：已灭菌，内径约9 cm，深度约15 mm，底皿之内外面应平坦，无气泡、刮伤或其它缺点。

2.2.10 增菌用容器：附螺旋盖之125 mL、250 mL、2 L三角锥瓶或广口瓶；玻璃、聚乙烯、铁弗龙或其它能耐121℃湿热灭菌20分钟以上之塑料材质。

2.2.11 pH测定仪。

2.2.12 培养箱：能维持内部温度在± 1℃以内者。

2.2.13 温度计：量测温度范围1～55℃，最小刻度0.1℃。

2.2.14 水浴：加盖，具水流循环系统，能维持水温温差在± 0.2℃以内者。

2.2.15 接种针及接种环（直径约3 mm）：镍铬合金、铂铱或铬线材质，或可抛弃式者。

2.2.16 曲玻棒：可灭菌者，直径3～4 mm，涂抹区域45～55 mm。

2.2.17 试管：10 × 100 mm，13 × 100 mm，13 × 120 mm，15 × 150 mm，16 × 150 mm试管，或其它适用者。

坂崎肠杆菌

ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
环境抗性
• 阪崎肠杆菌具有耐热及耐寒性，在外界环境中比其他肠道杆菌生存率强，培养最佳温度25—36℃，在6～45℃下都能生长，某些菌株可在47℃下生长。阪崎肠杆菌比其他肠杆菌耐高温，LEHNER研究发现阪崎肠杆菌在婴儿配方奶粉中60℃存活2.5min，并且72℃仍能存活。BREELLWER等观察阪崎肠杆菌在58℃下能持续0.39～0.60min不死。 • 由于阪崎肠杆菌细胞内含有大量的海藻糖酶，累积有大量的海藻糖，使得阪崎肠杆菌比沙门菌和其他肠杆菌更耐受渗透压和干燥。 • 阪崎肠杆菌耐酸性并对清洁剂和杀菌剂有较强抵抗力。 LEH—NER的实验表明，阪崎肠杆菌能在pH0.9～2下存活( 胃部的酸性环境)，可能与阪崎肠杆菌周身菌毛结构有关，该菌毛结构易使细菌形成共生集合体，也易粘附在各种物体表面形成一层生物保护膜，对清洁剂和杀菌剂具有较强的抵抗力。
增殖特性
• 所有的阪崎肠杆菌都能在胰蛋白酶大豆琼脂上 36℃快速生长，24小时后形成直径2～3mm的菌落；25℃生长24h后形成直径1～1．5mm的菌落， 48小时后形成直径2～3mm的菌落。 • 坂崎肠杆菌在25℃放置10小时可增加30000倍，即使婴儿配方粉中只有极微量的污染，阪崎肠杆菌能在婴儿配方粉中也可长期存活，在配方粉食用前的冲调期和储藏期该菌可能会大量繁殖。
阪崎肠杆菌是人和动物肠道内寄生的一种革兰阴性无芽孢杆菌，属肠杆菌科肠杆菌属，是肠道正常菌丛中的一种，在一定条件下可引起人和动物致病。在1980年之前一直被称为黄色阴沟肠杆菌
。
阪崎肠杆菌兼性厌氧，营养要求不高，能耐受一定程度的渗透压和干燥，能在营养琼脂、血平板、麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂、脱氧胆酸琼脂等多种培养基上生长繁殖。

阪崎肠杆菌检测标准

阪崎肠杆菌检测标准阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii）是一种常见的致病菌，它可以存在于环境中的多种食品和饮用水中。

由于其对婴儿和免疫系统较弱者具有较高的致病性，因此对阪崎肠杆菌的检测标准显得尤为重要。

本文将介绍阪崎肠杆菌检测的相关标准，以便从事食品生产和检验的相关人员了解和遵循。

首先，阪崎肠杆菌的检测应该遵循国家相关的标准和规定，如《食品安全国家标准食品中阪崎肠杆菌的检验》（GB 4789.41-2016）。

该标准规定了食品中阪崎肠杆菌的检测方法和技术要求，包括样品的采集、处理、培养和鉴定等步骤。

在进行检测时，应当严格按照标准的要求进行操作，以确保检测结果的准确性和可靠性。

其次，阪崎肠杆菌的检测需要使用合适的检测方法和设备。

常见的检测方法包括PCR法、免疫学方法、生化方法等。

在选择检测方法时，应根据实际情况和样品的特点进行合理的选择，以确保检测的准确性和灵敏度。

同时，应使用经过认证的检测设备和试剂，确保其质量和性能符合要求。

另外，阪崎肠杆菌的检测还需要严格控制检测过程中可能存在的污染和干扰因素。

在样品采集、处理和检测过程中，应避免外部环境的污染，确保样品的纯净性和可靠性。

同时，应严格控制实验室环境和操作流程，避免可能对检测结果产生干扰的因素存在。

最后，阪崎肠杆菌的检测结果应当进行合理的解读和评估。

在获得检测结果后，应根据标准的要求进行结果的解读和评估，判断样品中阪崎肠杆菌的存在情况和数量水平。

同时，应根据检测结果进行合理的风险评估和控制措施制定，以保障食品安全和公共健康。

总之，阪崎肠杆菌的检测标准对于食品安全和公共健康具有重要意义。

相关从业人员应当严格遵循国家标准和规定，选择合适的检测方法和设备，严格控制检测过程中的污染和干扰因素，合理解读和评估检测结果，以确保食品的安全和可靠性。

希望本文能够为相关人员提供一定的参考和帮助，促进阪崎肠杆菌检测工作的规范和标准化。

食源性阪崎肠杆菌研究进展

儿阪崎肠杆菌感染的主要感染源】。
１阪崎肠杆菌的生物学特性
１１茵落培养特性．
阪崎肠杆菌属兼性厌氧菌，营养要求不高，在营养对能
利用ａ一葡萄糖苷酶水解ＸＧＣ，ａＬ释放糖苷配基５一溴～４一氯一吲哚，糖苷配基在氧存在时形成色素溴一氯一吲哚，该使菌落呈现特异性的蓝绿色的特性，ＴＡ培养基中加人５在Ｓ
环触碰可发现菌落极富弹性；一种是典型，该菌在肉汤培养基中生长呈团块或沉且
淀状，目前还不清楚菌落特征差别是否与其毒性有关。但
蛋白酶大豆琼脂培养基上２ ℃ 培养４～７，取黄色菌５８２ｈ挑落，ＡＩ０用ＰＥ生化鉴定试剂盒或ＶＩＥ生化鉴定系统进２ＴＫ行生化鉴定，同时进行氧化酶试验。
２２ＤＦ１Ｉ法：方法是在Ｆ该ＤＡ法基础上的改进，要是主
年来已经受到了研究者的广泛关注【。目前．关阪崎肠杆３）有
菌的污染来源还尚不清楚，研究认为婴儿配方奶粉是新生有
培养基在３ ℃ 过夜进行选择培养，挑取５个可疑菌落到胰６再
一
琼脂、平板、康凯琼脂、ＳＢ琼脂和伊红美蓝琼脂血麦ＴＡ、ＨＩ

食源性阪崎肠杆菌检测方法研究进展

食源性阪崎肠杆菌检测方法研究进展作者：邓丽萍邓访萍张琴来源：《食品安全导刊·下》2023年第11期摘要：阪崎肠杆菌可感染婴幼儿，引发脑膜炎、菌血症和坏死性小肠结肠炎。

因此，探究出快速、灵敏、高效的阪崎肠杆菌检测方法对于保障食品质量安全至关重要。

目前，阪崎肠杆菌的检测方法中比较常见的是分离鉴定法、分子生物学检测技术和免疫学检测法。

分离鉴定法易于操作、成本低，但检测周期长，无法满足对目标食品快速检测的需求；分子生物学检测技术是一种高灵敏度和特异性的检测手段，但是由于其对检测人员要求高，所需设备和试剂价格昂贵，目前多在实验室进行，不适用于现场检测；免疫学检测方法简单快捷，适用于现场快速检验，但容易受到其他杂菌的影响，敏感性较低。

本文综述了分离鉴定法、分子生物学检测技术、免疫学检测技术等多种阪崎肠杆菌的检测方法，结合参考文献就检测研究进展予以分析，以期为食品中阪崎肠杆菌的快速检测方法研究提供参考。

关键词：阪崎肠杆菌；检测方法；研究进展Research Progress in Detection Methods for Foodborne Enterobacter sakazakiiDENG Liping1，2，3， DENG Fangping4， ZHANG Qin1，2，3（1.Guangdong Food Quality Supervision and Inspection Station， Guangzhou 511442， China;2.Guangdong Food Industry Institute Limited Company， Guangzhou 511442， China;3.Guangdong Provincial Food Industry Public Laboratory， Guangzhou 511442， China;4.The First Hospital of Guangdong Pharmaceutical University， Guangzhou 510080， China）Abstract： Trace amounts of E. sakazakii can infect newborns and young children， causing meningitis， septicaemia and necrotising small bowel colitis， among others. Therefore， exploring a rapid， sensitive and efficient detection method for E. sakazakii is essential for ensuring food quality and safety. At present， conventional isolation and identification， molecular biology and immunological detection methods for E. sakazakii are more common. The separation and identification method is easy to operate and low cost， but the detection cycle is long， which can not meet the demand for rapid detection of target food. Molecular biotechnology is a highly sensitive and specific means of detection， but due to its high demand for test technicians， the required equipment and reagents are expensive， and is currently mostly carried out in the laboratory， is not suitable for on-site testing. The method of immunological determination is simple and fast， which is suitable for field rapid detection， but it is easy to be interfered with other miscellaneous bacteria and itssensitivity is not high enough. In this paper， separation and identification method， molecular biological detection techniques， immunological detection techniques and other detection methods of E. sakazakii were reviewed， and the research progress of detection was analyzed in combination with references， in order to provide reference for the rapid detection of E. sakazakii in food.Keywords： Enterobacter sakazakii; detection method; research progress阪崎腸杆菌（又称阪崎氏肠杆菌）是一种寄生于人和动物肠道内的条件致病菌，在自然界中分布广泛，具有一定的耐热性、耐干燥性、耐高渗环境性，可抵抗超高温瞬时灭菌。

肠肺轴重大突破：肠道菌群更成熟，儿童哮喘就低发热心肠日报

肠肺轴重⼤突破：肠道菌群更成熟，⼉童哮喘就低发热⼼肠⽇报今天是第1633期⽇报。

Nature⼦刊：农场环境促进婴⼉肠道菌群成熟，预防哮喘Nature Medicine[IF:36.13]①纳⼊欧洲PASTURE出⽣队列中720名城乡⼉童，分析2⽉龄和12⽉龄的粪便菌群，构建评估菌群年龄（EMA）的模型；② EMA分数代表菌群发育的成熟度，12⽉龄时的EMA与农场⽣活经历正相关、与6岁时患哮喘的风险负相关，EMA可解释19%的农场暴露对哮喘的预防作⽤；③菌群产⽣丁酸的能⼒部分介导了这种保护作⽤，⼉童哮喘与粪便丁酸⽔平、预测丁酸产量的细菌类群和产⽣丁酸的主要细菌酶（丁酰辅酶A:⼄酸辅酶A-转移酶）的基因含量相关。

Maturation of the gut microbiome during the first year of life contributes to the protective farmeffect on childhood asthma11-02, doi: 10.1038/s41591-020-1095-x【主编评语】在农场长⼤与对哮喘的保护作⽤有关，但背后的原因并不清楚。

NatureMedicine最新发表了来⾃欧洲多国的PASTURE出⽣队列的研究结果，表明在有着丰富微⽣物环境的农场中长⼤，对婴⼉出⽣后第⼀年的肠道菌群的成熟有积极影响，从⽽有助于预防⼉童哮喘。

菌群产⽣短链脂肪酸丁酸的能⼒（⽐如产丁酸的Roseburia和粪球菌属等的丰度），部分介导了这种保护性作⽤。

这些结果也再次提⽰了肺-肠轴的存在，肠道菌群可能通过特定代谢产物影响肺部健康。

（@mildbreeze）⼀氧化碳在宿主-菌群互作中的作⽤（综述）Chemical Reviews[IF:52.758]①宿主细胞通过⾎红素加氧酶2（HMOX2）或HMOX1产⽣CO；② CO可与可溶性鸟苷酸环化酶、细胞⾊素c氧化酶、离⼦通道等结合以激活多种信号通路；③肠道菌群可表达与HMOX类似的CO产⽣酶，通过代谢丙酮酸、槲⽪苷等产⽣CO；④ CO氧化可促进细菌的甲烷/⼄酸/氢⽓⽣成及硫酸盐还原等反应，外源性CO可导致细菌（如⼤肠杆菌）的能量转换、铁摄取及氨基酸代谢相关的转录变化；⑤肠道菌群可诱导宿主的HMOX1表达，增加结肠Treg/Th17的⽐例，以抑制结肠炎症。

奶粉中阪崎肠杆菌在检测及控制方面的研究进展

基础上，分析生化反应、黄色菌落产物以及对抗
较高的致死率，对早产婴儿和免疫低下的婴幼儿具有极大的威胁，近年来引起了人们的高度关注。研究者对Ｅａａａｉ．ｓｋｚｋｉ的研究涵盖了Ｅａａａｉｓｋｚｋｉ
ＣｏｌｇｅｏｆＦｏｃｅｅｏｕｈｅｔＵｎｉｒｉｙｌｅｏｄＳｉｎｃ，Ｓｔｗｓｖｅｓｔ，Ｃｈｏｑｉ０７１，Ｃｈｎａｎｇｎｇ４０５ｉ
ＡｂｔａｔＥｔｏａｔｒａａａｉｉａｃｓ— ｔｌａｔｉｍｏ，ｉｎｃｕｅｒｖｒｉｌｆａｉｕｙｔｆｎｓＴｉｐｐｒｓｃ：ｎｅｂｃｋｚｋａｅｆａｂｃｅｕｉｆｄｗｈｈｃｓｒｅｓｅａｌｎｒｉａｔ．ｈｓａｅｒｒｅｓｉｓａｒｎｏｃａａｉｅｂｔｊｏｎ
微生物，将其列为与单核细胞增生李斯特菌（ｉｅｉｏｏｙｏｅｅ）肉毒梭菌（ｌｓｉｉｍＬｓｒｍｎｃｔｇｎｓ、ｔａＣｏｔｄｕｒｂｔｌｕ）Ａ型毒素和Ｂ型毒素、ｏｕｉｍ的ｎ微小隐孢子虫（ｒｔｐｒｉｍｐｒｕ）有同等危害的微生物Ｃｙｏｏｄｕａｖｍ具ｐｓ
品安全与质量控制。
于丰宇等：粉中阪崎肠杆菌在检测及控制方面的研究进展奶
的分类学和生物化学性质、分离和鉴别方法、临床病因学和致病性、对抗生素的抗性、污染源等方面。随着研究的不断深入，人们意识到Ｅｓｋｚｋａａａｉｉ已经成为一个影响健康的新因素，尤其是婴幼Ｊｉ方奶粉中Ｅａａａｉ的污染事件，为ＬＥ￣ｓｋｚｋｉ