阪崎肠杆菌的测定
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讲解人:冷静
阪崎肠杆菌的概述
1961 ——英国2例产黄色素阴沟肠杆菌(阪崎肠杆菌) 致新生儿脑膜炎 1980 ——将产黄色素的阴沟肠杆菌重新分类命名为 阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii) 2002年,国际食品微生物学规格委员会(ICMSF) 将阪崎肠杆菌归类为“对特殊人群具有严重危害, 威胁生命或者产生器质性慢性后遗症、长期影响” 的微生物 2004年2月,WHO/FAO就婴儿配方奶粉含阪崎肠杆 菌课题共同召开专家会议,做了初步的危险评估, 将阪崎肠杆菌归类于“A”类微生物,与严重的沙门 氏菌相提并论 2004年3月,CAC食品卫生委员会(CCFH)同意尽 快进行修订婴幼儿食品卫生操作国际标准,包括阪 崎肠杆菌及相关微生物的微生物学标准
生化鉴定(API20E)
步骤一
步骤二
步骤三
生化鉴定(API20E)
阪崎肠杆菌的危害
婴儿:
1. 脑膜炎
2. 坏死性小肠结肠炎
3. 菌血症 • 严重的神经系统后遗症 成人:局部感染、菌血症、术后骨髓炎
阪崎肠杆菌的生物学特征
1、G-,周身鞭毛,兼性厌氧 2、肠杆菌科克罗诺杆菌属 3、在6℃~47℃范围内均可生长,最适35℃~37℃ 4、平均繁殖时间在23℃为40min,10℃为4.98h, 冷藏条件下可以生长 5、在TSA培养基上产生黄色色素 6、产生α-葡萄糖苷酶,其它肠杆菌均不产生; 7、较强的耐干燥性,耐高渗透压, “干燥逆境抗 性”比其他,大多数乳品中分离得到的肠杆菌更 加耐热,但标准的高温短时巴氏杀菌可消灭
阪崎肠杆菌的分布
1.环境 原油、切削液、苍蝇、食品加工厂(奶制品、谷类、 巧克力、马铃薯粉),医院(空气、听诊器、临床 食品)、家庭、温泉、鼠、沉积物、沼泽地、土壤 2.食品及相关用品 啤酒杯、干酪、婴儿配方奶粉和豆粉、婴儿配方粉 冲调用品(搅拌器、勺子、甁刷),普通奶粉、碎
牛肉、肉类、香肠、发酵面包、豆腐、蔬菜、水 (管道、生物膜)、调味品
改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨加万古霉素增菌液(mLST-Vm), Vm有效抑制G+,同时能在高温下长的更好。而较高温度 可以抑制其他细菌生长 mLST含盐高,利于筛选高渗透压的阪崎 因前增菌优化,仅使用1mL前增菌液即可 注: mLST-Vm,灭菌后使用前加Vm,放置不超24h 要求44℃培养,温度波动<0.5℃
阪崎肠杆菌检验——平板分离
操作:各取培养物一环,接种显色平板,培养24h±2h 培养基作用 显色培养基 •显色培养基利用阪崎特异性α-葡萄糖苷酶原理,分解底物 形成蓝绿色菌落,选择性极佳
阪崎显色培养基
阪崎肠杆菌检验——平板确认
操作: 挑取1~5个典型 或疑似菌落,划 线于胰蛋白胨大 豆琼脂(TSA) 25℃±1℃培养 在TSA培养基上 产生黄色色素
阪 崎 检 测 步 骤
1前增菌 2选择性增菌 3平板分离 4平板确认 5 生化鉴定
操作:100g样品+900mL增菌液,培养18h±2h GB使用的增菌液为BPW 主要作用:营养丰富,更利于食品检验具有缓冲体系
阪崎肠杆菌检验——前增菌
未混匀
混合均匀
阪崎肠杆菌检验——选择性增菌增菌
操作:1mL样液+10mL增菌液, 44℃±0.5℃培养24h±2h 培养基的作用
易感人群
• 阪崎肠杆菌可引起各年龄段的感染,但从
报道病例的年龄分布来看,高危人群主要是 婴儿(即<1岁的儿童),新生儿(≤28天)、 尤其是早产儿、低出生体重或免疫力下的婴 儿,发生严重感染的危险性最高。 • 母亲HIV阳性的婴儿
主要感染渠道
虽然现在还不能确定阪
崎肠杆菌的宿主和传播模 型,但在多起新生儿阪崎 肠杆菌感染事件的调查中 发现婴幼儿配方粉是主要 的感染渠道
婴儿配方粉中的污染状况
公共卫生关注的婴儿配方粉中阪崎肠杆菌的
来源包括以下2种情况: 内在污染—二次污染 如:加工环境中微生物的存在;加工装置Fra Baidu bibliotek 表面微生物的存在,热处理后,与干燥基粉 混合的加入成分中存在的微生物。 外源性污染—配方粉中调制环境和调制器皿 受阪崎污染的配方粉或调制配方在较高温度 下存放,食用前不加热或加热不彻底,喂食 时间较长等都可导致阪崎有机会生长繁殖, 增加患病的危险性。
阪崎肠杆菌的概述
1961 ——英国2例产黄色素阴沟肠杆菌(阪崎肠杆菌) 致新生儿脑膜炎 1980 ——将产黄色素的阴沟肠杆菌重新分类命名为 阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii) 2002年,国际食品微生物学规格委员会(ICMSF) 将阪崎肠杆菌归类为“对特殊人群具有严重危害, 威胁生命或者产生器质性慢性后遗症、长期影响” 的微生物 2004年2月,WHO/FAO就婴儿配方奶粉含阪崎肠杆 菌课题共同召开专家会议,做了初步的危险评估, 将阪崎肠杆菌归类于“A”类微生物,与严重的沙门 氏菌相提并论 2004年3月,CAC食品卫生委员会(CCFH)同意尽 快进行修订婴幼儿食品卫生操作国际标准,包括阪 崎肠杆菌及相关微生物的微生物学标准
生化鉴定(API20E)
步骤一
步骤二
步骤三
生化鉴定(API20E)
阪崎肠杆菌的危害
婴儿:
1. 脑膜炎
2. 坏死性小肠结肠炎
3. 菌血症 • 严重的神经系统后遗症 成人:局部感染、菌血症、术后骨髓炎
阪崎肠杆菌的生物学特征
1、G-,周身鞭毛,兼性厌氧 2、肠杆菌科克罗诺杆菌属 3、在6℃~47℃范围内均可生长,最适35℃~37℃ 4、平均繁殖时间在23℃为40min,10℃为4.98h, 冷藏条件下可以生长 5、在TSA培养基上产生黄色色素 6、产生α-葡萄糖苷酶,其它肠杆菌均不产生; 7、较强的耐干燥性,耐高渗透压, “干燥逆境抗 性”比其他,大多数乳品中分离得到的肠杆菌更 加耐热,但标准的高温短时巴氏杀菌可消灭
阪崎肠杆菌的分布
1.环境 原油、切削液、苍蝇、食品加工厂(奶制品、谷类、 巧克力、马铃薯粉),医院(空气、听诊器、临床 食品)、家庭、温泉、鼠、沉积物、沼泽地、土壤 2.食品及相关用品 啤酒杯、干酪、婴儿配方奶粉和豆粉、婴儿配方粉 冲调用品(搅拌器、勺子、甁刷),普通奶粉、碎
牛肉、肉类、香肠、发酵面包、豆腐、蔬菜、水 (管道、生物膜)、调味品
改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨加万古霉素增菌液(mLST-Vm), Vm有效抑制G+,同时能在高温下长的更好。而较高温度 可以抑制其他细菌生长 mLST含盐高,利于筛选高渗透压的阪崎 因前增菌优化,仅使用1mL前增菌液即可 注: mLST-Vm,灭菌后使用前加Vm,放置不超24h 要求44℃培养,温度波动<0.5℃
阪崎肠杆菌检验——平板分离
操作:各取培养物一环,接种显色平板,培养24h±2h 培养基作用 显色培养基 •显色培养基利用阪崎特异性α-葡萄糖苷酶原理,分解底物 形成蓝绿色菌落,选择性极佳
阪崎显色培养基
阪崎肠杆菌检验——平板确认
操作: 挑取1~5个典型 或疑似菌落,划 线于胰蛋白胨大 豆琼脂(TSA) 25℃±1℃培养 在TSA培养基上 产生黄色色素
阪 崎 检 测 步 骤
1前增菌 2选择性增菌 3平板分离 4平板确认 5 生化鉴定
操作:100g样品+900mL增菌液,培养18h±2h GB使用的增菌液为BPW 主要作用:营养丰富,更利于食品检验具有缓冲体系
阪崎肠杆菌检验——前增菌
未混匀
混合均匀
阪崎肠杆菌检验——选择性增菌增菌
操作:1mL样液+10mL增菌液, 44℃±0.5℃培养24h±2h 培养基的作用
易感人群
• 阪崎肠杆菌可引起各年龄段的感染,但从
报道病例的年龄分布来看,高危人群主要是 婴儿(即<1岁的儿童),新生儿(≤28天)、 尤其是早产儿、低出生体重或免疫力下的婴 儿,发生严重感染的危险性最高。 • 母亲HIV阳性的婴儿
主要感染渠道
虽然现在还不能确定阪
崎肠杆菌的宿主和传播模 型,但在多起新生儿阪崎 肠杆菌感染事件的调查中 发现婴幼儿配方粉是主要 的感染渠道
婴儿配方粉中的污染状况
公共卫生关注的婴儿配方粉中阪崎肠杆菌的
来源包括以下2种情况: 内在污染—二次污染 如:加工环境中微生物的存在;加工装置Fra Baidu bibliotek 表面微生物的存在,热处理后,与干燥基粉 混合的加入成分中存在的微生物。 外源性污染—配方粉中调制环境和调制器皿 受阪崎污染的配方粉或调制配方在较高温度 下存放,食用前不加热或加热不彻底,喂食 时间较长等都可导致阪崎有机会生长繁殖, 增加患病的危险性。