阪崎肠杆菌污染途径
阪崎肠杆菌污染婴幼儿食品流行病学特征研究进展
阪崎肠杆菌污染婴幼儿食品流行病学特征研究进展
李秀桂
【期刊名称】《大众科技》
【年(卷),期】2009(0)9
【摘要】阪崎肠杆菌主要是通过污染婴幼儿配方食品引起婴幼儿感染的食源性病原病,能导致严重的新生儿脑膜炎、菌血症和小肠结肠炎,死亡率20%~50%以上,受到社会广泛关注.文章从阪崎肠杆菌的流行病学特征研究发展近况进行综述,为生产企业、公共卫生、临床有关人员予与借鉴和参考.
【总页数】3页(P137-139)
【作者】李秀桂
【作者单位】广西壮族自治区疾病预防控制中心
【正文语种】中文
【中图分类】R18
【相关文献】
1.婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌污染防控及检验技术的研究进展 [J], 李艳娟;李朝旭;房新平;李书国
2.不能让人放心的婴幼儿配方食品——阪崎肠杆菌污染食品问题 [J],
3.不能让人放心的婴幼儿配方食品——阪崎肠杆菌污染食品问题 [J],
4.食用受三聚氰胺污染婴幼儿奶粉致婴幼儿泌尿系统结石病例的流行病学特征 [J], 李芳
5.北京市售国产婴幼儿配方奶粉及婴幼儿食品带染阪崎肠杆菌调查 [J], 陆峥;王丽丽;王迪;陈倩
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阪崎肠杆菌检验技术
生态分类
一、阪崎肠杆菌概况
阪崎肠杆菌属肠杆菌科，是人和动物肠道中寄生的一种革 兰阴性无芽胞杆菌。是肠道正常菌群的一种，在一定条件 下可引起人和动物致病。1980年以前命名为黄色阴沟肠 杆菌，1980年更名为阪崎肠杆菌。
一、阪崎肠杆菌概况
生态分布 家庭、温泉、鼠、苍蝇、植物根围、沉积物，沼泽地、土壤、食品等均有检出阪 崎肠杆菌的报导。有报导推测，昆虫可能是阪崎肠杆菌的环境宿主。 婴儿配方粉的污染： 内在污染：--由加工环境中微生物的存在；加工装置内表面微生物的存在；热处理 后，与干燥基粉混合的加入成分中存在的微生物造成。 外源性污染：--受阪崎肠杆菌污染的配方粉或调制好的配方奶在较高温度下存放， 食用前不加热，或加热不彻底，喂食时间较长等都可导致阪崎肠杆菌有机会生长繁 殖，增加患病的危险性。
三、阪崎肠杆菌菌定量检测
1g(mL)×3
取样量 10g(mL)×3
100g(mL)×3
BPW 1：10 稀释
mLST-Vm
DFI、TSA
生化鉴定
报告 （MPN值）
操作规程
前增菌 选择性增菌 显色培养基 验证试验 结果报告
三、阪崎肠杆菌菌定量检测
各100ml（g)
各10ml（g)
各900ml（g) 各移1ml
900 ml BPW
样品
100mL（g） 溶解 预热
44℃
36±1℃ 18h±2h
选择性增菌 44±0.5℃
24h±2h
10mL mLST-Vm肉汤
挑取蓝绿色菌落
操作规程 API20E鉴定系统
二、阪崎肠杆菌菌定性检测
TSA平板上直接挑取黄色菌 落进行鉴定
结果鉴定
二、阪崎肠杆菌菌定性检测
阪崎杆菌的控制研究-贾超
阪崎肠杆菌的控制研究引言1958 年，人们在一例新生儿脑膜炎病例中第一次暗示了阪崎肠杆菌( Enterobacter sakazakii) 的存在，此后大约有70 例阪崎肠杆菌感染报告[1]。
事实上，阪崎肠杆菌在所有国家都远没有被充分报告。
阪崎肠杆菌可引起所有年龄组人群的疾病，但人们普遍认为婴儿受感染的危险最大。
而且，阪崎肠杆菌感染能在新生阶段以后，引起从前健康的婴儿染病[2]。
感染在医院和门诊部都曾发生过。
2004 年，分别发生在新西兰和法国[3]的两次阪崎肠杆菌爆发，被人们在微生物学上证明与婴幼儿配方奶粉有联系。
法国的爆发有9 例，造成2 名婴儿死亡。
由于现有的信息缺乏，尚不能确定每一次爆发中患者接触的阪崎肠杆菌数量，则不能画出阪崎肠杆菌剂量反应曲线图[4]。
然而，我们可以确定，配方奶粉中存在少量细菌就会引发疾病。
如果还原乳液中细菌有繁殖的条件，如放置在不适宜温度下时间过长，则这种危险会迅速增加。
本文综述了阪崎肠杆菌的生物特性、食物中阪崎肠杆菌的污染状况，以及如何对婴儿配方粉进行污染并采取的一些控制措施。
一、阪崎杆菌的介绍阪崎杆菌（E. sakazakii）属于肠杆菌科，起初E. sakazakii被认为是肠杆菌的生物变型菌, 并被命名为“黄色阴沟肠杆菌”,直到1980年, Farmer[5]与其合作者在E. sakazakii和E. cloacae 的脱氧核糖核酸(DNA) 杂交的基础上, 分析生化反应、黄色菌落产物以及对抗生素敏感性的基础上, 建议将该菌更名为在E. sakazakii, 此名称被广泛地采纳, 并沿用至今。
[6]E. sakazakii是一种兼性厌氧的条件致病菌。
能引起严重的新生儿脑膜炎、败血症及坏死性小肠结肠炎等疾病，并伴随神经系统后遗症，E. sakazakii作为一种条件性致病菌,具有较高的致死率，死亡率高达50%。
[7]二、阪崎肠杆菌微生物特性1. 形态特征：阪崎肠杆菌为革兰氏阴性杆菌，形态粗而短、周身有菌毛、无芽胞, 属于肠杆菌科肠杆菌属的一种条件致病菌。
食源性阪崎肠杆菌病诊断要点
食源性阪崎肠杆菌病诊断要点1 流行病学特点1.1 发病季节：无季节性，全年均可发生。
1.2 发病原因：经口食入被阪崎肠杆菌污染的食物而导致的食源性疾病。
婴儿配方中极微量的阪崎肠杆菌污染就有可能导致感染的发生。
受阪崎肠杆菌污染的调制配方在较高温度下存放，食用前不加热，或加热不彻底，喂食时间较长等都可导致阪崎肠杆菌有机会生长繁殖，增加患病的危险性。
1.3 致病食品：主要为婴儿配方粉。
另外，配方粉冲调、放置和喂食过程中不卫生的调制器皿和环境、配方粉冲调过程中添加的其他成分（如淀粉或糖）或食用其他食物也可能成为一种其他类型的污染源。
1.4 易感人群：阪崎肠杆菌可引起各年龄段的感染，但高危人群主要是婴儿（0～12 月龄）和新生儿（0d～28 d），尤其是早产儿、低出生体重或免疫力低下的婴儿，发生严重感染的危险性最高。
2 临床表现2.1 潜伏期：不明确。
2.2 主要症状：感染主要引起婴儿脑膜炎、败血症和坏死性小肠结肠炎。
2.2.1 脑膜炎：早期症状主要是吮奶无力或不吃奶，体温不稳（多数病儿有发热，少数全身发凉，体温不升），呼吸窘迫，黄疸，呼吸暂停，中枢神经系统体征［如嗜睡，惊厥（特别是局灶性），呕吐，激惹］更特异性地提示脑膜炎。
25%的病例有囟门的隆起或饱满，仅15%的病例有颈项强直，也可发现颅神经异常（特别是涉及第3，6，7 对颅神经)。
该菌引起的脑膜炎常引起脑梗塞、脑脓肿、囊肿形成和脑室炎等并发症，并且可引起严重神经系统后遗症，包括脑水肿、四肢瘫痪和发育障碍等。
2.2.2 败血症：早期体征通常是非典型的和轻微的。
自发性活动减少，吸吮无力，呼吸暂停，心动过缓和体温不稳（过高或过低）最常见。
其他症状和体征包括呼吸窘迫，神经系统症状（如惊厥和烦躁不安），黄疸，呕吐，腹泻和腹胀。
2.2.3 坏死性小肠结肠炎：婴儿可表现为腹胀的肠梗阻，胃胆汁性残留(在喂养后)可逐渐发生呕吐胆汁，或肉眼或镜下血便，败血症可表现为嗜睡，体温不稳，呼吸暂停发作的增多和代谢性酸中毒。
冲泡配方奶粉必须要70度？为了杀...
冲泡配方奶粉必须要70度？为了杀...
冲泡配方奶粉必须要70度？
在婴幼儿配方奶粉罐上，都建议妈妈们用40℃的水冲泡奶粉，但是最近有报道称，在给宝宝冲泡奶粉时一定要用70℃以上的热水才能消毒，那么到底是用40℃的温水还是用70℃的热水冲泡奶粉呢？
冲泡奶粉为什么要用70℃的水？
1980年，日本微生物学家坂崎利发现了坂崎肠杆菌，会引起婴儿菌血症或者脑膜炎，宝宝一旦感染，将出现40%～80%的死亡率。
而坂崎肠杆菌存在与配方奶粉中。
配方奶被坂崎肠杆菌污染主要有两个来源：
一是奶粉本身就含有少量坂崎肠杆菌；二是通过周围的环境和被细菌污染的器具或者双手进入配方奶所致。
如果配方奶中含有了少量坂崎肠杆菌，在冲调过程中又使用了40摄氏度左右的温水，冲调后又没有立即给婴儿喝，而是放置了一段时间。
那么配方奶中的少量坂崎肠杆菌就会趁此机会大量繁殖。
当婴儿喝了这样的配方奶，就很可能会感染坂崎肠杆菌。
所以世界卫生组织建议冲泡配方奶粉时，采用70℃的热水，能有效消灭坂崎肠杆菌。
而且据称，70℃的热水只会降低奶粉中的维生素C，对其他营养物质并不会破坏。
冲泡奶粉必须要用70℃的热水吗？
其实也不然，因为人并不是一接触到细菌就会立刻被感染，而且要接触到一定量后才会感染。
所以父母如果在冲调奶粉的过程中，注意清洗双手，对器具进行高温消毒，同时注意先将水烧开再密闭冷却到合适的温度，并且冲调好后尽快给宝宝喝，那么就可以在很大程度上保证配方奶的安全。
但是目前的技术还无法保证配方奶粉中绝对不含坂崎肠杆菌，而且其他环境也会感染上坂崎肠杆菌，所以父母最好还是用70℃的热水冲泡，等温度降低后再给宝宝食用。
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各种食源性致病菌的危害
1、阪崎肠杆菌：阪崎肠杆菌是奶粉（乳）制品中新发现的一种致病菌。
研究表明婴幼儿配方奶粉是当前发现致婴幼儿、早产儿脑膜炎、败血症和坏死性结肠炎的主要感染渠道,在某些情况下，由阪崎肠杆菌引发疾病而导致的死亡率可达40％～80%。
2、沙门氏菌：我国食源性疾病中细菌性食物中毒病例最为常见，其中由沙门氏菌引起的中毒病例占70％-80％，而以肉、蛋、奶等畜产品被沙门氏菌污染所引起的中毒可占90％以上。
该菌对人致病，引起肠伤寒，肠胃炎和败血症，也可能传染人类以外的其他多种动物。
因此，目前对食品质量安全监控进行CMA（中国计量认证/认可）认证检测时，沙门氏菌的检测已成为了必检的卫生指标测定项目之一。
3、志贺氏菌：志贺氏菌属即通称的痢疾杆菌，细菌性痢疾是最常见的肠道传染病,夏秋两季患者最多。
传染源主要为病人和带菌者,通过污染了痢疾杆菌的食物、饮水等经口感染。
志贺氏菌所致菌痢的病情较重，志贺氏菌侵入肠粘膜组织并释放内毒素引起症状。
症状为剧烈腹痛、腹泻（水样便，可带血和粘液）、发热、里急后重显著。
严重者出现痉挛和休克。
4、金黄色葡萄球菌：金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。
近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。
金黄色葡萄球菌引起的中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。
此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。
5、副溶血弧菌：副溶血弧菌对人和动物均有较强的毒力，其致病物质溶血素、溶血毒，具有溶血活性、肠毒素和致死作用。
副溶血性弧菌食物中毒也称嗜盐菌食物中毒，是进食含有该菌的食物所致，主要来自海产品或盐腌渍品，常见者为蟹类、乌贼、海蜇、鱼、黄泥螺等，其次为蛋品、肉类或蔬菜。
临床上以急性起病、腹痛、呕吐、腹泻及水样便为主要症状。
主要病理变化为空肠及回肠有轻度糜烂，胃粘膜炎、内脏(肝、脾、肺)淤血等。
奶粉中发现阪崎肠杆菌，它有何风险？
奶粉中发现阪崎肠杆菌，它有何风险？昨天（2016年2月2日），国家食品药品监督管理总局发布婴幼儿配方乳粉监督抽检通告，其中有3批次奶粉因阪崎肠杆菌不符合国家标准、存在食品安全风险。
阪崎肠杆菌是什么东西？是怎么进到奶粉里边的？有什么安全风险？1.阪崎肠杆菌是什么？阪崎肠杆菌（Cronobacter ，又名Enterobacter sakazakii），是一种革兰氏阴性菌，存在于自然环境及食物中的一组细菌。
它的发现较晚，直到1980年才被发现并命名为坂崎肠杆菌，以纪念日本微生物学家坂崎利一在微生物分类学上所作的贡献。
阪崎肠杆菌有一个显著的特点：它不怕干，即使在极干燥的环境中也能生存！比如，婴儿配方奶粉、奶粉、茶叶、淀粉中，虽然水分基本都没了，它们也能顽强生存下去。
2.它是怎么进到奶粉里边的呢？配方奶粉被坂崎肠杆菌污染主要有两个来源：一是奶粉本身就含有少量坂崎肠杆菌；二是通过周围的环境和被细菌污染的器具或者双手进入配方奶。
实际上，婴儿配方奶粉在生产过程中是不可能完全无菌的，目前的生产工艺没有办法杀灭配方奶粉中所有的细菌。
所以，奶粉本身可能含有少量阪崎肠杆菌，但是，量一般很少。
另外，阪崎肠杆菌也可能通过周围的环境进入配方奶。
奶粉中检出阪崎肠杆菌超标，说明它的生产工艺可能存在安全隐患，作为监管机构应该进行处理。
3.它有什么安全风险？阪崎氏肠杆菌可令各年龄组别的人受入侵性感染，但新生儿(出生28天或以下)和不足2个月的婴儿，尤其是早产、体重不足2.5公斤和免疫力较弱的婴儿的风险最高。
新生儿(尤其是早产婴儿)胃的酸性较成年人为低，这可能是阪崎氏肠杆菌可在婴儿体内生存的一个主要原因。
坂崎肠杆菌感染可以引起婴儿菌血症或者脑膜炎。
婴儿一旦感染这种病菌，死亡率会非常高，有数据显示在40%-80%之间。
不过，坂崎肠杆菌感染发病率并不高，根据世界卫生组织数据显示，大约每10万名婴儿才有一例。
4.如何保护自己的孩子免受包括阪崎肠杆菌在内的细菌感染？1)母乳喂养。
致病菌
• 分离、鉴定 • 同5.2，5.3
• • • • •
结果与报告 食品伙伴网 GB 4789.40—2010 5 综合菌落形态、生化特征，根据证实为阪 崎肠杆菌的阳性管数，查MPN 检索表，报 告每100 g（mL） • 样品中阪崎肠杆菌的MPN 值（见附录Ｂ中 表B.1）。
• • • • • • • •
氧化酶试剂 A.4.1 成分 N,N,N',N'-四甲基对苯二胺盐酸盐 1.0 g 蒸馏水 100 mL A.4.2 制法 少量新鲜配制，于冰箱内避光保存，在 7 d 之内使用。 A.4.3 试验方法 用玻璃棒或一次性接种针挑取单个特征性菌落，涂布在氧 化酶试剂湿润的滤纸平板上。如果滤纸在 • 10 s 之内未变为紫红色、紫色或深蓝色，则为氧化酶试验 阴性，否则即为氧化酶实验阳性。 • 注：实验中切勿使用镍/铬材料。
• 结果与报告 • 综合菌落形态和生化特征，报告每100 g （mL）样品中检出或未检出阪崎肠杆菌。
第二法 阪崎肠杆菌的计数
• 样品的稀释 • 7.1.1 固体和半固体样品：无菌称取样品100 g、10 g、1 g 各三份，加入已预热至44 ℃分别盛有900 mL、 • 90 mL、9 mL BPW 中，轻轻振摇使充分溶解，制成1:10 样品匀液，置36 ℃±1 ℃培养18 h±2 h。分别 • 移取1 mL 转种于10 mL mLST-Vm 肉汤，44 ℃±0.5 ℃ 培养24 h±2 h。 • 7.1.2 液体样品：以无菌吸管分别取样品100 mL、10 mL、 1 mL 各三份，加入已预热至44 ℃分别盛 • 有900 mL、90 mL、9 mL BPW 中，轻轻振摇使充分混匀， 制成1:10 样品匀液，置36 ℃±1 ℃培养18h±2h。 • 分别移取1 mL 转种于10 mL mLST-Vm 肉汤，44 ℃±0.5 ℃培养24 h±2 h。
育儿知识：谈婴儿配方食品中的阪崎肠杆菌
育儿知识：谈婴儿配方食品中的阪崎肠杆菌阪崎肠杆菌是奶粉（乳）制品中新发现的一种致病菌，对婴儿健康有一定的危害，应引起高度重视。
幼儿食品一直以来都为大众所关注，2011年4月1日起实施的《食品安全国家标准婴儿配方食品》（GB 10765-2010）更是引起了很多家长的注意。
据悉，该标准代替GB 10765-1997《婴儿配方乳粉Ⅰ》、10766-1997《婴儿配方乳粉Ⅱ、Ⅲ》、GB 10767-1997《婴幼儿配方粉及婴幼儿补充谷粉通用技术条件》，最突出的变化和特征是首次将阪崎肠杆菌纳入了检测范围。
那么，很多家长不禁要问阪崎肠杆菌为何物？它对婴幼儿的健康有危害吗？《食品安全国家标准婴儿配方食品》为何要将阪崎肠杆菌纳入检测范围？阪崎肠杆菌对婴儿的危害阪崎肠杆菌是奶粉（乳）制品中新发现的一种致病菌。
由其引发的婴儿、早产儿脑膜炎、败血症及坏死性结肠炎散发和暴发的病例已在全球相继出现。
多份研究报告表明：婴儿配方奶粉是当前发现致婴儿、早产儿脑膜炎、败血症和坏死性结肠炎的主要感染渠道，由阪崎肠杆菌引发疾病而导致的死亡率高达40％～80%。
阪崎肠杆菌已引起多国相关部门的重视。
阪崎肠杆菌对新出生婴儿，尤其是发育不良、免疫功能差的婴幼儿最具杀伤力。
来自美国（FDA）的监测表明，在美国出生体重偏低的新生儿中，阪崎肠杆菌感染率为8.7/100 000；而1岁以下婴儿阪崎肠杆菌感染率为1/100 000，感染死亡率为20%～50%。
1961年～2003年全球阪崎肠杆菌有案可稽的48起婴儿感染事件中，有25起是新生儿感染。
从历史记录来看，阪崎肠杆菌可感染各年龄组人群，其中，受感染的高危人群为1岁以内的婴儿，最危险人群为新生儿，特别是早产儿、低出生体重儿及免疫力低下的婴儿，发展中国家的低出生体重儿较发达国家的更容易感染。
而奶粉中的阪崎肠杆菌和沙门氏菌等是导致婴幼儿感染、疾病和死亡的主要原因。
历史污染记录1961年，英国首次报道2例由阪崎肠杆菌引起的脑膜炎病例，之后，美国、希腊、荷兰、冰岛、加拿大、比利时等国家相继报道了新生儿阪崎肠杆菌感染事件。
坂崎肠杆菌
环境抗性
• 阪崎肠杆菌具有耐热及耐寒性，在外界环境中比其他肠道 杆菌生存率强，培养最佳温度25—36℃，在6～45℃下都 能生长，某些菌株可在47℃下生长。阪崎肠杆菌比其他肠 杆菌耐高温，LEHNER研究发现阪崎肠杆菌在婴儿配方奶粉 中60℃存活2.5min，并且72℃仍能存活。BREELLWER等观 察阪崎肠杆菌在58℃下能持续0.39～0.60min不死。 • 由于阪崎肠杆菌细胞内含有大量的海藻糖酶，累积有大量 的海藻糖，使得阪崎肠杆菌比沙门菌和其他肠杆菌更耐受 渗透压和干燥。 • 阪崎肠杆菌耐酸性并对清洁剂和杀菌剂有较强抵抗力。 LEH—NER的实验表明，阪崎肠杆菌能在pH0.9～2下存活( 胃部的酸性环境)，可能与阪崎肠杆菌周身菌毛结构有关 ，该菌毛结构易使细菌形成共生集合体，也易粘附在各种 物体表面形成一层生物保护膜，对清洁剂和杀菌剂具有较 强的抵抗力。
增殖特性
• 所有的阪崎肠杆菌都能在胰蛋白酶大豆琼脂上 36℃快速生长，24小时后形成直径2～3mm的菌落 ；25℃生长24h后形成直径1～1．5mm的菌落， 48小时后形成直径2～3mm的菌落。 • 坂崎肠杆菌在25℃放置10小时可增加30000倍，即 使婴儿配方粉中只有极微量的污染，阪崎肠杆菌 能在婴儿配方粉中也可长期存活，在配方粉食用 前的冲调期和储藏期该菌可能会大量繁殖。
阪崎肠杆菌是人和动物肠道内寄生的一种革兰阴 性无芽孢杆菌，属肠杆菌科肠杆菌属，是肠道正 常菌丛中的一种，在一定条件下可引起人和动物 致病。在1980年之前一直被称为黄色阴沟肠杆菌
。
阪崎肠杆菌兼性厌氧，营养要求不高，能耐受一 定程度的渗透压和干燥，能在营养琼脂、血平板 、麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂、脱氧胆酸琼脂等 多种培养基上生长繁殖。
阪崎肠杆菌
目前，微生 物学家尚不 清楚阪崎肠 杆菌的污染 来源，但许 多病例报告 表明婴儿配 方粉是目前 发现的主要 感染渠道。
阪崎肠 杆菌是 乳制品 中近几 年新发 现的一 种致病 菌。
阪崎肠杆菌
阪崎肠杆菌在自然界分布广泛，繁殖迅速，但不耐热， 可通过巴斯德消毒法杀灭。阪崎肠杆菌属条件致病菌， 在一般情况下，不对人体健康产生危害，但对于免疫 力低下者和婴幼儿、新生儿，尤其是早产儿、低体重 儿可以致病。感染来源主要是受阪崎肠杆菌污染的奶 粉，人与人之间无传染性。
培养基和试剂
1、缓冲蛋白胨水BPW（略） 2、改良月桂基硫酸盐以蛋白胨肉汤-万古霉素 （mlST-Vm）
• 成分和配置方法详见GB/T 4789.40-2010 附录A2。
加入万古霉素的目的是抑制革兰氏阳性菌等杂 菌的生长。
注意：新鲜配置的mLST-Vm应该在24h内使用， 万古霉素溶液可在在0 ℃～5 ℃保存15 天。
注意：要避光4℃保存。
阪崎肠杆菌显色培养基DFI
微生物
菌落颜色
• 阪崎肠杆菌 • 大肠杆菌 • 金黄色葡萄球菌
蓝绿色 无色菌落 被抑制不生长
培养基和试剂
• 4 、胰蛋白胨大豆琼脂（trypticase soy agar， TSA）：见附录A 中A.3。
• 5 、生化鉴定试剂盒。 • 6、 氧化酶试剂：见附录A 中A.4。 • 7、 L-赖氨酸脱羧酶培养基：见附录A 中A.5。 • 8 、L-鸟氨酸脱羧酶培养基：见附录A 中A.6。 • 9 、L-精氨酸双水解酶培养基：见附录A 中A.7。 • 10、 糖类发酵培养基：见附录A 中A.8。 • 11 、西蒙氏柠檬酸盐培养基：见附录A 中A.9。
阪崎肠杆菌的生理生化特征 报》 2006年06期 《阪 崎肠杆菌的生物学特性及 其检测技术》
阪崎肠杆菌如何预防
阪崎肠杆菌如何预防阪崎肠杆菌（Escherichia coli O157:H7）是一种引起食物中毒的细菌，可以导致严重的胃肠道疾病。
为了预防阪崎肠杆菌引起的食物中毒，我们需要采取一系列的预防措施。
本文将介绍如何预防阪崎肠杆菌的传播和食物中毒的发生。
了解阪崎肠杆菌阪崎肠杆菌是一种常见的细菌，存在于动物的肠道中，尤其是在牛的肠道中。
阪崎肠杆菌传播主要通过食物和水源感染。
当食物或水受到污染后，细菌可以生长繁殖，如果人们食用这些污染食物或饮用污染水源，就可能感染阪崎肠杆菌。
因此，了解这种细菌的特点和感染途径对于预防阪崎肠杆菌感染至关重要。
预防措施：1. 保持良好的卫生习惯良好的卫生习惯是预防阪崎肠杆菌感染的基础。
包括保持手部卫生、定期洗手，并使用肥皂和温水洗手至少20秒。
特别是在接触动物、处理生食或用餐前后，务必洗手。
此外，定期清洗和消毒厨房及餐具也是必要的。
2. 食品安全控制在食品方面，确保食品安全是预防阪崎肠杆菌感染的关键。
以下是一些常见的食品安全措施：•生食处理：避免直接接触生肉、生蔬菜和未煮熟的食物。
在食用之前，确保食物彻底煮熟，特别是肉类和禽类产品。
避免食用生肉、生蔬菜和生鱼片等。
•温度控制：食品的储存和烹饪温度是预防细菌感染的重要因素。
冷藏食品应储存在零下5摄氏度以下，烹饪食品应达到适当的温度，通常为摄氏75摄氏度以上。
确保食物的温度适宜，可以有效地杀死阪崎肠杆菌。
•使用安全水源：饮用水和食物加工过程中使用的水源必须是安全的。
确保饮用水经过适当处理或来自可靠的供水系统，并确保使用的水用于清洗食物和餐具是安全的。
3. 防止交叉污染交叉污染是指细菌从一个食物或表面传播到另一个食物或表面的过程。
为了预防阪崎肠杆菌的交叉感染，我们可以采取以下措施：•使用专用切割板：使用专用切割板来切割不同类型食物，特别是生肉和生食。
避免将同一个切割板用于处理生肉和其他食物。
•分开存放食材：食材在储存时要分开存放，避免不同食物之间的直接接触。
【微生物】食品中常见的19种微生物污染、热处理和杀菌原理
【微生物】食品中常见的19种微生物污染、热处理和杀菌原理食源性微生物是影响食品安全的第一大危害，也是全球性的威胁。
以下总结了食品中常见的19种微生物污染，供大家参考。
1、大肠菌群大肠菌群，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌。
大肠菌群都是直接或间接地来自人和温血动物的粪便。
一般食品中大肠菌群超标，表示食品受动温血动物的粪便污染，其中典型大肠杆菌为粪便近期污染，其他菌属则可能为粪便的陈旧污染。
人吃了大肠菌群超标的食物可能会导致：肠道传染病、食物中毒等。
2、霉菌霉菌，是丝状真菌的俗称，意即'发霉的真菌'，它们往往能形成分枝繁茂的菌丝体，但又不像蘑菇那样产生大型的子实体。
在潮湿温暖的地方，很多物品上长出一些肉眼可见的绒毛状、絮状或蛛网状的菌落，那就是霉菌。
霉菌在我们的生活中无处不在，它比较青睐于温暖潮湿的环境，一有合适的环境就会大量的繁殖，必须采取措施来阻止霉菌的繁殖或切断其传播途径，就可以摆脱霉菌的污染。
霉菌对食物的污染，降低食品的食用品质外，还会产生霉菌毒素。
霉菌毒素对人主要毒性表现在神经和内分泌紊乱、免疫抑制、致癌致畸、肝肾损伤、繁殖障碍等。
3、酵母酵母是一些单细胞真菌，并非系统演化分类的单元。
是子囊菌、担子菌等几科单细胞真菌的通称，一般泛指能发酵糖类的各种单细胞真菌，有的对食品加工有益，如发酵粉、酿酒酵母，有的为致病菌。
空气中、人体中都存在一定数量的酵母菌，只要在合适的环境就会快速繁殖。
吃了致病性酵母菌污染的食品易造成食物中毒，有些免疫力低的人群亦可能发生酵母菌感染。
4、金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属，有“嗜肉菌'的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。
金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。
因此，食品受到污染的机会很多。
美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。
阪崎肠杆菌
阪崎肠杆菌检验 GB 4789.40—2010
Donna吴
阪崎肠杆菌 样品介绍 操作流程第一法
操作流程第二法
阪 崎 肠 杆 菌
阪崎肠杆菌
阪崎肠杆 菌能引起 （又称阪崎 严重的新 氏肠杆菌） 生儿脑膜 是肠杆菌科 炎、小肠 的一种， 结肠炎和 1980年由黄 茵血症， 色阴沟肠杆 死亡率高 菌更名为阪 达50% 崎肠杆菌。 以上。
②分离
各取增菌培养物1 环，分 别划线接种于两个阪崎肠 杆菌显色培养基平板
挑取1 个～5 个可疑菌落，划 线接种于TSA 平板。 25 ℃±1 ℃培养48 h±4 h。
③鉴定
自TSA 平板上直接挑取黄色可疑菌落，进行生化鉴定。阪崎肠杆菌的主 要生化特征见表1。可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统。
刚分离的阪崎肠杆菌在结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂上生长 形成两种不同的菌落：一种菌落呈干燥或粘液状，边缘不规 则，用接种环挑动，菌落具有明显的附着感并且有弹性；另 一种菌落则很光滑，很容易用接种环挑取，并发现该菌在肉 汤培养基中生长呈现团块或沉淀状，但目前还不清楚菌落特 征差别是否与毒性有关。
阪崎肠杆菌的生理生化特征
• ④结果与报告
• 综合菌落形态和生化特征，报告每100 g（mL）样品中检出 或未检出阪崎肠杆菌。
阪崎肠杆菌检验 GB/T 4789.40-2010
①样品的稀释
样品各三份
第二法 阪崎肠杆菌的计 数 ②分离 （同第一法） ③鉴定
100g
10g
1g
已预热到 44℃的蛋 白胨稀释 900ml 90ml 9ml 剂 置36 ℃±1 ℃培养18 h±2 h。
培养基和试剂
培养基和试剂
3、阪崎肠杆菌显色培养基DFI
阪崎肠杆菌污染途径
• 1.1发现历史 • 1.2流行病学特征 • 1.3检验方法 • 1.4其他肠杆菌属的检验
1.1发现历史 发现历史 • 阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)作 为寄生于人和动物肠道的条件性肠道致病 菌，导致新生儿出现脑膜炎、败血病、小 肠结肠炎坏死等症状，致死率可高达80％。 • 一项由7个国家参与的国际调查显示从27种 食品中均分离出阪崎肠杆菌，其中高达 12%原产婴儿奶粉中均检出阪崎肠杆菌
• 不需要其他的生化实验 • 灵敏度为0.36/100g.
1.3 分离方法
左，未混合；右，混合
1.3 分离方法
VRBG 平板:典型菌落为紫黑色
1.3 分离方法
TSA 平板: 典型菌落有黄色色素
1.3 分离方法
2003-DFI显色培养基法 标准方法 显色培养基法(标准方法) 显色培养基法
• Druggan-Forsythe-Iversen (DFI)
食品中阪崎肠杆菌及其他肠杆菌属的检验
2010.12.24
引言
阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)作为 新发现的寄生于人肠道的条件性致病菌，导 致新生儿出现脑膜炎、败血病、小肠结肠炎 坏死等症状，致死率可高达80％。 因此，我们对阪崎肠杆菌进行详细的讨论。
1.食品中阪崎肠杆菌的检验
• 研究了8例与阪崎肠杆菌相关的新生儿脑 膜炎。 • 阪崎肠杆菌从配方奶粉中分离出。 • 然而，没有关于对奶粉中阪崎肠杆菌的数 量分析报告。
1.1发现历史 发现历史
1984 – Postupa and Aldova
• 描述了从奶粉分离出4株阪崎肠杆菌和婴儿 配方奶粉中分离出2株。 • 在脱氧-柠檬酸琼脂37oC孵育48小时。 • 对数量没有详细分析。
阪崎肠杆菌是什么东西？是怎么进到奶...？
阪崎肠杆菌是什么东西？是怎么进到奶...？美国CDC（Centers for Disease Control and Prevention）的文章：孤崎肠杆菌相关疾病及婴儿配方奶粉（Cronobacter Illness and Infant Formula）。
阪崎肠杆菌（Cronobacter ，又名Enterobacter sakazakii），是一种革兰氏阴性菌，存在于自然环境及食物中的一组细菌。
在极干燥的环境中也能生存。
婴儿配方奶粉、奶粉、茶叶、淀粉中，它们也能生存。
有时，污水中也有它们的踪迹。
实验室培养皿里的阪崎肠杆菌。
阪崎肠杆菌会引发血液及中枢神经系统的疾病，虽然罕见，但一旦感染，对新生儿却是致命的。
CDC的这篇文章指出，婴儿配方奶粉中的阪崎肠杆菌，1、来自生产过程的染污，2、开封后，家庭内部染污。
生产商们声明，以目前的生产方式，婴儿配方奶粉不可能是完全无菌的，目前的生产工艺没有办法杀灭配方奶粉中所有的细菌。
因此，CDC指出，新生儿、早产儿、免疫系统有缺陷的婴儿，被感染的机率会较高。
如何保护自己的孩子免受包括阪崎肠杆菌在内的细菌感染，CDC 建议：1、母乳喂养。
母乳喂养能帮助婴幼儿免受很多细菌的感染。
在纯母乳喂养的婴儿中，尚没有阪崎肠杆菌致病的病例报道。
2、如果做不到母乳喂养，特别是新生儿或较小的婴儿期，最好选择液体配方奶。
液体配方奶为无菌的，不会有感染阪崎肠杆菌的危险。
3、如果只能选择固态配方奶粉，良好的卫生习惯、冲调奶粉的水温足够杀灭细菌、安全的储存方式，是保护婴幼儿最好的办法。
1）使用清水与肥皂洗手；用洗碗机清洗奶瓶时，使用热水并启用干燥程序；如果手洗，使用含清洁成分的热水，之后注意消毒。
2）保持配方奶粉罐的盖子及取用勺的清洁，不要碰到其他地方；取完奶粉后，尽快密封好奶粉罐，尽快冲调奶瓶中的奶粉，不要等候过长时间。
3）冲调奶粉时，使用70℃及以上的热水。
4）仔细摇匀，不要马虎地摇两下就算。
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• 检验流程: ①接种缓冲蛋白胨水 : • ②mLST增菌24h • ③接种DFI培养基,37℃，培养 24h • ④接种API20NE
1.3 分离方法 DFI显色培养基上阪崎肠杆菌的菌落特征 显色培养基上阪崎肠杆菌的菌落特征 显色培养基上
蓝绿色菌落
1.3 分离方法
E. sakazakii 的API 20E结果 结果
• 样品修复培养（前增菌）： 样品修复培养（前增菌）：无菌称取100g乳粉加 ）： 入500ml预热45℃BP中，混匀，经36℃±1℃培 养18-24h。 • 样品肠道增菌培养 样品肠道增菌培养：移取10ml 加入90mlEE肉 汤中，于36℃±1℃培养18-24h。 • 样品分离培养：取EE增菌肉汤培养物1环，分别 样品分离培养： 划线接种EMB、MacConKey、 SorbitolMacConKey琼脂平板各1块，置 36℃±1℃培养18-24h。观察3种平板上的菌落 形态及不同的生物学特性反应及其差异比较。
DFI培养基存在的问题 培养基存在的问题
更快的检测方法? 更快的检测方法
• PCR • Q-PCR
DFI培养基存在的问题 培养基存在的问题
荧光PCR结果 结果 荧光
1.4其他肠杆菌属的检验 其他肠杆菌属的检验
• E-M-S法 • 所需培养基： • EMB • MacConKey • SorbitolMacConKey
1.3 分离方法 美国FDA 法 – 2002年 美国 年
• 对加拿大法进行了修改:
– 从10毫升接种到 毫升肠杆菌增菌肉汤（EE）。 毫升接种到90毫升肠杆菌增菌肉汤 毫升接种到 毫升肠杆菌增菌肉汤（ ）。 孵育过夜而不是直接涂布 平板. 在36oC孵育过夜而不是直接涂布 VRBG 平板 孵育过夜 – 可疑菌落接种 可疑菌落接种TSA 并在 oC 培养 48-72 hours. 并在25 – 只有产黄色色素的菌落进行 API 20E system实验 实验. 实验
• 研究了8例与阪崎肠杆菌相关的新生儿脑 膜炎。 • 阪崎肠杆菌从配方奶粉中分离出。 • 然而，没有关于对奶粉中阪崎肠杆菌的数 量分析报告。
1.1发现历史 发现历史
1984 – Postupa and Aldova
• 描述了从奶粉分离出4株阪崎肠杆菌和婴儿 配方奶粉中分离出2株。 • 在脱氧-柠檬酸琼脂37oC孵育48小时。 • 对数量没有详细分析。
1.3 分离方法
E. sakazakii 的API 20E结果 结果
DFI培养基存在的问题 培养基存在的问题
(A) 假阴性;E. sakazakii FSM 322:非典型菌落
(B)假阳性; 志贺式菌S. ficaria
DFI培养基存在的问题 培养基存在的问题
DFI培养基灵敏度 培养基灵敏度
• 可以检测阪崎肠杆菌的水平远低于粮食和 农业组织（粮农组织）建议的 3.0CFU/100g的婴儿配方奶粉。 • 检测水平是0.36/100g
食品中阪崎肠杆菌及其他肠杆菌属的检验
2010.12.24
引言
阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)作为 新发现的寄生于人肠道的条件性致病菌，导 致新生儿出现脑膜炎、败血病、小肠结肠炎 坏死等症状，致死率可高达80％。 因此，我们对阪崎肠杆菌进行详细的讨论。
1.食品中阪崎肠杆菌的检验
1.2 流行病学特征 • CRAVEN et al. (2010) 和 HEIN et al. (2009)调查了阪崎肠杆菌在奶粉工厂的非 加工和加工环境的空间分布，流行特点和 持久性。 • 调查结果显示空气是阪崎肠杆菌潜在污染 来源，并确认阪崎肠杆菌在奶粉工厂广泛 的分布
• 阪崎肠杆 菌在乳粉 加工设备 中的分布 • ○：阳性 样品分离 处
• 1.1发现历史 • 1.2流行病学特征 • 1.3检验方法 • 1.4其他肠杆菌属的检验
1.1发现历史 发现历史 • 阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)作 为寄生于人和动物肠道的条件性肠道致病 菌，导致新生儿出现脑膜炎、败血病、小 肠结肠炎坏死等症状，致死率可高达80％。 • 一项由7个国家参与的国际调查显示从27种 食品中均分离出阪崎肠杆菌，其中高达 12%原产婴儿奶粉中均检出阪崎肠杆菌
淡粉色1.8-2.5mm
无色或淡黄色1.8-2.5mm
淡粉色1.8-2.3mm
无色或淡黄色1.8-2.3mm
紫红色2-3mm
粉红色2-3mm 粉红色3-4mm，中 间有黄色色素 红色2-3mm
红色2-3mm
紫红色粘液状,3-4mm 紫绿色,有金属光泽, 有黑心2-3mm
红色3-4mm
红色2-3mm
表（1) 所分离的肠杆菌科细菌在 种分 所分离的肠杆菌科细菌在3种分 离培养基上生物学特性反应差异比较
菌株 标准号） （标准号） 阪崎肠杆菌 NCCDC（4株） 聚团肠杆菌 NCCDC（5株） 阴沟肠杆菌 NCCDC（5株） 肺炎克雷伯氏菌 NCCDC（9株） 大肠埃希菌 NCCDC（4株） EMB 紫红色粘液状，相邻 菌落之间易于融合 紫红色1.8-2.3mm MacConKey SorbitolMacConKey
1.1发现历史 发现历史
阪崎肠杆菌(E. sakazakii)的发现历史 的 • 在空气过滤器和受污染的产品可能存 在微生物污染的奶粉蛋白加工设施进 行了调查。在10个月期间，7个空气 过滤器，环境，粉状产品有阪崎肠杆菌 的存在。
1.1发现历史 发现历史
Байду номын сангаас
1983 - Muytjens et. al.
subcultured to TSB-YE agar.
– ③API-20E confirmation. No additional
biochemicals.
• Levels determined by MPN. • 灵敏度为0.36/100g.
1.3 分离方法
加拿大法的调查结果
• 120份样品中,8株阪崎肠杆菌被分离出, 8份样品来自 5 家制造商, 存在数量为 0.36 MPN/100 g.
1.3 分离方法 加拿大法:1997年 – Nazarowec-White 年 加拿大法 and Farber
• 对 Dr. Muytjens’的方法进行了修改: – ①Dried infant formula suspended in sterile water. – ②Suspect colonies from VRBG plates
1.1发现历史 发现历史
IVERSEN et al.2008
• 2008年,阪崎肠杆菌正式从
肠杆菌属中划出,并命名为 克落诺菌属(Cronobacter) • 克落诺菌属目前包括了6个 种
1.2 流行病学特征 • 流行病学调查表明：婴幼儿配方奶粉被认 为是阪崎肠杆菌的主要来源的 • 阪崎肠杆菌最初以婴儿配方奶粉作为传播 媒介，导致新生儿出现脑膜炎、败血症、 肠结肠炎肠坏死， 病死率达 80%以上
• 不需要其他的生化实验 • 灵敏度为0.36/100g.
1.3 分离方法
左，未混合；右，混合
1.3 分离方法
VRBG 平板:典型菌落为紫黑色
1.3 分离方法
TSA 平板: 典型菌落有黄色色素
1.3 分离方法
2003-DFI显色培养基法 标准方法 显色培养基法(标准方法) 显色培养基法
• Druggan-Forsythe-Iversen (DFI)