粪便隐血试验的临床价值讲课
便潜血的临床应用(2).ppt王大光
大肠癌——可以预防的杀手
▪ 血红蛋白检测采用“血红蛋白”便潜血试剂 盒(批号20100911)
▪ 转铁蛋白检测采用“转铁蛋白”便潜血试剂 盒(批号20100822)
▪ 以上两种试剂盒均由万华普曼公司提供
▪ 两种方法联合检测时,其中任何一种检测阳 性即为阳性。
健康者与各种原因消化道出血患者粪便血 红蛋白和转铁蛋白免疫法检测法结果比较
血红蛋白结构 上消化道出血的不足
▪ 679个氨基酸 ▪ 结合两个Fe3+ ▪ 抗体结合位点 N端或C
端 ▪ 空间位相稳定
转铁蛋白可以有效弥补血红蛋白 检测上消化道出血的不足
血浆中主要的含铁蛋白 ▪ 在胃肠道中有效抵抗细菌
降解、消化酶分解,稳定 性高于血红蛋白十倍。 ▪ 检测水平是ng级的
▪ 遗传性无转铁蛋白血症、各种恶性疾病、炎 症为主的多种疾病均可导致转铁蛋白低下。
关爱自己,远离大肠癌
▪ 50岁以上,每年一次便潜血检测,降低15%-33%直结肠癌的死亡率。
▪ 肠镜检测 ▪ 钡餐 ▪ CEA检测
展望
▪ 最新报告可从粪便中检 测大肠癌细胞甲基化 ITGA4(integrin, alpha 4)
粪便来源
例数 血红蛋白免疫法 转铁蛋白免疫法
两法联合
例数 率(%) 例数 率(%) 例数 率(%)
健康者
101
2
2.0
1
1.0
2
2.0
▪ 血红蛋白法特异性:98.0% ▪ 转铁蛋白法特异性:99.0% ▪ 联合检测特异性 :98.0%
上消化道出血
食管、胃、十二指肠以 及胰腺、胆道的出血,统 称为上消化道出血。其中 溃疡病约占半数,食管、 胃底静脉曲张占25% 。上 消化道出血以呕血和柏油 便为主 。
大便潜血试验ppt课件
秘、腹泻或二者交替,超过3周应格外注意。
4.大便形状改变,变细、变扁或有槽沟。 5.出现贫血,粪便检查反复多次或持续出现潜血者。 6.持续性下腹部不适,隐痛或腹胀、腹部肿块,体
重减轻。
7.肠梗阻。 值得注意的是,患者容易将这些症状用“痔疮”、 “肠炎”来解释,往往错过了早诊治的时机。痔、 炎症性肠病的病人也可以发生大肠癌,所以痔、 炎症性肠病的病人,也应该进行检查。
引起重视,而肿瘤已是中、晚期。
青年朋友们也应重视大肠癌,尤其是 有不适,或有家族史时。我国专家推荐, 家族性腺瘤性息肉和遗传性非息肉病性结 直肠癌家族史的人,在20岁以后就应开始 进行筛查。
医生会给我安排哪些检查?多长 时间做一次检查?
肛门指检:
肛门指检是医生用手指触摸接受体检者的 肠道内部,来检查疾病的一种方法。这种方法 能发现距离肛门7-8cm内的中下段直肠肿瘤。 在我国大肠癌中,约50%可以通过肛门指检得 到初步诊断。但更高部位的肿瘤,这种方法就 无能为力了。
大肠癌多数发生在中老年人,但近年来国内许多 资料都向青年人发出了警报。医学上将40岁以下的 大肠癌称为青年型大肠癌。欧美是大肠癌高发区,青 年型大肠癌占总大肠癌数的2.2%-4.5%。令人吃惊的 是,我国青年人大肠癌所占比例为20%,高出此值 4-10倍之多,有报告最年轻一例仅13岁。
与其他年龄段相比,青年型大肠癌有以下特 点:(1)中晚期癌多见:约70%青年人大肠 癌病人在确诊时已有淋巴结转移。(2)发病年 龄越小,肿瘤恶性程度越高,手术存活期越短。 (3)由于癌细胞生长活跃,增生极快,侵犯广 泛,所以肠梗阻多见。(4)腹痛,呕吐症状突 出。(5)肿瘤易出血,故贫血常见。(6)病 理类型多为黏液腺癌,占全部青年大肠癌的50 %以上。
粪便检验丨隐血试验-完整版PPT课件
01 化学法-邻联甲苯胺法
根据出现颜色的时间及颜色的深浅来判读结果:
(-)2分钟后仍不显色 (+)10秒后由浅蓝渐变深蓝 (++)初显浅蓝褐色渐变成明显蓝褐色 (+++)立即呈现蓝褐色 (++++)立即呈现黑蓝色
结果示意图
01 化学法-邻联甲苯胺法
除邻联甲苯胺法外还有以下化学方法:
邻甲苯胺法、还原酚酞法、联苯胺法、愈创木酯法、匹拉米洞法 、无色孔雀绿法等 。
干化学试带法 单克隆胶体金试带法
01 化学法-邻联甲苯胺法
检测原理
血红蛋白含有类似过氧化物酶 的作用,催化供氢体,将供氢体中的 氢转移给过氧化氢生成水,供氢体脱 氢(氧化)后形成发色基团而呈色。 呈色的深浅可反映血红蛋白量(出血 量)的多少。
检测方法
用竹签挑取少许粪便于 滤纸片上,滴加邻联甲苯胺 冰乙酸液2~3滴,再加H2O2 (1mol/L)2 ~ 3滴,于标本 上立即观察结果,报告。
01 化学法-邻联甲苯胺法
质量保证
1
试验前3天必须禁食动物血、肉、肝,是为了避免假
阳性。禁服铁剂、维生素C是为了避免假阴性。
2
H2O2最好新鲜配制。
3
所用的器具要清洁
。
4
每天做阳性对照和阴性对照
。பைடு நூலகம்
02 免疫法
主要方法: 酶联免疫吸附法 胶体金法 免疫斑点法 胶乳凝聚法 反向间接血凝法等
用胶体金(有颜色)等标记物 标记抗人血红蛋白抗体,与粪便中 的血红蛋白(红细胞内容物)结合 ,在指定位置出现颜色变化,根据 颜色的有无及深浅判断阴性、弱阳 性、阳性、强阳性。
01 化学法-邻联甲苯胺法
粪便常规检查及便隐血试验护理课件
目录
CONTENTS
• 粪便常规检查及便隐血试验概述 • 粪便常规检查及便隐血试验的护理准备 • 粪便常规检查及便隐血试验的操作流程 • 粪便常规检查及便隐血试验的注意事项 • 粪便常规检查及便隐血试验的护理问题与处
理 • 粪便常规检查及便隐血试验的案例分享
01
准备必要的护理用品,如手套、 标本盒等。
物品准备
粪便常规检查所需的显微镜、载玻片、染色剂等。 便隐血试验所需的试剂、试纸等。
清洁、干燥的标本盒,确保无菌、无毒。
Hale Waihona Puke 03CHAPTER
粪便常规检查及便隐血试验 的操作流程
取样方法
01
02
03
排便容器准备
选择干净、干燥的容器, 避免使用纸尿裤或塑料袋 ,以免影响检查结果。
结果解读
正常结果
粪便常规检查及便隐血试验结果正常 ,表明肠道健康,无出血等异常情况 。
异常结果
检查结果异常,如红细胞、白细胞、 潜血等阳性,可能提示肠道炎症、溃 疡、肿瘤等疾病,需进一步检查和治 疗。
04
CHAPTER
粪便常规检查及便隐血试验 的注意事项
患者注意事项
患者在接受粪便常规检查及便隐血试 验前,需要了解相关的注意事项,如 饮食控制、避免服用某些药物等。
案例二:异常粪便常规检查结果解读
总结词
异常结果,需进一步检查
详细描述
粪便颜色、性状、气味出现异常,如颜色发黑、红、白等, 质地过软或过硬,伴有黏液、脓血等症状。镜检可见大量白 细胞、红细胞、寄生虫卵等异常物质。
案例三:便隐血试验阳性结果解读
总结词
阳性结果,需进一步确诊
详细描述
医学检验·检查项目:粪便隐血试验(OBT)_课件模板
慢性溃疡性结肠炎、小肠平滑肌瘤、小肠 脂肪瘤、小肠血管瘤、小肠纤维瘤、小肠 原发性恶性淋巴瘤、结直肠血管瘤、胃溃 疡、原发性十二指肠恶性淋巴瘤、小肠血 管畸形、结肠息肉和息肉病、老年人结肠 息肉、老年人缺血性结肠炎、胆肠内引流 术后内疝、盆底腹膜疝、下消化道出血、 新生儿流行性腹泻、新生儿呕血
医学检验·各论 粪便隐血试验(OBT)
内容课件模板
医学检验·各论:粪便隐血试验(OBT) >>>
别名: 大便粪便隐血试验。
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简介: 粪便隐血试验是指在消化道出血量很
少时,肉眼不能见到粪便中带血,并且粪 便中有少量红细胞被破坏。
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相关检查: 痢疾杆菌检测、粪脂肪定量、粪中脂肪、 粪中细胞、粪细菌培养、粪酸碱度。
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相关症状: 习惯性尿裤、胸膈间烧灼嘈杂感、婴儿褐 色或暗绿色的粘液便、酒后便血、产后便 血、爆发性水泻。
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临床意义:
类固醇抗炎药,可造成化学法隐血试验假 阳性。而摄入大量维生素C,则可造成隐 血试验假阴性。化学法检查上消化道出血 (胃、十二指肠等)可靠,而免疫法主要适 用于下消化道(小肠、大肠)出血的检查。
医学检验·各论:粪ຫໍສະໝຸດ 隐血试验(OBT) >>>
正常值: 阴性。
粪便隐血试验(OBT)及临床意义
粪便隐血试验(OBT)及临床意义一、概述粪(大)便隐血是指上消化道出血小于5 ml,粪便中无可见的血液,且红细胞被消化破坏,显微镜检查不能发现红细胞的微量出血。
检查粪便隐血采用粪便隐血试验(occult blood test,OBT)。
二、检测方法目前,粪便隐血试验常用化学法或免疫法测定类中血红蛋白,也可联合测定类中转铁蛋白。
其中,免疫法粪便隐血试验是一种高灵敏度的测定方法,有胶乳凝集法、EIA 法、胶体金法和免疫层析法等。
此外,还有半自动、全自动的粪便隐血试验仪器。
化学法一、原理血红蛋白中的亚铁血红素有类似过氧化物酶的活性,能催化H202作为电子受体使色原(如邻联甲苯胺)氧化而显色(如邻联甲苯胺氧化成邻甲偶氨苯显蓝色)。
二、试剂1、10g/L邻联甲苯胺冰醋酸溶液2、3%过氧化氢液。
三、操作1、用小木棍挑取少量粪便,涂在消毒棉签或白瓷板上。
2、滴加10g/L邻联甲苯胺冰醋酸溶液2~3滴于粪便上。
3、滴加3%过氧化氢液2~3滴。
4、立即观察结果,在2分钟内显蓝色为阳性。
四、结果判定1、阴性:加人试剂2分钟后仍不显色。
2、阳性+:加人试剂10秒后,由浅蓝色渐变蓝色。
3、阳性2+:加人试剂后初显浅蓝褐色,逐渐呈明显蓝褐色。
4、阳性3+:加人试剂后立即呈现蓝褐色。
5、阳性4+:加入试剂后立即呈现蓝黑褐色。
五、注意事项1、3%过氧化氢液易变质失效,须进行阳性对照试验,将过氧化氢滴在血片上,应产生大量泡沫。
2、齿龈出血、鼻出血、月经血等可导致阳性反应。
3、用具应加热处理(如试管、玻片、滴管等)以破坏污染的过氧化物酶。
4、也可选用中等敏感(0.3~1mg Hb/g粪便)的愈创木酯法,但必须选购质量优良的愈创木酯,配制成20g/L愈创木酯乙醇溶液,代替10g/L邻联甲苯胺冰醋酸溶液,操作同上。
免疫法一、原理采用抗人血红蛋白的单克隆抗体或多克隆抗体,与粪便样品中的人血红蛋白特异性结合以检测类便中有无血液。
本试验不受动物血红蛋白的干扰,试验前不须禁食肉类。
粪便隐血PPT课件
胶体金法: • 1)在稀释样杯中加入0.5ml的蒸馏水; • 2)用采样棒在标本的6个最有可能阳性的 部位取样; • 3)取好样品后,将样品与蒸馏水充分混匀 ; • 4)将金标纸条MAX线一端插入稀释样杯中 ,3-5分钟后观察结果。
6.结果判断 • 邻甲苯胺法:滴加双氧水溶液后随即出现 蓝色阳性反应,报告为++++;在10秒内出 现阳性反应,报告为+++;在一分钟内出现 阳性反应,报告为++;在1分钟后5分钟内 出现阳性反应,报告为+;没有任何颜色反 应则报告阴性。 • 胶体金法:检测区与质控区均出现红色线 的为阳性,如仅质控区出现红色线为阴性 ,如质控线不出现红色线则表示试验无效 应重做。
• 当免疫法与化学法结果同为阳性时,判定 结果为阳性结果,化学法显色结果可作为 出血程度的参考; • 当免疫法结果为阳性而化学法结果为阴性 时,判定结果为阳性,但可能其标本隐血 的含量极微少; • 当免疫法结果为阴性而化学法结果为阳性 时,建议复查; • 当两者均为阴性时,判定为阴性结果。
7.临床意义 • 1)上消化道有出血:OB(大便隐血实验)呈阳性 • 2)消化性溃疡:阳性率40%~70%,呈间断性阳性,治疗 粪便外观正常时,OB仍可持续5~7天阳性,此后若出血停 止OB可转阴;只要消化道出血大于5ml,即可出现阳性, 但不作为诊断的直接依据;若OB呈强阳性提示消化性溃 疡合并出血 • 3)消化道癌症:阳性率95%,呈持续阳性,可OB可作为 消化道癌筛选指物导致胃粘膜损伤(Eg阿司匹林、消炎痛、糖皮质 激素等)肠结核、溃疡性结膜炎、结肠息肉、钩虫病等, OB显示阳性。
8.质控 • 邻甲苯胺法:采用血标本作为阳性对照。 • 胶体金法:质控区所显示的紫红色带(质 控区被事先固定上相应抗体)是判定层析 反应过程是否正常,即作为试纸条的质控 标准。
粪便隐血试验的临床价值-讲课
粪便隐血试验的临床价值医科大学附属第一医院消化科军自1864年Vandeen发明GUALAC法检测大便隐血后,为临床消化道出血及消化道肿瘤的诊断提供了一种无创伤、简便、快速的检测方法。
100多年以来,此法有了长足的进步。
目前隐血检查方法可分为五类LL2]:放射分析法、物理法、化学法、免疫法和血红素-吓嘛试验。
放射分析法是静脉注射弋r标记的红细胞后检测粪便放射活性.专门用于定量分析.但日常使用太复杂。
物理法是通过显微镜检测粪便红细胞和血色素晶体或分光仪鉴定血红蛋白及其衍生物.目前主要用于学术研究:血红素-吓啾试验可检出任何形式的血红素,如游离的血红素或与珠蛋白结合的血红素及其多种衍生物.可用于定量分析大肠癌的隐性岀血■ 但由于对上消化道岀血的髙灵敏性,降低了其筛检大肠癌的特异性化学法和免疫法是目前比较常用的粪隐血检测试验•被美国胃肠病学会推荐用于普通人群大肠癌的筛检化学法以愈创木脂试验为代表,原理是基于血红蛋白分子的高铁血红素部分具有假性过氧化物酶(pseudoper-oxidase)活性.可催化裂解过氧化氢.其衍生物与指示剂偶联.氧化显色剂而形成有色产物.从而判断粪便中是否含有血红蛋白或血红素。
显色剂常用联苯胺(benzidine),但由于其致突变性,最近有应用三环类抗抑郁药盐酸丙咪嗪(imipramine hydrochloride, I PH)和去甲丙咪嗪盐酸盐(desipramine hydrochloride,DPH)等代替联苯胺,作为新的粪隐血检测显色剂的报道I:。
再水化愈创木脂试验可以增加反应的灵敏度,但再水化也可激活各种干扰因素的过氧化物酶活性而增加假阳性率[L5\研究发现无再水化假阳性结果为2%〜4%,而再水化则达8%〜16%t6\亦有报道,使用再水化愈创木脂试验可使肿瘤的预测值从44%下降到19% 1],因此美国胃肠病学会推荐使用无再水化愈创木脂试验筛检大肠癌⑶。
愈创木脂试验检测粪隐血前常需进行膳食限制,这是因为来自于肉类的非人类血红蛋白及其他具有过氧化物酶活性的膳食成分(如菠菜等)可引起假阳性,而过多的维生素C则可引起假阴性结果。
医学交流课件:粪便常规检查及便隐血试验
粪便常规检查
一般性状检查 • 量:正常成人大多每日排便一次,其量约为100-300克。 • 外观:包括颜色与性状。正常成人的粪便出时为黄褐色成
形便,质软;婴儿粪便便可呈黄色或金黄色糊状。病理情 况下可见粘液便、糖便、胨状便、脓性及脓血便、柏油样 黑便、米泔样便、白陶土样便等等。 • 气味 • 酸碱反应 • 寄生虫 • 结石
便隐血试验
• 2、免疫学法隐血试验主要检测下消化道出血,约有4050%的上消化道出血不能检出。以免疫胶体金法优点较多 ,ACS认为免疫法在特异性和灵敏度上等于或好于愈创木 酯法,不受食物因素影响;单克隆抗体隐血试验对人隐血 具有高度特异性。
便隐血试验
• 临床意义 • 粪便隐血检查对消化道出血的诊断有重要价值。 • 进行鉴别诊断消化性溃疡时后当粪便外观正常时,隐血试验 阳性仍可持续5-7天,此后如出血完全停止,隐血试验即 可转阴。 • 消化道癌症时,阳性率可达95%。呈持续性阳性,故粪便 隐血试验常作为消化道恶性肿瘤诊断的一个筛选指标。尤 其对中老年人早期发现消化道恶性肿瘤有重要价值。
谢谢
粪便常规检查
化学检查 • 隐血试验 • 粪胆色素检查 • 消化吸收功能试验
粪便常规检查
• 显微镜检查 • 粪便直接涂片显微镜检查是临床常规检验项目。可以从中
发现病理成分,如各种细胞、寄生虫卵、真菌、细菌、原 虫等,并可通过观察各种食物残渣以了解消化吸收功能。
粪便常规检查
• 一般采用生理盐水涂片法,以竹签取含粘液脓血的部分, 若为成形便则常自粪便表南,深处胩粪便端多处取材,混 悬于载有一滴生理盐水的载玻片上,涂成薄片,厚度以能 透视纸上字迹为度,加盖玻片,先用低倍镜观察全片有无 虫卵、原虫疱囊、寄生虫幼虫及血细胞等,再用高倍镜详 细检查病理成分的形态及结构。
双连法检测便潜血的临床意义ppt课件
双连法检测便潜血通常在几分钟内即可得 出结果,方便快捷。
准确性高
适用范围广
双连法检测便潜血采用抗原-抗体反应原理 ,具有较高的准确性,能够及时发现消化 道出血或肠道炎症等疾病。
双连法检测便潜血适用于各种年龄段的人 群,特别是对于消化道疾病的高危人群, 可以定期进行筛查。
02
双连法检测便潜血的临床应用
需要进一步检查确诊
阳性结果提示需要进行进一步的检查,如胃镜、肠镜等,以明确出血的原因和 部位,为后续治疗提供依据。
阴性结果的解读
阴性结果提示无消化道出血
当双连法检测便潜血结果为阴性时,表明消化道未发生出血情况。这可能是由于消化道未受损或受损较轻,也可 能是由于出血已经停止。
不一定排除其他疾病
虽然阴性结果提示消化道未出血,但仍需关注其他可能的疾病症状,如腹痛、腹胀等,以便及时发现并治疗。
双连法检测便潜血的临床意义
汇报人:可编辑 2024-01-11
目 录
• 双连法检测便潜血简介 • 双连法检测便潜血的临床应用 • 双连法检测便潜血的结果解读 • 双连法检测便潜血与其他检测方法的比较 • 双连法检测便潜血的未来展望
01
双连法检测便潜血简介
双连法检测便潜血的定义
双连法检测便潜血是一种基于化学反 应的检测方法,用于检测粪便中的微 量血液。
敏感性
双连法检测便潜血的敏感性较高 ,能够检测出较小的出血量,为 早期诊断提供有力支持。
成本效益
与其他新型检测方法相比,双连 法检测便潜血的成本较低,更适 合基层医疗机构的经济条件。
双连法检测便潜血的局限性
影响因素
双连法检测便潜血可能会受到饮食、药物、 肠道菌群等因素的影响,导致结果出现偏差 。
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粪便隐血试验的临床价值
南京医科大学附属南京第一医院消化科张 军
自l864年Vandeen发明GUALAC法检测大便隐血后,为临床消化道出血及消化道肿瘤的诊断提供了一种无创伤、简便、快速的检测方法。100多年以来,此法有了长足的进步。目前隐血检查方法可分为五类[ 1, 2 ]:放射分析法、物理法、化学法、免疫法和血红素-卟啉试验。放射分析法是静脉注射51Cr标记的红细胞后检测粪便放射活性,专门用于定量分析,但日常使用太复杂。物理法是通过显微镜检测粪便红细胞和血色素晶体或分光仪鉴定血红蛋白及其衍生物,目前主要用于学术研究:血红素-卟啉试验可检出任何形式的血红素,如游离的血红素或与珠蛋白结合的血红素及其多种衍生物,可用于定量分析大肠癌的隐性出血,但由于对上消化道出血的高灵敏性,降低了其筛检大肠癌的特异性[ 2 ]。化学法和免疫法是目前比较常用的粪隐血检测试验,被美国胃肠病学会推荐用于普通人群大肠癌的筛检[ 3 ]。
化学法以愈创木脂试验为代表,原理是基于血红蛋白分子的高铁血红素部分具有假性过氧化物酶(pseudoper-oxidase)活性,可催化裂解过氧化氢,其衍生物与指示剂偶联,氧化显色剂而形成有色产物,从而判断粪便中是否含有血红蛋白或血红素。显色剂常用联苯胺(benzidine),但由于其致突变性,最近有应用三环类抗抑郁药盐酸丙咪嗪(imipramine hydrochloride,IPH)和去甲丙咪嗪盐酸盐(desipramine hydrochloride,DPH)等代替联苯胺,作为新的粪隐血检测显色剂的报道[ 4 ]。再水化愈创木脂试验可以增加反应的灵敏度,但再水化也可激活各种干扰因素的过氧化物酶活性而增加假阳性率[ 1, 5 ],研究发现无再水化假阳性结果为2%~4%,而再水化则达8%~16%[ 6 ]。亦有报道,使用再水化愈创木脂试验可使肿瘤的预测值从44%下降到19%[1],因此美国胃肠病学会推荐使用无再水化愈创木脂试验筛检大肠癌[3]。愈创木脂试验检测粪隐血前常需进行膳食限制,这是因为来自于肉类的非人类血红蛋白及其他具有过氧化物酶活性的膳食成分(如菠菜等)可引起假阳性,而过多的维生素C则可引起假阴性结果。有研究表明,使用常规(无再水化)愈创木脂试验,食用红肉时的假阳性率只有0.7%[ 7 ],因此检查前无须限制膳食[ 3 ]。愈创木脂试验一般检测3次连续的大便,每次取2个样本。尽管单次试验的灵敏度很低(30%~50%),但每年1次的检测方案能够检出大约92%的大肠癌患者。
化学法FOBT病人取第一次粪便标本前的4d内及整个检测期间应注意的问题:(1)避免进食红色的肉和血制品(如黑色布丁、肝、肾)及黑色的鱼肉(如鲨鱼、金枪鱼、沙丁鱼等);(2)避免进食西红柿、花菜、甜瓜、香蕉,黄豆等;(3)避免饮酒和药物服用,如阿司匹林或其它非激素类抗炎药物、维生素C、含铁剂等;(4)避免过于粗糙的食物刺激溃疡部出血;(5)如果病人在腹泻期和月经期,或最近有鼻、咽喉出血者应暂停试验;(6)FOB试验准确与否与过氧化酶有很大的关系,由于前4d及检查中要吃低过氧化酶的食物,还应避免吃刺激消化道出血的药物;(7)正确留取粪便的方法包括:①在黏液脓血等肉眼观察不正常的部位取材;②肉眼观察无异常,则需在3个以上不同部位取材;③如是鲜血便或柏油样便,要在取便器上注明;④取便量不能少于黄豆大小。
免疫法FOBT的原理是利用抗原、抗体的特异性结合,使用单克隆或多克隆抗体检测粪便内未受破坏的人血红蛋白的珠蛋白部分。由于珠蛋白通过上消化道时已被降解、代谢而失去免疫原性,因而免疫化学法检测粪便隐血对于结肠和直肠出血更具特异性[ 8 ]。免疫法FOBT不与非人类血红蛋白反应,不需进行膳食限制,受上消化道出血的影响也最小,但使用非甾体抗炎药或患有其他常见的大肠非肿瘤性出血仍可引起假阳性结果[ 2 ]。各种免疫法FOBT如反向被动血凝法、荧光酶免疫法、酶联免疫吸附法、血凝法、乳胶凝集法等多种方法均已用于临床。免疫法FOBT筛检大肠癌较愈创木脂试验更精确,目前在日本已经广泛用于粪便筛检早期大肠癌[ 9 ]。Nakama[ 10 ]等应用3d粪便收集法,使用5种不同的免疫法FOBT,检测大于1cm的腺瘤。结果显示,灵敏度和特异性分别为48%和97%。与愈创木脂试验相比,免疫法提高了检测的特异性和病人的依从性,不足之处是灵敏度仍不够理想。
目前临床上常用的免疫法是单克隆血红蛋白抗体金标试纸法。金标法不会出现假阳性,但可能出现假阴性。出现假阴性主要有以下几方面原因。(1)粪便中血红蛋白含量太高,超过了金标法的检测范围。因隐血试纸中抗血红蛋白抗体的量是一定的,所以具有一定的检测范围。当血红蛋白抗原物质浓度远远大于检测板中抗血红蛋白抗体的浓度时,形成的免疫复合物反而减少,即出现后带现象。所谓后带现象是指由于抗原过剩而产生的弱阳性乃至假阴性结果,又称为钩状效应。临床实验中柏油样、咖啡样便等出现的假阴性就是由于血红蛋白含量过高所致[ 11]。(2)轻微出血,如果采样不足(抗原过少)和稀释液用最控制不严格也可造成假阴性。(3)由于血红蛋白结构的破坏造成。有的上消化道出血患者的血红蛋白在胃部,珠蛋白链被胃酸迅速的水解,在小肠被蛋白酶分解,血红蛋白可能被充分分解或消化殆尽而失去单克隆抗体所特异结合的抗原决定镞,同时体外或胃肠道内细菌的作用也可使粪便中血红蛋白免疫活性丧失,已没有抗原特性,导致假阴性结果。提示血红蛋白可能被充分降解而失去单克隆抗体所特异结合的抗原决定簇。(4)由于抗原抗体反应受温度影响较大,当冬天气温较低时,应适当延长观察时间或做保温处理,以免人为出现假阴性结果。(5)用弱碱性PBS缓冲液代替蒸馏水稀释标本进行检测,可提高消化道出血的检出率。这是由于抗原与抗体具有胶体性质,在弱碱性条件下有较高的亲水性,抗原与抗体特异性结合后,其亲水性减弱,易受某些电解质影响而失去部分负电荷,从而使在第一阶段已形成的抗原抗体复合物彼此进一步连接,出现明显的凝集或沉淀现象。(6)单克隆抗体金标检测法假阴性结果的出现提示我们,尽管单克隆抗体检测法具有高灵敏度,高特异性的优点。但也有一定局限性。此检验只能作为筛选或辅助诊断用,不能对消化道出血病变做结论性诊断。有时对外观为柏油样便而免疫法检查却呈阴性或弱阳性时,不要轻易排除患者无消化道出血的结论。