园艺植物花粉的贮藏和生活力的测定(精)

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实验四花粉采集及生命力的测定

3 ．染色观察法（3）氯化三苯基四氮唑（TTC）法原理：凡具有生活力的花粉，在其呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的花粉则无此反应，因此当TTC渗入有生活力的花粉时，花粉中的脱氢酶在催化去氢过程中与TTC结合，使无色的 TTC变成三苯基甲（TTF）而呈红色。步骤和方法：取少量花粉放在载玻片上，在花粉上滴1～2滴TTC溶液，用镊子使其混匀后，盖上盖玻片。将此载玻片上置于恒温箱中（35～40℃）约 15～20分钟，在显微镜（100倍）下观察。凡有生活力的花粉粒呈红色，其次呈淡红色，失去生活力的和不育的花粉粒表现无色。
六、作业及思考题：１、按下表统计实验结果。２、绘一幅花粉粒发芽形态图。染色法测定结果记载表
各视野中花粉粒数量及生活力
花粉来源平均其中生生活红黄活力色色力 (％)
其中花粉生红黄总活色色数力
花粉总数
其中
红黄鲜
培养基法测定结果记载表
花粉来源
各视野中花粉粒数量及发芽率培养基浓度 1 发芽数/ 总数发芽率 2 发芽数/ 总数发芽率 3 发芽数/ 总数发芽率平均生活力(％)
0% 5% 贮藏 10% 15% 20%
新鲜
配制对二萘氧基联苯胺: a．0.2克联苯胺溶于100毫升50%的酒精溶液； b．0.15克a-萘酚溶于100毫升50%酒精溶液； c．0.25克的碳酸钠溶解在100毫升的蒸馏水中。以上三种溶液分别放入棕色瓶中备用，使用时将这三种溶液等量配成试剂Ⅰ，放入棕色滴瓶中备用，在使用前准备好0.3%的过氧化氢水溶液作为试剂Ⅱ。
２．花粉生活力的测定：（１）染色观察法 ——TTC 和KI染色法 ① 分别配制 TTC 和KI染色液各100ml，装入棕色瓶中备用。 ② 制片：取少量花粉于载玻片上，滴入 1 ～ 2 滴 0.5 ％ TTC 或KI染色液，用镊子搅拌均匀，盖上盖玻片，于 35 ～ 40℃ 条件下净置 15 ～ 20min 。 ③ 观察统计：在显微镜下观察三个不同的视野，凡被TTC染成红色或玫瑰红的都是有生活力的花粉，黄色或不着色者为没有生活力的花粉；被KI染成蓝色者表示具有生活力，花粉呈黄褐色者不具有生活力。

实验一花粉收集

实验一花粉收集、贮藏及花粉生活力测定一、实验目的1.掌握鲜花粉收集、储藏的方法及原理。

2.观察花粉在人工配制的培养基上的萌发情况，认识花粉萌发形成花粉管的外形和伸长过程，为理解植物的生殖过程奠定基础。

二、实验原理花期不遇，给杂交工作造成困难，有的树木和园林植物可通过延长花期解决，有的不得不进行花粉储藏，花粉贮藏对某些园林植物杂交育种具有重要的意义。

通过花粉贮藏，它可以使一些迟开花的园林植物和早开花的园林植物进行杂交，或到较远的地方给母本授粉，花粉的贮藏与运输可以打破杂交育种中双亲时间上和空间上的隔离，扩大育种的范围。

花粉在贮藏期间的稳定性，与花粉壁外层（外壁）的性质和贮藏期间花粉原生质的代谢有关。

在贮藏期间代谢调较少可溶性糖类和有机酸的花粉能够在较长期间保持其活力。

花粉贮藏的原理在于创造一定的条件，使花粉降低代谢强度，延长花粉的寿命。

花粉寿命的长短，因植物种类不同而异。

在自然条件下，大多数植物的花粉从花药散出后只能存活几小时，几天或几个星期。

如一般木本植物花粉寿命很长，如在干燥凉爽的条件下，柑橘花粉能存活40～50d，椴树45d，苹果10～70d，樱桃30～100d，麻栎一年，叶培忠教授试验发现杉木的花粉可存活17年之久；而在草本植物中，如棉属花粉采下后24h存活只有65％，超过24h 很少存活；多数禾本科植物的存活时间不超过一天，如玉米1～2d，水稻花粉在田间条件下3min就有50％丧失生活力，5min后几乎全部死亡，是寿命最短的例子。

一般在自然条件下自花授粉植物花粉寿命比常异花、异花授粉植物为短。

花粉的类型和生活力也表现了相关性，通常三胞花粉的寿命要比二胞花粉短，如水稻等禾本科植物为三胞花粉，寿命都是比较短的。

花粉寿命的长短除了上述因种遗传性的差异以外，还与温度、湿度有密切的关系。

通常高温高湿下花粉呼吸旺盛，会很快失去生命力，但在极干燥的条件下，花粉失去水分，也不利于保存。

据亚达姆斯试验，苹果花粉在干燥状态下，可保存3个月；如放在2～8℃，湿度80％的条件下，经过5个星期即失去生活力。

植物花粉生活力测定技术

1．外地采集来的花粉或杂交时父本花期早于母本时都要将花粉进行短暂贮藏； 2．自交或远缘杂交时，为了分析结实率或不结实原因时； 3．为了鉴定雄性不育系时； 4．了解某些杂交技术时，如测定花粉的刺激等作用，测定受精选择性等。因此，要根据各种植物花粉的特点，采取适当的保存方法。花粉生活力的测定方法很多，其中发芽试验手续较复杂，设备要求较高，需时也较长。为了简易而迅速的测定花粉生活力，也常采用化学染色的方法，但是此法也有缺点，就是染上色的花粉不一定都具有生活力，因为染上色的花粉中也包括了那些生活力弱不能正常发芽的花粉，所以一般常用而且较为可靠的方法仍然是采用花粉发芽实验。要是要求不严格对新采集的花粉还有一个较简便的鉴定方法——形态鉴定法。本实验目的是学习花粉生活力测定的方法，进而研究花粉寿命长短与环境条件的关系，以探求保存花粉的合适方法。
三、作业思考题
1．测定花粉生活力的意义有哪些？ 2．分析在实验中出现的问题，并找出原因所在。 3．将四种方法的结果分别记载于表中，并比较结果是否一致，如不一致，分析其原因。
表 1－6
供试花粉收集测定第一视野
品种日期日期
第二视野
具有生活力第三视野
的花粉%
备注
形态鉴定法
一、试材及用具
1．材料：几种植物的不同处理花粉；如：小麦、玉米、大白菜、黄瓜、杏、苹果等。 2．试剂：配制好的缓冲液、联苯胺液、过氧化氢液、TTC 粉、蔗糖、琼脂等； 3．用具：显微镜、载玻片、盖玻片、凹面载玻片、玻璃棒、擦镜纸、吸水纸、标签纸、铅笔。
二、方法步骤
（一）直接检验法每个实验小组选定同品种种株去雄。注意：选用的花蕾最好是花前 1～2d，且发育正常、饱满。每天去雄 20 个花蕾，然后套袋隔离，连续 5d，共 100 朵花。这一实验要和花粉贮藏实验相配合，即花粉贮藏的当天开始去雄。授粉时，每去雄一次，分别授以两种不同贮藏条件下的花粉（各 10 朵），连续 5d，就使得贮藏期分别为当天、第二天、第三天、第四天、第五天的花粉授到了去雄后的花蕾上。实验时，一定要挂牌标好品种、花粉贮藏期、贮藏条件、株号、授粉日期、授粉人。等最后一个处理完后十天，检验结实率和结籽率。将得到的结果填入表 1－6。（二）染色鉴定法（TTC 法） TTC 即 2、3、5－三苯基四唑氯化物。主要原理在于检验花粉呼吸过程中去氧酶的活性。具有生活力的花粉的脱氢酶，在催化去氢的过程中，把氢转移到其他的物质上去，使用 TTC 与催化过程中产生的氢结合成红色化合物，从而使具有生活力的花粉变为红色。 1．先配制下列溶液（1）磷酸缓冲液：在 100 毫升的蒸馏水中，溶解 0.832 克的磷酸氢二钠和 0.273 克的磷酸二氢钾，调整 PH 值为 7.17。

刺槐花粉生活力测定方法及贮藏特性

刺槐花粉生活力测定方法及贮藏特性王存纲;晋佳路【期刊名称】《南方农业学报》【年(卷),期】2014(045)008【摘要】[目的]探索刺槐花粉生活力测定方法及其贮藏特性,为刺槐生产及育种提供参考依据.[方法]以刺槐花粉为试材,使用培养基萌发试验法测定其生活力,并研究不同浓度Ca2+、不同贮藏条件及时间对刺槐花粉萌发的影响.[结果]刺槐花粉在琼脂8.0 g/L+蔗糖20.0 mg/L+硼酸2.0 mg/L的培养基中萌发率高达30.25％;适当浓度的Ca2+能促进花粉萌发和花粉管伸长,当Ca2+浓度为1.6×104 mg/L时,花粉萌发率高达40.25％,花粉管伸长最快;适宜刺槐花粉贮藏的条件依次为-80℃、4℃、-23℃和常温;花粉在-80℃贮藏32 d后,萌发率仍达15.30％.[结论]适合刺槐花粉萌发的培养基为:琼脂8.0 g/L+蔗糖20.0 mg/L+硼酸2.0 mg/L;培养基中添加低浓度外源钙能促进刺槐花粉萌发和花粉管生长;于超低温真空冷冻条件下贮藏的刺槐花粉保持活力时间更长.【总页数】4页(P1443-1446)【作者】王存纲;晋佳路【作者单位】鹤壁职业技术学院,河南鹤壁458030;鹤壁职业技术学院,河南鹤壁458030【正文语种】中文【中图分类】S792.27【相关文献】1.不同鲜食葡萄品种花粉生活力测定及贮藏特性研究 [J], 苏来曼·艾则孜;王勇;李玉玲;热比古丽·哈力克;郭平峰;骆强伟2.野牡丹花粉生活力与贮藏特性研究 [J], 江鸣涛;吴沙沙;卓孝康;唐淑玲;李淑娴;彭东辉3.刺槐花粉生活力测定方法及贮藏特性 [J], 王存纲;晋佳路;4.马蔺花粉生活力测定及贮藏特性研究 [J], 贾文庆;陈韵5.白花树花粉生活力检测方法与贮藏特性研究 [J], 吴君;李因刚;柳新红;何云核;石从广;朱光权因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

花粉贮藏及花粉生活力的测定

实验四花粉贮藏及花粉生活力的测定花期不遇给杂交工作造成困难，有的园林植物可通过调整花期来解决，有的则不得不进行花粉贮藏，或者从外地寄运花粉。

为了避免杂交工作失误，在使用外地寄来的花粉或经过一段时间贮藏的花粉之前，必须对花粉的生活力进行检测，以便对杂交结果进行分析与研究。

因此我们必须掌握花粉贮藏及花粉生活力测定的原理和技术。

（为什么贮藏花粉？）一、实验目的掌握花粉贮藏及花粉生命力鉴定的方法和原理。

二、实验材料油松、辣椒、一串红、矮牵牛、油茶、油菜等植物的花粉。

三、仪器及药品载玻片、盖玻片、解剖针、镊子、毛笔、干燥器、小指形管、标签、记号笔、显微镜、天平、烧杯、培养皿、滴管、玻璃棒、量筒、电炉、石棉网、冰箱；凡士林、无水氯化钙、蔗糖、琼脂、蒸馏水、硼酸、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、碘、碘化钾、氯化二苯基四氮唑（TTC ）。

四、实验原理花粉在低温（0 ～ 2 ℃）、干燥、黑暗等条件下代谢强度降低，花粉贮藏的原理就是要创造这样低代谢的环境条件，从而延长花粉的寿命。

花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉的多少（淀粉质花粉）通常与其生活力密切相关，因此可以利用花粉的形态观察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低（呼吸）、淀粉的含量以及在人工培养基上花粉管萌发的情况作为鉴定花粉生活力高低的标准。

鉴定花粉生活力的方法很多，概括起来主要有如下几种：1 ．直接测定法将待测花粉直接授粉，然后统计结实情况。

此法最准确，但需时较长，且实验结果易受气候条件的影响。

也可在授粉后隔一定时间切下柱头，在显微镜下压片检查花粉的萌发情况，根据萌发率的高低来鉴定花粉的生活力。

2 ．形态观察法直接在显微镜下观察花粉的形态，根据品种花粉的典型性（如具有正常的大小、形状、色泽等）判断花粉的生活力，即形态正常的花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力。

此法简便易行但准确性差，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。

3 ．染色观察法1 ）碘－碘化钾染色法：以碘－碘化钾溶液（0.3g 碘＋1.3g 碘化钾溶于100ml 蒸馏水）染色后于显微镜下观察，花粉被染成蓝色者表示具有生活力，花粉呈黄褐色者不具有生活力（不太准，比如刚死的花粉）。

植物花粉生活力测定技术

三、作业思考题
1．测定花粉生活力的意义有哪些？ 2．分析在实验中出现的问题，并找出原因所在。 3．将四种方法的结果分别记载于表中，并比较结果是否一致，如不一致，分析其原因。Fra bibliotek表 1－6
供试花粉收集测定第一视野
品种日期日期
第二视野
具有生活力第三视野
的花粉%
备注
直接鉴定法
TTC 染色法
发芽测定法形态鉴定法
1．外地采集来的花粉或杂交时父本花期早于母本时都要将花粉进行短暂贮藏； 2．自交或远缘杂交时，为了分析结实率或不结实原因时； 3．为了鉴定雄性不育系时； 4．了解某些杂交技术时，如测定花粉的刺激等作用，测定受精选择性等。因此，要根据各种植物花粉的特点，采取适当的保存方法。花粉生活力的测定方法很多，其中发芽试验手续较复杂，设备要求较高，需时也较长。为了简易而迅速的测定花粉生活力，也常采用化学染色的方法，但是此法也有缺点，就是染上色的花粉不一定都具有生活力，因为染上色的花粉中也包括了那些生活力弱不能正常发芽的花粉，所以一般常用而且较为可靠的方法仍然是采用花粉发芽实验。要是要求不严格对新采集的花粉还有一个较简便的鉴定方法——形态鉴定法。本实验目的是学习花粉生活力测定的方法，进而研究花粉寿命长短与环境条件的关系，以探求保存花粉的合适方法。
（2）TTC 溶液：称取 0.02～0.05 克（不同植物所用的量是不同的）的 TTC 溶解在 10ml 的磷酸缓冲液中，溶液配好后装入棕色滴瓶内，置入暗处，因氯化三苯基四唑有毒，操作时要注意安全。
2．操作步骤：（1）取少量花粉放在载玻片上，并在花粉上滴上 1～2 滴配制液，用玻璃棒混合后盖上盖玻片。（2）将载玻片置于恒温箱中（35～40℃）约 15～20min。（3）在显微镜（10×10）下观察：凡具有生活力的花粉呈红色，部分丧失生活力的呈淡红色，无色的是死的和不育的花粉粒。 3．观察和测定结果：每片观察 3 个视野，并统计具有生活力花粉的百分率，填入表 1 －6。（三）发芽测定法（培养基培养法） 1．培养基的配制常用的花粉发芽培养基有液体和固体两种。以前者最为简便。本实验选用前者。其有效成分主要有：蔗糖、硼酸、柠檬酸、赤霉素等。不同的植物所用的蔗糖培养液的浓度是不同的，配制 3～30%的蔗糖培养液：在 100ml 水中，加糖 3～30g，加热溶解后，再加 0.1%硼酸数滴。 2．制片取双凹载玻片，滴 2 滴培养液于槽中，用解剖针挑少许花粉均匀撒于培养液的表面（注意不必搅拌，以防花粉混于液体中因缺少空气而影响发芽，又因花粉深浅不一而在显微镜检查时因光线折射而不易观察。）处理好后，放于一下部添有少量蒸馏水、内有两根玻璃棒的培养皿中（注意不要使水没过载玻片），放到恒温为 25℃左右的恒温箱中或室内 2h。 3．镜检将放置 2h 后的载玻片取出，放在显微镜下观察三个视野，统计总花粉数与发芽的花粉数，然后计算比例，填入下面的表格中。（四）形态鉴定法对于新采集的花粉来说，还有一个更为简便的鉴定方法——形态鉴定法。将花粉用解剖针播于一般载玻片上，然后直接放到显微镜下观察，根据形态特征，判断花粉的生活力状况，一般来说，畸形、皱缩、小形化等均为无生活力花粉，而有光泽、饱满、具有本品种花粉典型特征等性状的均为有生活力花粉。将观察的结果统计一下填写下表格。

10个菊花品种花粉生活力测定和贮藏方法研究

10个菊花品种花粉生活力测定和贮藏方法研究作者：李亚军黄河牛雅静李霞来源：《福建农业学报》2020年第03期摘要：[目的]筛选菊花花粉离体培养生活力测定的最佳培养基配方，探究花粉贮藏的最适温度和耐贮藏时间，并挑选出较耐贮藏的菊花品种，为菊花新品种选育和种质资源保存提供参考。

[方法]以10个菊花品种盛花期花粉为试验材料，通过离体萌发测定法筛选菊花花粉萌发最适培养基，以该培养基测定花粉在4℃、-20℃和-80℃3种温度下进行60d或120d贮藏周期的生活力变化趋势观测，每隔15d取样检测1次;对贮藏120d的花粉进行授粉，统计结实率。

[结果]培养基为ME3+200g·L-1PEG4000+6g·L-1琼脂的处理，10种花粉都能萌发，且萌发率较其他培养基有显著差异;花粉贮藏60d后，所有花粉生活力均下降，其中‘5’‘52’‘64’和‘85’4个品种花粉生活力下降较缓慢;4种花粉贮藏120d后，在-80℃贮藏的花粉生活力较高，花粉授粉后均能够结实，且品种‘5’花粉授粉结实率最高，平均每个授粉花序结实8粒。

[结论]花粉萌发培养基、植物品种基因型、贮藏温度和贮藏时间都会影响菊花花粉生活力。

本文研究表明，菊花花粉最适贮藏温度为-80℃，品种‘5’花粉可贮藏120d保持较高的授粉结实率，在杂交育种中可优先考虑。

关键词：菊花，花粉生活力，贮藏，授粉中图分类号：S682.1+1文献标志码：A 文章编号：1008-0384（2020）03-0295-080 引言（研究意义）花粉是植物遗传信息的载体和交流工具，花粉贮藏是保存种质资源最简洁、高效的途径。

在杂交育种工作中，花粉贮藏能够解决亲本花期不遇和远距离杂交问题，打破杂交亲本的空间和时间隔离。

菊花（Chrysanthemum X morifolium Ramat.）是菊科菊属植物，在世界各地园艺造景中广泛应用，杂交育种是培育菊花新品种的主要手段。

因而探讨菊花花粉最佳贮藏条件对于解决菊花近缘属间杂交以及品种间杂交所面临的花期不遇或远距离杂交等问题具有重要意义，同时在使用贮存花粉之前，选择合适的方法对花粉生活力进行测定，可确保选择了最优花粉进行人工授粉而得到性状优良的后代。

金娃娃萱草花粉的贮藏以及生活力的测定

由于蔗糖浓度过高导致花粉粒快速脱水进而引起质壁分离导致花粉萌发受阻12j3结论与讨论通过试验我们得出1509l蔗糖是金娃娃萱草花粉萌发的适宜浓度花粉萌芽率随蔗糖浓度的增加而逐渐升高在浓度为1509l时花粉萌芽率达到最高
第1期
河北林业技
2019 年 3 月
金娃娃萱草花粉的贮藏以及生活力的测定
宋立功 1，孙晓光 2
1 材料与方法
1.1 材料试验材料为金娃娃萱草花粉，采摘于河北农业
收稿日期：2019-02-22 作者简介：宋立功（1968-），男，农学学士，高级工程师，主要从事农业生态园管理工作。
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第1期
河北林业科技
2019 年 3 月
大学西校区图书馆南楼南侧。于 2015 年 5 月 5 号上午 8：00~9：00 采取植株生长健壮，正处于盛花期含苞欲放的金娃娃萱草的花蕾，用硫酸纸包好。 1.2 方法 1.2.1 适宜花粉染色剂的筛选
当前，国内外对于萱草属花粉生命力相关研究报导并不多见。金娃娃萱草（Hemerocallis fulva ‘Golden Doll’）是萱草人工栽培的园艺品种[5]，具根状茎和肉质肥大的纺锤状块根，螺旋状聚伞花序，花 7~10 朵。花冠漏斗形，花径约 7~8cm，金黄色。花
期 5~11 月（6~7 月为盛花期，8~11 月为续花期），单花开放 5~7d。花期长，叶丛绿色期长，花径大，单花时间长，株型矮壮。且早春叶片萌发早，翠绿叶丛甚为美观。加之既耐热又抗寒，适应性强，栽培管理简单，适宜在城市公园、广场等绿地丛植点缀。金娃娃萱草由北美最早育出，非常适合在中国华北、华中、华东、东北等地园林绿地推广种植，所以对于其花粉生命力的研究具有很强的现实性。利用培养基发芽法筛选出了最适宜其花粉萌发的培养基浓度、最适宜的染色剂和染色时间，其目的是为金娃娃萱草的遗传育种工作和扩大萱草属植物资源提供理论依据。

实验三花粉的贮藏和生活力测定

实验三花粉的贮藏和生活力测定一、目的和要求在正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力，就是花粉的生活力。

花粉生活力测定在杂交工作中很重要，尤其亲本花期不相同需要从外地采集花粉作父本时，花粉要经过一段较长时间的贮藏运输过程，因此在杂交前应检验花粉的生活力，以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作的失败。

从生产上来看，在选择相互授粉的品种时，也应考虑到品种的花粉发芽能力，凡是花粉发育不全的品种，其花粉的发芽率都很低。

因此不适宜做授粉品种。

本实验的主要目的是掌握花粉贮藏和花粉生活力测定的方法。

二、花粉及用具材料：桃或苹果树的花粉。

用具：显微镜、天平、盖玻片、凹式载玻片、培养皿、干燥器、试管、滴瓶、蒸馏水、凡士林、蔗糖、氯化钙、琼脂、联苯胺、α-奈酚、碳酸钠、过氧化氢等。

三、方法（一）花粉贮藏从发育良好的植株上采下将开的花朵、取出花药放在纸上或培养皿中，放于干燥的室内，令其开裂，花药裂开后将花粉倒入小玻璃瓶或指形管中，口上塞以棉花或橡皮塞，贴上写有品种名称的标签。

再把花粉瓶放于干燥器内，使花粉在空气相对湿度较低的条件下（一般0～40%）保存；为了减少呼吸作用，可以放在低温（0～4℃）黑暗的地方贮藏。

（二）花粉生活力试验1、花粉发芽法人为的创造适合于花粉发芽的环境条件，以花粉发芽的情况来鉴定花粉生活力的强弱，此法的缺点是花粉发芽条件与实际不完全相符，所得的结果与实际有一定的差异，但操作方便，能测定出相对发芽率来。

（1）培养基的制作与接种一般采用5～20%蔗糖或葡萄糖加1～2%琼脂，溶于蒸馏水中。

加热煮沸即可，将已配制好的培养基保持在40℃温度即不凝固，用玻璃棒点一点培养基敷在载玻片的凹坑内，然后用接种针或解剖针沾以少量花粉。

轻轻振动，使花粉均匀地撒在培养基上，将载玻片放在垫有湿润棉花培养皿内或倒扣在培养皿上，并贴上标签写明处理、种类、播种日期，将培养皿放于20℃的恒温箱中培养。

（2）观察记数在显微镜下隔一定时间检查一次（花粉发芽快的经过几个小时即可观察到已经发芽，慢的需24小时以上）若发现花粉已发芽时，便按一定方向，就同一视野中用记数器记录花粉粒总数和发芽数，观察记录3～5个显微镜视野的数字，求其平均数，即得出花粉发芽百分率。

花粉的保存及生活力测定方法的探讨

花粉的保存及生活力测定方法的探讨
刘芳;周蕴薇
【期刊名称】《南方农业》
【年(卷),期】2007(001)003
【摘要】花粉在有性繁殖中发挥着重要作用,采集和贮存的花粉,在使用之前必须进行生活力的鉴定.本文介绍了花粉的采集、保存及花粉生活力的测定方法,并对各种方法的优缺点进行了讨论.
【总页数】2页(P70-71)
【作者】刘芳;周蕴薇
【作者单位】东北林业大学园林学院,黑龙江,哈尔滨,150040;东北林业大学园林学院,黑龙江,哈尔滨,150040
【正文语种】中文
【中图分类】S6
【相关文献】
1.黄帝陵古侧柏花粉生活力及其保存方法的研究
2.玉蝉花花粉生活力检测和超低温保存研究
3.红花刺槐花粉生活力测定及保存方法
4.番茄花粉保存与生活力测定
5.茄子花粉的离体萌发和生活力保存研究
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(园艺植物育种学复习题)

名词解释多倍体育种：根据育种目标要求，采用染色体加倍的方法选育作物新品种的途径。

诱变育种：是指人为地采用各种物理的或化学的手段，诱发有机体产生遗传物质的变异，经过选择和鉴定，培育和创造新品种的育种途径。

电离辐射：辐射通过有机体时，都能直接或间接地产生电离现象，故称为电离辐射。

非电离辐射：紫外线辐射的能量不足以使原子电离，只能产生激发作用，称非电离辐射。

积分流量：是指每㎝2截面积上所通过的中子总数目（中子数/㎝2）。

化学诱变：应用有关化学物质诱发基因和染色体变异。

物理诱变（也叫辐射诱变）：利用辐射，诱发基因突变和染色体变异。

单倍体植物：细胞内含有该物种配子染色体数目的植物多倍体植物：细胞内含有三个以上染色体组的植物。

外植体：在离体条件下，分离下来进行培养的部分。

植板率：每个平板接种细胞总数中形成细胞团的百分率。

植物原生质体：是指除去细胞壁的由质膜包裹着的具有生活力的裸细胞。

分子育种：运用分子生物学技术，通过直接手段或间接手段选育新品种的途径。

分子标记：是基于DNA水平多态性的遗传标记，它通过检测基因组的一批识别位点来估测基因组的变异性或多样性。

品种审定：是指对新选育或新引进的品种由权威性的专门机构对其进行审查，并作出能否推广和在什么范围内推广的决定。

品种混杂退化：品种在生产栽培过程中，纯度降低、种性发生不良变异，致使失去品种原有的形态特点，抗逆性和适应性减退，产量下降和品质劣化等现象。

育种家种子：育种家育成的遗传性状稳定的品种或亲本种子的最初一批种子，用于进一步繁殖原种种子。

原种：由育种家种子繁殖的第一代至第三代种子，或按原种生产技术规程生产的达到原种质量标准的种子。

抗逆育种：采用有性杂交、系统选择及基因工程等方法培育抗逆性强的新品种的方法。

耐盐性：是指植物在盐胁迫下维持生长、形成经济产量或完成生活史的能力。

热激蛋白：在高于植物正常生长温度8--12℃的温度下，植物体内会合成一些新蛋白质，这种蛋白质称之为热激蛋白。

一种桉树花粉的贮藏方法及其贮藏花粉的生活力测定方法[发明专利]

专利名称：一种桉树花粉的贮藏方法及其贮藏花粉的生活力测定方法
专利类型：发明专利
发明人：陆钊华,徐建民,吴世军,李光友,张霞
申请号：CN201610136982.6
申请日：20160310
公开号：CN105766893A
公开日：
20160720
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种桉树花粉的贮藏方法，包括以下步骤：(1)花粉的收集和干燥；(2)低温贮藏。

贮藏花粉的生活力测定方法，用于检验贮藏前、后的花粉活力，包括以下步骤：(1)配制培养基：20％蔗糖+6％琼脂+100mg/L硼酸；a、硼酸母液称取0.1g硼酸，水溶解后定容至100ml；b、培养基的配制称取20g蔗糖，6克琼脂加10ml硼酸母液，再加水定容至100ml，备用；(2)贮藏花粉的预处理；(3)培养；(4)镜检观察。

本发明与现有技术相比的优点是：本发明可使桉树花粉的保活期由原来的3?5天延长至5年，还可达30％的生活力。

可以在任何季节提供桉树母树授粉需要的花粉。

解决桉树杂交育种中的亲本树花期不遇等关键技术问题。

本发明操作方法简便，适合桉树花粉贮藏应用。

申请人：中国林业科学研究院热带林业研究所
地址：510520 广东省广州市天河区广汕一路682号中国林科院热林所
国籍：CN
代理机构：北京方圆嘉禾知识产权代理有限公司
代理人：董芙蓉
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花粉贮藏与生活力检测

（二）花粉生活力试验

1、花粉萌发法正常的成熟花粉粒具有较强的活力，人为的创造适合于花粉萌发的环境条件，以花粉萌发的情况来鉴定花粉生活力的强弱，此法的缺点是花粉萌发条件与实际不完全相符，所得的结果与实际有一定的差异，但操作方便，能测定出相对发芽率来。
（1）培养基的制作与接种用胶头滴管滴一滴培养基敷在载玻片上，然后用接种针沾以少量花粉。轻轻振动，使花粉均匀地撒在培养基上，将载玻片放在垫有湿润滤纸培养皿内，外覆保鲜膜。并贴上标签写明处理、种类、播种日期，将培养皿放于25℃的恒温箱中培养。（2）观察记数在显微镜下隔一定时间检查一次（花粉发芽快的经过几个小时即可观察到已经萌发，慢的需24小时以上）若发现花粉已萌发时，便按一定方向，就同一视野中记录花粉粒总数和发芽数，观察记录 3～5个显微镜视野的数字，求其平均数，即得出花粉发芽百分率。花粉发芽的标准，以花粉管伸长超出花粉直径为准。
果树花粉的贮藏和生活力的测定
一、实验目的
1.了解花粉的主要贮藏方法。
2.学习并掌握花粉生活力与发芽率的测定方法。
Байду номын сангаас
二、材料与用具
1.材料：梨树花粉 2. 仪器：显微镜、盖玻片、载玻片、解剖针、培养皿(托盘)、干燥器、指形管、滴瓶、天平、胶头滴管、培养箱等试剂：蒸馏水、蔗糖、琼脂、硼酸、联苯胺、α-奈酚、碳酸钠、过氧化氢、酒精等。
四、思考题
1.上述方法是否适合于所有植物花粉活力的测定？
2.哪一种方法更能准确反映花粉的活力？
作业
1、绘出花粉发芽前后形态图。
2、统计几种测定方法的花粉发芽率。 3、将花粉发芽法与染色法测定的结果作一比
较，分析其差异原因。哪种方法较优越。

不同园艺植物花粉离体培养生活力的测定分析

【器材与用具】显微镜、载玻片、镊子、滴瓶。【试剂】1%醋酸洋红:将洋红粉末1g倒入100mL45%醋酸溶液中,边煮边搅拌,煮沸(沸腾时间不超过30s),冷却后过滤,即可使用。也可再加入1%～2%铁明矾水溶液5-10滴,至此液变为暗红色而
不发生沉淀为止。
【方法】 (1)取少许花粉于载玻片上,加1～2滴醋酸洋红溶液,盖
按要求撒好后用记号笔在标签上做标记（时间、品种、组别）放在25℃培养箱内进行培养，观察花粉管的萌发伸长。
（6）观察
培养1h，2h，3h，5h后进行显微镜观察,观察萌发的个数，每个培养皿观察3 个重复，算出平均数，然后计算不同园艺植物不同贮藏条件下离体培养的花粉萌发率。
萌发率（%）=（已萌发的花粉粒数目/花粉粒总数）*100%
加1~2滴0.5%TTC溶液，搅匀后盖上盖玻片，置35℃恒温箱中， 10~15min后镜检，凡被染为红色的花粉活力强，淡红次之，无色者为没有活力或不育花粉。观察2~3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。
3.醋酸洋红法
【原理】正常花粉呈圆球形,物质积累较多,对醋酸洋红的吸附作用与亲和力强,通常易被染成深红色,发育不良的花粉常呈畸形, 不积累物质或积累很少,用醋酸洋红染色呈淡红色或无色。
花粉贮藏的原理在于创造一定的条件，使花粉降低代谢强度，延长花粉的寿命。花粉寿命的长短，因植物种类不同而异。在自然条件下，大多数植物的花粉从花药散出后只能存活几小时，几天或几个星期。
花粉寿命的长短除了上述因种遗传性的差异以外，还与温度、湿度有密切的关系。通常高温高湿下花粉呼吸旺盛，会很快失去生命力，但在极干燥的条件下，花粉失去水分，也不利于保存。
上盖玻片; (2)将制片放在显微镜(16×10)下观察3～5片,每片选择

不同园艺植物花粉离体培养生活力的测定分析

【方法】采集植物的花粉，取少许放在干洁的载玻片上，
含淀粉或积累淀粉较少，I2-KI溶液染色呈黄褐色。因此，可用
I2-KI溶液染色来测定花粉活力。
【器材与用具】显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。【试剂】 I2-KI溶液
【步骤】采集成熟花药，取一花药于载玻片上，加一滴蒸
馏水，用镊子将花药捣碎，使花粉粒释放，再加1～2滴I2-KI
力，但在极干燥的条件下，花粉失去水分，
也不利于保存。

亚达姆斯试验发现苹果花粉在干燥状态下，可保存3个月；如放在2～8℃，湿度80％的条件下，经过5个星期即失去生活力。维霍夫试验中，丁香的花粉贮藏在干燥器中，15d以后发芽率降到50％；至20d时，仅有个别花粉发芽；到30d时，即全部死亡。
（1）采集花朵
选择正常的无病虫害的园艺植株上含苞待放正常的花朵，采集后带回实验室剔除过大及过小的以及一些叶子和杂质。
（2）收集花药及散粉
用镊子取出花药（每个园艺植物取20个花蕾的花药）置于培养皿（纸盒-花粉量多）中，写上标签，进行必要的加温处理（培养箱温度25℃ 使其散粉。
（3）花粉的储藏
实习三
不同园艺植物花粉离体培养生活力的测定
一、实验目的
1.掌握园艺植物的花粉收集、并掌握利用不同方法进行花粉生活力的测定。 2.观察花粉在离体条件下的萌发情况，认识花粉萌发形成花粉管的外形和伸长过程以及萌发的长度,为理解园艺植物的生殖过程及杂交育种奠定基础。
二、实验原理
正常的成熟花粉粒具有较强的活力，在适宜的培养条件下便能萌发和生长，在显微镜下可直接观察计算其萌发率，以确定其活力。
溶液，盖上盖玻片，在显微镜下观察。凡是被染成蓝色的为含有淀粉的活力较强的花粉粒，呈黄褐色的为发育不良的花粉粒。观察2～3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的育性。】具有活力的花粉呼吸作用较强，其产生的NADH2或 NADPH2可将无色的TTC（2,3,5-氯化三苯基四氮唑）还原成

园艺植物花粉的贮藏和生活力的测定(精)

2.培养法
（1）原理
正常的成熟花粉粒具有较强的活力，在适宜的培养条件下便能萌发和生长，在显微镜下可直接观察计算其萌发率，以确定其活力。
（2）方法步骤
①将培养基熔化后，用玻棒蘸少许，涂布在凹玻片上，放入垫有湿润试纸的培养皿中，保湿备用。 ②在25℃左右的恒温箱中培养，5~10min后在显微镜下检查5个视野，统计其萌发率。
6.置于干燥器内（干燥器底部放入适量的碳酸钙或氯化钙）
7.将干燥器放于冰箱内（温度接近0℃而又是黑暗的条件）贮藏备用。
（二）花粉生活力的测定 1.染色法—I-KI
（1）实验原理：碘遇淀粉变兰色，正常的花粉淀粉含量高而不正常的花粉含量少，正常的染成兰色颜色较深；生活力弱的染成淡兰色；无生活力的染色呈黄褐色（2）方法步骤：在载玻片上放有少量测定花粉，然后在花粉上滴一滴染色液，用玻棒将之混匀后，在显微镜下镜检，每片观察5个视野，统计出具有生活力的花粉的百分率
2-2南瓜的雄花和雌花
三、方法和步骤
（一）花粉的收集和贮藏 1.收集花粉的植株必须是健壮，并具有标准的特征特性。 2.收集前一、二日将开放的花蕾（或花序）进行套袋，以免其他花粉混入。
3.采集时应该选择将开放的花朵。
4.用镊子（镊子宜先用酒精浸洗，以免不同的花粉混入）将花药取下。
花粉
5.装入已消毒而且干燥的花粉瓶内
在载玻片上放有少量测定花粉然后在花粉上滴一滴染色液用玻棒将之混匀后在显微镜下镜检每片观察5个视野统计出具有生活力的花粉的百分率正常的成熟花粉粒具有较强的活力在适宜的培养条件下便能萌发和生长在显微镜下可直接观察计算其萌发率以确定其活力
实验二
园艺植物花粉的贮藏和生活力的测定
一、实验目的

植物花粉的贮藏与花粉生活力测定

干燥的花粉首先筛去杂质分装到指形管或小玻璃瓶中，用棉花或双层纱布封口，装的数量以容量的1/5或更少为宜，然后在瓶外贴上标签，注明花粉的植物种类和贮藏日期。
为保持花粉的生活力，最好将装好的花粉放入冰箱内或放入装有无水氯化钙的干燥器中，如没有以上设备，也可把装有花粉的小瓶放入盛有石灰的箱子里，保持湿度25%以下，放在阴凉、干燥黑暗处，这样可短时期内贮藏。
原理：花粉在贮藏期间的稳定性与花粉壁外层的性质和贮藏期花粉原生质的代谢有关。贮藏期内花粉可溶性糖类和有机物消耗少，则能在较长时期内保持生活力。影响花粉生活力的外界因子主要是相对湿度、温度和气体环境及花粉本身的含水量。在贮藏花粉时需要创造一个干燥、低温、低氧的环境，使得花粉处于几乎不活动或休眠的状态。
六、花粉生活力的测定
直接测定方法
1. 将花粉直接授在同种植株的雌蕊柱头上，并做好隔离工作，然后观察结实情况；如发育正常收到种子，即证明花粉有生活力。
2. 花粉在柱头上发芽（1）将花粉直接授在清洁的同种植株的雌蕊柱头上，并做好隔离工作，隔1至3天采集已授过花粉的柱头，用FAA固定液或60℃温水中固定15分钟以上。（2）染色制片将固定的花柱取出，用1%的苯胺兰水溶液（将1克苯胺兰溶于100毫升蒸馏水中）染色24小时，把花柱撕开，放在载玻片上，盖上盖玻片，用大拇指轻压、镜检、观察、若花粉有生活力，即可见染成蓝色的花粉管深入柱头组织，若花粉无生活力则看不到花粉管深入柱头组织现象。
间接测定法（此法是借人为创造条件使得花粉发芽来鉴别是否有生活力）
1. 培养基法 100毫升蒸馏水加入1至2克琼脂加热溶解，在加入葡萄糖或蔗糖制成5%、10%、15%、20%浓度的培养基趁热分别倒入培养皿中，冷凝后呈固体培养基，然后用解剖针粘取少量的花粉，均匀撒在培养基上。将播种好的培养基放在20~25℃恒温箱中，24小时或更长一点时间即可镜检观察其发芽情况。

百合花粉生活力测定和贮藏方法研究

百合花粉生活力测定和贮藏方法研究
赵兴华;张道旭;印东生;李丹;张艳玲
【期刊名称】《北方园艺》
【年(卷),期】2009(000)002
【摘要】采用4种常用的花粉活力测定方法,对百合花粉生活力进行测定.结果表明:以蔗糖培养基培养法效果最好,并能直接观察到花粉管发育状况;百合不同品种间花粉生活力存在极显著差异,在所测定的68个品种中以麝香系百合的花粉活力为最高;卷丹花粉活力最低,几乎为零.在所研究的6种花粉贮藏方法中,以低温(5℃)干燥法最有利于保持百合花粉活力.
【总页数】4页(P172-175)
【作者】赵兴华;张道旭;印东生;李丹;张艳玲
【作者单位】辽宁省农业科学院,花卉研究所,辽宁,沈阳,110161;辽宁省农业科学院,花卉研究所,辽宁,沈阳,110161;辽宁省农业科学院,花卉研究所,辽宁,沈阳,110161;辽宁省农业科学院,花卉研究所,辽宁,沈阳,110161;辽宁省农业科学院蔬菜研究所,辽宁,沈阳,110161
【正文语种】中文
【中图分类】S682.2+9;S603.6
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大花三色堇花粉生活力测定及贮藏方法

大花三色堇花粉生活力测定及贮藏方法穆金艳;杜晓华;贾文庆;刘会超;黄伶俐【期刊名称】《西北农业学报》【年(卷),期】2013(022)009【摘要】为解决大花三色堇杂交育种过程中的时空障碍,提高育种效率,以纯黄大花三色堇品种EYO花粉为试材,采用离体萌发法、碘-碘化钾染色法、醋酸洋红染色法和TTC(氯化三苯基四氮唑)染色法对新鲜花粉生活力进行测定,并研究不同贮藏条件对花粉萌发的影响.结果表明:培养基中添加蔗糖和硼酸对花粉的萌发有促进作用,且二者之间具有互作效应,当培养基中添加200 g/L蔗糖+150 mg/L硼酸,萌发率较高,达35.04％.与离体萌发法相比较,碘-碘化钾染色法、醋酸洋红染色法测定的花粉活力值偏高,分别为50.80％、71.41％,TTC染色法不能使大花三色堇花粉着色.花粉在不同贮藏条件下,生活力变化存在显著差异,常温贮藏3d后花粉活力降为零,而4℃、-80℃不干燥贮藏26 d后花粉仍有活力,萌发率分别为6.26％和10.31％.【总页数】5页(P158-162)【作者】穆金艳;杜晓华;贾文庆;刘会超;黄伶俐【作者单位】河南科技学院园艺园林学院,河南新乡 453003;河南科技学院园艺园林学院,河南新乡 453003;河南科技学院园艺园林学院,河南新乡 453003;河南科技学院园艺园林学院,河南新乡 453003;河南科技学院园艺园林学院,河南新乡453003【正文语种】中文【中图分类】S681.9【相关文献】1.万载龙牙百合花粉生活力测定及贮藏方法研究 [J], 李润根;却志群;刘芳玲;吴学渊;娄小翠2.三色堇花粉生活力最佳测定方法的筛选 [J], 王孝鹏;孙晓梅3.不同现代月季品种的花粉生活力测定及贮藏方法比较 [J], 王红梅;张邱艳;张操4.10个菊花品种花粉生活力测定和贮藏方法研究 [J], 李亚军; 黄河; 牛雅静; 李霞5.牡丹花粉生活力测定方法及其贮藏研究进展 [J], 李婷;乔琦;李剑峰;郭幸飞;侯小改因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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