消毒剂消毒效果确认方案

消毒剂消毒效果确认方案

TABLE OF CONTENTS 目录

1 PURPOSE AND SCOPE 目的和围 (4)

2 OVERVIEW 概述 (4)

3 REGULATIONS, STANDARDS & REFERENCES 法规、标准和参考文献 (4)

4 RESPONSIBILITIES AND TRAINING 职责和培训 (4)

5 PREPARATION 验证准备 (5)

6 VALIDATION TESTS 验证测试 (6)

7 DEVIATIONS & CHANGES 偏差和变更 (10)

8 ANNEXES 附件 (11)

9 VERSION 修订记载 (11)

1目的和围

1.1目的

本方案的目的是为了确认各洁净级别的操作间及设备外表面按照规定的消毒程序消毒能够达

到消毒、防止污染的目的，并在消毒剂有效期能确保其消毒效力能符合要求。

1.2围

本验证方案适用于QC洁净区的墙面、天花板、门窗、机器设备、仪器、操作台、桌椅等表

面以及操作人员双手（手套）所用的消毒。

本文件合并了方案和记录，当验证完成后，本文件将作为确认报告的附件。

2概述

2.1本公司拟定用于仪器设备和洁净区表面消毒的消毒剂有：XXXXXX。本次验证方案将选用以上X

种消毒剂分别进行验证试验。作用对象一样的消毒剂每月轮换使用，避免表面微生物产生耐

药菌株。为了确认消毒剂的消毒效力我们通过定量悬液试验和定量载体试验对消毒效果进行

确认。

2.2洁净区设施表面材质有彩钢板、不锈钢和玻璃三种，故定量载体试验选用彩钢板载片、不锈

钢载片和玻璃裁片模拟洁净区设施表面进行验证试验。

3法规、标准和参考文献

3.1中华人民国国家标准消毒与灭菌效果的评价方法与标准

3.2中华人民国药典 2015年版第四部

4职责和培训

4.1职责

4.2Training 培训

上表中提及的员工都会参与验证实施，并且会在验证实施前经过培训。培训记录作为附件附

入本方案。

5验证准备

5.1仪器/设备

本次验证需要使用到的仪器/设备及其信息如下：

5.2标准物质、试药和试液

5.3菌种

微生物检验方法验证方案适用。

5.4培养基

6验证测试

6.1通用项目

6.1.1培养基：按QS-QC-GAM-014《培养基配制标准操作规程》和QS-QC-GAM-013《培养基适用性检

查标准操作规程》要求准备相应的培养基，培养基适用性检查记录作为附件附入本方案。

6.1.2消毒液：XXXXX

6.1.3稀释剂为：PH

7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液。中和剂为：0.1%卵磷脂+0.1%吐温80+0.1%蛋白胨缓

冲液

6.1.4菌液准备

6.1.4.1菌液的制备：见XXXX《菌种传代、保藏、使用和灭活标准操作规程》。

6.1.4.2菌液计数确认：将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌的新鲜培养物用PH

7.0氯化

钠-蛋白胨缓冲液按10倍梯度稀释成10-6、10-7、10-8三个浓度。枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的

新鲜培养物用PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液按10倍梯度稀释成10-5、10-6、10-7三个浓度。

取黑曲霉新鲜培养物加入3~5ml含0.05%（ml/ml）吐温80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子

洗脱，然后用带纱布的移液管吸出孢子悬液至无菌试管。再用PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液按

10倍梯度稀释成10-5、10-6、10-7三个浓度。每种菌各个浓度的菌液分别取1ml至平皿中，同

法平行制备两个平皿。金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的平皿

倾注15~20ml 45℃以下的胰酪大豆胨琼脂培养基。白色念珠菌、黑曲霉的平皿倾注15~20ml 45℃

以下的沙氏葡萄糖琼脂培养基。

6.1.4.3胰酪大豆胨琼脂培养基平皿于30~35℃生化培养箱中培养，培养时间不超过3天，每天至少计

数一次。沙氏葡萄糖琼脂培养基平皿于20~25℃生化培养箱中培养，培养时间不超过5天，每

天至少计数一次。根据各个浓度菌液的计数情况推算出1ml浓菌悬液的含菌数。记录见附件

一《菌液含菌数计数记录》

6.1.5中和剂确认试验

6.1.5.1根据菌液计数所得数据，将新鲜的浓菌液用PH

7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液按10倍梯度稀释成

5*105~5*106CFU/ml的工作菌液。

6.1.5.2将配制好的消毒液用不同的工作菌液进行以下分组试验。

具体操作：

第一组：取消毒剂4.5ml+工作菌液0.5ml ，混匀作用10min 后，取混合液A0.5ml+

稀释液4.5ml ，混匀作用10min ，取混合液B 或浓度为10-1

的混合液B0.5ml 注皿，各平行制备2皿。

第二组：取消毒剂4.5ml+工作菌液0.5ml ，混匀作用10min 后，取混合液A0.5ml+中和剂4.5ml ，混匀作用10min ，取混合液B 或浓度为10-1的混合液B0.5ml 注皿，各平行制备2皿。

第三组：取中和剂4.5ml+工作菌液0.5ml ，混匀作用10min 后，取混合液A0.5ml+稀释液4.5ml ，混匀作用10min ，用稀释剂进行10倍系列稀释成10-2

、10-3

。取相应稀释级0.5ml 注皿，各平行制备2皿。

第四组：取消毒剂和中和剂1:1的混合液4.5ml+工作菌液0.5ml ，混匀作用10min ，取混合液A0.5ml+稀释液4.5ml ，混匀作用10min 后，用稀释剂进行10倍系列稀释成10-2

、10-3

。取相应稀释级0.5ml 注皿，各平行制备2皿。

第五组：取稀释液4.5ml+工作菌液0.5ml ，混匀作用10min ，取混合液A0.5ml+稀释液4.5ml ，混匀作用10min 后，用稀释剂进行10倍系列稀释成10-2、10-3。取相应稀释级0.5ml 注皿，各平行制备2皿。

各组高浓度平皿编号为：1＃、2＃，低浓度平皿编号为：3＃、4＃。

第六组：分别取稀释液和中和剂各1.0ml 注入无菌平皿中，胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基各制备2皿。

金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌、铜绿假单胞菌用胰酪大豆胨琼脂培养基，倒置30～35℃培养3天计数；白色念珠菌、黑曲霉用沙氏葡萄糖琼脂培养基，倒置20～25℃培养5天计数计数，逐日观察。

6.1.5.3

结果判定

试验结果应符合以下全部条件，判断所选中和剂合格：①第1组无菌生长，或仅有少数试验菌菌落生长。②第2组菌落数比第1组菌落数多，但明显少于第3、4、5组菌落数。③第3、4、5组有相似菌落数生长，其每组间菌落数误差率不超过15%。计算公式如下： 6.1.5.4 记录见附件二《中和剂确认记录》

6.2

消毒剂消毒效果确认