分子生物学实验课PPT曾令江XXX1116
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分子生物学实验技术ppt课件
质粒转化大肠杆菌的过程
感受态
非定向克隆 +
或
定向克隆
克隆的片段只能按
+ 特定方向连接基因组DNA的构建基因组DNA的类型
质粒（﹤10kb)噬菌体质经双向电泳之后，用蛋白质水解酶裂解成肽段，可 用于质谱分析。通过电离源将蛋白质分子转化为气相离子， 然后用质谱分析仪的电场、磁场将具有特定质量与电荷比 值（M/Z值）的蛋白离子分离开，经过离子检测器收集分离 的离子，确定离子的M/Z值，分析鉴定未知蛋白质。
两种离子发生方法： 基质辅助激光解吸附/离子化（MALDI)、电喷雾离子化 （ESI)
噬菌体展示技术
噬菌体展示技术是将编码目的蛋白的基 因与编码噬菌体表面蛋白的基因融合后， 以融合蛋白的形式表达在噬菌体表面的一 种技术。
将不同蛋白的cDNA插入噬菌体载体进 行表达，得到表达不同蛋白的一定规模的 噬菌体展示库 。
将“诱饵”蛋白固定化，基于“诱饵”蛋白与 “猎物”蛋白之间的相互作用，可将展示库 中与固定化的“诱饵”蛋白有相互作用的“猎 物”蛋白分离纯化出来，再对“猎物”蛋白进 行质谱鉴定。
四、蛋白组学研究
蛋白质分离 蛋白质分析 蛋白质相互作用的研究方法： 酵母双杂交技术，噬菌体展示技术，表
面等离子共振技术，荧光共振能量转移 技术，蛋白质微阵列芯片技术，免疫共 沉淀技术，pull-down技术
蛋白质分离
最常用的蛋白质分离技术是20世纪70年代发明的双 向电泳（2-DE），是根据蛋白质的等电点不同在pH 梯度介质中进行第一次分离，即等点聚焦（IEF)，然 后根据蛋白质分子量的不同进行第二次分离，即 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。
重叠延伸PCR原理
重叠延伸PCR技术由于使用了具有互补末端的引物， 使PCR 产物形成了重叠链，从而在随后的扩增反应中通过 重叠链的延伸，将不同来源的扩增片段重叠拼接起来。可 简单迅速的将两个DNA片段连在一起，用于嵌合基因的构 建
分子生物学PPT课件
04 蛋白质的结构与功能
蛋白质的化学组成与结构
蛋白质的基本组成单 位
氨基酸，具有氨基和羧
基的有机化合物。
氨基酸的种类
20种常见氨基酸，根据 侧链R基的不同进行分 类。
蛋白质的一级结构
氨基酸的线性排列顺序 ，包括肽键和二硫键的 连接。
蛋白质的高级结构
二级结构（α-螺旋、β折叠等）、三级结构和 四级结构。
01
其他RNA
如miRNA、snRNA等，在基因表达调控、 RNA加工等方面发挥作用。
04
03
RNA的合成与加工
01
02
03
转录
以DNA为模板，通过RNA 聚合酶的作用，合成RNA 的过程。
加工
新合成的RNA需要经过一 系列加工过程，如剪接、 修饰等，才能成为成熟的 RNA分子。
转录后调控
通过RNA干扰、RNA编辑 等方式对RNA进行转录后 水平的调控，影响基因的 表达。
03
DNA连接酶的种类和应用
04
重组DNA分子的构建和筛选
PCR技术及其应用
01
PCR技术的原理及步骤
02
03
04
引物的设计与优化
PCR反应体系的组成及优化
PCR技术的应用举例
基因克隆与基因工程
基因克隆的定义和原理 基因表达载体的构建和选择
基因工程的基本步骤 基因工程的应用举例
分子生物学在医学、农业等领域的应用
医学领域的应用
基因诊断、基因治疗、药物研 发等
工业领域的应用
酶工程、发酵工程、生物制药 等
农业领域的应用
转基因作物、基因编辑育种、 农业生物技术等
环境领域的应用
环境监测、污染治理、生态修 复等
2024版年度现代分子生物学(全套课件180P)ppt课件
2024/2/3
链的延伸
RNA聚合酶沿DNA模板 移动，催化RNA链的延
伸。
转录终止
RNA聚合酶在特定信号 作用下停止转录，释放
RNA链。
16
转录后修饰
包括5’端加帽、3’端 加尾等修饰过程。
RNA的加工与成熟
剪接
去除内含子，连接外显子，形成成熟的 mRNA。
编辑
对某些核苷酸进行修饰或替换，改变RNA的 编码信息。
DNA复制和修复过程中的突变 和重组为生物进化提供了原材
料。
疾病发生与发展
DNA复制和修复异常可能导致 基因突变和基因组不稳定，进
而引发疾病的发生和发展。
2024/2/3
14
04
RNA转录与加工
2024/2/3
15
RNA转录的过程与机制
转录起始
RNA聚合酶与DNA模板 结合，形成转录起始复
合物。
疗。
基因治疗
通过导入正常基因或修复突变基 因，恢复细胞功能，达到治疗疾
病的目的。
精准医疗
结合基因诊断与治疗，为患者提 供定制化的治疗方案，提高治疗
效果和生活质量。
2024/2/3
26
07
分子生物学技术与应用
2024/2A重组技术
利用限制性内切酶、DNA连接酶等工具酶，实现 DNA片段的切割、连接和重组，构建重组DNA分子。
8
基因组的组成与特点
基因组的定义
基因组是一个生物体所有 基因的总和，包括核基因 组和细胞器基因组。
2024/2/3
基因组的组成
基因组由DNA序列、RNA 序列和蛋白质序列等组成， 其中DNA序列是主要的遗 传物质。
基因组的特点
链的延伸
RNA聚合酶沿DNA模板 移动，催化RNA链的延
伸。
转录终止
RNA聚合酶在特定信号 作用下停止转录，释放
RNA链。
16
转录后修饰
包括5’端加帽、3’端 加尾等修饰过程。
RNA的加工与成熟
剪接
去除内含子，连接外显子，形成成熟的 mRNA。
编辑
对某些核苷酸进行修饰或替换，改变RNA的 编码信息。
DNA复制和修复过程中的突变 和重组为生物进化提供了原材
料。
疾病发生与发展
DNA复制和修复异常可能导致 基因突变和基因组不稳定，进
而引发疾病的发生和发展。
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04
RNA转录与加工
2024/2/3
15
RNA转录的过程与机制
转录起始
RNA聚合酶与DNA模板 结合，形成转录起始复
合物。
疗。
基因治疗
通过导入正常基因或修复突变基 因，恢复细胞功能，达到治疗疾
病的目的。
精准医疗
结合基因诊断与治疗，为患者提 供定制化的治疗方案，提高治疗
效果和生活质量。
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07
分子生物学技术与应用
2024/2A重组技术
利用限制性内切酶、DNA连接酶等工具酶，实现 DNA片段的切割、连接和重组，构建重组DNA分子。
8
基因组的组成与特点
基因组的定义
基因组是一个生物体所有 基因的总和，包括核基因 组和细胞器基因组。
2024/2/3
基因组的组成
基因组由DNA序列、RNA 序列和蛋白质序列等组成， 其中DNA序列是主要的遗 传物质。
基因组的特点
分子生物学全套课件96P课件精品文档
分子生物学
Molecular Biology
Presumed that you have learned “Molecular Biology” before your receiving the Bachelor’s Degree of Sciences;
Designed for helping you to become associated with the most researching interests (areas) of our university;
+
lucifCAAAACCCC
luciferase
Light + oxylufiferin
AC G TG
Pyrograph
Recorded by computer
dNTP added in serial
Sequencing by ligation: Applied Biosystems
polony
20 microns
Position overlapped one base one image color order = base adding order = sequence
Reversible terminators: Illumina
Bridge amplification of DNA fragments is randomly distributed across eight channels of a glass slide, to which high-density forward and reverse primers are covalently attached. The solid-phase amplification produces ~80 million molecule clusters (MCs) from individual ssDNA templates. A primer is annealed to the free ends of templates in each MC. The polymerase extends and then terminates DNA synthesis from a set of four reversible terminators (RTs), each labeled with a different dye. Unincorporated RTs are washed away, base identification is performed by four-colour imaging, and blocking and dye groups are removed by chemical cleavage to permit the next cycle. Colour images for a given MC provide reads of ~45 bases. Substitutions are the most common error type.
Molecular Biology
Presumed that you have learned “Molecular Biology” before your receiving the Bachelor’s Degree of Sciences;
Designed for helping you to become associated with the most researching interests (areas) of our university;
+
lucifCAAAACCCC
luciferase
Light + oxylufiferin
AC G TG
Pyrograph
Recorded by computer
dNTP added in serial
Sequencing by ligation: Applied Biosystems
polony
20 microns
Position overlapped one base one image color order = base adding order = sequence
Reversible terminators: Illumina
Bridge amplification of DNA fragments is randomly distributed across eight channels of a glass slide, to which high-density forward and reverse primers are covalently attached. The solid-phase amplification produces ~80 million molecule clusters (MCs) from individual ssDNA templates. A primer is annealed to the free ends of templates in each MC. The polymerase extends and then terminates DNA synthesis from a set of four reversible terminators (RTs), each labeled with a different dye. Unincorporated RTs are washed away, base identification is performed by four-colour imaging, and blocking and dye groups are removed by chemical cleavage to permit the next cycle. Colour images for a given MC provide reads of ~45 bases. Substitutions are the most common error type.
分子生物学实验 ppt课件
分 子 生 物 学 实 验下
ppt课件
1
实验流程一
ppt课件
2
实验安排
准备材料：重组工程菌目标蛋白的表达 第1次 菌体超声破壁、离心、包涵体复性、装 离子交换柱 第2次 测酶活、定蛋白、 离子交换层析 第3次 亲和柱层析，并对收集样 品进行测活、定蛋白等 第4次 对分离纯化各样品进行蛋白电泳分析 第5次 Western blotting， 绘出分离纯化表 ppt 绘制包涵体复性曲线 课件
ppt课件 23
B瓶 1N NaCl 100ml
A瓶 0N NaCl 100ml
ppt课件
24
操作要点
1)在梯度洗脱仪中的洗脱瓶A（混合器）和洗脱瓶B（贮存器）
内各装入100毫升缓冲液Ⅰ和缓冲液Ⅱ（注意加溶液的方法），
注意液面应处于同一水平面，同时应排除连接管内的气泡 2) 开动梯度洗脱仪中的电磁搅拌器开关，调节搅拌速度，以 混合器内缓冲液旋转而无明显旋涡为宜 3) 将洗脱瓶A、洗脱瓶B与层析柱上端连接管道打开，同时将
O
对硝基苯酚磷酸酯 p-NPP
O O
-
-
Na+ Na+
碱性磷酸酶
O
- P
OH 对硝基苯酚
p-NP
NO2
NO2
以对硝基酚磷酸二钠为底物，根据水解磷酯键所产生的对 硝基酚量测定酶活力。在37℃、pH10.0条件下，每分钟转 化产生1μ mol/L对硝基酚的酶量为1个酶单位
ppt课件 6
每10秒记一个数（0、10、20、……120） 将时间及其对应的A405导入EXCEL文档中， 做时间t—A405曲线，得到斜率，
ppt课件 20
层析操作一般过程
装柱、平衡、上样、洗涤、洗脱、合并样品 上样前后样品活性测定---当天测定 上样前后蛋白浓度测定---最后一天测定
ppt课件
1
实验流程一
ppt课件
2
实验安排
准备材料：重组工程菌目标蛋白的表达 第1次 菌体超声破壁、离心、包涵体复性、装 离子交换柱 第2次 测酶活、定蛋白、 离子交换层析 第3次 亲和柱层析，并对收集样 品进行测活、定蛋白等 第4次 对分离纯化各样品进行蛋白电泳分析 第5次 Western blotting， 绘出分离纯化表 ppt 绘制包涵体复性曲线 课件
ppt课件 23
B瓶 1N NaCl 100ml
A瓶 0N NaCl 100ml
ppt课件
24
操作要点
1)在梯度洗脱仪中的洗脱瓶A（混合器）和洗脱瓶B（贮存器）
内各装入100毫升缓冲液Ⅰ和缓冲液Ⅱ（注意加溶液的方法），
注意液面应处于同一水平面，同时应排除连接管内的气泡 2) 开动梯度洗脱仪中的电磁搅拌器开关，调节搅拌速度，以 混合器内缓冲液旋转而无明显旋涡为宜 3) 将洗脱瓶A、洗脱瓶B与层析柱上端连接管道打开，同时将
O
对硝基苯酚磷酸酯 p-NPP
O O
-
-
Na+ Na+
碱性磷酸酶
O
- P
OH 对硝基苯酚
p-NP
NO2
NO2
以对硝基酚磷酸二钠为底物，根据水解磷酯键所产生的对 硝基酚量测定酶活力。在37℃、pH10.0条件下，每分钟转 化产生1μ mol/L对硝基酚的酶量为1个酶单位
ppt课件 6
每10秒记一个数（0、10、20、……120） 将时间及其对应的A405导入EXCEL文档中， 做时间t—A405曲线，得到斜率，
ppt课件 20
层析操作一般过程
装柱、平衡、上样、洗涤、洗脱、合并样品 上样前后样品活性测定---当天测定 上样前后蛋白浓度测定---最后一天测定
分子生物学课件ppt
转基因技术
转基因技术是将外源基因导入生物体，实现基因的过 表达或补充。转基因技术的关键在于选择合适的载体 和导入方法。
THANKS
感谢观看
基因编辑技术的应用
基因编辑技术在许多领域都有广泛的应用，如罕见病治疗、癌症免疫治疗、农业育种等。 通过基因编辑技术，可以实现对特定基因的敲除、敲入或修饰，以达到治疗或改良的目的 。
基因编辑技术的伦理问题
虽然基因编辑技术具有巨大的潜力，但也引发了伦理和法律等方面的争议。在应用基因编 辑技术时，需要充分考虑伦理和法律问题，确保技术的合理应用和规范发展。
发展趋势
基因组学、蛋白质组学、代谢组学等 多组学研究，跨学科交叉融合，生物 信息学和计算生物学的发展等。
02
分生物学基本概念
基因与DNA
基因
基因是生物体内携带遗传信息的最小 单位，负责编码蛋白质或RNA分子 。
DNA
DNA是生物体的主要遗传物质，由四 种不同的脱氧核苷酸组成，通过特定 的序列排列储存遗传信息。
高通量测序
高通量测序是指一次可以对大量DNA或RNA分子进行序列测定的技术。高通量测序技术极大地提高了 基因组学和转录组学研究的效率，为生物医学研究提供了强大的工具。
04
分子生物学应用
生物医药研究
01
02
03
药物设计与开发
利用分子生物学技术，研 究药物与靶点的相互作用 ，提高药物的疗效和降低 副作用。
分子生物学前沿研究
表观遗传学研究
01
表观遗传学研究
表观遗传学是研究基因表达的调控机制，通过研究DNA甲基化、组蛋
白修饰等机制，揭示基因表达的调控规律，以及环境因素对基因表达的
影响。
02
分子生物学全套课件96P课件-精品文档97页
Reads, not template
The recorded is the sequence of dNTP flow; FLOWGRAM; Reads averaging 400 bases; Homopolymer repeats up to six nucleotides; The number of dNTPs added is directly proportional to the light signal, with fluctuation.
Molecular Biology: The biology (structure and function) of macro-molecules
Protein Nucleic acid (DNA/ RNA/
Coding-/ non-coding/ functional/ junk/ ... Fatty acid Polysaccharide (sugar) Small molecules
Emulsion PCR: 1 – 2 - 2n; synchronically,
PicoTiterPlate
adenosine 5′phosphosulphate
+ sulphate
SCcoamnnpiuntger+
Pyrosequencing: Templates are prepared by emPCR, with 1–2 million beads deposited into PTP wells. Smaller beads with attached sulphurylase and luciferase surround the template beads. Individual dNTPs flow sequentially across the wells, dispensed in a predetermined order. On incorporation of the complement dNTP, released PPi is converted to ATP, producing light from the oxidation of luciferin to oxyluciferin. Reads averaging 400 bases are recorded as flowgrams. For homopolymer repeats up to six nucleotides, the number of dNTPs added is directly proportional to the light signal. Insertions are the most common error type, followed by deletions.
2024《分子生物学全套》ppt课件
ppt课件contents •分子生物学概述•基因与基因组结构•DNA复制与修复机制•转录与翻译过程调控•蛋白质组学与代谢组学研究方法•现代分子生物学技术应用•生物信息学在分子生物学中应用•分子生物学前沿领域及未来发展趋势目录分子生物学概述分子生物学定义与特点分子生物学定义分子生物学特点以分子为研究对象，阐明生命现象的本质；与多学科交叉融合，推动生命科学的发展；实验技术手段不断更新，提高研究效率和准确性。
分子生物学发展历程早期发展阶段现代分子生物学阶段分子生物学研究内容及方法研究内容研究方法基因与基因组结构基因概念及功能基因功能基因定义基因通过编码蛋白质或参与生物体的各种生理和生化过程，从而控制生物的性状和表现。
基因分类基因组组成与结构特点基因组定义基因组是指一个生物体内所有基因的总和。
基因组组成基因组包括编码区和非编码区，其中编码区包含结构基因和调控基因，非编码区则包含一些重要的调控元件和重复序列。
基因组结构特点不同生物的基因组具有不同的结构特点，如原核生物基因组较小且连续，真核生物基因组较大且存在大量的重复序列和间隔区。
转录后水平调控转录后水平调控主要涉及mRNA 的加工、剪接、运输和降解等过程，通过这些过程可以影响mRNA 的稳定性和翻译效率。
基因表达概念基因表达是指基因转录成mRNA ，再翻译成蛋白质的过程。
基因表达调控机制生物体通过多种机制对基因表达进行调控，包括转录水平调控、转录后水平调控、翻译水平调控和表观遗传调控等。
转录水平调控转录水平调控是最主要的基因表达调控机制，包括启动子、增强子、沉默子等顺式作用元件和反式作用因子的相互作用。
基因表达调控机制DNA复制与修复机制DNA复制过程及影响因素DNA复制过程影响因素DNA损伤类型及修复方式损伤类型包括碱基错配、单链断裂、双链断裂、碱基修饰等，这些损伤可能导致遗传信息的改变或丢失。
修复方式包括直接修复、切除修复、重组修复和跨损伤修复等，这些修复方式能够识别和修复DNA损伤，维护基因组的稳定性。
《分子生物学》PPT课件
六、转录和修复
从目前的研究来看，修复发生于转录的整 个过程，如激活、起始和延伸都与修复有 关。在转录激活过程中，主要是AP-1和 NF-KB两种转录因子可能参与转录－偶联 修复。在转录起始过程中转录辅助因子TFII H也是一种修复因子。转录的延伸过程中， 转录的序列修复比非转录的序列更迅速。
七、大肠杆菌的挽回系统
2. 电离辐射引起的DNA损伤
电离辐射对DNA的损伤有直接效应和间接效应两 种途径。前者指辐射对DNA直接沉积能量，并 引起理化改变；后者是指电离辐射在DNA周围 环境的其它成分上沉积能量，而引起DNA分子 的变化。电离辐射的结果可以引起DNA的碱基 损伤、链断裂以及DNA的交联。
三、化学因素引起的DNA损伤
挽回系统〔retrieval system〕也称“复制后 修复〞〔post-replication repair〕因为它 们在复制后起作用，也称为“重组修复〞 〔recombination-repair〕。此系统在处 理复制含有损伤碱基模板后产生的子代二 倍体的缺陷中起作用。
八、SOS系统 许多损伤DNA或抑制大肠杆菌复制的手段引
四、交联修复 链间交联是由多种多样的致癌剂和化疗药物等
引起的。大肠杆菌和哺乳动物细胞内都存在 这种修复机制，但细节还不清楚。
五、双链断裂修复 双链断裂〔DSB〕发生在体细胞重组和转座的
生理条件下，也是电离辐射和氧化应激的主 要损伤形式。依赖DNA的蛋白激酶对哺乳动 物细胞中的双链断裂重接是必需的。
2. 碱基的自发性化学改变
这类损伤包括互变异构、碱基的 脱氨基作用、自发的脱嘌呤和 脱嘧啶、以及细胞代谢产物对 DNA的损伤。例如，腺嘌呤的 互变异构体〔A’〕可以与胞嘧 啶配对，模板链上存在这些异 构体的时候，子代链上就可能
分子生物学课件(共51张PPT)(2024)
四级结构
由两条或两条以上的多肽链组 成的一类结构，每一条多肽链
都有完整的三级结构。
21
蛋白质的功能与分类
结构蛋白：作为细胞的结构，如膜蛋白，染色体蛋白等 。 酶：催化生物体内的化学反应。
抗体：参与免疫应答。
2024/1/29
功能蛋白
激素：调节生物体的生理活动。
蛋白质的分类还可以根据其溶解度、形状等进行划分。 例如，根据溶解度可分为清蛋白、球蛋白等；根据形状 可分为纤维状蛋白和球状蛋白等。
RNA的基本组成单位是核糖核苷酸， 由磷酸、核糖和碱基组成。
磷酸二酯键
核糖核苷酸之间通过磷酸二酯键连接 形成RNA链。
碱基
RNA中的碱基主要有腺嘌呤（A）、 鸟嘌呤（G）、胞嘧啶（C）和尿嘧啶 （U）。
2024/1/29
12
RNA的种类与结构
mRNA
信使RNA，负责携带遗 传信息并指导蛋白质合
成。
翻译水平调控
通过控制翻译的起始、延伸和 终止来调控基因表达。
蛋白质水平调控
通过控制蛋白质的活性、稳定 性和相互作用来调控基因表达
。
表观遗传学调控
通过改变染色质结构和DNA 甲基化等方式来调控基因表达
。
2024/1/29
18
05
蛋白质的结构与功能
2024/1/29
19
蛋白质的分子组成
氨基酸
蛋白质的基本组成单元，共有20 种标准氨基酸。
2024/1/29
tRNA
转运RNA，负责携带氨 基酸并识别mRNA上的
遗传密码。
rRNA
其他RNA
核糖体RNA，是核糖体 的组成部分，参与蛋白
质合成。
13
如miRNA、snRNA等， 在基因表达调控等方面
由两条或两条以上的多肽链组 成的一类结构，每一条多肽链
都有完整的三级结构。
21
蛋白质的功能与分类
结构蛋白：作为细胞的结构，如膜蛋白，染色体蛋白等 。 酶：催化生物体内的化学反应。
抗体：参与免疫应答。
2024/1/29
功能蛋白
激素：调节生物体的生理活动。
蛋白质的分类还可以根据其溶解度、形状等进行划分。 例如，根据溶解度可分为清蛋白、球蛋白等；根据形状 可分为纤维状蛋白和球状蛋白等。
RNA的基本组成单位是核糖核苷酸， 由磷酸、核糖和碱基组成。
磷酸二酯键
核糖核苷酸之间通过磷酸二酯键连接 形成RNA链。
碱基
RNA中的碱基主要有腺嘌呤（A）、 鸟嘌呤（G）、胞嘧啶（C）和尿嘧啶 （U）。
2024/1/29
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RNA的种类与结构
mRNA
信使RNA，负责携带遗 传信息并指导蛋白质合
成。
翻译水平调控
通过控制翻译的起始、延伸和 终止来调控基因表达。
蛋白质水平调控
通过控制蛋白质的活性、稳定 性和相互作用来调控基因表达
。
表观遗传学调控
通过改变染色质结构和DNA 甲基化等方式来调控基因表达
。
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蛋白质的结构与功能
2024/1/29
19
蛋白质的分子组成
氨基酸
蛋白质的基本组成单元，共有20 种标准氨基酸。
2024/1/29
tRNA
转运RNA，负责携带氨 基酸并识别mRNA上的
遗传密码。
rRNA
其他RNA
核糖体RNA，是核糖体 的组成部分，参与蛋白
质合成。
13
如miRNA、snRNA等， 在基因表达调控等方面
分子生物学(全套课件396P)pptx
DNA修复机制包括直接修复、 切除修复、重组修复和SOS修 复等，用于维护DNA分子的完 整性和稳定性。
PART 03
RNA结构与功能
REPORTING
RNA种类及特点
mRNA（信使RNA）
携带遗传信息，指导蛋白质合成。
rRNA（核糖体RNA）
与蛋白质结合形成核糖体，是蛋白质合成的 场所。
tRNA（转运RNA）
分子生物学(全套课件 396P)pptx
REPORTING
• 分子生物学绪论 • DNA结构与功能 • RNA结构与功能 • 蛋白质合成与功能 • 基因表达调控机制 • DNA损伤修复与重组技术
目录
PART 01
分子生物学绪论
REPORTING
分子生物学定义与发展
分子生物学的定义
在分子水平上研究生物大分子的结 构和功能，究生物大分子的结构和功能方面有很多交 叉，但分子生物学更侧重于在分子水平上揭示生命现象的本质。
与细胞生物学的关系
分子生物学与细胞生物学在研究细胞的结构和功能方面密切相关，但 分子生物学更侧重于研究细胞内的分子机制和信号传导。
与医学的关系
分子生物学在医学领域有着广泛的应用，如基因诊断、基因治疗和药 物研发等，为医学的发展提供了重要的理论和技术支持。
THANKS
感谢观看
REPORTING
识别并携带氨基酸，参与蛋白质合成。
其他非编码RNA
如microRNA、siRNA等，参与基因表达调 控。
RNA转录后加工与修饰
01
02
03
04
5'端加帽
在mRNA的5'端加上甲基鸟嘌 呤帽子结构，保护mRNA不被
降解。
3'端加尾
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分子生物学实验课PPT曾令江 XXX1116
五、分子生物学实验课—课程准备
1、清洗培养皿、三角瓶等，包装灭菌。清洗研钵并烘干备用。（5班）
2、分装10ul（白色）、200ul（黄色）、1000ul（蓝色）枪 头并高压灭菌（ 2班）
3、分装200ul、10mlEP管并高压灭菌。（2班）
4、配置100mlCTAB抽提液：配方见黑板。（5班）
分子生物学实验课PPT曾令江 XXX1116
四、分子生物学实验课—课程考核
1、本课程为考查科目。总成绩为100分，由考勤、 实验过程表现（个人）、小组平时成绩（各实验环节 结果）、实验报告四部分组成，分别占总成绩的20﹪、 20﹪、 20﹪、 40﹪。
2、实验报告的写作按照毕业论文的格式，包括：标 题、中文摘要、英文摘要、文献综述、材料与方法、结 果与分析、实验总结（体会）等，每个实验小组提交一 份实验报告。
分子生物学实验课PPT-曾令江-XXXX1116
2020/11/10
分子生物学实验课PPT曾令江 XXX1116
内容提要
1
分子生物学实验----课程介绍
2
分子生物学实验----课程内容
3
分子生物学实验----课程要求
4
分子生物学实验----课程考核
5
分子生物学实验----课程准备
分子生物学实验课PPT曾令江 XXX1116
分子生物学实验课PPT曾令江 XXX1116
二、分子生物学实验—课程内容
实验一、DNA的提取及检测 实验二、PCR扩增目的基因及检测 实验三、目的基因片段的回收、连接 实验四、大肠杆菌DH5感受态细胞的制备 实验五、连接产物的转化、筛选及PCR检测 实验六、质粒DNA的抽提、酶切（生工专业选作） 实验七、RNA的抽提与检测（生科专业选作）
实验二：PCR扩增adk基因及检测
第一链cDAN的合成—用试剂盒
反应体系：
1: DEPC-treated water
9 ul
2: oligo(dT)18 primer
1 ul
3: Template RNA
2 ul
4: 5×Raction buffer
4 ul
5: RNase inhibitor
1 ul
分子生物学实验课PPT曾令江 XXX1116
技术路线
甘薯材料（幼苗） 提取甘薯总RNA
反转录成cDNA第一链
提取甘薯DNA
引物设计 PCR扩增adk基因核心片段
胶回收adk片段
连接T载体 转化大肠杆菌DH5a
送测序及生物信息学分析
PCR检测筛选阳性转化子
分子生物学实验课PPT曾令江 XXX1116
反应条件：
I） 94℃ II） 94℃
56℃
72℃ III） 72℃
5min
45S
45S
1min（33个循环）
8min
分子生物学实验课PPT曾令江 XXX1116
胶回收
TIANGEN公司： 普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒—-离心柱型 操作步骤按照试剂盒说明做。
分子生物学实验课PPT曾令江 XXX1116
回收DNA片段与T载体连接
1、连接体系： T-载体 回收片段 灭菌蒸馏水 SolutionⅠ 总体积：
2、连接条件： 16℃连接过夜
0.5ul 2ul 2.5ul 5ul 10ul
分子生物学实验课PPT曾令江 XXX1116
演讲完毕，谢谢听讲!
再见，see you again
2020/11/10
三、分子生物学实验课—课程要求
1、根据集中实验课的实际进程安排上课时间， 要求准时到实验课堂。
2、由专人负责收集本实验课的所有中间实验结果， 包括电泳图片、照片、电子资料等。
3、安全：人生安全、仪器设备、试剂药品安全。 如:离心机、移液器(枪)的使用。
4、清洁：每次实验课结束，各组要收拾整理实验 台面、仪器设备、试剂药品等，再由当天值班清洁 小组最后收拾整理。
5、配制LB液体培养基400，LB固体培养基+AMP抗生素 600
6、研钵、液氮，抗生素配制等。
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实验一：甘薯DNA的提取
采用CTAB（十六烷基三乙基溴化铵）法提取甘薯 DNA，并用琼脂糖凝胶电泳检测所抽提DNA。 收集电泳图片
分子生物学实验课PPT曾令江 XXX1116
反应体系：1：MiniQ H2O 2：10×PCR buffer 3：25mM MgCl2 4： 10mM dNTP mix 5：引物1(10μM) F-ADK 6：引物2(10μM) R-ADK 7：Taq(2 to 5 units/ul) 8：模板（cDNA） 终体积为
36.5ul 5ul 3ul 1ul 1ul 1ul 0.5ul 2ul 50 ul
一、分子生物学实验—课程介绍
分子生物学是生物学科中的前言学科，发展速度快， 内容更新快，是高等院校生命科学学科的主干基础课， 是生命科学中公认的核心学科。
分子生物学实验课，原来附属于理论课程，因其 重要性，现已独立成一门单独学科，主要围绕能更 好培养学生的动手能力和创新能力。
我院从1997年开始开设本科生的分子生物学课程及 其实验课，2006年该课程已列为学校重点课程建设。 大三上期开设，学分1.5，27学时。
分子生物学实验课PPT曾令江 XXX1116
6: 10mM Dntp Mix
2 ul
7: MVReverse Transcriptase
1 ul
total volume
20ul
反应条件：1: 42℃-60min; 2: 70 ℃ -5min
分子生物学实验课PPT曾令江 XXX1116
实验二：PCR扩增adk基因及检测
每个小组做2个50ul体系
五、分子生物学实验课—课程准备
1、清洗培养皿、三角瓶等，包装灭菌。清洗研钵并烘干备用。（5班）
2、分装10ul（白色）、200ul（黄色）、1000ul（蓝色）枪 头并高压灭菌（ 2班）
3、分装200ul、10mlEP管并高压灭菌。（2班）
4、配置100mlCTAB抽提液：配方见黑板。（5班）
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四、分子生物学实验课—课程考核
1、本课程为考查科目。总成绩为100分，由考勤、 实验过程表现（个人）、小组平时成绩（各实验环节 结果）、实验报告四部分组成，分别占总成绩的20﹪、 20﹪、 20﹪、 40﹪。
2、实验报告的写作按照毕业论文的格式，包括：标 题、中文摘要、英文摘要、文献综述、材料与方法、结 果与分析、实验总结（体会）等，每个实验小组提交一 份实验报告。
分子生物学实验课PPT-曾令江-XXXX1116
2020/11/10
分子生物学实验课PPT曾令江 XXX1116
内容提要
1
分子生物学实验----课程介绍
2
分子生物学实验----课程内容
3
分子生物学实验----课程要求
4
分子生物学实验----课程考核
5
分子生物学实验----课程准备
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二、分子生物学实验—课程内容
实验一、DNA的提取及检测 实验二、PCR扩增目的基因及检测 实验三、目的基因片段的回收、连接 实验四、大肠杆菌DH5感受态细胞的制备 实验五、连接产物的转化、筛选及PCR检测 实验六、质粒DNA的抽提、酶切（生工专业选作） 实验七、RNA的抽提与检测（生科专业选作）
实验二：PCR扩增adk基因及检测
第一链cDAN的合成—用试剂盒
反应体系：
1: DEPC-treated water
9 ul
2: oligo(dT)18 primer
1 ul
3: Template RNA
2 ul
4: 5×Raction buffer
4 ul
5: RNase inhibitor
1 ul
分子生物学实验课PPT曾令江 XXX1116
技术路线
甘薯材料（幼苗） 提取甘薯总RNA
反转录成cDNA第一链
提取甘薯DNA
引物设计 PCR扩增adk基因核心片段
胶回收adk片段
连接T载体 转化大肠杆菌DH5a
送测序及生物信息学分析
PCR检测筛选阳性转化子
分子生物学实验课PPT曾令江 XXX1116
反应条件：
I） 94℃ II） 94℃
56℃
72℃ III） 72℃
5min
45S
45S
1min（33个循环）
8min
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胶回收
TIANGEN公司： 普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒—-离心柱型 操作步骤按照试剂盒说明做。
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回收DNA片段与T载体连接
1、连接体系： T-载体 回收片段 灭菌蒸馏水 SolutionⅠ 总体积：
2、连接条件： 16℃连接过夜
0.5ul 2ul 2.5ul 5ul 10ul
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演讲完毕，谢谢听讲!
再见，see you again
2020/11/10
三、分子生物学实验课—课程要求
1、根据集中实验课的实际进程安排上课时间， 要求准时到实验课堂。
2、由专人负责收集本实验课的所有中间实验结果， 包括电泳图片、照片、电子资料等。
3、安全：人生安全、仪器设备、试剂药品安全。 如:离心机、移液器(枪)的使用。
4、清洁：每次实验课结束，各组要收拾整理实验 台面、仪器设备、试剂药品等，再由当天值班清洁 小组最后收拾整理。
5、配制LB液体培养基400，LB固体培养基+AMP抗生素 600
6、研钵、液氮，抗生素配制等。
分子生物学实验课PPT曾令江 XXX1116
实验一：甘薯DNA的提取
采用CTAB（十六烷基三乙基溴化铵）法提取甘薯 DNA，并用琼脂糖凝胶电泳检测所抽提DNA。 收集电泳图片
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反应体系：1：MiniQ H2O 2：10×PCR buffer 3：25mM MgCl2 4： 10mM dNTP mix 5：引物1(10μM) F-ADK 6：引物2(10μM) R-ADK 7：Taq(2 to 5 units/ul) 8：模板（cDNA） 终体积为
36.5ul 5ul 3ul 1ul 1ul 1ul 0.5ul 2ul 50 ul
一、分子生物学实验—课程介绍
分子生物学是生物学科中的前言学科，发展速度快， 内容更新快，是高等院校生命科学学科的主干基础课， 是生命科学中公认的核心学科。
分子生物学实验课，原来附属于理论课程，因其 重要性，现已独立成一门单独学科，主要围绕能更 好培养学生的动手能力和创新能力。
我院从1997年开始开设本科生的分子生物学课程及 其实验课，2006年该课程已列为学校重点课程建设。 大三上期开设，学分1.5，27学时。
分子生物学实验课PPT曾令江 XXX1116
6: 10mM Dntp Mix
2 ul
7: MVReverse Transcriptase
1 ul
total volume
20ul
反应条件：1: 42℃-60min; 2: 70 ℃ -5min
分子生物学实验课PPT曾令江 XXX1116
实验二：PCR扩增adk基因及检测
每个小组做2个50ul体系