(完整版)白喉棒状杆菌及检验
实验六：白喉棒状杆菌、厌氧菌、螺旋体
培养特性
白喉棒状杆菌需在特定 的培养基上培养，适宜 温度为37℃，适宜pH值
为7.2-7.4。
抵抗力
对干燥、阳光和一般消 毒剂敏感，但在咽喉分
泌物中可存活数周。
厌氧菌
01
02
03
04
简介
厌氧菌是指在无氧环境下生长 繁殖的细菌，是导致多种感染
性疾病的病原体。
形态特征
厌氧菌形态多样，包括球形、 杆形、螺旋形等。
鉴定结果
通过形态学观察、生化试验和16S rRNA基因测序，确认分离出的菌 株为脆弱拟杆菌。
药敏试验
对分离出的脆弱拟杆菌进行药敏试 验，结果显示该菌对甲硝唑敏感， 对克林霉素耐药。
螺旋体的分离与鉴定结果
分离结果
通过暗视野显微镜观察，成功从 患者皮肤溃疡处分离出螺旋体。
鉴定结果
通过形态学观察和特异性抗原检 测，确认分离出的微生物为钩端
微生物的鉴定
形态观察
通过显微镜观察微生物的 形态、大小、染色特性等， 初步判断其种类。
生化试验
进行一系列生化试验，如 糖发酵试验、酶活性测定 等，以进一步确定微生物 的种类。
血清学试验
利用特异性抗体进行血清 学试验，如凝集反应、沉 淀反应等，以确定微生物 的血清型。
04 实验结果与分析
白喉棒状杆菌的分离与鉴定结果
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03 实验步骤
微生物的分离与纯化
微生物的分离
根据微生物的特性，选择适宜的培养基和培养条件，将微生 物从样品中分离出来。
微生物的纯化
通过反复划线培养或稀释培养，获得纯培养物，即单一菌落 。
微生物的培养
培养基的制备
根据需要选择适宜的培养基成分和配方，制备适合微生物生长的培养基。
白喉棒状杆菌
白喉棒状杆菌（corynebacterium diphtheriae）1、★生物学特点：◆细长微弯，末端膨大，排列呈V 、L等，G+，无荚膜，无鞭毛，无芽孢。
◆异染颗粒：储存的核糖核酸和多磷酸盐颗粒（鉴定）◆吕氏培养基：生长迅速，细小灰白菌落，异染颗粒(metachromatic granules)，亚碲酸钾平板，黑色菌落（鉴定）2、致病性和免疫性：主要致病物质：白喉毒素。
◆毒性强，抑制细胞蛋白质合成，引起组织坏死和病变。
◆由β-棒状杆菌噬菌体毒素基因（tox+）编码，因此，只有携带β-棒状杆菌噬菌体毒素基因的溶源性白喉棒状杆菌才能产生白喉毒素。
◆tox+基因的表达和菌体内无机铁的含量密切相关，铁含量适量时，tox+基因表达，否则不表达。
◆tox+基因可经过细菌遗传和变异传给子代，丢失、获得。
3、白喉毒素的致病机制：。
4、传染：◆飞沫或污染物经过呼吸道传播，易感者：1~5岁的儿童。
◆临床表现：引起局部炎症：假膜；全身中毒症状:心肌炎、软腭麻痹等。
◆所致疾病：急性呼吸道传染病白喉，乙类传染病。
5、免疫性：接种疫苗、隐性感染、愈后→抗病毒免疫6、微生物学检查方法：采集标本：用绵拭子在假膜边缘取材；涂片镜检：典型的白喉棒状杆菌及其异染颗粒；分离培养：吕氏血清斜面：37度培养18小时可见1mm大小、湿润、灰白色的菌落，在亚碲酸钾培养基上培养一个小时，可见1~3mm大小的黑色菌落。
◆毒力鉴定:豚鼠试验，协同凝集试验，Elek平板毒力试验7、白喉的防止原则：白百破三联疫苗。
炭疽芽孢杆菌◆致病菌中最大的革兰氏阳性菌。
1.Shape and structure：◆革兰氏阳性菌（gram positive）◆似竹节状长链◆芽孢位于菌体中央◆形成荚膜是毒力象征◆无鞭毛，无运动2.培养特性：◆需氧或者兼性厌氧，不溶血◆含NaHCO3的血琼脂平板：有毒株会形成粘液性菌落，无毒株会形成粗糙型菌落。
◆在含有0.05U/ml的青霉素液体培养基中培养，使菌体呈串珠状，有鉴别意义。
白喉棒杆菌实验报告
一、实验目的1. 熟悉白喉棒杆菌的生物学特性；2. 掌握白喉棒杆菌的分离和鉴定方法；3. 提高实验室操作技能，培养严谨的科学态度。
二、实验原理白喉棒杆菌（Corynebacterium diphtheriae）是一种革兰氏阳性杆菌，是白喉的病原菌。
该菌具有特殊的棒状形态，常呈V字形或L字形排列，无鞭毛、无芽孢。
白喉棒杆菌能在亚碲酸钾培养基上形成黑色菌落，对青霉素和红霉素敏感。
本实验通过分离、培养和鉴定白喉棒杆菌，以验证其生物学特性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：白喉棒杆菌标准菌株、亚碲酸钾培养基、营养琼脂培养基、生理盐水、无菌棉签、无菌吸管、酒精灯、显微镜、培养箱等。
2. 实验仪器：高压蒸汽灭菌器、电子天平、恒温培养箱、显微镜等。
四、实验方法1. 分离培养（1）将白喉棒杆菌标准菌株接种于营养琼脂培养基，37℃培养24小时。
（2）取适量菌液，用无菌生理盐水稀释至10^-6。
（3）取稀释液0.1ml接种于亚碲酸钾培养基，37℃培养24小时。
2. 鉴定（1）观察菌落形态：在亚碲酸钾培养基上，白喉棒杆菌菌落呈黑色，周围有白色沉淀。
（2）革兰氏染色：取菌落涂片，进行革兰氏染色，显微镜下观察菌体形态。
（3）生化试验：取菌落接种于葡萄糖发酵培养基，观察菌落是否产生气体。
五、实验结果与分析1. 分离培养在亚碲酸钾培养基上，观察到菌落呈黑色，周围有白色沉淀，符合白喉棒杆菌的菌落特征。
2. 鉴定（1）革兰氏染色：观察到菌体呈棒状，两端膨大，排列不规则，符合白喉棒杆菌的形态特征。
（2）生化试验：菌落未产生气体，符合白喉棒杆菌的生化特征。
综上所述，实验结果表明，分离得到的菌落为白喉棒杆菌。
六、实验结论通过本实验，成功分离和鉴定出白喉棒杆菌。
实验过程中，我们掌握了白喉棒杆菌的分离和鉴定方法，熟悉了其生物学特性。
同时，提高了实验室操作技能，培养了严谨的科学态度。
七、实验讨论1. 白喉棒杆菌是一种常见的病原菌，了解其生物学特性对预防和治疗白喉具有重要意义。
假白喉棒状杆菌
二、微生物特性
1.G-一端呈棒状,无荚膜无鞭毛，不形 成芽胞。菌体着色不均匀，用Neisser 法染色，出现深染的颗粒,与菌体颜色 不同为异染颗粒，主要成分是核糖核酸 和多偏磷酸盐，有鉴定意义。
2.需氧或兼性厌氧菌。在血平板上长出12mm、不透明的S型菌落。分离培养时常用鉴别 选择培养基含0.03％-0.04％亚碲酸钾的血平 板。亚碲酸钾能抑制杂菌，且白喉杆菌能吸收 亚碲酸钾使其还原为元素碲，菌落呈黑色。
一、临床意义
存在于患者鼻咽腔粘膜。传染源为患者 及带菌者，随飞沫或污染的物品传播， 感染后在鼻咽部繁殖,产生外毒素致病， 引起局部炎症,形成灰白色膜状物，称为 假膜。若伪膜脱落气管内，即可致呼吸 道阻塞窒息，成为致死原因。本菌不侵 人血流，但外毒素吸收入血造成毒血症。
白喉毒素具有强烈细胞毒作用，含有分 子量分别为24和39kD的A、B两个片段。 毒素活性位于A片段，由B片段携带转运 细胞内。白喉毒素对组织有选择性亲和 力，常侵人心肌及外周神经，故临床上 常有心肌炎和软腭麻痹等症状。病后有 高度免疫性。
(五)免疫力检测
致敏红细胞凝集试验，取待检者血清 0.1ml在微量血凝板上作倍比稀释， 然后滴加外毒素致敏血细胞。经振 荡后置37℃ 1 h 后观察结果，敏感 度可达10-4单位。
第二节 其他棒状杆菌
除白喉棒状杆菌外，在鼻腔、咽喉部、外耳 道、眼结膜、外阴和皮肤等处可见一些类似 白喉棒状杆菌的细菌，统称为类白喉棒状杆 菌。
菌落分为三型：①重型为不溶血、不规则、有 条纹。②轻型为β溶血、光泽、凸起。③中间 型为不溶血的小菌落，外形在重型和轻型之间。
三、微生物检验
1.标本采集 从假膜边缘采集分泌物，立即 送检。
2.标本革兰和异染颗粒染色镜检。如发现G+ 棒状杆菌，且有异染颗粒，可作“直接涂片 检出形似白喉棒状杆菌”的初步报告，为临 床早期诊断提供依据。
需氧或兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验考点总结
需氧或兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验考点总结一、棒状杆菌属G+，杆菌，菌体粗细、长短不一，一端或两端膨大呈棒状。
着色不匀，有异染颗粒。
无鞭毛、无荚膜、无芽胞。
需氧，营养要求较高。
引起人类致病的主要是白喉棒状杆菌，其他大多数为条件致病菌。
（一）白喉棒状杆菌1.生物学性状（1）形态与染色：菌体细长微弯，一端或两端膨大的革兰阳性杆菌。
细菌排列呈散在L、V、Y字形及不规则栅栏状。
无荚膜、无芽胞、无鞭毛、无菌毛。
异染颗粒：Neisser（奈瑟）染色；Albert（阿培特）染色。
这是白喉棒状杆菌的形态学特征，对鉴别细菌有重要意义。
异染颗粒（浓染颗粒）Neisser（奈瑟）染色：菌体染成黄褐色，颗粒被染成紫黑色；Albert（阿培特）染色：菌体呈蓝绿色，异染颗粒蓝黑色。
（2）培养特性：在普通培养基上生长不良，形态不典型。
1）血液琼脂平板：灰白色S型菌落，有狭窄的β溶血环。
2）吕氏（Loeffler）血清斜面培养基：生长迅速，形成灰白色、湿润、S型菌落。
涂片染色形态典型，异染颗粒明显。
3）亚碲酸钾血琼脂：本菌能吸收亚碲酸盐，并使其还原为元素碲，使菌落呈黑色。
4）液体培养基。
（3）生化反应：触酶试验阳性，氧化酶试验阴性。
分解葡萄糖、麦芽糖、果糖、半乳糖，产酸不产气。
不分解乳糖，极少分解蔗糖。
能还原硝酸盐，不液化明胶，不产生吲哚，不分解尿素。
据亚碲酸钾血琼脂培养基、肉汤培养基的生长特点及生化反应，可将本菌分为轻、中、重三型。
在我国以轻型多见。
分型与所致疾病的严重程度无关，可用于流行病学调查。
2.致病性致病物质：白喉棒状杆菌引起白喉，多在秋冬季节流行。
以咽白喉最常见，喉白喉及鼻白喉次之，偶亦引起眼结膜、外耳道、阴道及皮肤的局部病变。
本菌一般不侵入血流，但其产生的大量外毒素可吸收入血，引起毒血症。
毒素能与敏感的心肌、肝、肾、肾上腺等组织细胞及外周神经，尤其与支配咽肌和腭肌的神经结合，引起细胞变性、坏死、内脏出血和神经麻痹等严重损害，是白喉晚期死亡的主要原因。
细菌学检验-11-棒状杆菌属-4
白喉假膜
此假膜在咽部与粘膜下组织紧密粘连不易 拭去。若假膜扩展至气管、支气管粘膜， 由于其上具有纤毛，假膜容易脱落气管内 而引起呼吸道阻塞窒息，早期致死的主要 原因。
外毒素致病，引起如心肌炎、软腭麻痹、 声嘶、肾上腺功能障碍等症状。约2/3患者 的心肌受损，多发生在病后2~3周，成为 白喉晚期致死的主要原因。
吕氏血清斜面：生长迅速，细小灰白菌落， 涂片染色异染颗粒
4．毒力试验
(1)琼脂平板毒力试验：
将含有20％牛血清肉汤琼脂注于平皿中 将浸有lOOu／ml抗毒素血清的滤纸条沉于琼脂内 在与滤纸条垂直方向将待检菌划线接种，同时接种
标准产毒株作为阳性对照。 37℃培养 24-48h 若菌苔两侧出现斜向外侧延伸的乳白色沉淀线，并
床单、玩具上可存活数天至数周。 – 5%石炭酸中１min、3% 来苏尔中10min
死亡。 –对青霉素、氯霉素、红霉素敏感。
二、致病性
1.致病物质--白喉毒素
产生：携带β-噬菌体白喉棒状杆菌带有编码外毒 素的tox基因，噬菌体侵入白喉棒状杆菌，在溶原 阶段tox基因即可整合到宿主染色体上，使之产生 毒素。
影响tox+基因的表达因素：(即白喉毒素的产生)与 菌体内无机铁含量密切相关。铁含量适量 (0.14μg/ml),tox+基因表达,否则铁含量高,tox+ 基因不表达。
毒素的结构：
–白喉毒素含有A和2个B 亚单位。
• B亚单位上有1个受体结合区和1个转位区，可作用 心肌和神经细胞，引起中毒性心肌炎和神经症状。
若两孔之间出现白色沉淀线，表明待检 菌为产毒菌株
此法比琼脂平板毒力试验敏感10—100倍， 适用于大批量标本的检测
(4)动物试验
白喉棒状杆菌.ppt
2.人工被动免疫
与白喉病人密切接触的易感 儿童应肌肉注射白喉抗毒素进行 紧急预防。 方法：立即肌注白喉抗毒素
1000-3000单位。
（二）治疗
1.抗生素的应用
青霉素、红霉素,不仅能抑制 白喉棒状杆菌的感染，也能预防恢 复期带菌者的出现。
专性需氧 营养要求较高 , 血琼脂和巧 克力色琼脂平板上均不能生长
※
鲍-金 ( Bordet-Gengou, B-G) 培养基，内含
血液、甘油和马铃薯。
菌落特征：3-5天，形成细小、光滑、隆起、有珠
光色泽的菌落，周围有不明显的溶血环。
Ⅰ相菌有毒力，新分离的菌株有荚膜和菌毛，为光滑 型,称为Ⅰ相菌。
首选红霉素首选红霉素对治疗反应对治疗反应迟缓的患者迟缓的患者可合用利福可合用利福平等其他药平等其他药第四节百日咳鲍特菌bordetellapertussis生物学性状革兰染色阴性短小杆菌两端浓染单个或成对短链排列光滑型菌株有荚膜血琼脂和巧克力色琼脂平板上均不能生长bordetgengoubg培养基内含血液甘油和马铃薯
(2)特点：进程曲折，发展缓慢，直到20世纪30年代情况才发生变 化。
3．交通通讯变化的影响 (1)新式交通促进了经济发展，改变了人们的通讯手段和 ，出行 方式转变了人们的思想观念。
(2)交通近代化使中国同世界的联系大大增强，使异地传输更为便 捷。
(3)促进了中国的经济与社会发展，也使人们的生活 多。姿多彩
第七节 棒状杆菌属--ຫໍສະໝຸດ 喉棒状 杆菌------引起人类白喉的病原菌
一、生物学性状
1. 形态与染色
临床检验技师-微生物检验(2019)讲义第十八章需氧兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验-(1008)
第十八章需氧 / 兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验本章内容一、棒状杆菌属（一）白喉棒状杆菌（二）其他棒状杆菌（类白喉棒状杆菌）二、芽胞杆菌属（一）炭疽芽胞杆菌（二）蜡样芽胞杆菌三、产单核李斯特菌四、丹毒丝菌属（红斑丹毒丝菌）五、阴道加特纳菌标题记忆图像记忆对比记忆棒状杆菌属· G+杆菌，菌体一端或两端膨大呈棒状，故名棒状杆菌。
·着色不匀，有异染颗粒。
·无鞭毛、无荚膜、无芽胞。
· 需氧，营养要求较高。
·能分解一些糖类，产酸不产气。
·种类较多，有白喉棒状杆菌、假白喉棒状杆菌、干燥棒状杆菌、溃疡棒状杆菌等。
引起人类致病的主要是白喉棒状杆菌，其他大多数为条件致病菌。
白喉棒状杆菌——生物学特性·形态与结构形态：细长微弯，一端或两端膨大。
排列：散在 L、V、 Y 字形及不规则栅栏状。
特殊结构：无荚膜、无芽胞、无鞭毛、无菌毛。
革兰染色：阳性。
亚甲蓝染色：深浅相间节段或着色较深的颗粒。
Neisser 染色：菌体染成黄褐色，颗粒染成紫黑色。
Albert 染色：菌体呈蓝绿色，异染颗粒蓝黑色。
·培养特性营养要求：较高。
气体环境：需氧或兼性厌氧。
温度环境： 35～37℃； pH7.2 ～ 7.8 。
菌落特征：普通培养基上生长不良，形态不典型。
吕氏血清斜面培养基：生长迅速， 10～18h 形成灰白色、湿润、S 型菌落。
异染颗粒明显。
亚碲酸钾血琼脂：菌落呈黑色。
白喉棒状杆菌——微生物检验及鉴定·标本采集：若需培养，应在使用抗生素或其他抗菌药物前用无菌长棉拭子，从可疑的伪膜边缘采集分泌物， 或采集鼻咽部或扁桃体黏膜上的分泌物。
如不能立即送检， 应将标本浸于无菌生理盐水或15%甘油 盐水中保存。
·形态学检查：革兰染色和异染颗粒染色（奈瑟法或阿培特法）。
镜检如见革兰阳性形态典型的棒状杆菌，在细菌的一端或两端有浓染的颗粒，和菌体着色不均匀，称为异染颗粒。
白喉棒状杆菌、溃疡棒状杆菌和假结核棒状杆菌的鉴定程序
白喉棒状杆菌、溃疡棒状杆菌和假结核棒状杆菌的鉴定程序IDENTIFICATION OF CORYNEBACTERIUM DIPHTHERIAE , CORYNEBACTERIUM ULCERANS AND CORNYNEBACTERIUM PSEUDOTUBERCULOSISISSUE NO :2 ISSUE DATE:03.02.06 ISSUED BY :Standards Unit, Evaluations andStandars LaboratoryTranslated Copy :复旦大学附属中山医院临床微生物中心本操作规程应当和Health Protection Agency的其它sop文件一起使用Email:hyacinth911@Page no: 1 of 9索引索引 (2)修订程序 (3)本文件主要内容 (4)介绍 (4)毒素特征鉴定原则1 安全事项 (6)2 目标菌株 (6)3 鉴定 (7)4 报告 (9)5 参考资料(略)ISSUE NO :2 ISSUE DATE:03.02.06 ISSUED BY :Standards Unit, Evaluations andStandars LaboratoryTranslated Copy :复旦大学附属中山医院临床微生物中心本操作规程应当和Health Protection Agency的其它sop文件一起使用Email:hyacinth911@Page no: 2 of 9修订程序本文件检索标号BSOP ID 2本文件标题白喉棒状杆菌、溃疡棒状杆菌和假结核棒状杆菌的鉴定程序每一标准操作程序都有一个独立的修订记录.当前本文件的修订记录列在本页. 每一份调整文件都由实验室的校对人员来更新.修订数/ 日期废弃的发行号插入的发行号页码涉及的章节修订2/03/02/2006 1.1 2 7811章节1章节3.3章节6从DH Green Book参考表格内的试验步骤增加联系方式ISSUE NO :2 ISSUE DATE:03.02.06 ISSUED BY :Standards Unit, Evaluations andStandars LaboratoryTranslated Copy :复旦大学附属中山医院临床微生物中心本操作规程应当和Health Protection Agency的其它sop文件一起使用Email:hyacinth911@Page no: 3 of 9白喉棒状杆菌、溃疡棒状杆菌和假结核棒状杆菌的鉴定程序文件主要内容:本sop介绍如何把咽喉、皮肤和其它部位的分离出来的棒状杆菌属鉴定到白喉棒状杆菌、溃疡棒状杆菌和假结核棒状杆菌种水平。
第十三章 白喉杆菌
第十三章棒状杆菌属棒状杆菌属是放线菌（分枝杆菌属、诺卡氏菌属、棒状杆菌属）中细胞壁含短链分枝菌酸（碳原子数不同）的菌属,G+,菌体一端或两端膨大呈棒状的杆菌，无荚膜、无鞭毛，不产生芽胞。
棒状杆菌种类较多(16种），包括致病的白喉杆菌，条件致病的有假白喉棒状杆菌、结膜干燥棒状杆菌、溃疡棒状杆菌、痤疮杆菌和阴道棒状杆菌等。
第一节白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌（C. diphtheriae）俗称白喉杆菌，是引起白喉的病原菌。
一、生物学性状(一）形态染色细长稍弯,菌体一端或两端膨大呈棒状，排列不规则，常呈L、V、X、T等字形或排成栅栏状。
G+；用美兰液染色菌体着色不均匀，常呈着色深的颗粒;用奈瑟氏染色，菌体染成黄褐色，一端或二端染成兰色或深兰色颗粒,此颗粒称为异染颗粒（Metachromatic granules），主要成分是核糖核酸和多偏磷酸盐，是本菌储存的养料，是本菌形态特征之一.衰老的细菌此颗粒因被消耗而不明显，革兰染色不定。
（二）培养特性需氧或兼性厌氧,最适温度为37℃，最适PH为7。
2~7。
8，在含血液、血清或鸡蛋的培养基上生长良好。
在血板上过夜，菌落1～3mm，呈灰白色、光滑、圆形凸起。
在含有0.03%～0.04％亚碲酸钾血清培养基上生长繁殖时，能吸收碲盐,并还原为金属碲，使菌落呈黑色，为本属其他棒状杆菌共同特点.且亚碲酸钾能抑制标本中其他细菌的生长，故亚碲酸钾血琼脂平板可作为棒状选择培养基。
根据在此培养基上白喉杆菌落的特点及生化反应，可将白喉杆菌区分为重型、中间型和轻型三型,三型均可致病，病情轻重与类型无明显关系，但其分布常随地区和年份有所不同，有流行病学意义。
（三）抵抗力对湿热的抵抗力不强，对一般消毒剂敏感。
煮沸1分钟或60℃经10分钟可杀死，5%石炭酸中经1分钟死亡，但对干燥、寒冷和日光的抵抗力较其他大多数无芽胞的细菌为强，在日常物品、食品及衣服上能生存多日.对青霉素和常用广谱抗生素比较敏感。
【临床微生物实验】_白喉棒状杆菌和炭疽芽孢杆菌
、神经细胞均有毒素受
A链促使辅酶Ⅰ上的腺苷
体
二磷酸核糖与EF2结合
• 肿瘤细胞对此毒素敏感
（二）短链分枝菌酸
细菌细胞壁中的一种糖脂，能破坏细胞 的线粒体，影响细胞的呼吸与磷酸化
所致疾病：白喉--急性呼吸道传染病
• 传染源：患者及带菌者 • 传播途径：飞沫或污染物品 • 临床表现咽痛、吞咽困难、淋巴腺炎、低热、全身不适及头痛
• 镜下形态：革兰阳性竹节样链状 排列大杆菌，有毒株有荚膜。
鉴定试验
• 串珠试验：接种待检菌于0.05－0.5U/ml青霉素培养基 37℃ 6h 形成大而均匀的圆球状菌体。 （类炭疽-）
• 青霉素抑制试验（青霉素5-、10+、100+U/ml） • 青霉素串珠和抑制联合试验 • 噬菌体裂解试验（AP631炭疽噬菌体） • 毒力试验：小白鼠动物试验
– 细菌------上呼吸道粘膜， 生长繁殖，产生毒素
细菌与毒素共同作用引起局部炎症： • 炎性渗出，坏死，纤维蛋白 →→假膜→→窒息
–毒素→→血液→→全身中毒症状
• 外周N---N炎：膈肌麻痹---呼吸困难 声带麻痹---声音嘶哑 软颌麻痹---吞咽困难
• 心肌---心肌炎
白喉假膜
患儿咽部白膜延 伸到悬雍垂
炭疽杆菌粗糙菌落和卷发样边缘（血平板）
• NaHCO3-BAP： --有毒株：5%CO2、37℃24--48h、产
生荚膜呈黏液型菌落，挑取时呈粘丝状(鉴 别要点)
--无毒株：粗糙型菌落 • 肉汤培养基：沉淀生长（絮状沉淀），培
养液澄清，无菌膜 • 明胶培养基：液化明胶，表面呈漏斗状
生化反应
• 分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、覃糖， 余-
广州医科大学 临床微生物检验
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• 病史：百白破疫苗出生后三个月 打了第一针，加强免疫因经济困 难而未接种（家属说舍不得花钱， 一针要40多元；孩子的父亲右 手残疾）
• 问题：什么病？ 患者和密切接 触者需如何处理？
* 白喉（Diphtheria ）是一种急性呼吸道传染病 特征：患者咽喉部出现灰白色的假膜 假膜
一、生物学性状
1. 白喉棒状杆菌的形态学特征
细长杆菌，粗细不一，一端或两端膨大呈棒状， 排列不规则，呈栅栏状、V字形或L形。
革兰染色 奈瑟染色
1. 白喉棒状杆菌的形态学特征
异染颗粒 成分： 核糖核酸 + 多磷酸盐 作用： 储存养料、鉴定价值
Albert染色
2. 培养特性
*吕氏血清斜面培养物 含凝固的血清，生长
2. 致病机制
1）白喉外毒素：只有携带β棒状杆菌噬菌体的溶 原性白喉杆菌才能产生外毒素
外毒素结构： B亚单位：有结合和转位功能 A亚单位：其上有1个催化区
作用靶位：心肌和神经细胞
2. 致病机制
2）索状因子 破坏哺乳动物细胞中的线粒体，
影响细胞呼吸与磷酸化。 3）K抗原：抗吞噬
3. 所致疾病：
白喉——急性呼吸道传染病 *传染源：患者、恢复期带菌者、健康带菌者 *传播途径：飞沫或污染（多在秋冬季） *临床表现：
亚碲酸钾琼脂平板 培养 黑色菌落
• Elek平板试验
•
白喉杆菌的有毒菌株可产生白喉外毒素，白喉抗毒素
可与其特异性结合，中和白喉外毒素的毒性，可用细菌培
养法和动物试验予以证实。
•
【原理】
• Elek平板毒力试验是一种体外的毒力测定方 法。通过观察白喉抗毒素与白喉外毒素的双向琼 脂扩散现象，判断所培养的白喉杆菌的产毒性。
第二十三章： 需氧革兰阳性杆菌及检验
检验系 刘涛
第一节
棒状杆菌属
* G＋菌，菌体一端或两端彭大呈棒状而得名 * 菌体染色不均匀，出现节段浓染或异染颗粒 * 排列不规则，呈栅栏状，或L形，或V形 * 无荚膜、无鞭毛、不产生芽胞 * 多为条件致病菌，只有白喉棒状杆菌是致病菌
白喉棒状杆菌
CASE
• 患儿，男，6岁，咽痛、声嘶、 咳嗽、发热3天；
•
【材料】
•
1．产毒素的白喉杆菌、类白喉杆菌及待测的白喉杆
菌吕氏血清斜面24h培养物。
•
2．Elek琼脂蛋白胨培养基。
•
3．白喉抗毒素(1000u/m1)、马或兔血清(无菌)、无
菌滤纸条(6.0×1.5cm)、无菌5ml刻度吸管、无菌平皿及
镊ห้องสมุดไป่ตู้等。
•
• 【方法】
• 1．将Elek琼脂蛋白胨培养基10ml加热 融化，待冷至50～55℃时，加入无菌的马或 兔血清2ml，立刻混匀，并倾注平板。
3. 所致疾病：
* 临床表现：
1）细菌与毒素共同作用引起局部症状：
炎症，坏死，纤维蛋白渗出，假膜导致窒息
2）毒素入血引起全身中毒症状：
外周神经炎：膈肌麻痹—呼吸困难—声带麻
痹—声音嘶哑—软颌麻痹—吞
心肌炎
咽困难
4. 免疫性
1）人群易感性 * 普遍易感； * 1~5岁儿童； * 成人也有可能。
2）免疫特点 * 抗毒素免疫； * 感染后机体可获得牢固的免疫力； * 机体还可通过其它方式获得免疫力：
轻型 菌落β溶血、光泽、凸起
3. 变异
* 白喉棒状杆菌形态、菌落和毒性均可发生变异。
噬菌体
* 无毒株
溶原性细菌（产生外毒素）
4. 抵抗力
* 抗寒冷和干燥 * 对湿热抵抗力弱 * 对青霉素、氯霉素、红霉素敏感
对磺胺不敏感
二、致病性与免疫性
1. 致病物质：
* 白喉毒素（diphtherotoxin） * 索状因子（cord factor） * K抗原（K antigen）
六月以下婴儿---- 母亲 成人---- 隐性感染、疫苗
三、微生物学检查法
* 标本：假膜边缘取材 * 涂片镜检：
标本片
革兰染色 奈瑟染色 Albert染色
典型
镜下特点
菌体颜色 菌体排列 异染颗粒
* 分离培养：
标本 接种 吕氏血清斜面 37℃ 直接涂片镜检
6~12 h
（快速诊断）
接种
灰白色小菌落
• 2．趁琼脂未凝固前，用无菌镊子将浸有 白喉抗毒素(1000u/m1)的滤纸条(尽量使滤 纸条上的抗毒素流尽)贴于平板中央，待琼脂 凝固后将平板置37℃温箱内1～2h(平板面朝 下)，使培养基略干燥。
• 3．接种细菌，以接种环取产毒素白喉杆菌、 类白喉杆菌和待检的白喉杆菌分别以与滤纸
条成垂直的方向划线接种，接种线须密且集
中，接种的菌量宜多。若用此法测未知标本 需设阳性对照(产毒株)及阴性对照(无毒株)， 一般每个平板可接种5～6个标本。置37℃培 养24、48、72h观察结果。
• 【结果】
•
注意观察在接种
线两侧距滤纸条约
1cm处有无与接种线
呈45°角的白色沉淀
线出现。有沉淀者，
白喉杆菌毒力试验阳
性，该菌株产生白喉
迅速，异染颗粒明显。 *亚碲酸钾血平板
黑色菌落。 亚碲酸盐
还原
碲（黑色）
在亚碲酸钾血琼脂平板上的白 喉棒状杆菌菌落（18～24 h）
根据对亚碲酸钾的还原能力、菌落形态及生 化反应可将白喉棒状杆菌分为3种类型：重型 （gravis）、轻型（mitis）和中间型 （intermedius）。
重型 菌落不溶血、不规则、有条纹
外毒素；无沉淀线者，
白喉杆菌毒力试验阴
性，该菌株不产生白
喉外毒素。
* 毒力鉴定：动物试验，Elek平板毒力实验
白喉杆菌菌苔 沉淀线(阳性)
含白喉抗毒素滤纸片
Elek毒力实验结果
四、防治原则
1. 预防 * 人工主动免疫：注射DTP混合疫苗 * 人工被动免疫：注射白喉抗毒素 * 药物预防：用青霉素或红霉素预防
2. 治疗
* 白喉抗毒素：皮试，尽早使用
* 抗生素