药物分析1.7含量测定

1.7 含量测定药品的含量测定是指准确测定药品有效成分或者指标性成分的测定。

含量测定时评价药品质量、判断药物优劣和保证药品疗效的的重要手段。

含量测定需在鉴别无误和杂质检查符合规定的基础上进行。

除个别品种不收载含量测定项外，原则上均按药品质量标准进行含量测定。

药品的含量测定应根据侧成分的物理化学性质选择相应的测定方法。

测定药物含量时，可选用容量分析法和仪器分析法。

容量分析法（滴定分析法）的仪器设备简单、易于操作，不需要使用化学对照品，成本低、速度较快，结果准确、方法耐用性高，但方法缺乏专属性，主要适用于对结果准确度和精密度要求较高的样品测定。

虽然其专属性不如先分离后分析的仪器分析法高，但仍作为国内外药典中药物的含量测定首选含量分析法；光谱分析法简便、快速，灵敏度高、并具有一定的准确度，但方法专属性稍差，主要适用于对灵敏度要求较高、样本量较大的分析项目；色谱分析法则具有高灵敏度与高专属性、并具有一定的准确度，但其结果计算需要对照品，本法主要适用于对方法的专属性与灵敏度要求较高的组分复杂、干扰成分较多样品的含量测定。

随着仪器和检测技术的快速发展，仪器分析法的准确度和精密度越来越高。

国内外药典中应用仪器分析法进行药物含量测定日益普及。

采用仪器分析方法测定含量时，需要采用化学对照品。

1.7.1方法选择药物的含量测定所采用的分析方法一般要求操作简便，结果准确重现。

但对于药物的不同形式，其含量测定方法的选择依据有所侧重。

对于化学原料药的含量测定，因为纯度较高、所含杂质较少，故强调测定结果的准确和重现，通常要求方法具有更高的准确度和精密度，首选容量分析法,如用容量法不适宜时，可考虑选用HPLC法，尤其在有关物质干扰，或多组份物质时，具有特殊优势。

因仪器或操作间的偏差较大，一般不选用UV法，尤其不首选“吸收系数法”定量，不选用末端吸收峰作测定波长；须用UV法时，可采用不受仪器及其它变化影响的“对照品比较法”定量，测定溶液的吸收度宜在0.3～0.7间。

元素测定法如定氮法，在其它方法均不适宜时可采用，但因不能反映化合物含量的变化情况，此法不可用于稳定性考察中。

对于药物制剂的含量测定，则因为制剂组分复杂、干扰物之多，且含量限度一般较宽，故更加强调方法的灵敏度和专属性或则选择性，选用方法时应考虑辅料等的干扰，首选方法一般为HPLC法，在有关物质、辅料不干扰的情况下，也可选用UV法或原料药项下的容量法，复方制剂首选HPLC法较为适宜。

而对于药物制剂的定量检查，如溶出度、含量均匀度检查中药物的溶出量或则含量测定，因为分析样本量较大、且限度亦较宽，在辅料不干扰测定时宜选用管谱分析法。

药品的含量或效价是评定药品的主要指标之一，设计其测定方法时，应根据药品特性、剂型、处方、鉴别试验和纯度检查综合考虑，当鉴别试验和纯度检查保证了专属性和纯度的情况下，含量测定方法的选择要着眼于准确性、稳定性和可重复性。

1.7.1.1原料药含量的测定一．选用原则对于组份单一的原料药，首选精密度高，操作简便、快速的容量法测定含量，可根据药物分子中所具有的官能团及其化学性质，选用不同的容量分析方法，但应符合如下条件：（1）反应须按一个方向完全进行；（2）反应要迅速，必要时可通过加热或加入催化剂等方法提高反应速度；（3）共存物不得干扰主要反应，或能用适当方法消除；（4）确定等当点的方法要简单、灵敏；（5）标化滴定液所用基准物质易得，并符合纯度高、组成恒定且与化学式符合、性质稳定（标化时不发生副反应）等要求。

方法叙述中要强调：（1）供试品的取用量应满足滴定精度的要求（消耗滴定液约20ml）；（2）滴定终点的判断要明确，如选用指示剂法，应考虑其变色敏锐，提供滴定曲线，并用电位法校准其终点颜色。

（3）为排除因加入其它试剂或混入杂质对测定结果的影响，或便于剩余滴定法的计算，可采用“将滴定的结果用空白试验校正”的办法；（4）最后要给出滴定度（采用四位有效数字）。

容量法测定含量要注意参加反应的应是药物分子活性部分，而不应是次要的酸根或碱基部分。

如盐酸西替立嗪、盐酸氨溴索，有研究者采用氢氧化钠滴定液滴定法直接测定其含量，事实上这种方法测定的是其中盐酸的含量，由于其成盐工艺中的酸、碱配比不当时，可严重影响成品酸碱度，故此法的测定结果并不能代表其活性成分有机碱的含量，这种方法不能准确把握其有效成分含量。

应采用非水滴定法，以无水冰醋酸为溶剂屏蔽掉盐酸的干扰，用高氯酸滴定其有机碱的含量。

高氯酸非水滴定法因适应性广（适用于有机弱碱及其盐类）、方法简便和测定结果精密等优点，在化学原料药的含量测定中较为常用。

二．化学分析法1．酸碱滴定法酸碱滴定法是在水溶液中以酸碱中和反应来测定物质含量的方法，可用来测定酸、碱、弱酸盐、弱碱盐等。

芳酸及其酯类原料药的含量测定多采用酸碱滴定法，如萘普生、阿司匹林。

2．非水溶液滴定法在非水溶剂（有机溶剂与不含水的无机溶剂）中进行滴定分析的方法。

在非水溶剂中滴定，可使原来在水中不能进行完全的反应顺利进行，还能使在水中不能溶解的药物溶解在非水溶液中，增大药物的溶解度，扩大滴定分析的应用范围。

非水滴定法包括非水碱量法和非水酸量法。

其两者的比较参看表1。

表1.非水碱量法和非水酸量法的比较（1）非水碱量法 通常是以冰醋酸为溶剂，高氯酸为滴定液，测定弱碱性药物及其盐类的分析方法，在药物含量测定中应用非常广泛。

溶剂：碱的滴定宜选择酸性溶剂，冰醋酸是滴定弱碱性物质最常用的溶剂。

市售的冰醋酸中含有水分，水分的存在可影响滴定突跃，故一般按计算量加入醋酐，以除去水分。

滴定液：非水碱量法通常使用高氯酸的冰醋酸溶液作滴定液，因为高氯酸在冰醋酸中有较强的酸性，且绝大多数有机碱的高氯酸盐易溶于有机溶剂，有利于滴定的进行。

市售高氯酸为含HCl04 70.0%～72.O%的水溶液，故需加入计算量的醋酐除去水分。

高氯酸滴定液受温度影响较大，因此样品的测定与标定应在同一温度进行，若温度差超过2℃以上，应重新标定或带温度补偿值加以校正。

校正公式：)(0011.01001T T C C I -+= 指示剂：非水碱量法可用指示剂或电位法指示终点，常用的指示剂为结晶紫。

（2）非水酸量法 通常是在碱性溶液中，以甲醇钠为滴定液，麝香草酚蓝或偶氮紫为指示剂，二甲基甲酰胺、乙二胺等为溶剂，滴定弱酸性药物的分析方法。

主要用于滴定极弱的酸类如酚类、酰亚胺类药物的含量测定，如乙虎胺。

非水溶液酸碱滴定法常用于氨基酸类、有机碱及其盐类等的原料药的含量测定，如尼可刹米、地西泮。

3．银量法对于易水解或则机构中含有卤族元素的药物，能与Ag +生成AgX 沉淀，可选用银量法测定药品含量，即可用指示剂判定终点，也可用电位滴定法判定。

银量法按所用指示剂的不同分为铬酸钾指示剂法、铁铵矾指示剂法和吸附指示剂法。

（1）铬酸钾指示剂法 是在中性溶液中，用硝酸银滴定液滴定氯化物或溴化物，以K 2CrO 4作指示剂，Ag +和CrO 42- 形成砖红色沉淀指示终点。

多用于Cl -、Br - 的测定。

（2）铁铵矾指示剂法用NH4SCN为滴定剂，以硫酸铁铵为指示剂，在硝酸酸性（防止出现Fe（OH）3红棕色沉淀）溶液中测定Ag+的滴定方法，Fe3+和SCN-形成红色配合物指示终点。

（3）吸附指示剂法用硝酸银滴定液滴定，以吸附指示剂（荧光黄）确定终点的滴定方法，一般用以测定卤化物，滴定时避免阳光直射，因卤化银遇光易分解，使沉淀变为灰黑色。

4．碘量法是以碘为氧化剂，或以碘化物为还原剂进行滴定的方法。

按照滴定的方式分为直接碘量法、剩余碘量法和置换碘量法。

（1）直接碘量法是用碘滴定液直接滴定还原性物质的方法。

在滴定过程中I2被还原为I-，该法只能在酸性、中性或弱碱性溶液中进行，一般用淀粉指示剂指示终点，淀粉遇碘变蓝色，反应极其灵敏。

也可用碘自身的颜色指示终点，化学计量点后，溶液中稍过量的碘即显黄色而指示终点。

如维生素C的含量测定。

（2）剩余碘量法是在供试品（还原性物质）溶液中，先加入定量过量的碘滴定液，待I2与待测组分反应完全后，再用硫代硫酸钠滴定液滴定剩余的碘，来求出待测组分含量的方法。

滴定时用淀粉作指示剂，在近终点时加入，因为当溶液中有大量碘存在时，碘易吸附在淀粉表面，影响终点的判断。

如复方对乙酰氨基酚片中咖啡因的含量测定。

（3）置换碘量法如硫代硫酸钠滴定液的标定即采用该法，以重铬酸钾为基准物，加入碘化钾置换出定量的碘，碘再用硫代硫酸钠滴定液滴定。

5．亚硝酸钠法是利用亚硝酸钠滴定液在盐酸溶液中与具有芳伯氨基的化合物发生重氮化反应，定量生成重氮盐，根据消耗亚硝酸钠的量来计算药物含量的方法，可选用永停滴定法判定终点。

如盐酸普鲁卡因的含量测定。

6．铈量法也称硫酸铈法，是以硫酸铈[Ce（S04）2]作为滴定液，在酸性条件下测定还原性物质的滴定方法。

采用邻二氮菲作指示剂，化学计量点后，Fe2+被氧化成Fe3+，生成邻二氮菲铁，由红色转变为淡蓝色而指示终点。

铈量法由于不受制剂中淀粉、糖类的干扰，因此特别适合片剂、糖浆剂等制剂的测定。

《中国药典》2005年版采用铈量法测定的药物有：硫酸亚铁片及硫酸亚铁缓释片、葡萄糖酸亚铁及其制剂、富马酸亚铁及其制剂等。

7．配位滴定法是以形成稳定配合物的配位反应为基础的滴定分析法。

主要用于金属离子的测定，目前应用最广泛的配位滴定剂是EDTA（乙二胺四醋酸二钠），因此通常所谓的配位滴定法，主要是指使用EDTA滴定液的滴定法，一般选用金属指示剂指示滴定终点。

如葡萄糖酸钙、硫酸锌的含量测定均采用此法，用铬黑T作指示剂。

8．重量分析法重量分析法是通过称量物质的某种称量形式的质量来确定被测组分含量的一种定量分析方法。

当无合适的容量分析法时，可通过测定药品中有效含量或则是其衍生物重量对药品含量进行测定。

二．仪器分析法1．紫外-可见分光光度法通常分子结构中含有共轭体系结构、苯环和杂环的药物都可以通过紫外分光光度法检测其特征吸收光谱，计算出其含量。

有色药物或与显色剂反应后在可见区有特征吸收的药物，可选用可见分光光度发测定含量。

此法准确度与精密度均较高，灵敏度亦较高，仪器价格低廉，仪器操作简便快捷，应用广泛，是原料药含量测定首选的仪器分析方法。

2．色谱法（1）高效液相色谱法本法具有高灵敏度，高选择性，高效能，高速度及应用广泛的特点，HPLC法使用高效固定相，流动相采用高压泵输送，在线进行检测，是杂质或则其他干扰因素较多的品种其含量测定的常用方法，色谱柱的填充剂通常用十八烷基硅烷键合硅胶，检测器通常用紫外检测器，定量通常采用外标法，有时也可选用内标法加校正因子法、面积归一化法等。

（2）气相色谱法气象色谱法采用气体为流动相流进装有填充剂的色谱柱进行分离测定的，主要用于分离分析易挥发的物质。

本法是一种高效能、高选择性、高灵敏度、操作简单、应用广泛的分离分析方法。