实验6-a-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测要点
《高三生物复习资料》实验6-α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测-精选文档
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六、实验步骤
5mg α-淀粉酶+4mL蒸馏水 +5g石英砂(搅拌30min)
装入下端接有气门心并 用夹子封住的注射器中 10倍体积蒸馏水洗涤注射器以除去 未吸附的淀粉酶,流速1mL/min 用滴管滴加淀粉溶液,以 0.3mL/min流速过柱 为什么要控制流速? 流出5mL溶液后接收0.5mL流出液,加 1~2滴过柱KI-I2溶液,观察颜色 10倍体积蒸馏水洗涤注射器4℃保存
一、基础知识 固定化酶:是将酶用物理或化学的方法 固定在某种介质上,使之成为不溶于水 而又有酶活性的制剂。 优点:固定化酶固定在一定的空间范围 内,可以重复使用,且能及时与产物分 离。
酶固定化的常用方法
吸附法
(1)物理吸附法 (基团与载体 共价结合。
交联法
酶蛋白的氨基以戊二醛 与载体相连。
四、实验材料 1、 α-淀粉酶,石英砂, 2、可溶性淀粉溶液 3、5mmol/LKI-I2溶液
五、实验原理
一定浓度的淀粉溶液经过固定酶柱后,
可使淀粉水解成糊精。用淀粉指示剂溶液测
试,流出物呈红色,表明水解产物糊精生成。
淀粉
α-淀粉酶
糊精
β-淀粉酶
麦芽糖
糖化淀粉酶
葡萄糖
遇碘显 蓝色
遇碘显 红色
遇碘不 显色
七、实验结果
淀粉溶液
吸附有α-淀粉酶的石英砂
1
2
3
4
1、2mL水+1~2滴KI-I2溶液 2、2mL淀粉液+1~2滴KI-I2溶液 3、2mL淀粉滤液+1~2滴KI-I2溶液 4、2mL淀粉滤液+1~2滴KI-I2溶液+稀释1倍
八、问题讨论
1.如何证明洗涤固定化酶柱的流出液中没有淀 粉酶?
a-淀粉酶的固定化与淀粉溶液的检测.
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淀 粉
α-淀粉酶ຫໍສະໝຸດ 糊 精β-淀粉酶麦 芽 糖
糖化淀粉酶
葡 萄 糖
运用吸附法将 α - 淀粉酶的固定在石英砂上。一定浓度的 淀粉溶液经过固定化的 α - 淀粉酶催化后,生成糊精,使流 出液加入KI-I2指示液后呈红色,表明水解产物糊精生产。
固定化装置—层析柱
实验材料制备
a-淀粉酶的固定化
在烧杯中将5mg a-淀粉酶溶于4ml蒸馏水中。再加入
5g石英砂,不时搅拌,30分钟后装入层析柱中。
用10倍体积的蒸馏水洗涤此层析柱以除去未吸附的游
可溶性淀粉溶液
离淀粉酶,流速控制为1ml/min。
取50mg可溶性淀粉溶于100ml热水中,搅拌均匀。
5mmol/L KI-I2溶液
称取0.127g碘和0.83g碘化钾。加蒸馏水100ml。
实验步骤
知识结构
一、固定化技术基础知识 二、a-淀粉酶的固定化与淀粉水解 作用的检测
一、固定化技术基础知识
固定化技术:利用物理或化学方法将酶或细
胞固定在一定空间内的技术,包括吸附法、 包埋法、化学结合法(将酶分子或细胞相互 结合,或将其结合到载体上)。
物理吸附法
包埋法
化学结合法
酶更适合采用化学结合和物理吸附法
1.将灌注了固定化酶的层析柱放在铁架台
上,用滴管滴加淀粉溶液,使淀粉溶液已 0.3mL /min的流速过柱。在流出5mL后接 收0.5mL流出液,加入1-2滴KI-I2 溶液,观 察颜色。用水稀释1倍后再观察颜色。
2.试验后,用10倍体积的蒸馏水洗涤此层析
柱,放置在4℃冰箱里,几天后再重复上述 实验,看是否有相同结果。
固定化 细胞多采用包埋法固定
实验6-a-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测
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(2)固定在载体上的酶可以被反复利用。
3.固定化酶方法
固定化酶:就是将水溶性的酶用物理或化学的方法 固定在某种介质上,使之成为不溶于水而又有酶活 性的制剂。 固定化的方法: 吸附法、 交联法结合法
(三)实验
实验原理: 本实验是用吸附法将a-淀粉酶固定在石英砂上,一 定浓度的淀粉溶液经过固定化酶柱后,可使淀粉水解 成糊精,用淀粉指示剂溶液测试,流出物呈红色表明 水解产物糊精生成。
第二部分 :酶的应用
实验目的:
1.制备固定化a-淀粉酶 2.进行淀粉水解的测定
(一)酶制剂 1、酶制剂的概念和种类 ①定义: 含有酶的制品 ②种类: A、液体酶制剂 治疗某些胃病的胃蛋白酶液 B、固体酶制剂
多酶片、加酶洗衣粉中的蛋白酶 和脂肪酶
2、酶的生产 ① 定义:采用一定的技术直接从动植物或微生 提 物的组织、细胞中将酶提取出来 取 简单易行,在动植物或微生物资源丰 法 优点: 富的地区具有应用价值 缺点: 要有充足的原材料,广泛应用受到限制 实例:在屠宰厂,可以从家畜胰脏中提取 出胰酶;在水果加工厂,可以从菠萝皮中 提取出菠萝蛋白酶
直接使用酶和固定化酶的优缺点
类型 优点 不足
直接 使用酶
催化效率高 低耗能 低污染
酶既能与反应物接 触,又能与产物分 离,同时,固定在 载体上的酶还可以 被反复利用
对环境条件非常敏感,容易 失活;溶液中的酶很难回收, 不能被再次利用,提高了生 产成本;反应后酶会混在产 物中,难分离
在生产实践中,很多产物 的形成都通过一系列的酶 促反应才能得到的 难以一次性固定化多种酶
淀粉
α-淀粉酶
糊精
β淀粉酶
麦芽糖糖化淀粉酶 葡萄糖
遇碘不显色
遇碘显蓝色
α-淀粉酶的固定化以及淀粉水解作用的检测
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《α-淀粉酶的固定化与淀粉水解作用的检测》实验方案第二实验班一组组长:张金昌组员:胡建军、朱恩梅、石仙竹、谢娟丽、李昀奕、郭天天2013.10.15α-淀粉酶的固定化与淀粉水解作用的检测一、实验背景资料:1、酶:活细胞产生的具有催化作用的有机物,其中绝大多数酶是蛋白质;具有高效性、专一性,同时,也有高度不稳定性,因为绝大多数酶的本质是蛋白质,凡是能使蛋白质变性的因素,如高温、高压、强酸、强碱等都会使酶丧失活性。
2、酶促反应:指由酶作为催化剂进行催化的化学反应;3、α-淀粉酶:为枯草杆菌的α-淀粉酶,其作用的最适PH为5.5~7.5,最适温度为50~70℃。
广泛分布于动物(唾液、胰脏等)、植物(麦芽、山萮菜)及微生物。
此酶既作用于直链淀粉,亦作用于支链淀粉,其特征是引起底物溶液粘度的急剧下降和碘反应的消失,最终产物在分解直链淀粉时以麦芽糖为主,此外,还有麦芽三糖及少量葡萄糖;在分解支链淀粉时,除麦芽糖、葡萄糖外,还生成分支部分具有α-1,6-键的α-极限糊精。
4、固定化酶:借助于物理和化学的方法把酶束缚在一定的空间内并仍具有催化活性的酶制剂。
酶更适合采用化学结合和物理吸附法固定化。
吸附法是酶分子吸附于水不溶性的载体上,它的优点是操作简便,条件温和,不会引起酶变性或失活,且载体廉价易得,可以反复使用。
5、吸附剂:常用的吸附剂有活性炭、氧化铝、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃等。
活性炭:活性炭是一种多孔性的含炭物质, 它具有高度发达的孔隙构造, 是一种极优良的吸附剂, 每克活性炭的吸附面积更相当于八个网球埸之多. 而其吸附作用是藉由物理性吸附力与化学性吸附力达成. 其組成物质除了炭元素外,尚含有少量的氢、氮、氧及灰份,其結构则为炭形成六环物堆积而成。
由于六环炭的不规则排列,造成了活性炭多微孔体积及高表面积的特性。
硅胶:硅胶是由硅酸凝胶mSiO2·nH2O适当脱水而成的颗粒大小不同的多孔物质。
具有开放的多孔结构,比表面(单位质量的表面积)很大,能吸附许多物质,是一种很好的干燥剂、吸附剂和催化剂载体。
α淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测精品课件(一)
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α淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测精品课件(一)α淀粉酶是一种催化淀粉分解的酶,具有广泛的应用价值,在食品工业、饲料工业、医药工业和纺织工业都有重要的应用。
对于α淀粉酶的固定化和淀粉水解作用的检测具有重要的研究价值。
本文将介绍α淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测精品课件。
一、α淀粉酶的固定化1. 研究目的α淀粉酶固定化的目的是利用固定化技术提高酶的稳定性和活性,使其在工业应用中更加优越。
2. 固定化方法(1)吸附法:将酶直接吸附在固体载体表面上,如硅胶、纤维素等。
(2)共价结合法:通过化学反应将酶共价结合在载体上,如聚酰胺凝胶。
(3)交联法:利用交联剂将酶与载体交联,形成固定化酶。
3. 固定化效果α淀粉酶经过固定化后,具有更好的稳定性和活性,可以提高酶的使用寿命和效率。
二、淀粉水解作用的检测1. 研究目的淀粉水解作用的检测旨在测定酶水解淀粉的效率,评价酶的性能和应用价值。
2. 检测方法(1)碘酒法:将淀粉样品与酶一起加入反应体系中,加入碘酒滴定,在淀粉被水解完全后,碘酒滴定出现无色。
(2)比色法:将淀粉样品与酶一起加入反应体系中,加入糖色再经比色,根据测试淀粉的浓度,推算出酶的效率。
(3)电化学法:利用电化学技术测定反应体系中的还原电位,根据反应体系的电化学响应来测定淀粉水解的效率。
3. 检测效果通过淀粉水解作用的检测,可以评估α淀粉酶的性能和应用价值,指导其在工业应用中的使用。
综上所述,α淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测是酶学研究领域中的重要课题。
本文介绍了α淀粉酶的固定化方法、效果,以及淀粉水解作用的检测方法和效果,对于淀粉酶及其应用研究人员具有重要的参考价值。
实验6 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测
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怎样解决这些问题呢?
——固定化酶技术
一、酶与固定化酶
• 酶 活细胞产生的具有生物催化作用的
生物大分子。
• 固定化酶 (固相酶)
将水溶性的酶用物理或化学 的方法固定在某种介质上, 使之成为不溶于水而又有酶 活性的制剂。
• •
•
•
固定化酶的优点 (1)使酶固定化后有一定的机械强度,催化反 应的过程可管道化、连续化和自动化; (2)酶不溶解在催化反应的溶液中,产物更易 纯化; (3)固定化酶可反复使用,更经济,更利于工 厂化生产; (4)固定化酶提高了酶的稳定性,可较长时间 贮存和使用;
6、实验结果: • 淀粉溶液+指示剂: 呈蓝色 • 亲和层析洗脱液+指 示剂: 呈红色 • 贮于冰箱几天后重 复实验: 呈红色
固定化酶的用途
在工业上的应用: 柚苷酶固定化酶用于果汁脱苦; 木瓜蛋白酶固定化酶用于啤酒澄清; 葡萄糖异构酶固定化酶用于制造果糖,提高甜度。
在化学分析和临床诊断上的应用: 用脲酶固定化酶测定血液或尿中的尿素含量。 在医药上的应用: 将苯丙氨酸羟化酶及其辅酶制成不溶酶,注射到 患者体内,可有效治疗苯丙酮尿症。 缺少乳糖酶,不能水解牛乳中的乳糖,引起腹痛 腹泻,可用乳糖酶固相酶在体内或体外水解乳糖。
5、实验步骤:
将注射器固定在注射器架上 用滴管滴加淀粉溶液,流速0.3ml/min,(尽量慢)
流出5ml后接收0.5ml(约10滴)流出液 加入1~2滴KI-I2溶液,观察颜色 用水稀释1倍后再观察颜色(与对照组比较) 实验后,10倍柱体积蒸馏水洗涤此柱,放置在4℃冰箱中 几天后重复实验,观察结果
固定化酶的不足之处 不能催化一系列反应
二、酶的固定化
• 方法: 吸附法 包埋法 共价偶联法 交联法
固定化-淀粉酶及活性测定要点
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固定化-淀粉酶及活性测定要点实验六固定化α-淀粉酶及活性测定一、实验目的:学会交联法制备固定化酶的操作技术二、实验原理:制备固定化酶的方法很多,利用双功能试剂或多功能试剂在酶分子间,酶分子与惰性蛋白间,或酶分子与载体间进行交联反应,以共价键制备固定化酶的方法称为交联法,本实验即采用这种方法。
交联剂为戊二醛,载体为甲壳素。
三、实验器材:1.恒温水浴锅2.恒温振摇仪四、实验试剂1. 5%戊二醛2. 甲壳素3. 碘原液:称取碘1.1g。
碘化钾2.2g,置于小烧杯中,加10ml 蒸馏水使之溶解,然后转入容量瓶中。
再加少量的蒸馏水洗涤烧杯数次,洗涤液均转入容量瓶中,最后定容至50ml。
摇均后放于棕色试管中备用。
4. 比色稀碘液:取碘原液2ml,加碘化钾20g,再用蒸馏水定容至5000ml。
5. 2%淀粉溶液:称取2g可溶淀粉,放入小烧杯中,加少量蒸馏水做成悬浮液。
然后在搅拌下注入沸腾的蒸馏水中,继续煮沸一分钟,冷却后加蒸馏水定容至100ml。
6. pH6磷酸氢二钠——柠檬酸缓冲液:称取磷酸二氢钠(Na2HPO4.12H2O)45.23g,柠檬酸(C6H8O7.H2O)8.07g,先在烧杯中使之溶解,然后转入容量瓶中定容至1000ml。
7. 标准终点色溶液,A液:精确称取氯化钴(CoCl.6H2O)40.2493g和重洛酸钾(K2GrO7)0.4878g,用蒸馏水定容至500ml.B液::精确称取络黑T40mg,用蒸馏水定容至100ml.同时取A液40ml、B液5ml、混合后置于冰箱中待用。
混合液在15天内使用有效。
五、实验操作1. 酶液的制备:精确称取α-淀粉酶2g,先用少量40℃pH6的磷酸二氢钠——柠檬酸缓冲液溶解,溶解过程中轻轻用玻璃棒捣研。
将上层液小心倾入100ml容量瓶,沉渣部分再加入少量上述缓冲液,如此反复捣研3—4次。
最后,将溶液与残渣全部移入容量瓶中,用缓冲液先定容摇匀后,通过四层纱布过滤,溶液供测定使用。
实验6-α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测
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固定化原生质体
注意:一般要添加渗透压稳定剂,以防止原生质体破裂。 ①由于去除了细胞壁的扩散障碍,有利于氧气和营养物 质的传递和吸收和胞内产物的分泌。 ②原生质体不稳定,容易破裂,固定化后,由于载体的 保护作用,稳定性提高,可反复使用和连续使用较长的 时间,利于连续化生产。 ③易于和发酵产物分开,有利于产物的分离纯化,提高 产品质量。
①溶解淀粉:50 mg 可溶性淀粉溶于100 mL热水 中,搅拌均匀。 ②过柱:使淀粉溶液以0.3 mL/min的流速过柱, 在流出5mL淀粉溶液后接收0.5 mL流出液。 ③检测:加入1-2滴KI-I2溶液,观察颜色变化。 用水稀释1倍后再观察颜色。
固 定 化 酶 柱
淀粉完全水解?
每分钟6滴
控制流速:让淀粉和淀粉酶充分接触反应。
关的问题:
(1)通常从腐烂的水果上分离产果胶酶的微生物,其
原因除水果中果胶含量较高外,还因为
。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
(2)为了获得高产果胶酶微生物的单菌落,通常对分
离或诱变后的微生物悬液进行
。
腐烂的水果中含产果胶酶的微生物较多 涂布分离或划线分离
(3)在某种果汁生产中,用果胶酶处理显著增加了产量
,其主要原因是果胶酶水解果胶使
什么是固定化酶
固定化酶:将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某 种非水溶性介质上,使之成为不溶于水而又有酶活性的 制剂。
游离酶
酶在水溶液中很不稳定,且不利于工业化使用。
固定化酶的优点
①能提高酶的稳定性。 ②可以反复多次使用,大大降低生产成本。 ③反应后易于与产物分离,利于提高产品质量。 ④反应条件易于控制,生产可实现连续化和自 动化。
。果汁
生产中的残渣果皮等用于果胶生产,通常将其提取液浓
浙科版高中生物选修一 第二部分 实验6 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测(共18张PPT)
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难以一次性固定化多种酶
物理 吸附法
通过物理吸附Leabharlann 用,把酶固定在纤 维素、琼脂糖、多孔玻璃或离子交
换树脂等载体上
考点二
要点突破
命题设计
技法提炼
返回
实验1.a-淀粉酶的固定化: 方法: 吸附法 载体: 石英砂
淀粉溶液
固定化酶柱
实验二、固定化α淀粉酶对淀粉水解作用的检测
实验原理:一定浓度的淀粉溶液经过固定化酶柱后 ,可使淀粉水解成糊精,用淀粉指示剂溶液测试, 流出物呈红色表明水解产物糊精生成
酶。
(3)作用:将果胶分解成可溶性的分子,使出汁率提高,也使
浑浊的果汁变得澄清。
考点一
要点突破
命题设计
返回
1.制备固定化a-淀粉酶 2.用固定化a-淀粉酶进行淀粉水解的测定 3.进行固定化a-淀粉酶重复利用效果实验
固定化酶:就是将水溶性的酶用物理或化学的方 法固定在某种介质上,使之成为不溶于水而又有 酶活性的制剂。
优点: (1)使酶既能与反应物接触,又能与产物分离; (2)固定在载体上的酶可以被反复利用。
吸附法、 交联法、 包埋法、 共价偶连法
α淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测
2.酶的固定化方法及适用对象
名称
原理
图示
将微生物细胞均匀地包埋在不溶于 包埋法
水的多孔性载体中
化学 利用共价键、离子键将酶分子或细 结合法 胞相互结合,或将其结合到载体上
1.如何证明洗涤固定化酶柱的流出液中没有淀粉酶?
◦ 可在试管中加入1ml可溶性淀粉,再加几滴淀粉酶柱流出液 ,保温几分钟后用碘液检验。如仍显蓝色,则流出液中没 有淀粉酶了。
2.耐高温的淀粉酶有哪些可能的用途?
α-淀粉酶的固定化及淀粉水解2
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实验6 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测高二年级班姓名实验日期:____月日【知识准备】1.背景知识酶是生物体内各种化学反应的催化剂,它有高度的专一性和高效性。
但酶在水溶液中很不稳定,且不利于工业化使用。
固定化酶就是将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某种介质上,使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。
将固定化酶装柱,当底物经过该柱时,在酶作用下转变为产物。
2.实验原理本实验是采用吸附法制备固定化酶。
(1)使用的吸附剂是石英砂,石英砂是由天然矿石粉碎而成,它的化学成分是二氧化硅,其化学反应活性很低。
(2)使用的α-淀粉酶通常由枯草杆菌深层发酵制备,具有较强的液化淀粉的能力,可用于制备糊精,其最适pH5.5~7.5,最适温度50℃~75℃。
3.各种淀粉酶水解淀粉的反应如下:α-淀粉酶只将淀粉水解为糊精,淀粉溶液加入KI-I2指示溶液时显现蓝色,而转变成糊精后显现红色。
将吸附有α-淀粉酶的石英砂装柱,使淀粉溶液流过柱,若柱的流出液在加入KI-I2溶液时可看到溶液呈现红色,表明水解产物中有糊精。
α-淀粉酶制成不溶性的固定化酶后,酶的稳定性增加,包括酶对热的稳定性,对蛋白酶的抵抗能力、对各种试剂的稳定性都不同程度地增加。
由于稳定性增加,保存期也相应延长,数日内酶活力不减。
4.思考题①为什么使用石英砂作为酶的吸附剂?②如何证明α-淀粉酶已将淀粉水解?③如何证明洗涤固定化酶的流出液中没有淀粉酶?【实验目的】1.制备固定化的α-淀粉酶2.固定化的α-淀粉酶水解淀粉的测定【材料用具】α-淀粉酶溶液,0.5%淀粉溶液,石英砂,5mmol/L KI-I2溶液,蒸馏水5ml层析柱50mL烧杯,250mL烧杯,滴管,玻璃棒,点样板铁架台【实验步骤】一、新制淀粉固定化酶1.用50ml小烧杯称取5g石英砂,加入2ml α–淀粉酶溶液,浸泡10分钟,使α–淀粉酶固定到石英砂上。
在等候期间可以先完成实验步骤“二”。
2.用10~15ml的蒸馏水清洗石英砂后,取清洗液2滴加到点样板上,同时滴加0.5%淀粉溶液混匀,再加入1滴KI-I2溶液,若溶液变为蓝色,说明未固定到石英砂上的α–淀粉酶已完全除去。
实验6淀粉酶的固定化
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等微生物。
由于酶在水溶液中不稳定,因此常将酶固定在某种介质上
制成 固定化酶 。
黑曲霉或苹果青霉
(2)果胶酶可将紫甘薯匀浆中的果胶水解成
。
A. 半乳糖醛酸和葡萄糖
B. 半乳糖和果糖
C. 半乳糖醛酸甲酯和果糖
D. 半乳糖醛酸和半乳糖醛酸甲酯
整理课件
19
(3)紫甘薯匀浆流经α-淀粉酶柱后,取适量流出的液体,
目的:控制流速让淀粉和淀粉酶充分接触反应。
整理课件
14
固定化酶技术生产高果糖浆
分布着小孔的筛板
酶颗粒无法通过筛板上的小孔,而反应液却可以自由出 入。
整理课件
15
例题:研究认为,用固定化酶技术处理污染物是很有前途
的。如将从大肠杆菌得到的磷酸三酯酶固定到尼龙膜上制
成制剂,可以用来降解残留在土壤中的有机磷农药,与用
第二章 酶的应用
实验6 α-淀粉酶的固定化及淀粉 水解作用的检测
整理课件
1
什么是酶制剂?
胃蛋白酶
蛋白酶和脂肪酶
酶制剂:含有酶的制品。
整理课件
2
酶制剂的缺点
通常对强酸、强碱、高温和有机溶剂等条件非常敏 感,容易失活。 溶液中的酶很难回收,不能被再次利用,提高了生 产成本。 反应后酶会混在产物中,可能影响产品质量(难分 离)。
整理课件
11
Step3:固定化柱的保存和再次使用
用10倍柱体积的蒸馏水洗涤此柱(洗去残留的反应物和 产物),放置在4℃冰箱中保存,几天后取出再重复实验。
整理课件
12
实验结果
稀释
淀粉
淀粉
1倍
水
溶液
滤液
④
①
②
浙科版选修1第二部分《实验六 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测》教案3
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浙科版选修1第二部分《实验六α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测》教案3α-淀粉酶的固定化及淀粉水解1.酶的生产①提取法:采用一定的技术直接从动植物或微生物的组织、细胞中将酶提取出来。
优点:简单易行,在动植物或微生物资源丰富的地区具有应用价值。
缺点:要有充足的原材料,广泛应用受到限制。
②发酵法(常用方法):通过微生物发酵获得所需要的酶。
优点:易培养、繁殖速度快、便于大规模生产。
2.酶制剂的优点:催化效率高、低能耗、低污染等。
酶制剂的缺点:通常对强酸、强碱、高温和有机溶剂等条件非常敏感,容易失活;溶液中的酶很难回收,不能被再次利用,提高了生产成本;反应后会混在产物中(难分离),可能影响产品质量。
3.固定化酶:固定化酶技术。
即将酶固定在一定空间内的技术(如固定在不溶于水的载体上)。
固定化酶的优点:使酶既能与反应物接触,又能与产物分离;固定在载体上的没可以被反复利用。
4.固定化酶方法:吸附法、交联法、包埋法、共价偶连法等。
5.实验操作实验原理:本实验是用吸附法将a-淀粉酶固定在石英砂上,一定浓度的淀粉溶液经过固定化酶柱后,可使淀粉水解成糊精,用淀粉指示剂溶液测试,流出物呈红色表明水解产物糊精生成。
设备及用品:5ml塑料注射器、50ml烧杯、滴管、自行车用气门心及夹子、注射器架、试管及微量离心管3支。
材料:①α-淀粉酶的固定化:在烧杯中将5mgα-淀粉酶溶于4ml蒸馏水中.由于酶不纯,可能有些不溶物。
再加入5g石英砂,不时搅拌,30min后装入1支下端接有气门心并用夹子封住的注射器中(石英砂体积约4ml)。
用10倍体积的蒸馏水洗涤此注射器以除去未吸附的游离淀粉酶,流速为1ml/min。
②可溶性淀粉溶液:取50ml可溶性淀粉溶于100ml热水中,搅拌均匀。
③5mmol/L KI-I2溶液:称取0.127g碘和0.83g碘化钾。
加蒸馏水100ml完全溶解后装入滴瓶中。
步骤:①将灌注了固定化酶的注射器放在注射器架上,用滴管滴加淀粉溶液,使淀粉溶液以0.3ml/min的流速过柱。
a-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用实验方案
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实验:α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用背景资料一、酶酶(enzyme)催化特定化学反应的蛋白质、RNA或其复合体。
是生物催化剂,能通过降低反应的活化能加快反应速度,但不改变反应的平衡点。
绝大多数酶的化学本质是蛋白质。
具有催化效率高、专一性强、作用条件温和等特点。
1.高效性:酶的催化效率比无机催化剂更高,使得反应速率更快;2.专一性:一种酶只能催化一种或一类底物,如蛋白酶只能催化蛋白质水解成多肽;因此在食用酵素当今在功能上,主要有四种:高浓缩SOD酵素如复方天然酵素主要用于乳腺瘤、子宫肌瘤、卵巢囊肿等肿瘤方面;长生酵素直接补脾补肾补气血,全面调理;纤体酵素专门转化脂肪减肥;肠毒清酵素则专门清理肠皱褶的毒素。
3.多样性:酶的种类很多,大约有5000多种,其中可以通过食用补充的酵素达2000多种;形态上主要有三种:专业级酵素为酵素胶囊,其次为酵素粉,而液体酵素含量低、效价低、易腐败而安全性较差一些,食用风险较高。
4.温和性:是指酶所催化的化学反应一般是在较温和的条件下进行的,因此,纯正酵素是中性的,温和的,不存在副作用,或“好转反应”。
对于有刺激性而必然存的“好转反应”,除了本身腐败以外,也有可能有药品的添加。
5.活性可调节性:包括抑制剂和激活剂调节、反馈抑制调节、共价修饰调节和变构调节等。
6.易变性:大多数酶是蛋白质,因而会被高温、强酸、强碱等破坏;7.有些酶的催化性与辅助因子有关。
酶与无机催化剂的比较但酶易受环境影响而失活,包括温度、PH值等,例如一般来说动物体内的酶最适温度在35到40℃之间,植物体内的酶最适温度在40-50℃之间;细菌和真菌体内的酶最适温度差别较大,有的酶最适温度可高达70℃。
动物体内的酶最适PH大多在6.5-8.0之间,但也有例外,如胃蛋白酶的最适PH为1.8,植物体内的酶最适PH大多在4.5-6.5之间。
另外,反应中反应产物和酶的分工和回收困难等缺点限制了酶在工业上的广泛应用。