第5套丙型肝炎病毒抗体诊断试剂国家参考品的研制

作者单位 : 中国药品生物制品检定所 ( 北京 100050) . 通讯作者 : 谷金莲 , Te: l 010-67095528
剂; 国内 18 家有文 号的抗 HCV E I A 试 剂; 梅 里埃 H IV 抗体试剂 ; 上海荣盛 公司 H BsAg E I A 试剂 ; 北 京金豪公司 TP 抗体试剂 ; 厦门新创公司 HAV 抗体 酶联免疫试剂 ; CH IRON RIBA HCV 31 0 S I A 确证试 剂; 深圳匹基公司荧光 HCV PCR 试剂; CH IRON 公 司 HCV RNA TMA 试剂; 上海瑞芯生物科技有限公 司 HCV 基因分型试剂。 31 样品的复核及确证 对所选出的 317 份样品 , 用在中国注册的国外 3 种抗 HCV E I A 试剂 及占国 内抗 HCV 试剂市 场 50 % 以上的 4种抗 HCV E I A 试剂进行检测, 同时对 部分样品进行抗 HI V、 HBsAg、 梅毒抗体和乙脑抗体 等检测。根据复检结果, 对可能被挑选入参考品的 样品用 CH IRON 公司抗 HCV RIBA 确证试剂、 HCV RNA PCR 试剂、 CH I RON 公司 HCV RNA TMA 试剂 进行了确证。利用 HCV 基因分型试剂对部分样品进 行了 HCV 基因型别检测, 并对部分分型结果用核苷 酸序列测定的方法进一步确证。 41 会同标定 根据样品复检及确证结果, 从 317 份样品中选 出 100 份, 邀请了国内外 21 家生产单位及实验室进 行了会同标定。盲样分装及下发后 , 要求各单位用 当时试剂对样品进行检测。收到反馈的结果后, 立 即将本室的检测结果告之参加会同标定的单位, 并 要求各单位对本室的检测结果进行复核 , 或对本单 位的试剂进行改进。根据样品确证、 复核及会同标 定结果, 考虑到样品的抗体谱、 基因型别、 地域代表 性, 尤其是国内试剂存在的问题 , 从中选出 65 份样 品组成了第 5 套丙型肝炎病毒抗体诊断试剂国家参 考品。
用 3 种国外抗 HCV E I A 试剂, 检测第 5 套 HCV 抗体试剂国家参考品 中的 30 份阳性样品 , 除 1 种 抗HCV E I A 试 剂出 现 1 份漏 检外 , 其它 两种 抗 HCV E I A 试剂检测结果均为阳性。用 CH IRON R IBA HCV 3 . 0 SI A 确证试剂检测 30 份阳性样品 , 发 现该 30 份样品涵盖了各种抗 HCV 抗体及各种抗 HCV 抗体谱组合, 包括抗 HCV 强阳性样品、 中等强 度和弱阳 性样 品。有 的样 品同 时 含有 抗 HCV 核 心、 NS3 、 NS4 和 NS5 抗体, 有的样品含有其中 2 种 或 3 种抗体组 合, 也有 的样品只含有 某一种抗体。 含有 HCV 核心抗体的样品有 23 份 ( 其中单独阳性 样品 1 份 ), 含有 NS3 抗体的样品有 29 份 ( 其中单 独阳性样品 7 份 ) , 含有 NS4 抗 体的样品有 14 份 , 含有 NS5 抗体的样品有 9 份。 3 份 ( L1 、 L2 、 L3) 灵 敏度参考品及 1 份精密度参考品 ( J) 均同时含有抗 HCV 核心、 NS3 、 NS4和 NS5 抗体。 对 30 份 阳 性 样 品 进 行了 HCV 基 因 分型 及 HCV RNA 检测。阳性样品包括了我国流行的主要 HCV 基因型 1b、 2a , 还包括 1a /1b 、 6a 、 3b 。灵敏度 参考品 L1 、 L2 、 L3 号为我国流行的主要 HCV 基因 型 1b 亚型。精密度参考品 ( J) 为 1b /2a 亚型, 检测结 果见表 1 。需要说明的是, 基因型别检测方法是依赖 于首先对 HCV 基因进行 PCR 扩增, 然后才可检测, 若样品中 HCV RNA 为阴性或含量太低 , 则无法进行 分型 , 所以部分样品未显示 HCV 基因分型结果。 灵敏度样品 L4为 5 份阴性血浆混合液, L1~ L3 为用 L4 稀释不同倍数的同 1 份抗 HCV 阳性血浆; L1 、 L2均可被 3 种国外抗 HCV EI A 试剂检出阳性, L3 可被 1种国外抗 HCV 试剂检出阳性 , 另外两种试 剂检测为阴性。 3 种国外抗 HCV EI A 试剂检测 L4 均为阴性。精密度样品为 1份中等偏弱阳性血浆。 用 3 种国外抗 HCV E I A 试剂分别检测 30 份阴 性样品 , 结果均为阴性。用 CH IRON RIBA HCV 31 0 SI A 确证试剂及 HCV RNA PCR试剂检测 30份阴性 样品, 结果也均为阴性。 考虑到该套参考品有可能用于抗 HCV+ 抗 HI V, 抗HCV+ 抗 HBV, 抗 HCV+ 抗 TP 等联合检测的试剂 检定, 对参考品中的 65 份样品, 分别用梅里埃抗 HI V 试剂、 荣盛公司 HBs A g 试剂、 金豪公司抗 TP 试剂、 新 创公司抗 HAV 试剂进行了检测, 结果证明该 65份样 品均不含有抗 HI V、 抗HAV、 抗TP 抗体及 HBsAg。
为控制丙型肝炎病毒 ( HCV ) 抗体试剂质量 , 我 国于 1993~ 2004 年相继建立并使用了 1~ 4 套国家 丙型肝炎 病 毒抗 体 质控 参 考品 及 相应 的 质 量标 [ 1~ 4 ] 准 。 11年来, 国家丙型肝炎病毒抗体质控参考 品促进了对国内丙肝诊断试剂质量的提高 , 同时, 通 过对国外进口试剂的检验 , 起到了把好国门质量关 的重要作用。近年来, 国产丙肝抗体诊断试剂质量 有了很大的提高 , 有些产品的灵敏度甚至超过了国 外的试剂。但在使用过程中也发现有些产品存在着 较多的假阳性现象, 有些产品的抗干扰能力不如国 [5 ] 外同类产品 。为促进我国丙型肝 炎病毒抗体诊 断试剂质量的进一步提高 , 本文研制了第 5 套丙型 肝炎病毒抗体诊断试剂国家参考品。 材料与方法 11 样品来源 样品分别来自国内 13 省市 , 从几十万个供血员 中进行 筛选。一方 面选 取 初筛 中发 现可 能为 抗 HCV 阳性或 ALT 异常的样品, 另一方面选取其样品 的 A 值在抗 HCV E I A 试剂临界值附近的弱阳性或 高值阴性样品 ; 用多种试剂对收集到的 2 000 多份 血样进行复检, 从中选出 317 份进行 HCV RNA、 抗HCV 抗体谱、 HCV 基因型等集中检测 , 每份样品的 总体积在 300 m l以上 , 保存于 - 80e 。 21 试剂 美国 O rtho HCV E I A 310 试剂; 美国 M u rex HCV EI A 41 0 试 剂; 意大利 D iaSo rin ET IABHCVK-3 试
谷金莲 祁自柏 扬振 于洋 张华样
= 摘要 > 目的
研制第 5 套丙型肝炎病毒抗体诊断试剂国家参考品。 方法
品 , 用多种试剂对收集到的 2 000 多份血样进行复检 , 从中选出 317 份样 品 , 用国 外 3 种抗 HCV EI A 试剂及 国内 4 种 抗 HCV EI A 试剂进行检测 , 对可能被 选入参考品的样品 , 再 用 CH IRON 公司抗 HCV R IBA 确证试 剂 , HCV RNA PCR 试剂 和 CH IRON 公司 HCV RNA TM A 试剂进行了确证。利用 HCV 基因分型试剂对部分样品进行 HCV 基因型别检测 , 并对部分分型结果用核 苷酸序列测定的方法确证。 21 个实验室会同 标定。结 果 量标准。 结论 =关键词 > 丙型肝炎 ; 诊断试剂 ; 国家参考品 建立了第 5套 丙型肝炎病毒抗体诊断试剂国 家参考品及 相应的质 自 2004 年 10 月 1 日起 , 第 5 套抗 HCV 国家参考品已被国家有关部门批准正式使用。
# 70# 21 参考品组成及判断标准
中国生物制品学杂志 2006年 1月第 19 卷第 1期
C hin J B iologicals January 2006 , V o1 . 19 N o. 1
抗HCV 抗体谱组 合, 含 有抗 HCV 强阳 性样品、 中 等强度样品和弱阳性样品。 41 阴性参考品均为市 售抗 HCV EIA 试剂 , 检 测时 A 值略低于试剂临界值的高值阴性样品, 以控 制试剂的非特异性反应。其抗 HCV、 抗HI V、 抗TP 抗体和 HB s A g 均为阴性。 51 灵敏度参考品 L1、 L2 、 L3 号含有抗 HCV 核 心抗体、 NS3抗体、 NS4 抗体和 NS5 抗体, 为我国流 行的主要 HCV 基因型 1b 亚型, L4为全阴性血清稀 释液。 61 精密度参考品为 1 份中等偏弱的阳性样品, 1b /2 a亚型。含抗 HCV 核心、 NS3 、 NS4和 NS5抗体。 该套参考品对抗 HCV 诊断试剂的质量提出了 基本的合格标准。在研制这套参考品的过程中, 考 察了国内抗 H CV 试剂的现状。用 3 种进口和 18 种 国产抗 HCV E I A 试剂 , 检测第 5 套抗 HCV 试剂国 家参考 品所包 括的 30 份 阴性 和 30 份阳 性样 品。 3 种进口抗 HCV E I A 试剂检测 30 份阴性样品最多 出现了 1 份假阳性。而 18 种国产抗 HCV E I A 试剂 中的 4 种出现了 9 份假阳性, 13 种出现了 4~ 8 份 假阳性, 没有任何一种可达到阴性符合率 29 /30 的 标准。说明当时的国产试剂特异性与国外试剂差距 较大。 3 种进口的抗 HCV E I A 试剂对 30 份阳性样 品检测时 , 1 种试剂漏检了 1 份 , 另 2 种均可检出。 18 种国产抗 HCV E I A 试剂漏 检数 在 0 ~ 2 之 间。
中国生物制品学杂志 2006年 1月第 19 卷第 1期
C hin J B iologicals January 2006 , V o1 . 19 N o . 1
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结 11 样品的复核及确证
果
表 1 第 5 套抗 H CV 试剂阳性参考品的复 核及确证检测 进口抗 HCV 编号 1 P1 P2 P3 P4 P5 P6 P7 P8 P9 P10 P11 P12 P13 P14 P15 P16 P17 P18 P19 P20 P21 P22 P23 P24 P25 P26 P27 P28 P29 P30 L1 L2 L3 L4 J + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + EI A 试剂 2 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + 3 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + HCV R IBA 确证 C100 C33c C22 N S5 ? 8 7 8 8 ? ? + 7 7 8 7 7 ? 6 + ? 8 8 6 6 6 7 7 8 8 7 8 8 7 6 ? 8 + 8 7 6 8 8 8 8 + 6 6 7 6 + 8 8 + + + + 8 8 8 8 7 8 7 7 8 7 6 6 7 6 8 6 ? 8 8 7 7 6 + 8 7 8 8 8 7 7 7 8 7 7 8 ? 7 7 8 6 ? 8 8 7 7 7 7 HCV RNA PCR + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + 基因 型别 1b 1b 1b 3b / 1b 1b 1b / 1b 2a 6a 1b / / 1a /1b / 1b 2a / / / / / 1b 1b 1b 1b 2a / 1b 1b 1b / 1b /2a