选修3 动物的克隆(75张PPT)优秀课件
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《动物克隆》PPT课件
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2.2 受体胞质的选择和处理
2.2.1 卵母细胞在动物克隆中的作用
在克隆中，供核细胞的全能性是基础，但这种全能性 只有在特定的条件下才能实现。这一特定条件就是卵 母细胞。研究发现：早期胚胎的发育首先是由母型信 息调控（maternal regulation）的，直到合子型基因 被 激 活 ， 才 能 过 渡 到 合 子 型 调 控 （ zogotic regulation）。也就是要经过由母源控制向合子型控 制胚胎发育的转变（maternal-zygotic transition, MZT）。
目前一般以排出第一极体作为卵母细胞成熟 的标志。
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2.2.5 卵母细胞的激活
成熟后的卵母细胞停滞于MⅡ期，自然条件下， 当精子穿入（受精）后会激活卵母细胞，启动一 系列生化事件和形态变化。
面对问题：核移植胚是怎样被激活的？
解决途径：
途径一：电激活。电脉冲剌激是最经典、应用最 为广泛的卵母细胞激活方式。细胞膜在瞬间高压 电流脉冲的作用下，激发穿孔，从而使细胞内外 的离子和大分子物质发生短暂流动，其中钙离子 的内流会导致卵母细胞活化。
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途径二：化学物质激活。包括乙醇、钙离子载 体A23187（Calcium ionophore A23187, CaA）、 离 子 霉 素 （ Ionomycin）、Sr2+、 Thimerosal(THI) 、Dithiothreitol(DTT)、三 磷 酸 肌 醇 、 精 子 因 子 （ sperm factor, SF） （精子的提取物）。
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1938年，Hans Spermann提出了克隆动物的设想：从一 个分化细胞中提取细胞核，然后注入另一个去核的受 精卵中构建新胚胎，他同时提出用体细胞进行动物克 隆的思想，但一直未能付诸实施。
选修3 动物的克隆(75张PPT)
3.动物细胞培养和组织培养的联系
两者在一定程度上可看作是同义语，统称为组织培养 （组培），即代表各种生物体结构成分的体外培养。
广义的组织培养还包括器官培养，即器官的原基、器 官的一部分或整个器官在体外和人工控制的条件下得以保 存、生长，在此过程中保持器官的结构、功能及分化能力。
动物细胞培养：体外培养分散后的单个细胞，
• 选择的瘤细胞是有遗传缺陷的，即胸腺嘧啶核苷激酶缺陷（TK－）或者 次黄嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT－）缺陷。
• 筛选的方法： 用选择性培养基来完成，即HAT培养基。加入次黄嘌呤 （H）、氨基喋呤（A）及胸腺嘧啶核苷（T）的培养基称HAT培养基。
• 其中，氨基喋呤可阻断DNA合成的主要途径。主要途径阻断后，依靠应 急途径即在HGPRT（次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶）和TK（胸苷激酶） 作用下，利用胸腺嘧啶和次黄嘌呤合成DNA，缺少其中一种，DNA合成 不能发生。
5. 大部分细胞是贴壁细胞，需要一个可贴附的表面【细胞培养瓶或卡氏瓶的壁，培养 皿的壁】，会接触抑制，培养密度不能过大。 少部分细胞是悬浮细胞，悬浮培养，悬浮细胞的密度可远远大于贴壁细胞，因此利用 动物细胞进行工业大规模生产一些药物时，最好使用悬浮细胞。
（3）动物细胞的培养过程
取动物胚胎 或幼龄动物器官
正常细胞
接触抑制
癌细胞
（2）动物细胞培养的条件
1）离体
2）营养物质：无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素、
动物血清
3）恒温和pH，无需光照 4）无菌无毒的环境
保证细胞顺利 的生长增殖
培养条件：
1. 培养基营养物质：氨基酸、糖类、维生素、无机盐、激素、其他成分（生长因子 【添加动物血清】）
2. 气体：CO2 O2【 CO2 培养箱：5% CO2和95%的空气 ，培养时培养瓶的盖子 处于拧松状态】 CO2的作用：调节PH 3. 理化条件：PH【 5% CO2调节PH ，培养基中加入PH缓冲剂，培养过程中细胞代 谢产生很多酸性物质，PH发生改变，为了实时监控培养基中PH的变化，一般在培养 基中加入酚红指示剂，若培养基颜色变化超过一定程度，即使细胞密度不大，也要更 换培养基。 】、渗透压、温度、湿度【 CO2 培养箱：37℃，湿度很高】 4. 无菌条件
动物体细胞核移植技术和克隆动物 课件人教版高中生物选修三ppt
电融合法
供体细胞注入去 核的卵母细胞
重构胚
用物理或化学 方法激活重构胚， 使其完成细胞 分裂和发育
克隆动物 遗传物质
环境
早期胚胎
7.实验结论：
细胞核的DNA: 来自于供体细胞的细胞核 细胞质中的DNA:供体细胞和去核卵母细胞
将胚胎移入受体 （代孕）母牛体内
证明动物已分化的体细胞的细胞核具有全能性
生出与供体奶牛遗传 物质基本相同的犊牛
克隆羊多莉没过多久(6岁半)就产生了严重的肺部疾病，由于病情 来得实在太突然，难以救治，最终在2003年不得不将多利羊进行安乐死。 按照普通绵羊的正常寿命为12岁来算的话，这只克隆羊还是比较年轻的。
1.2017年，某国批准了首例使用细胞核移植技术培育“三亲婴儿”的申请。其培育过程
可选用如下技术路线。据图分析下列叙述错误的是 （ ）
(1)过程①采用的是细胞工程中的_体__细__胞__核__移__植_技术。
(2)动物细胞进行分瓶传代培养前，需要用_胰__蛋__白__酶_处理贴满瓶壁的细胞，以便细胞继续
不会，杂交瘤细胞能无限增殖
分裂增殖。杂交瘤细胞在体外培养时，会出现上述现象吗？理由是
。
在培养中，为避免毒害，常采取的措施是_定__期__更__换__培__养__液__。
①供体细胞的细胞核在去核卵母细胞中不能完全恢复其_分__化_前的功能状态，这导 致了_胚__胎__发__育_率__低___； ②对非人灵长类动物_胚__胎__进行操作的技术尚不完善。
我国科学家经过多年努力，攻克了这些障碍， 终于成功获得了世界上首例体细胞克隆猴。
非人灵长类动物：具有许多与人类相似的生物学特征的灵长类动物
从供体高产奶牛 取体细胞
动物细胞 培养
《动物的克隆》课件(浙科版选修3)
（5）动物组织培养具体是如何实现的？
动物组织培养的发展历史 什么是原代培养？什么是传代培养
动物组织培养时，培养细胞能不能 无限制地存活下去
阅读教材
（一）动物细胞培养
1.过程：
动物胚胎或幼龄动 胰蛋白酶 单个细胞 细 制成 物的组织、器官 剪碎 胞 去掉组织 悬 细胞增殖 间蛋白 浮 液
原代培养
重组细胞 电脉冲处理 早期胚胎 b 另一头母绵羊子宫 妊娠、出生 克隆绵羊多莉
•THE END
THANKS FOR YOUR ATTENTION!
⑴写出 ａ、ｂ所指的细胞工程 各称：ａ ｂ 。 ⑵实施细胞工程ａ时，所需的 受体细胞大多采用动物卵细胞 的原因是： 。 ⑶多莉面部的毛色是 判断依据： ， 。 黑面绵羊去 白面绵羊卵 核卵细胞 腺细胞核 a
⑷继植物组织培养之后，克隆 绵羊培育成功，证明动物细胞 也具有 。 ⑸请举例说明克隆绵羊培育成 功的实际意义： 。
细胞膜被病毒颗粒穿通
细胞膜连接
细胞融合，形成杂种细胞
植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较
比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合
原理 细胞融合的方法
细胞膜的流动性、细胞膜的流动性 植物细胞全能性
去除细胞壁后诱 使细胞分散后诱 导原生质体融合 导细胞融合 物理（离心、振 物理、化学方法 荡、电刺激） （同左） 化学（聚乙二醇） 灭活的病毒 获得杂(三）单克隆抗体 ——动物细胞融合的重要应用
1.其由何种细胞产生？ 2.主要分布在哪里？ 3.如何得到抗体？
1、抗原
刺激
动物体内
浆细胞
抗体
2、特异性差、纯度低； 产量低、反应不够灵敏
抗原 抗原不纯
刺激
动物体内
浆细胞
《动物的克隆》PPT课件
转入特殊培养液 中进行原代培养 细胞形成生长晕并增大
分装到多个卡氏瓶中进 行传代培养
a
4
有关概念:
细胞系— 可连续传代的细胞
（1）有限细胞系： 不能连续培养下去的细胞系 例：二倍体细胞
（2）连续细胞系: 能连续培养下去的细胞系
发生了转化：大多数具有异倍体核型，有的
是恶性细胞系，具有异体致瘤性，有的获得 不死性（保留接触抑制，不致癌）
克隆羊多利
a
14
讨论（阅读P36-37）
体细胞羊的克隆成功证明了什么？
为什么克隆羊能获得成功，请用分子细胞学机理来阐述 原因。
克隆动植物具有哪些应用？
a
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专能干细胞：
低等动物细胞的全能性一般比较容易体现。
无论分化或癌变，变化的都是表现型，基因组完整性可以保留
a
11
2.动物难以克隆的原因
细胞的分化使得细胞发生了基因的差异表达， 有的基因开放，有的基因关闭 已分化的体细胞，基因组中基因的活动很不 完全，不能像受精卵那样发挥细胞的全能性
a
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3.动物核移植实验和克隆繁殖
细胞株-
通过一定的选择或纯化方法，从原代培养或细胞 系中获得的具有特殊性质的细胞
有限细胞株 连续细胞株
具有恒定的染色体组型、同工酶类 型、病毒a 敏感性和生化特性。 5
细胞系与细胞株的关系
细胞系泛指可传代的细胞 细胞株是具有特殊性质的细胞系
a
6
（3）动物组织培养的条件:
1.无菌无毒的环境 2.营养 3.温度和pH 4.气体环境
2、产物: 遗传性状均一、表现的性状相似的纯系
未经克隆的异质性细胞系 分离 克隆
纯系：经克隆以后的细胞的后裔细胞群，来源 于一个共同的祖细胞。
分装到多个卡氏瓶中进 行传代培养
a
4
有关概念:
细胞系— 可连续传代的细胞
（1）有限细胞系： 不能连续培养下去的细胞系 例：二倍体细胞
（2）连续细胞系: 能连续培养下去的细胞系
发生了转化：大多数具有异倍体核型，有的
是恶性细胞系，具有异体致瘤性，有的获得 不死性（保留接触抑制，不致癌）
克隆羊多利
a
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讨论（阅读P36-37）
体细胞羊的克隆成功证明了什么？
为什么克隆羊能获得成功，请用分子细胞学机理来阐述 原因。
克隆动植物具有哪些应用？
a
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专能干细胞：
低等动物细胞的全能性一般比较容易体现。
无论分化或癌变，变化的都是表现型，基因组完整性可以保留
a
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2.动物难以克隆的原因
细胞的分化使得细胞发生了基因的差异表达， 有的基因开放，有的基因关闭 已分化的体细胞，基因组中基因的活动很不 完全，不能像受精卵那样发挥细胞的全能性
a
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3.动物核移植实验和克隆繁殖
细胞株-
通过一定的选择或纯化方法，从原代培养或细胞 系中获得的具有特殊性质的细胞
有限细胞株 连续细胞株
具有恒定的染色体组型、同工酶类 型、病毒a 敏感性和生化特性。 5
细胞系与细胞株的关系
细胞系泛指可传代的细胞 细胞株是具有特殊性质的细胞系
a
6
（3）动物组织培养的条件:
1.无菌无毒的环境 2.营养 3.温度和pH 4.气体环境
2、产物: 遗传性状均一、表现的性状相似的纯系
未经克隆的异质性细胞系 分离 克隆
纯系：经克隆以后的细胞的后裔细胞群，来源 于一个共同的祖细胞。
动物克隆教学课件ppt
06
教学总结与展望
本课程的教学目标与内容总结
• 教学目标 • 掌握动物克隆的基本原理和技术 • 了解克隆技术在科研和生产中的应用 • 培养学生的独立思考和实验操作能力 • 内容总结 • 克隆技术的历史与发展 • 克隆技术的原理和方法 • 克隆技术在动物育种、生物医药、濒危物种保护等领域的应用案例 • 实验操作：动物克隆实验的基本流程与注意事项
克隆技术在人类社会面临的挑战和争议
伦理问题
安全和健康问题
社会接受程度
克隆技术涉及到人类自身的复制和改 造，引发了关于人类尊严、身份和伦 理的争议。
克隆技术可能带来新的安全和健康问 题，如基因突变、传染病传播等。
克隆技术的社会接受程度也是一大挑 战，许多人对其持怀疑态度，需要更 多的教育和宣传来提高公众的认识和 理解。
02
保护动物权益的意义
保护动物权益有助于减少对动物的伤 害，维护生态平衡和可持续发展。
03
动物保护的法律与政 策
各国制定了一系列法律和政策来保护 动物的权益，如《动物保护法》、《 野生动物保护法》等。
克隆动物的福利问题
克隆动物的概念
克隆动物是指通过基因技术复制 出来的动物个体。
克隆动物的福利问题
在克隆动物的过程中，可能会出 现一些问题，如发育异常、疾病 和死亡等，这些都是克隆动物的 福利问题。
目前，科学家正在研究如何提高克隆效率、降低成本 以及解决伦理和安全问题等方面的问题。
02
动物克隆技术
胚胎克隆技术
定义
胚胎克隆技术是一种通过细胞 核移植技术将一个胚胎的细胞 核转移到另一个去除了细胞核 的卵母细胞中，从而产生遗传
相同的胚胎的方法。
应用
胚胎克隆技术在畜牧业、医学 、濒危动物保护等方面具有广
动物的克隆(浙科版) ppt课件
• 物理法：电刺激诱导融合
细胞膜连接
ppt课件 细胞融合、形成杂种细胞19
5. 应用
此技术有什么缺点和优点？
1.由于细胞杂交中染色体容易丢失，因此利用杂交细 胞检测特定染色体丢失与特定基因产物减少的对应关 系，可以进行基因定位。
2.克服远缘杂交不亲和的障碍
鼠—鸡、鼠—兔、鼠—猴、人—鼠、人—兔、 人—鸡、人—蛙、酵母菌—鸡 、人—胡萝卜等
ppt课件
2
ppt课件
3
一、动物细胞、组织培养
1.什么方法取得离体的单个动物细胞？
机械消化或者胰酶消化（胰蛋白酶）
2.离体的动物细胞能否正常的生活、表现出正 常的生命活动？
能，在人工控制的培养条件下，生长、分裂乃至 接触抑制和衰老、死亡等，并呈现一定的组织特性。
3.是不是所有的动物细胞都能在离体的情况下表现 出生命活动？
4.1912年，鸡胚浸出液对鸡胚成心功脏进组行织了块传进代行培原养代；培养
和传代培养。
发明了卡氏瓶；
5.1943年，获得长期培养细胞系（可连续传代）和细胞
克隆。
标志着组织培养工作进入
6.1950年，人工培养液“199全”研新制阶成段功
7.1951年，海拉细胞系的建成。
ppt课件
6
三、动物细胞培养过程
从普通细胞系中分离出缺乏特殊基因的突变细胞系。
用于研究细胞的遗传规律ppt课和件 生理特性。
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三、动物的细胞融合技术及其应用 ★ 什么是细胞融合技术？ ★ 为什么要进行细胞融合？ ★ 如何实现细胞融合？
ppt课件
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1.动物细胞融合
定义 指用自然或人工方法, 使两个或多个不同的细胞融 合成一个细胞的过程。
动物克隆-PPT课件
核移植入去 核卵细胞
取出细胞核 （2N）
取乳腺细胞
营养限制性 培养
“多莉”克隆成功的原因和意义
成功的原因（哺乳动物体细胞克隆最复杂）
•重组卵细胞最初分裂时仅复制DNA，而不进行基因转
用途
•使用CO2培养箱调节PH
只有对培养环境有较大 适应范围和具有较强独 立生存能力的细胞，才 容易做细胞克隆。如： 无限细胞系
从普通细胞系中分离出缺乏特殊基因的突变细胞系， 来研究某些蛋白质的功能
动物的克隆繁殖
动物细胞全能性的表现程度
动物难以克隆的根本原因 细胞核移植实验和动物的克隆繁殖 细胞核移植实验 “多莉”的克隆过程 “多莉”克隆成功的原因和理论意义
类型（以哺乳动物的克隆为例）
胚胎克隆
体细胞核移植（难度高） 体细胞胎克隆 2019年，克隆羊“多莉”
“多莉”的克隆过程
过程
2019年
苏格兰罗斯林研究所 维尔穆特
取卵细胞 胚胎 移植 去除细胞核（N） 去核卵细胞
苏格兰黑 面母羊
白色芬 兰母羊
分裂至8 体外胚胎 另一苏格兰 细胞胚体 培养 黑面母羊 妊娠、 “多莉” 分娩 核DNA与白色 芬兰母羊相同
动物细胞培养和组织培养的关系
动物细胞培养和组织培养的关系
•细胞培养中，培养液中各细胞彼此相互依存，细胞培
养的后代在某种程度上会表现出一定的组织特性
•组织培养中，长期的组织培养往往只能使单一类型的
细胞保存下来，而成为简单的细胞培养 细胞培养
统称为组织培养
各种生物体结构 成分的体外培养
组织培养
器官培养
动物细胞培养不能像植物组织培养那样最终培养成新个体
动物组织培养技术的发展
•1885年 •1903~1907年
高中生物23动物的克隆课件新人教版选修
小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖
杂种细胞
教学pptຫໍສະໝຸດ 152.制备过程：
（1）给小鼠抗原注射的目的是什么？
诱导小鼠体内的特异性免疫应答，分化 出浆细胞。
（2）两次筛选的目的相同吗？
不同，第一次筛选是为了筛选杂交瘤细 胞，第二次筛选是做抗体检验，筛选产 生特异性抗体的细胞。
（3）最后培养有几种方案？
两种，体内培养和体外培养。
细胞融合的方法 去除细胞壁后诱 使细胞分散后诱 导原生质体融合 导细胞融合
诱导方法
物理（离心、振 物理、化学方法
荡、电刺激）
（同左）
化学（聚乙二醇） 灭活的病毒
用途
获得杂种植株 主要用于制备 单克隆抗体
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(三）单克隆抗体 ——动物细胞融合的重要应用
1.其由何种细胞产生？
2.主要分布在哪里？
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黑面绵羊去 白面绵羊卵 核卵细胞 腺细胞核
a 重组细胞
电脉冲处理 早期胚胎
b 另一头母绵羊子宫
妊娠、出生 克隆绵羊多莉
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教学ppt
3
（3）细胞离体培养时，表现出什么样的 生命活动？ 生长、分裂（繁殖）至接触抑制
（4）离体的动物组织能否像离体的动物细胞一 样表现出体外培养的特征？
动物组织在离体的情况下，也能培养并
表现出正常的生命活动；但与细胞培养
也有不同的地方：在得到离体的组织后，
需要机械处理或胰蛋白酶处理得到分散
的细胞再进行细胞培养，同时动物组织
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四、动物的克隆繁殖
多莉
克隆猴
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1、动物细胞全能性的表现程度：
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机械消化或胰酶消化 （胰蛋白酶）
动物组织细胞间 隙中含有一定量的 问题：胶为原什纤么维要等从原蛋代白培质养，转向传代培养？ 原代培将养细的胞细网胞络，起到一来定形时期时，贴壁生
单个细胞悬浮液
长以及接触成抑具制有生一长定的细弹胞性就和会因细胞密度过
转入特殊培养液 大和代谢消韧耗性引的起组营织养枯和竭器，官不。能正常生长。
动物克隆的技术基础： 动物的细胞培养 和组织培养
植物克隆的技术基础： 植物组织培养
一、动物细胞的培养和克隆形成
（一）动物细胞
1、动物细胞培养
为什么要分散成单个细胞培养？
（1）定义
将动物体内的一部分组织取出
机械消化或胰酶消化
分散成单个细胞
放在适宜的培养基培养
细胞得以生存并保持生命活动现象
生存、生长、分裂乃至接触抑制和有规律的衰老、死亡性能等
3.动物细胞培养和组织培养的联系
两者在一定程度上可看作是同义语，统称为组织培养 （组培），即代表各种生物体结构成分的体外培养。
广义的组织培养还包括器官培养，即器官的原基、器 官的一部分或整个器官在体外和人工控制的条件下得以保 存、生长，在此过程中保持器官的结构、功能及分化能力。
动物细胞培养：体外培养分散后的单个细胞，
和传代培养。
发明了卡氏瓶；
5.1943年，获得长期培养细胞系（可连续传代）和细胞
克隆。
标志着组织培养工作进入
6.1950年，人工培养液“199全”新研阶制段成功
7.1951年，海拉细胞系的建成。
原代培养
从机体取出后立即 进行的细胞、组织 培养
传代培养
原代培养细胞分成 若干份，接种到若 干份培养基中，使 其继续生长，增殖。
因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强
3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？
成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养
4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？
不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体
5、培养的细胞为什么会贴壁生长？ 大多数组织细胞不适应悬浮生长，他们必须在固体
1.1885年，鸡神经板在生理盐水“中组培织养培成养活”。一词产生
2.1903年，皮肤及白细胞在腹水及血清中存活一个月， 且观察到细胞分裂。 3.1907年，蛙胚神经管在蛙淋巴真液正中的悬组浮织培培养养，开成始功； 看到神经末端的阿米巴运动。 创立了悬浮培养法
4.1912年，鸡胚浸出液对鸡胚成心功脏进组行织了块传进代行培原养代；培养
和组织
因为这些组织或器官上的细 胞生命力旺盛，分裂能力强
剪碎组织
分解组织中的胶 原纤维和细胞外 的其他成分
胰蛋白酶处理
单个细胞
细胞培养
（4）动物细胞生长特点： 1）贴壁生长：培养瓶中的悬浮液细胞，紧贴培养 瓶内壁才能生长； 2）接触抑制：当培养瓶中贴壁生长细胞彼此紧密接 触时，细胞不再分裂； 3）细胞只分裂不分化。
5. 大部分细胞是贴壁细胞，需要一个可贴附的表面【细胞培养瓶或卡氏瓶的壁，培养 皿的壁】，会接触抑制，培养密度不能过大。 少部分细胞是悬浮细胞，悬浮培养，悬浮细胞的密度可远远大于贴壁细胞，因此利用 动物细胞进行工业大规模生产一些药物时，最好使用悬浮细胞。
（3）动物细胞的培养过程
取动物胚胎 或幼龄动物器官
使其得以生存，并保持生命活动现象。像体内一 样呈现一定的组织特性。
组 动物组织培养：体外培养动物组织，使其维持 织 生活状态或生长特性。可以伴随组织分化，但最 培 终成为细胞培养。 养
动Байду номын сангаас器官培养：体外培养动物器官原基、部分
或整个器官，使之得以保存、生长。保持器官的 结构、功能及分化能力。
（三）动物组织培养技术的发展
的表面上生长和分裂。
贴壁生长后随细胞数目的增多，会出现接触性抑制的 现象。 要定期要胰蛋白酶处理使细胞从瓶壁脱离，配成 悬浮液，分装多瓶再培养
6、用胰蛋白酶处理动物胚胎或幼龄动物的组织、器官？ 分解胶原纤维等蛋白
7、若一直在卡氏瓶中持续培养会出现什么情况？
贴壁生长以及接触抑制生长的细胞就会因细胞密度过大 和代谢消耗引起营养枯竭，不能正常生长。
（5）动物细胞培养的结果： 不能最终培养成生物体,而是细胞群。
思考：
1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独 特之处？ 主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特 之处有：a、液体培养基 b、成分中有动物血清等 2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养 材料？
（二）动物组织培养
1.概念：动物组织在体外及人工条件下维持生活状态或生长特性。
动物组织培养过程中可以伴随组织分化。不管采用什么手段 和培养条件，组织培养中主要生命活动成分仍然以细胞为单位的。
2.结果：由于细胞的运动、变化，使得培养物的组织成分也发生结 构和功能变异，结果长期的培养经常只能使单一类型的细胞保存下 来，最终成了简单的细胞培养。
原代培养
原代培养物 选择或纯化 细胞株
正常细胞
接触抑制
癌细胞
（2）动物细胞培养的条件
1）离体
2）营养物质：无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素、
动物血清
3）恒温和pH，无需光照 4）无菌无毒的环境
保证细胞顺利 的生长增殖
培养条件：
1. 培养基营养物质：氨基酸、糖类、维生素、无机盐、激素、其他成分（生长因子 【添加动物血清】）
2. 气体：CO2 O2【 CO2 培养箱：5% CO2和95%的空气 ，培养时培养瓶的盖子 处于拧松状态】 CO2的作用：调节PH 3. 理化条件：PH【 5% CO2调节PH ，培养基中加入PH缓冲剂，培养过程中细胞代 谢产生很多酸性物质，PH发生改变，为了实时监控培养基中PH的变化，一般在培养 基中加入酚红指示剂，若培养基颜色变化超过一定程度，即使细胞密度不大，也要更 换培养基。 】、渗透压、温度、湿度【 CO2 培养箱：37℃，湿度很高】 4. 无菌条件
二氧化碳培养箱
通过在培养箱内模拟形成一个类似细 胞或组织在生物体内的生长环境，如恒 定的pH值（7.2-7.4）、稳定的温度 （37°C）、较高的相对湿度（95%）、 稳定的CO2水平（5%），来对细胞或组 织进行体外培养的一种装置。
…………
小结：培养过程
从动物胚胎或幼龄动物组织 切片中取小片样品
动物组织细胞间 隙中含有一定量的 问题：胶为原什纤么维要等从原蛋代白培质养，转向传代培养？ 原代培将养细的胞细网胞络，起到一来定形时期时，贴壁生
单个细胞悬浮液
长以及接触成抑具制有生一长定的细弹胞性就和会因细胞密度过
转入特殊培养液 大和代谢消韧耗性引的起组营织养枯和竭器，官不。能正常生长。
动物克隆的技术基础： 动物的细胞培养 和组织培养
植物克隆的技术基础： 植物组织培养
一、动物细胞的培养和克隆形成
（一）动物细胞
1、动物细胞培养
为什么要分散成单个细胞培养？
（1）定义
将动物体内的一部分组织取出
机械消化或胰酶消化
分散成单个细胞
放在适宜的培养基培养
细胞得以生存并保持生命活动现象
生存、生长、分裂乃至接触抑制和有规律的衰老、死亡性能等
3.动物细胞培养和组织培养的联系
两者在一定程度上可看作是同义语，统称为组织培养 （组培），即代表各种生物体结构成分的体外培养。
广义的组织培养还包括器官培养，即器官的原基、器 官的一部分或整个器官在体外和人工控制的条件下得以保 存、生长，在此过程中保持器官的结构、功能及分化能力。
动物细胞培养：体外培养分散后的单个细胞，
和传代培养。
发明了卡氏瓶；
5.1943年，获得长期培养细胞系（可连续传代）和细胞
克隆。
标志着组织培养工作进入
6.1950年，人工培养液“199全”新研阶制段成功
7.1951年，海拉细胞系的建成。
原代培养
从机体取出后立即 进行的细胞、组织 培养
传代培养
原代培养细胞分成 若干份，接种到若 干份培养基中，使 其继续生长，增殖。
因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强
3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？
成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养
4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？
不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体
5、培养的细胞为什么会贴壁生长？ 大多数组织细胞不适应悬浮生长，他们必须在固体
1.1885年，鸡神经板在生理盐水“中组培织养培成养活”。一词产生
2.1903年，皮肤及白细胞在腹水及血清中存活一个月， 且观察到细胞分裂。 3.1907年，蛙胚神经管在蛙淋巴真液正中的悬组浮织培培养养，开成始功； 看到神经末端的阿米巴运动。 创立了悬浮培养法
4.1912年，鸡胚浸出液对鸡胚成心功脏进组行织了块传进代行培原养代；培养
和组织
因为这些组织或器官上的细 胞生命力旺盛，分裂能力强
剪碎组织
分解组织中的胶 原纤维和细胞外 的其他成分
胰蛋白酶处理
单个细胞
细胞培养
（4）动物细胞生长特点： 1）贴壁生长：培养瓶中的悬浮液细胞，紧贴培养 瓶内壁才能生长； 2）接触抑制：当培养瓶中贴壁生长细胞彼此紧密接 触时，细胞不再分裂； 3）细胞只分裂不分化。
5. 大部分细胞是贴壁细胞，需要一个可贴附的表面【细胞培养瓶或卡氏瓶的壁，培养 皿的壁】，会接触抑制，培养密度不能过大。 少部分细胞是悬浮细胞，悬浮培养，悬浮细胞的密度可远远大于贴壁细胞，因此利用 动物细胞进行工业大规模生产一些药物时，最好使用悬浮细胞。
（3）动物细胞的培养过程
取动物胚胎 或幼龄动物器官
使其得以生存，并保持生命活动现象。像体内一 样呈现一定的组织特性。
组 动物组织培养：体外培养动物组织，使其维持 织 生活状态或生长特性。可以伴随组织分化，但最 培 终成为细胞培养。 养
动Байду номын сангаас器官培养：体外培养动物器官原基、部分
或整个器官，使之得以保存、生长。保持器官的 结构、功能及分化能力。
（三）动物组织培养技术的发展
的表面上生长和分裂。
贴壁生长后随细胞数目的增多，会出现接触性抑制的 现象。 要定期要胰蛋白酶处理使细胞从瓶壁脱离，配成 悬浮液，分装多瓶再培养
6、用胰蛋白酶处理动物胚胎或幼龄动物的组织、器官？ 分解胶原纤维等蛋白
7、若一直在卡氏瓶中持续培养会出现什么情况？
贴壁生长以及接触抑制生长的细胞就会因细胞密度过大 和代谢消耗引起营养枯竭，不能正常生长。
（5）动物细胞培养的结果： 不能最终培养成生物体,而是细胞群。
思考：
1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独 特之处？ 主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特 之处有：a、液体培养基 b、成分中有动物血清等 2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养 材料？
（二）动物组织培养
1.概念：动物组织在体外及人工条件下维持生活状态或生长特性。
动物组织培养过程中可以伴随组织分化。不管采用什么手段 和培养条件，组织培养中主要生命活动成分仍然以细胞为单位的。
2.结果：由于细胞的运动、变化，使得培养物的组织成分也发生结 构和功能变异，结果长期的培养经常只能使单一类型的细胞保存下 来，最终成了简单的细胞培养。
原代培养
原代培养物 选择或纯化 细胞株
正常细胞
接触抑制
癌细胞
（2）动物细胞培养的条件
1）离体
2）营养物质：无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素、
动物血清
3）恒温和pH，无需光照 4）无菌无毒的环境
保证细胞顺利 的生长增殖
培养条件：
1. 培养基营养物质：氨基酸、糖类、维生素、无机盐、激素、其他成分（生长因子 【添加动物血清】）
2. 气体：CO2 O2【 CO2 培养箱：5% CO2和95%的空气 ，培养时培养瓶的盖子 处于拧松状态】 CO2的作用：调节PH 3. 理化条件：PH【 5% CO2调节PH ，培养基中加入PH缓冲剂，培养过程中细胞代 谢产生很多酸性物质，PH发生改变，为了实时监控培养基中PH的变化，一般在培养 基中加入酚红指示剂，若培养基颜色变化超过一定程度，即使细胞密度不大，也要更 换培养基。 】、渗透压、温度、湿度【 CO2 培养箱：37℃，湿度很高】 4. 无菌条件
二氧化碳培养箱
通过在培养箱内模拟形成一个类似细 胞或组织在生物体内的生长环境，如恒 定的pH值（7.2-7.4）、稳定的温度 （37°C）、较高的相对湿度（95%）、 稳定的CO2水平（5%），来对细胞或组 织进行体外培养的一种装置。
…………
小结：培养过程
从动物胚胎或幼龄动物组织 切片中取小片样品