选修3 动物的克隆(75张PPT)优秀课件
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原代培养
原代培养物 选择或纯化 细胞株
5. 大部分细胞是贴壁细胞，需要一个可贴附的表面【细胞培养瓶或卡氏瓶的壁，培养 皿的壁】，会接触抑制，培养密度不能过大。 少部分细胞是悬浮细胞，悬浮培养，悬浮细胞的密度可远远大于贴壁细胞，因此利用 动物细胞进行工业大规模生产一些药物时，最好使用悬浮细胞。
（3）动物细胞的培养过程
取动物胚胎 或幼龄动物器官
机械消化或胰酶消化 （胰蛋白酶）
动物组织细胞间 隙中含有一定量的 问题：胶为原什纤么维要等从原蛋代白培质养，转向传代培养？ 原代培将养细的胞细网胞络，起到一来定形时期时，贴壁生
单个细胞悬浮液
长以及接触成抑具制有生一长定的细弹胞性就和会因细胞密度过
转入特殊培养液 大和代谢消韧耗性引的起组营织养枯和竭器，官不。能正常生长。
1.1885年，鸡神经板在生理盐水“中组培织养培成养活”。一词产生
2.1903年，皮肤及白细胞在腹水及血清中存活一个月， 且观察到细胞分裂。 3.1907年，蛙胚神经管在蛙淋巴真液正中的悬组浮织培培养养，开成始功； 看到神经末端的阿米巴运动。 创立了悬浮培养法
4.1912年，鸡胚浸出液对鸡胚成心功脏进组行织了块传进代行培原养代；培养
3.动物细胞培养和组织培养的联系
两者在一定程度上可看作是同义语，统称为组织培养 （组培），即代表各种生物体结构成分的体外培养。
广义的组织培养还包括器官培养，即器官的原基、器 官的一部分或整个器官在体外和人工控制的条件下得以保 存、生长，在此过程中保持器官的结构、功能及分化能力。
动物细胞培养：体外培养分散后的单个细胞，
和传代培养。
发明了卡氏瓶；
5.1943年，获得长期培养细胞系（可连续传代）和细胞
克隆。
标志着组织培养工作进入
6.1950年，人工培养液“199全”新研阶制段成功
7.1951年，海拉细胞系的建成。
原代培养
从机体取出后立即 进行的细胞、组织 培养
传代培养
原代培养细胞分成 若干份，接种到若 干份培养基中，使 其继续生长，增殖。
因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强
3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？
成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养
4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？
不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体
5、培养的细胞为什么会贴壁生长？ 大多数组织细胞不适应悬浮生长，他们必须在固体
使其得以生存，并保持生命活动现象。像体内一 样呈现一定的组织特性。
组 动物组织培养：体外培养动物组织，使其维持 织 生活状态或生长特性。可以伴随组织分化，但最 培 终成为细胞培养。 养
动物器官培养：体外培养动物器官原基、部分
或整个器官，使之得以保存、生长。保持器官的 结构、功能及分化能力。
（三）动物组织培养技术的发展
的表面上生长和分裂。
贴壁生长后随细胞数目的增多，会出现接触性抑制的 现象。 要定期要胰蛋白酶处理使细胞从瓶壁脱离，配成 悬浮液，分装多瓶再培养
6、用胰蛋白酶处理动物胚胎或幼龄动物的组织、器官？ 分解胶原纤维等蛋白
7、若一直在卡氏瓶中持续培养会出现什么情况？
贴壁生长以及接触抑制生长的细胞就会因细胞密度过大 和代谢消耗引起营养枯竭，不能正常生长。
（5）动物细胞培养的结果： 不能最终培养成生物体,而是细胞群。
思考：
1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独 特之处？ 主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特 之处有：a、液体培养基 b、成分中有动物血清等 2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养 材料？
二氧化碳培养箱
通过在培养箱内模拟形成一个类似细 胞或组织在生物体内的生长环境，如恒 定的pH值（7.2-7.4）、稳定的温度 （37°C）、较高的相对湿度（95%）、 稳定的CO2水平（5%），来对细胞或组 织进行体外培养的一种装置。
…………
小结：培养过程
从动物胚胎或幼龄动物组织 切片中取小片样品
（二）动物组织培养
1.概念：动物组织在体外及人工条件下维持生活状态或生长特性。
动物组织培养过程中可以伴随组织分化。不管采用什么手段 和培养条件，组织培养中主要生命活动成分仍然以细胞为单位的。
2.结果：由于细胞的运动、变化，使得培养物的组织成分也发生结 构和功能变异，结果长期的培养经常只能使单一类型的细胞保存下 来，最终成了简单的细胞培养。
正常细胞
接触抑制
癌细胞
（2）动物细胞培养的条件
1）离体
2）营养物质：无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素、
动物血清
3）恒温和pH，无需光照 4）无菌无毒的环境
保证细胞顺利 的生长增殖
培养条件：
1. 培养基营养物质：氨基酸、糖类、维生素、无机盐、激素、其他成分（生长因子 【添加动物血清】）
2. 气体：CO2 O2【 CO2 培养箱：5% CO2和95%的空气 ，培养时培养瓶的盖子 处于拧松状态】 CO2的作用：调节PH 3. 理化条件：PH【 5% CO2调节PH ，培养基中加入PH缓冲剂，培养过程中细胞代 谢产生很多酸性物质，PH发生改变，为了实时监控培养基中PH的变化，一般在培养 基中加入酚红指示剂，若培养基颜色变化超过一定程度，即使细胞密度不大，也要更 换培养基。 】、渗透压、温度、湿度【 CO2 培养箱：37℃，湿度很高】 4. 无菌条件
动物克隆的技术基础： 动物的细胞培养 和组织培养
植物克隆的技术基础： 植物组织培养
一、动物细胞的培养和克隆形成
（一）动物细胞
1、动物细胞培养
为什么要分散成单个细胞培养？
（1）定义
将动物体内的一部分组织取出
机械消化或胰酶消化
分散成单个细胞
放在适宜的培养基培养
细胞得以生存并保持生命活动现象Leabharlann Baidu
生存、生长、分裂乃至接触抑制和有规律的衰老、死亡性能等
和组织
因为这些组织或器官上的细 胞生命力旺盛，分裂能力强
剪碎组织
分解组织中的胶 原纤维和细胞外 的其他成分
胰蛋白酶处理
单个细胞
细胞培养
（4）动物细胞生长特点： 1）贴壁生长：培养瓶中的悬浮液细胞，紧贴培养 瓶内壁才能生长； 2）接触抑制：当培养瓶中贴壁生长细胞彼此紧密接 触时，细胞不再分裂； 3）细胞只分裂不分化。
原代培养物 选择或纯化 细胞株
5. 大部分细胞是贴壁细胞，需要一个可贴附的表面【细胞培养瓶或卡氏瓶的壁，培养 皿的壁】，会接触抑制，培养密度不能过大。 少部分细胞是悬浮细胞，悬浮培养，悬浮细胞的密度可远远大于贴壁细胞，因此利用 动物细胞进行工业大规模生产一些药物时，最好使用悬浮细胞。
（3）动物细胞的培养过程
取动物胚胎 或幼龄动物器官
机械消化或胰酶消化 （胰蛋白酶）
动物组织细胞间 隙中含有一定量的 问题：胶为原什纤么维要等从原蛋代白培质养，转向传代培养？ 原代培将养细的胞细网胞络，起到一来定形时期时，贴壁生
单个细胞悬浮液
长以及接触成抑具制有生一长定的细弹胞性就和会因细胞密度过
转入特殊培养液 大和代谢消韧耗性引的起组营织养枯和竭器，官不。能正常生长。
1.1885年，鸡神经板在生理盐水“中组培织养培成养活”。一词产生
2.1903年，皮肤及白细胞在腹水及血清中存活一个月， 且观察到细胞分裂。 3.1907年，蛙胚神经管在蛙淋巴真液正中的悬组浮织培培养养，开成始功； 看到神经末端的阿米巴运动。 创立了悬浮培养法
4.1912年，鸡胚浸出液对鸡胚成心功脏进组行织了块传进代行培原养代；培养
3.动物细胞培养和组织培养的联系
两者在一定程度上可看作是同义语，统称为组织培养 （组培），即代表各种生物体结构成分的体外培养。
广义的组织培养还包括器官培养，即器官的原基、器 官的一部分或整个器官在体外和人工控制的条件下得以保 存、生长，在此过程中保持器官的结构、功能及分化能力。
动物细胞培养：体外培养分散后的单个细胞，
和传代培养。
发明了卡氏瓶；
5.1943年，获得长期培养细胞系（可连续传代）和细胞
克隆。
标志着组织培养工作进入
6.1950年，人工培养液“199全”新研阶制段成功
7.1951年，海拉细胞系的建成。
原代培养
从机体取出后立即 进行的细胞、组织 培养
传代培养
原代培养细胞分成 若干份，接种到若 干份培养基中，使 其继续生长，增殖。
因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强
3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？
成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养
4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？
不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体
5、培养的细胞为什么会贴壁生长？ 大多数组织细胞不适应悬浮生长，他们必须在固体
使其得以生存，并保持生命活动现象。像体内一 样呈现一定的组织特性。
组 动物组织培养：体外培养动物组织，使其维持 织 生活状态或生长特性。可以伴随组织分化，但最 培 终成为细胞培养。 养
动物器官培养：体外培养动物器官原基、部分
或整个器官，使之得以保存、生长。保持器官的 结构、功能及分化能力。
（三）动物组织培养技术的发展
的表面上生长和分裂。
贴壁生长后随细胞数目的增多，会出现接触性抑制的 现象。 要定期要胰蛋白酶处理使细胞从瓶壁脱离，配成 悬浮液，分装多瓶再培养
6、用胰蛋白酶处理动物胚胎或幼龄动物的组织、器官？ 分解胶原纤维等蛋白
7、若一直在卡氏瓶中持续培养会出现什么情况？
贴壁生长以及接触抑制生长的细胞就会因细胞密度过大 和代谢消耗引起营养枯竭，不能正常生长。
（5）动物细胞培养的结果： 不能最终培养成生物体,而是细胞群。
思考：
1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独 特之处？ 主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特 之处有：a、液体培养基 b、成分中有动物血清等 2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养 材料？
二氧化碳培养箱
通过在培养箱内模拟形成一个类似细 胞或组织在生物体内的生长环境，如恒 定的pH值（7.2-7.4）、稳定的温度 （37°C）、较高的相对湿度（95%）、 稳定的CO2水平（5%），来对细胞或组 织进行体外培养的一种装置。
…………
小结：培养过程
从动物胚胎或幼龄动物组织 切片中取小片样品
（二）动物组织培养
1.概念：动物组织在体外及人工条件下维持生活状态或生长特性。
动物组织培养过程中可以伴随组织分化。不管采用什么手段 和培养条件，组织培养中主要生命活动成分仍然以细胞为单位的。
2.结果：由于细胞的运动、变化，使得培养物的组织成分也发生结 构和功能变异，结果长期的培养经常只能使单一类型的细胞保存下 来，最终成了简单的细胞培养。
正常细胞
接触抑制
癌细胞
（2）动物细胞培养的条件
1）离体
2）营养物质：无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素、
动物血清
3）恒温和pH，无需光照 4）无菌无毒的环境
保证细胞顺利 的生长增殖
培养条件：
1. 培养基营养物质：氨基酸、糖类、维生素、无机盐、激素、其他成分（生长因子 【添加动物血清】）
2. 气体：CO2 O2【 CO2 培养箱：5% CO2和95%的空气 ，培养时培养瓶的盖子 处于拧松状态】 CO2的作用：调节PH 3. 理化条件：PH【 5% CO2调节PH ，培养基中加入PH缓冲剂，培养过程中细胞代 谢产生很多酸性物质，PH发生改变，为了实时监控培养基中PH的变化，一般在培养 基中加入酚红指示剂，若培养基颜色变化超过一定程度，即使细胞密度不大，也要更 换培养基。 】、渗透压、温度、湿度【 CO2 培养箱：37℃，湿度很高】 4. 无菌条件
动物克隆的技术基础： 动物的细胞培养 和组织培养
植物克隆的技术基础： 植物组织培养
一、动物细胞的培养和克隆形成
（一）动物细胞
1、动物细胞培养
为什么要分散成单个细胞培养？
（1）定义
将动物体内的一部分组织取出
机械消化或胰酶消化
分散成单个细胞
放在适宜的培养基培养
细胞得以生存并保持生命活动现象Leabharlann Baidu
生存、生长、分裂乃至接触抑制和有规律的衰老、死亡性能等
和组织
因为这些组织或器官上的细 胞生命力旺盛，分裂能力强
剪碎组织
分解组织中的胶 原纤维和细胞外 的其他成分
胰蛋白酶处理
单个细胞
细胞培养
（4）动物细胞生长特点： 1）贴壁生长：培养瓶中的悬浮液细胞，紧贴培养 瓶内壁才能生长； 2）接触抑制：当培养瓶中贴壁生长细胞彼此紧密接 触时，细胞不再分裂； 3）细胞只分裂不分化。