重要 动物组织切片制作技术
重要动物组织切片制作技术
7、选好组织块的切面
熟悉某些器官组织成分安排，然后决定其切面的走向；如一 长管状器官以横切面较好。
8、保持材料的清洁
组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用生 理盐水冲洗，然后再入固定液，但要注意防止组织损伤。
9、切除不需要的部分
特别是组织周围的脂肪等，应尽可能清除掉，否则给固定、 脱水、浸蜡、切片等带来一些不必要的问题。
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（二）、固定的目的 1、迅速阻止组织、细胞的死后变化，防止自溶与 腐败，使之尽量保持生前的状态与结构。 2、使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变 为不溶性物质，以保持其原有状态。 3、使组织内各种物质成分产生不同的折光率，以 便染色后易于鉴别和观察。
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4、使组织块在脱水、包埋、切片、染色等过程 中不易损坏。 5、使不同组织成分对染料有不同的亲和力，经 染色处理后易于辨认。 6、防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有形态 结构。 7、使组织块硬化，便于制作薄片。
称浸蜡。一般用于浸蜡的石蜡熔点为52-56℃， 在夏天较热时一般用高熔点石蜡，在冬天气温较 低时用低熔点石蜡，主要是有利于切片的制作。 时间不易过长，否则容易造成组织脆硬，时间不 足，也难制作良好的切片。
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四、 组织的包埋与包埋方法
组织块经过浸透剂浸透后，再用包埋剂（石蜡、 火棉胶、碳蜡和树脂等）包起的过程称包埋。不同 的包埋方法有不同的要求，包埋后均可制成组织的 块。经过包埋后，可使组织达到一定的硬度和韧度， 有利于切成薄片。
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1、脱水剂 （1）酒精：是最常用的脱水剂，脱水能力强， 并能使组织硬化。其主要缺点是易使组织收缩、 变脆，故应勿直接用高浓度酒精，一般从70%酒 精开始；脱水时间勿过长。在70%可长时间保存。 （2）丙酮：脱水作用比酒精强，但对组织块的 收缩较大，价格较高，主要用于快速脱水或固 定兼脱水，脱水时间一般为1-3h左右。
辽宁中学动物病理学切片制作方法
辽宁中学动物病理学切片制作方法
一、背景介绍
动物病理学切片是病理学研究中常用的一种实验技术，是病理学检测重要的一个组成部分，主要用于病理检测，病理学研究以及教学实验等。
本研究以辽宁中学生物实验室制作的病理学切片为例，介绍动物病理学切片制作的基本方法。
二、基本要求
1、要求动物及其器官的质量最好，采用新鲜未受污染的动物及其器官来进行实验操作。
2、要保证动物及其器官的灭菌消毒，避免污染和变质，对动物和器官进行灭菌消毒，采用5％NaOCl操作。
3、要求切片稳定，要求切片细致、焦点清晰、清晰度高，可以用15-20毫米厚的切片机切片。
4、要保证切片的贮存条件，要求切片保存在低温冰箱中或者冻干的方法进行保存，最好在恒温和低湿的环境下进行切片操作，保证切片的稳定和清晰度。
三、操作过程
1、准备工作：准备所需的器材，如病理切片机、液氮冰箱、低温冰箱等，并对器材进行清洁消毒。
2、取材：采用新鲜的动物及其器官进行实验操作，进行前期灭菌消毒，确保取材安全。
3、制片：使用15-20mm厚度的切片机，垂直放置器官，慢慢龟
裂切片，焦点清晰，保证细致卓越。
4、贮存：完成切片后，立即放入低温冰箱中保存，或者采用冻
干的方式保存，保证切片的质量。
四、实验结果
动物病理学切片制作技术有助于加快实验结果，结果精确、清晰，准确判断动物的病变和治疗效果，为病理学研究提供精准的实验数据。
五、结论
病理学切片制作技术是动物病理学研究的重要实验技术，需要掌握实验操作要求，确保实验质量，为病理学研究和教学提供准确有效的实验数据。
小鼠部分组织的石蜡切片制作
小鼠部分组织的石蜡切片制作一、实验原理：利用脱水剂除去组织中的水分，再用透明剂二甲苯可以去除脱水剂酒精，而二甲苯可以溶解石蜡并将其导入到已脱水的组织细胞中，然后用熔化的石蜡对组织进行包埋，冷却后即可将柔软的组织包埋在石蜡中，使其具有一定硬度，且不改变其大小和形状。
用旋转切片机可将其切为极薄的薄片，经染色、脱水、装片后在显微镜下可以清晰地观察其组织结构。
二、材料与用具1．材料：小鼠肝脏、脾脏等。
2．用具：溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。
三、实验内容与步骤1．取材及固定取小鼠，采用拉颈处死或麻醉处死法将其杀死，取其脾脏和肝脏，切为边长约为0.5cm的组织块。
用先用0.85％的生理盐水漂洗以洗去血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。
由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24 hr。
如果是管状器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。
取下的材料马上进行固定，采用FAA固定液，固定液的用量与组织块体积之比一般在20:1，固定时间2 hr以上，超过24hr时可继续浸泡或转入70%酒精中保存。
不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。
2．冲洗固定后的组织块在进行脱水前用70%酒精洗去固定液。
3．脱水和硬化经过固定后的组织在水洗后要进行脱水，脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，使组织逐渐变硬，便于油类或其他透明及浸入，为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。
常用的脱水剂是不同浓度的酒精，因为酒精与水有很大的亲和力，酒精浓度可以逐渐升高，置换出组织中的水。
脱水必须充分，脱水不充分会影响透明和浸蜡。
脱水过程要逐级上升，不能操之过急，跳级脱水会引起组织块强烈的收缩变形。
脱水所用的酒精浓度及过程如下：30％—→50％—→70％—→80％—→90％—→95％—→100％(Ⅰ)—→100％(Ⅱ)组织块在各级较低浓酒精（小于70％）中脱水的时间应视组织块的大小而定，大小不超过0.5立方厘米的组织块脱水时间为6～12 hr，在高浓度酒精中（大于70％）脱水时间为3 hr 左右。
做切片方法
常规组织病理技术切片技术是病理检验技术的重要组成部分。
在实验室内的病理检查工作中，不仅要观察大体标本的病理变化，更重要的还要观察组织标本的病理变化，才能作出最后诊断。
大体标本的病理变化是用肉眼观察，而组织标本必须借助显微镜进行观察。
组织标本的质量将直接影响镜检观察，也就是影响到诊断和研究。
学习和从事切片技术工作，首先应当认识这一工作的重要性，提高责任感。
切片技术随着生物学和医学的发展而发展，随着光学仪器和切片机的日益精密而不断改进。
下面仅就目前兽医实验室最常用的石蜡切片的制作技术做一系统的介绍。
（一）石蜡切片制作方法和程序任何组织制成一张菲薄的切片标本需要经过一系列的处理过程，而每一过程的步骤和手续严密而复杂。
现将制作石蜡切片的主要程序介绍如下。
制作石蜡切片的主要程序：取材；固定；脱水；透明；浸蜡；包埋；切片；染色；封固。
1.取材病理组织大多数采自动物尸体剖检材料或活体检查组织，取材的种类、数量取决于诊断和研究的目的，病理组织要越新鲜越好，因此标本取材后要及时切成小块，进行固定。
取材时必须注意：⑴接受病理组织材料时，必须依据送检单详细检查送检物。
自己采的病料也要求及时填写送检单。
检查时注意标本名称、数量与送检单是否相符，并查明送检单位地址以及有无临床及化验等有关资料。
如果发现送检标本不符，标本固定不当以及标本发生腐败等而不能制作切片时，应立即退回；若检查无误，应将标本及时登记、编号。
⑵组织切块需用锐刀或剪，切忌对组织材料挤压，揉搓及扭折等损伤，以保持组织完整及生活时状态。
⑶切块要选择病变显著部位及可疑病灶。
切取组织块要包括病灶及其周围健康部分，重要病变可多取几块，以反映病变各阶段、各部分的形态变化。
采取组织应包括各该器官的各组成部分，如肾脏应包括被膜、肾皮质部、肾髓质部、肾乳头及肾盂。
⑷组织块不宜过大，通常长1厘米，宽为1.5厘米，厚度为0.3厘米，最宽可达1.5~3厘米，但厚度不超过0.5厘米为宜。
小鼠病理切片的制备
小鼠病理切片的制备小鼠病理切片的制备，说起来可能有点复杂，但其实一想到小小的一块切片，能帮咱们了解小鼠体内发生的种种变化，感觉这事儿就变得有趣多了。
病理切片嘛，就是通过把小鼠的组织做成超薄的片状，方便显微镜下观察，看看它们是不是有什么问题。
你可能会想，这个过程一定是高深莫测、科学家专利的技术。
其实呢，做病理切片也没那么可怕，只要掌握了几个基本步骤，动手起来倒是挺有意思的。
得从取材说起。
别看小鼠那么小，里面的东西可不少。
想要做切片，得把小鼠的某个组织或者器官取出来，像什么肝脏、心脏、脑组织啊，大家可以根据研究需要来选择。
其实取材这一步，技术要求也不算太高，关键就是要把小鼠的尸体处理好，避免影响切片的质量。
哦，对了，很多时候我们会用麻醉药物让小鼠“睡着”，不然它们可不太愿意配合。
这个时候，如果你动手快一点，它就不会感觉到什么痛苦，大家放心。
好了，接下来就是取样了。
把小鼠的内脏取出来后，第一件事就是要把组织切成适当的块。
这个“适当”啊，不是你想切多大就多大，而是根据切片的厚度来决定的。
切块太大了，后面做切片时可能会出现问题，太小了，又难以处理。
真是让人操碎了心。
不过，没关系，大家慢慢摸索，熟能生巧。
这时候，许多人都会用到“手术刀”这一神器，刀片锋利，切起来又快又干净。
切块好后，要做个固定处理，一般是用福尔马林，保持组织的原样，让它不容易变质，确保后面观察时能看到真实的状态。
然后，得进入脱水环节。
这一步听起来不难，但其实是个技术活。
组织块在固定之后，得把它里面的水分去除，毕竟水分太多，切片的时候容易断裂。
脱水的过程就是通过一系列不同浓度的酒精来慢慢吸走组织里的水分，大家可得小心，不是每个步骤都能随便跳过或者省略的。
得按照一定的规律，一点点往更浓的酒精溶液里泡，时间不能短，浓度不能低。
好像人在游泳池里泡久了，皮肤都会皱巴巴的道理。
脱水完成后，就到了浸蜡阶段。
这个过程嘛，说白了就是把组织泡进液态石蜡里。
想象一下，你在做糕点，做那种巧克力外壳，差不多是一样的道理。
兽医病理学诊断技术
兽医病理学诊断技术
兽医病理学诊断技术是兽医学中非常重要的一环，它涉及到对动物疾病病因、发病机制、病理变化和疾病发展过程的研究。
以下是一些常见的兽医病理学诊断技术：
1. 尸体剖检技术：这是兽医病理学中最基本的诊断技术之一，通过对动物尸体的剖解，观察其内部器官的形态、颜色、质地以及病理变化，以确定疾病的类型和严重程度。
2. 组织切片制作技术：组织切片是将病变组织或器官进行固定、包埋、切片和染色的过程，以便在显微镜下观察其结构和病理变化。
3. 显微镜检查技术：显微镜检查是通过显微镜观察组织切片或其他样本的方法，可以观察到细胞的形态、结构和病理变化，是诊断疾病的重要手段。
4. 生化检测技术：生化检测是对动物体内的生化物质进行检测，以了解其生理和病理状态。
例如检测血液中的血糖、血脂、肝功、肾功等指标，以评估动物的健康状况。
5. 免疫学诊断技术：免疫学诊断是通过检测动物体内免疫系统的反应来诊断疾病的方法。
例如检测抗体、抗原等，以确定疾病的类型和严重程度。
6. 分子生物学诊断技术：分子生物学诊断是通过检测动物体内的基因和蛋白质的表达情况，以了解疾病的病因和发病机制。
例如检测基
因突变、表达谱分析等。
7. 细胞培养技术：细胞培养是将动物组织或细胞在体外进行培养的技术，可以用于研究疾病的发病机制和药物筛选等。
8. 动物实验技术：动物实验是通过实验动物来模拟人类或动物疾病的发病过程，以研究疾病的病因、发病机制和治疗方法。
例如复制某种传染病的动物模型、药物疗效观察等。
这些诊断技术在兽医病理学中发挥着重要的作用，可以帮助兽医正确地诊断和治疗动物疾病，提高动物的健康水平和生产效益。
动物组织切片的制作与染色
动物组织切片的制作与染色一、目的掌握动植物材料石蜡切片及染色的原理和技术。
二、原理石蜡切片（paraffin section）是组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。
石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。
活的细胞或组织多为无色透明，各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差，在一般光镜下不易清楚区别出；组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败，失去原有正常结构，因此，组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡，而能清晰辨认其形态结构。
石蜡切片制作基本过程包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。
一般的组织从取材固定到封片制成玻片标本需要数日，但标本可以长期保存使用，为永久性显微玻片标本。
三、仪器与试剂（一）仪器组织切片机及配套刀片、摊片用水浴锅、恒温箱、电子天平、酒精灯、脱水篮、染色架等。
（二）试剂1. Bouin氏液苦味酸饱和水溶液75 mL甲醛25 mL冰醋酸 5 mL渗透速度快，对于小块组织只须固定数小时，组织收缩很少，着色良好，不使组织变硬和变脆。
固定后的组织可直接投入70%酒精脱水。
2. 70%、80%%、95%酒精及无水酒精：95%以下的各级浓度酒精是用95%酒精加蒸馏水稀释而成。
简单的稀释方法：所需稀释的浓度是多少，就量取多少毫升原浓度的酒精，再加蒸馏水至该酒精的原浓度即可。
例如，配制70%酒精，就量取70 ml95%酒精，然后加入25 ml蒸馏水即成。
3.蛋白甘油：蛋白甘油是粘贴蜡片用的粘片剂。
配方如下：取一新鲜鸡蛋的蛋白，充分搅拌成雪花状泡沫，然后滤去泡沫，加入等量甘油，搅拌均匀，再加入一小粒麝香草酚防腐。
4. Ehrilich氏酸性苏木素液苏木素 2 g纯酒精100 ml钾明矾15 g蒸馏水100 ml甘油100 ml冰醋酸10 ml将苏木素溶于纯酒精，再将钾明矾溶于蒸馏水中，溶解后将甘油倾人混合，然后加入苏木素酒精混合，最后加人冰醋酸，溶液全部混合后，应暴露在日光下使其自然成熟，时间约要三个月（若加人300毫克碘酸钠，使苏木素迅速氧化则可立即使用）。
教学生物切片工艺
教学生物切片工艺教学生物切片工艺介绍在生物学实验室中，切片是一项非常重要的技术，它能够将生物样本切成薄片，以便观察细胞结构和功能。
本文将介绍一些常用的生物切片工艺，帮助学生们更好地掌握这一技术。
准备工作在进行生物切片之前，需要进行一些准备工作：•选择合适的样本：样本应具有较为鲜活的生物组织，如植物的叶片、动物的肌肉等。
•固定样本：将样本浸泡在适当的固定液中，如福尔马林等，以保持细胞形态和结构。
•脱水：将固定的样本经过一系列浓度递增的酒精中脱水，以去除样本中的水分。
切片步骤切片是一个复杂的过程，需要耐心和细心。
以下是常见的生物切片步骤：1.取样本：使用手术刀或镊子等工具，从准备好的样本中取出适当大小的组织。
2.定位样本：将取出的组织在显微镜下定位，确保选取合适的区域进行切片。
3.包埋：将定位好的组织放入包埋剂中，使其在固化过程中形成坚实的组织块。
4.切片：使用切片机或手动切片工具，将包埋好的组织块切成薄片，通常为几微米至几十微米。
5.上片：将切好的薄片浸泡在水中，再用镊子或刮刀等工具将其转移到载玻片上。
6.染色：根据需要，可以选择将切片进行染色，以突出细胞结构或功能。
7.封片：使用显微镜封片机或封片胶等工具，将载玻片上的切片进行密封，以保护切片并提供更好的清晰度。
注意事项进行生物切片时，还需注意以下几点：•安全第一：操作时应戴上手套和安全眼镜，避免对身体造成伤害。
•细心操作：切片过程中要轻柔、细心，避免破坏组织结构。
•保持干燥：切片前后应保持样本和切片工具的干燥，以避免水分带来的影响。
总结生物切片工艺是生物学实验中的重要技术之一。
通过准备工作、切片步骤和注意事项的介绍，希望能够帮助学生们更好地掌握生物切片技术，提高实验的准确性和效果。
请学生们在实践中加强训练，并随时向导师和同学们寻求帮助。
动物切片制作方法
动物切片制作方法一、准备工作。
1.1 工具准备。
首先呢，咱得把工具准备齐全喽。
这就像厨师做菜得先备好锅碗瓢盆一样。
需要用到的有锋利的切片刀，这刀可得小心着用，那可是咱制作切片的“得力助手”。
还有镊子，就像咱的小夹子似的，用来夹取切片。
载玻片和盖玻片也不能少，这就好比是切片的“小床”和“小被子”。
另外，固定液、染色剂等化学试剂也得备着，这些可都是让切片能清楚呈现结构的“魔法药水”。
1.2 动物样本采集。
采集动物样本的时候啊，可得遵循相关规定，可不能乱采乱捕。
如果是实验室里专门饲养的动物，那也得小心操作。
就拿小老鼠来说吧，要轻柔地把它固定住，就像对待一个小宝贝似的，然后选取合适的部位，这个部位得具有代表性，可不能瞎选，不然做出来的切片就没意义了，那可就是“竹篮打水一场空”喽。
二、切片制作过程。
2.1 固定。
把采集好的动物样本尽快放到固定液里，这一步可重要了，就像给样本“定个型”。
固定液能让细胞保持原有的形态结构，要是这一步没做好，那后面的切片就全乱套了，整个就成了“一盘散沙”。
不同的样本可能需要不同的固定液，这就得根据具体情况来选择了，就像不同的病要吃不同的药一样。
2.2 脱水。
固定好之后呢，就要进行脱水。
这就好比把样本里多余的水分给抽干。
一般是用不同浓度的酒精逐步进行脱水。
这个过程得慢慢来，心急可吃不了热豆腐。
要是脱水不彻底，切片的时候就会出现各种问题，比如说切片容易破碎，那可就前功尽弃了。
2.3 包埋。
脱水完成后就到包埋这一步了。
把样本放到包埋剂里，就像把一个小物件放到一个特制的盒子里一样。
包埋的目的是为了方便切片，让样本有个支撑的东西。
这一步也得细心，要是包埋得不好，切片的时候样本就可能歪歪斜斜的，那做出来的切片质量肯定不咋地。
2.4 切片。
终于到切片这一步了。
拿着切片刀，就像一个技艺高超的工匠一样，小心翼翼地把包埋好的样本切成薄片。
这可是个技术活，手得稳，心也得静。
切得太厚了，在显微镜下就看不清楚结构，切得太薄了，又容易破。
【大学实验】动物组织石蜡切片制作-PPT课件
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（二）石蜡切片制作
• 用切片机将石蜡包埋的组织块（蜡块）制成适宜厚度的切 片，是目前在病理学科中最常用的一种制片方法。切片厚 度为一般4~6μ m。 【切片前的准备】 1、修切蜡块 切片前应先修块，即切去组织周围过多的石 蜡，一般留下约2mm宽度的蜡边为宜。注意蜡块不能留 得太窄，在切片时易损坏组织；蜡边不能留得太多，否则 影响展片。室温过高时，可将修好的蜡块放到冰箱中冷却 一定时间。 2、切片用品准备 （1）切片刀：预先磨好切片刀备用或切片前更换新的一 次性切片。 （2）载物片：载物片经清洁液、95%乙醇处理后备用。 （3）展片仪：加入温水，接通电源，调整温度。 （4）其他用品：准备好毛笔、记号笔、镊子、冰块等。
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方案一:病理石蜡切片的制作
（一）石蜡组织块制作 1．取材。 2．固定。 3．脱水、透明及浸蜡（具体步骤见表）。 4．包埋
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步骤 （1） （2） （3） （4） （5） （6） （7） （8） （9） （10） （11） （12）
操作项目 60%乙醇 70%乙醇 80%乙醇 90%乙醇 95%乙醇Ⅰ 95%乙醇Ⅱ 无水乙醇Ⅰ 无水乙醇Ⅱ 二甲苯Ⅰ 二甲苯Ⅱ 石蜡Ⅰ 石蜡Ⅱ
小鼠 15min 15min 20min 20min 20min 20min 20min 20min 5min 3min 10min 20min
大鼠 20min 20min 30min 30min 30min 20min 30min 30min 8min 5min 15min 25min
家兔 30min 30min 40min 40min 40min 30min 40min 40min 10min 5min 20min 30min
组织切片制作技术要点
组织切片制作技术要点组织石蜡切片制作技术要点一、动物致死（一）动物致死方法的选择：空气栓塞法。
不宜用于血管注射标本的制作乙醚麻醉对下丘脑神经内分泌物染色标本不利股动脉放血有利于肠系膜铺片制作（二）致死方法：麻醉法：乙醚或氯仿棉球与动物密封于钟罩或有盖玻璃缸麻醉4%戊巴比妥静脉注射（1毫升/公斤体重）20%乌拉坦（氨基甲基乙酯、尿烷）腹腔注射（5毫升/公丘体重）空气栓塞法：50毫升注射器从兔耳静脉注入击头法：用重物猛击大、小鼠后部或将其头猛撞桌沿，一击而死断头法：青蛙、小鼠等小动物，用剪刀剪去头部，并可用探针插入椎管中，破坏脊髓较大动物如兔等，用斧头迅速将其砍死股动脉放血：动物吸入乙醚或氯仿麻醉，立即切开动脉放血二、取材刀剪锋利，不能来回挫动组织。
熟悉取材的特点。
最好在心脏还在跳动时取材，脏器争取在死后30分钟内完成尽量取大些，固定后将受挤压或损伤的部位修去。
厚度最好在2毫米左右，长、宽尽可能的短小，使固定液迅速均匀渗入组织内部将组织展平，尽可能保持原状；神经（如坐骨神经）、肌组织（如肌梭）等，将其两端用线扎住在木片（棒）上固定取材部位：胰腺取尾部（胰岛较多）脊髓取颈、腰膨大处（神经元较多）肺取有细支气管及带有软骨片的小支气管部位选择合适的动物品种：肥大细胞取大、小鼠皮下组织及肠系膜、大网膜铺片内耳取豚鼠胰岛细胞取豚鼠（聚集成团）卵巢取猫（看到各级卵泡）运动终板取小鼠肋间肌等甲状腺、甲状旁腺取犬的材料猪肝的肝小叶十分典型（结蹄组织较多）选择切面（纵切、横切、冠状切或矢状切）：管状器官以横切为佳：如回肠、食管、气管器质性器官如肝脏，肺等保证有被膜和实质两大部分组织保持清洁，用生理盐水将组织上的血液、污物、黏液、食物、粪便等冲洗干净，再入固定液，不要损伤组织切除不需要的部分，特别是组织周围的脂肪等，尽可能切去三、固定（一）固定的一般要求组织块不宜过大，一般以厚5毫米，长宽不超过15X15毫米固定液渗透力强，又不使组织过度收缩或膨胀固定液的量一般以组织块大小的20倍为宜，最好在固定组织的器具底部垫几层滤纸或脱脂棉，使固定液从上、下、左、右、前、后几个部分能渗入组织块组织固定的时间长短以不同固定液、气温和组织块大小有关：温度高，固定时间短；组织块过大，固定时间延长软组织或较大块组织，先经2~3小时固定，再修成小块，重新固定特殊要求的组织要用特殊固定液，如显示某些结构用相应的固定液（二）固定剂与固定液1．固定剂（1）甲醛（福尔马林）还原剂。
重要动物组织切片制作技术
注意组织的新鲜度和 保存方式，避免组织 腐败和自溶。
根据实验需求选择适 当的组织部位，如肝 脏、肾脏、心脏等。
动物组织的固定
01
固定是制作切片的关键步骤，有助于保持组织结构的完整性。
02
选择适当的固定剂，如甲醛、乙醇等，根据组织类型和实验要
求进行固定。
固定时间要适当，不宜过长或过短，以确保组织结构和细胞形
03
态的清晰度。
动物组织的脱水
脱水是去除组织中多余水分的过程，为后续的包 埋做准备。
选择适当的脱水剂，如乙醇、丙酮等，逐步替换 组织中的水分。
注意脱水时间和程度，避免组织过度干燥和结构 破坏。
动物组织的包埋
包埋是将脱水后的组织包裹在包埋剂 中，以便于切片操作。
包埋过程中要保持组织结构的完整性 ，避免产生气泡和裂痕。
选择染色剂
根据观察目的选择适当的染色剂，如苏木精-伊红 染色、银染色等。
染色过程
按照染色剂的要求进行染色，控制染色时间和温 度等参数。
复染
在染色后进行复染，以提高染色效果和对比度。
切片的观察与记录
显微镜观察
使用显微镜观察切片，记 录组织结构和形态等信息 。
图像采集
使用图像采集设备将观察 到的切片图像保存下来。
切片制作技术还可以用于土壤污染监测。通过对土壤中的 动植物组织进行切片制作，可以观察到土壤污染对生物的 影响，为土壤污染治理提供支持。
切片制作技术在法医学中的应用
在法医学中，切片制作技术主要用于 对死因的鉴定和物证分析。通过对死 者的组织和器官进行切片制作，可以 了解死因和死亡方式，为刑事案件的 侦破提供依据。
标准化和规范化
为了提高切片制作技术的准确性和可靠性，标准化和规范化的操作流 程和技术标准正在不断完善和推广。
动物组织石蜡切片制作
方案二 石蜡切片的制作
贴片: 四,贴片: 将单张切片,用镊子夹住蜡片的一边并提起, 1,将单张切片,用镊子夹住蜡片的一边并提起, 铺于恒温水中(光亮的一面朝下) 铺于恒温水中(光亮的一面朝下)立即用毛笔轻 轻拉展以切片无皱褶为最好. 轻拉展以切片无皱褶为最好. 待切片在恒温水内充分摊开展平后, 2,待切片在恒温水内充分摊开展平后,将载玻片 垂直插入水中轻靠切片,随即将玻片直立提起, 垂直插入水中轻靠切片,随即将玻片直立提起, 拨正切片位置. 拨正切片位置. 用铅笔在玻片的毛玻璃上写上标本编号, 3,用铅笔在玻片的毛玻璃上写上标本编号,字要 写得小而清楚,端正. 写得小而清楚,端正. 贴好的切片置于60℃恒温箱内干燥2小时, 60℃恒温箱内干燥 4,贴好的切片置于60℃恒温箱内干燥2小时,蛋 白质凝固后即可染色. 白质凝固后即可染色.
方案二 石蜡切片的制作
二,切片的步骤: 1,将蜡块固定于切片机头上的夹座内, 2,调整蜡块组织切面恰好与刀口接触,旋 紧刀架 3,根据需要调整切片厚度. 4,修整切片,直到切出完整的最大组织切 面后,再行切制. 5,切下的切片带,用毛笔从刀口向上挑起, 拉下切片带
方案二 石蜡切片的制作
三,切片的注意事项 切片质量的好坏,与技术熟练程度和切片机, 1,切片质量的好坏,与技术熟练程度和切片机, 切片刀的好坏有关外. 切片刀的好坏有关外. 切片机的各个零件和螺丝应旋紧, 2,切片机的各个零件和螺丝应旋紧,否则将会产 生震动. 生震动. 在摇动切片机时,用力要求均匀一致, 3,在摇动切片机时,用力要求均匀一致,不宜过 重过猛,否则造成切片厚薄不均.或空洞现象. 重过猛,否则造成切片厚薄不均.或空洞现象. 在夏秋季节进行切片时,应使用冰块加强冷却, 4,在夏秋季节进行切片时,应使用冰块加强冷却, 可保持石蜡的硬度,减少切片的褶皱. 可保持石蜡的硬度,减少切片的褶皱.
动物组织石蜡切片制作流程
2min 95 1:1无水乙醇、二甲苯（）
5min二甲苯Ⅰ
5min
二甲苯Ⅱ
..
.
..
15min无水乙醇2min95乙醇2min85乙醇2min70乙醇2min50乙醇2min蒸馏水2min苏木精15min蒸馏水洗去多余染液1盐酸分色60sec自来水蓝化20min蒸馏水2min50乙醇2min70乙醇2min85乙醇2min伊红2min95乙醇2min无水乙醇2min无水乙醇2min无水乙醇二甲苯1
.
动物组织石蜡切片制作流程
1.固定：10％福尔马林浸泡24h
2.洗涤：自来水冲洗24h
3.脱水、透明
5％乙45min
1.5h7％乙1.5h％乙81h9％乙醇30min无水乙醇Ⅰ
30min无水乙醇Ⅱ20min 1:1无水乙醇、二甲苯（）30min二甲苯Ⅰ
30min二甲苯Ⅱ℃的石蜡）浸蜡（4.58-60 30min二甲苯、石蜡（1:1）30min石蜡Ⅰ30min石蜡Ⅱ
30min
石蜡Ⅲ5.包埋、切片、展片、贴片6.染色
10min石蜡
2min石蜡5min无水乙醇、二甲苯1:12min无水乙醇
2min％乙醇952min 85％乙醇
2min 70％乙醇2min 50％乙醇2min蒸馏水
15min
苏木精
洗去多余染液蒸馏水
60sec％盐酸分色1
20min自来水蓝化
2min蒸馏水2min 50％乙醇2min％乙醇70
[VIP专享]鸡的腿肌组织切片制作
![[VIP专享]鸡的腿肌组织切片制作](https://img.taocdn.com/s3/m/7af5fcb3700abb68a882fb42.png)
摘要石蜡切片是组织学、发育生物学研究的主要实验方法，同时也是病理学中观察病理变化的重要手段，为科研和临床做出了卓越贡献。
该技术应用石蜡与动植物的组织能够很好地结合这一基本原理，经过标本采集、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、摊片、贴片、烘片、脱蜡、染色、脱水、透明等一系列特殊处理方法制成透明的薄片，在显微镜下观察肉眼看不到的结构，为更深入的研究做准备。
关键词：鸡腿肌组织切片目录1 前言 (1)2 材料与方法 (2)2.1 材料 (2)2.1.1 主要试剂 (2)2.1.2 主要仪器设备 (2)2.2 方法 (3)2.2.1 (3)2.2.2 (3)2.2.3 (3)2.3 (4)2.3.1 (4)2.3.2 (5)2.4 (5)2.4.1 (5)2.4.2 (6)2.4.3 (7)2.4.4 (8)2.4.5 (8)3 结果与分析 (8)3.1 (8)3.2 (9)3.3 (9)3.4 (10)4 讨论 (11)参考文献致谢图一取材（draw materials）2.2.2 固定新鲜的组织被割取后,由于细胞内酶的作用和细菌的繁殖，可引起组织的自溶和腐败。
因此，割取组织块后，应立即采用一种方法，将组织尽可能保持原有的形态结构，且有利于保存和适于制片的操作，这一步骤称为固定。
化学固定法就是用化学试剂配制成固定液使组织固定。
具体方法如下：将取好的腿肌组织尽快的浸入相当于组织体积20~30倍的10%福尔马林固定液中固定24h（图二）。
借助固定液的作用，使细胞的新陈代谢瞬时停止，使之与存活的原有形态和结构相似而不发生变形，从而达到使组织变硬以便于切片、增强内含物的折光度、令细胞易于着色的目的，同时具有防腐作用。
组织固定后保存于加盖的容器内，贴上标签。
标签上注明固定液、材料来源、日期等图二固定（fixation）图三冲洗（flushing）Dehydration）由于石蜡不溶于水，而本实验中采用的固定以后的腿肌组织中仍含有水分，需先进行脱水。
家畜组织切片的制作和观察
家畜组织切片的制作和观察摘要：包埋是使浸透蜡的组织块包裹在石蜡中，先准备好模板盒将熔蜡倒入盒内，迅速用预温的镊子夹取组织块平放在纸盒底部，切面朝下，再轻轻提起模板盒，平放在冷水中，待表面石蜡凝固后立即将纸盒按入水中，使其迅速冷却凝固，30min后取出。
用蜡的温度应略高于浸蜡温度，使组织块与周围石蜡完全融为一体。
石蜡的迅速冷却也很重要，否则包埋块中将会产生结晶。
以后切片时引起碎裂重点词：固定，包埋，切片和贴片第一步：处死和采血;取活鸡一只，用剪刀在其口腔内部三分之二处剪断血管，将鸡倒垂，使血液流下，这时，取小型试管一个，在鸡喙处接血液至三分之二满，放入试管架，待有血清出现时，留待备用。
第二步：取材和固定；开膛破肚，取所需组织（十二指肠，空肠，回肠，盲肠，直肠，泄殖腔，肝，肺，气囊，肾，心脏，脾脏，肾上腺，胸腺，脑，眼球，气管，食管，）一式两份，且其组织块大小应不超过2厘米，在生理盐水中冲刷后，分别置入有甲醛溶液和溶液。
搁置一天，使组织的细胞蛋白质变性凝固，防止其自身溶解，从而保持组织形状。
第三步：脱水；切取所需要的组织（注意厚度要薄，且应垂直切割，）先浸入50%的一级酒精溶液2小时；50%二级酒精溶液1小时70%一级酒精溶液2小时；70%二级酒精溶液1小时；80%一级酒精溶液2小时；80%二级酒精溶液1小时；95%一级酒精溶液1小时30分钟；95%二级酒精溶液过夜；100%一级酒精溶液1小时；100%二级酒精溶液30分钟；脱去组织中的水分。
第四步，透明；再将组织块置于1：1的100%二级酒精和二甲苯1h30MIN一级二甲苯20MIN；二级二甲苯20MIN既溶于酒精，又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明，且二甲苯可以置换出组织中的酒精，为下一步的浸蜡和包埋做准备。
第五步：浸蜡和包埋；将已透明的组织块置于浸蜡盒中，放入到一级蜡溶液中45分钟，取出在放入二级蜡溶液中60分钟，紧接这又放入三级蜡溶液中45分钟。
犬猫组织切片的制作试验指导
小动物疾病防治专业动物组织胚胎学综合性实验犬猫组织切片的制作实验指导李玉谷编华南农业大学兽医学院二零零四年六月犬猫组织切片的制作实验指导李玉谷编写张媛整理李楚宣审校目录概述 (2)实验一动物麻醉与组织取材 (3)实验二组织固定 (5)实验三组织冲洗与脱水 (8)实验四组织透明、浸蜡与包埋 (11)实验五组织切片、贴片与烤片 (14)实验六组织切片染色 (15)概述一、本实验的目的动物组织制片的方法，最主要的和最常用的是石蜡包埋切片法，该方法广泛应用于动物组织学、病理学、生物学等许多学科和临床实践中。
石蜡包埋切片法的基本原理，是将石蜡渗入组织内作为支持物，然后用切片机将组织切成薄片，经染色后在显微镜下观察。
本综合性实验，要求同学们学会犬、猫组织的石蜡包埋切片，HE 染色标本的制作过程。
通过该实验，掌握犬、猫组织的取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片和HE染色等基本方法和操作技能，为今后临床病理诊断等奠定基础。
二、本实验所需的仪器设备光学显微镜、石蜡切片机、组织脱水机、石蜡包埋机、磨刀机、染色机、染色缸、切片架、载玻片、盖玻片、冰箱、恒温箱、干燥箱、天平、酸度计、离心机、定时钟、解剖器械、玻璃器皿，等等。
三、本实验所需的主要试剂组织固定剂（10%福尔马林等）、组织脱水剂（酒精等）、组织透明剂（二甲苯等）、组织包埋介质（石蜡等）、染色剂（苏木精、伊红等）、分色剂（1%盐酸酒精等）、封片剂（中性树胶）等。
实验一动物麻醉与组织取材一、动物麻醉猫或狗一只，用3%~4%戊巴比妥钠，按1ml/kg w静脉注射或腹腔注射；或按5ml/kg w腹腔注射20%氨基甲酸乙酯；或按使用说明书注射其他麻醉剂。
二、组织取材组织取材是制片的一个重要技术问题，必须根据具体要求，确定取材的部位和方法。
否则，对所观察的组织结构，不是看不到，就是看不全。
因此，在取材之前，必须弄清所取组织器官的解剖位置、组织结构特点等，同时，还要掌握实际的操作技术，不能随意切取组织器官。
鸡的切片制作
鸡的切片制作鸡的切片制作实验报告实验三病变组织的取材、固定和修块一.实验目的掌握用于病理组织学诊断的组织材料的取材原则，固定法及修块标准。
二．实验耗材手术刀、组织剪、刀片、生理盐水、多聚甲醛固定液（福尔马林）、铅笔等。
三．实验过程1.取材：用颈部放血法处死公鸡，打开腹腔，取需要的组织。
切取的组织块不宜太大，以利于固定剂穿透，通常以5mm*5mm*2mm 或10mm*10mm*2mm为宜。
取下所需的组织，切成一小块2-3mm 厚。
注意：取材动作要迅速。
不宜做太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化，不要损伤所需要的部分。
2.固定：将切好的脏组织用生理盐水把组织洗一下，立即投入中性福尔马林固定液中固定。
（固定的作用）组织经一系列的处理后，就必须进行固定。
固定的作用，从组织学的角度其简单的定义是，保持细胞、组织的固有形态和结构，使之尽量保持细胞、组织的固有形态和结构，而从免疫组化技术的角度，固定的作用不仅是使细胞蛋白质凝固，尽量减少或终止外源性酶和源性酶的反应；防止细胞的自溶，以免使抗原扩散至组织间质；以保持组织的固有形态和结构；更重要的是保持组织或细胞的抗原性，不但要使抗原不导致失活，而且不使抗原发生弥散的现象，才能在免疫组化染色时，不产生过深的背景，影响对阳性物的判断。
3. 修块样品要求：长，宽各1cm左右，厚不宜超过1cm（依据组织不同要求不同）。
肝、肾、脾、肺、肌肉、消化道、脑其他注意（1）组织固定越新鲜越好。
组织一经离体，就能及时地固定，这是最好的。
（2）固定材料时，固定液必须充足，一般材料块的20-30倍，有些水分多的材料，中间应更换1-2次新液。
（3）组织固定，组织块不宜过大。
对于产酶类的器官如肝、肾、脾等，更要处理好，否则更容易出现自溶现象。
（4）对不同类型的组织应适当合理地选择固定液。
（5）组织固定，时间不宜太短，也不宜太长。
（6）特殊病例或特殊物质应选择特殊的固定液。
一般的病例标本，如没特殊的要求，都可以应用甲醛配成的各种固定液来固定。
新鲜动物组织装片,的制作与观察
制作动物新鲜组织装片，会引起孩子的极大兴趣，并可培养其动手能力，还能使学生加深对各组织结构特点、功能等知识的理解记忆；且新鲜组织取材方便，易于染色，有利于观察。
一、上皮组织装片的制作与观察。
方法一：①用大头针挑起一些脱落的青蛙（或蟾蜍）的表皮，放在载玻片上，并将其展平后盖上盖玻片。
②从盖玻片一侧滴入红墨水（1：5稀释），另一侧用滤纸吸引，将细胞染成红色。
③观察，用低倍显微镜观察，蛙的表皮为复层扁平上皮，脱落下来的鳞状上皮细胞呈多角形，细胞质中含有色素；染色后可明显的看到细胞核。
方法二：①取材。
将蛙的小肠袢展平，放在软木环（将暖瓶软木塞切成厚约0.4—0.5厘米，直径约2.2—2.5厘米的圆片，将圆片中央挖成直径为1.5—2厘米的孔）上，周围用大头针固定。
②冲洗。
用蒸馏水冲洗2-3次。
③染色。
将冲洗后的肠系膜连同软木环一起浸在l％硝酸银溶液内，染色5-10分钟。
④再冲洗。
从硝酸银溶液中取出后再用蒸馏水冲掉浮色。
⑤照光。
冲掉浮色的肠系膜及软木环一起浸泡在蒸馏水中放在阳光下或日光灯下照射，约20分钟左右，直至肠系膜显棕褐色为止。
（①—⑤由教师提前完成）⑥制片。
将肠系膜从软木环上取下，剪一小块，展平在载玻片上，加一滴蒸馏水，盖上盖玻片。
⑦观察。
用低倍显微镜观察，肠系膜为单层扁平上皮，由于细胞间质用AgNO3溶液染成了棕褐色，可清晰地看到一个个扁平细胞。
二、疏松结缔组织装片的制作与观察①用解剖针从蛙的腿与躯干相连处挑取皮肤下的组织放在一块干燥的载玻片上，用大头针尽量展平、展薄，当周缘干燥后，滴一滴生理盐水，加盖玻片。
②用低倍显微镜观察，并从盖玻片一侧滴入紫药水，另一侧用吸水纸吸引使染色剂弥散。
观察到的分布不规则的紫色束状结构是胶原纤维；一般不成束分布且末端卷曲的纤维是弹性纤维，以及散在基质中的细胞。
三、肌肉组织装片的制作与观察骨骼肌：①在蛙腿部用解剖刀取下很小的一块肌肉，放在载玻片上，滴一滴生理盐水。
②两手持大头针顺肌纤维走向将其分离，分得越细越好。
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脂无作用，渗透力较弱，很少单独使用，固定后
收缩明显，用含苦味酸的固定液固定组织一般不
宜超过24小时。
14
（5）重铬酸钾：其穿透速度快，对组织收缩小并
稍有膨胀，重铬酸钾常备水溶液为3-5%。其混合 固定液，如Zenker液、Helly液及Regaud液等被 广泛用于组织学，凡经重铬酸钾、铬酸、铬酸盐 固定的组织，必须以流水冲洗后方能转入脱水剂。
11
（四）、固定液
1、固定液种类：一类是单纯固定液，即只有一种
试剂；另一类是混合固定液，由两种或两种以上试
剂组成。 作为较好的固定液，应有下列特性，首先，有 强渗透力，能迅速的渗入组织内部；其次，不使组 织过渡收缩或膨胀，并能使组织内欲观察的成分得 以凝固为不溶性物质；最后，能使组织达到一定的 硬度并获得较佳的折光率和对某些染料具有较强的
一般厚度约 5mm 的实质性器官，总的浸蜡时间约 2-
3h，均在恒温箱内进行。较理想的的浸蜡温度是石
蜡刚溶化的温度，或在蜡杯底部尚残留一小部分未 熔完蜡时的温度，浸蜡完成后，即做成包有组织的 蜡块。包埋蜡块的器材有专用的包埋框，也有自己 制作的包埋盒，只要是具有一定形状的容器，我们
都可以把它用作包埋盒。包埋的具体过程详述。
8
4、使组织块在脱水、包埋、切片、染色等过程 中不易损坏。 5、使不同组织成分对染料有不同的亲和力，经 染色处理后易于辨认。 6、防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有形态 结构。
7、使组织块硬化，便于制作薄片。
9
（三）、注意事项及影响固定的因素
1、组织块不易过大，一般以厚度5mm，长宽不超过
15×15mm。 2、固定液的量一般以组织块大小的20倍为宜。 3、必须选择渗透力强，又不使组织过渡收缩或膨 胀的试剂作为固定液。 4、有的固定剂是由氧化剂与还原剂混合而成，如 甲醛（还原剂）与重铬酸钾（氧化剂）混合成的 Helly液等。
2
3、击头法
如大、小鼠，可用重物击头后部或将其头后部猛撞桌沿，最 好一击而死。
4、断头法
青蛙、小鼠等小动物，可用剪刀剪去其头部，较大动物如 兔子等，可用斧头迅速砍头致死。
5、股动脉放血法
动物经吸入乙醚或氯仿稍麻醉后，立即切开股动脉放血。
注意：上述各法，应根据制片需要选用，如空气栓塞法不宜
用作血管注射标本的制作；乙醚麻醉对丘脑下神经部分泌物
个组织和全身，从而得到充分的固定。
3、蒸汽固定法:比较细小而薄的标本，可用锇酸或甲醛蒸汽 固定。主要用于血液或细胞涂片以及某些薄膜组织的固定。
7
（二）、固定的目的
1、迅速阻止组织、细胞的死后变化，防止自溶与
腐败，使之尽量保持生前的状态与结构。
2、使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变
为不溶性物质，以保持其原有状态。 3、使组织内各种物质成分产生不同的折光率，以 便染色后易于鉴别和观察。
10
5、固定时间的长短视固定剂的不同要求而定，
也与气温、组织块的大小有关。温度高时则时
间缩短，组织块过大则应延长固定时间。
6、软组织或较大组织可先经2-3小时固定后再
修整成小块重新投入新配制的固定液内继续固 定。 7、特殊要求的组织，常需要特殊的固定液，所 以，取组织之前应做好准备。如各种神经组织 因显示内容不同，需不同的固定液与固定方法。
收缩显著，除用作固定液外，万分之一的铬酸水 溶液，可制作分离标本。 （8）丙酮：丙酮能使蛋白质沉淀，渗透力强，但 对核固定欠佳，且使组织剧烈收缩。广泛用于组
织化学中酶的固定，其作用基本与酒精相同。
（9）三氯醋酸：作用与醋酸相似，很少单独使用，
在混合固定液中对组织起膨胀作用。
16
3、常用混合固定液Fra bibliotek（1）Bouin液：饱和苦味酸水溶液：75ml；甲醛
足，也难制作良好的切片。
26
四、 组织的包埋与包埋方法
组织块经过浸透剂浸透后，再用包埋剂（石蜡、
火棉胶、碳蜡和树脂等）包起的过程称包埋。不同
的包埋方法有不同的要求，包埋后均可制成组织的
块。经过包埋后，可使组织达到一定的硬度和韧度，
有利于切成薄片。
27
（一）、石蜡包埋法 石蜡包埋法为组织学技术中最常用的一种包埋 法。石蜡具有不同的熔点，夏天一般用50℃以上熔 点（硬蜡）石蜡包埋，冬天用50℃以下熔点（软蜡） 石蜡包埋，软的组织用软蜡包埋，硬的组织用硬蜡
3、勿使组织块受挤压
切取组织块时刀剪要锋利，不要来回挫动，夹取组织时切 勿猛压，取材时组织块可稍大，以便固定后修块。
4
4、尽量保持组织的原有形态
新鲜组织经固定后，或多或少产生收缩现象，为此可将组织
展平，以尽可能维持原形。
5、要熟悉取材部位
要能准确的按解剖部位取材，如胰腺，一般取胰岛较多的 胰腺尾部；肺应取有细支气管及带有软骨片的小支气管部。
9、切除不需要的部分
特别是组织周围的脂肪等，应尽可能清除掉，否则给固定、
脱水、浸蜡、切片等带来一些不必要的问题。
6
三、 组织固定法
（一）、固定的方法
1、小块组织固定法：从人体和动物取下的小块组织，立即
臵入液态固定剂中进行固定，这是应用最广泛最经常的方法。 2、注射、灌注固定法：某些组织块由于体积过大或固定液 极难渗入内部或需要对整个脏器或整个动物进行固定。这时 宜采用注射固定法，将固定液注入血管，经血管分支到达整
（ 4 ）中性缓冲甲醛液：为免疫组织化学最常用的固
定 液。固 定时间 24h 为宜 ，配方 ： 40% 甲 醛 10ml ，
0.01mol/LpH7.4的PBS90ml
18
第二章：固定后处理及切片
一、 洗涤与修切
1、水洗法
一般常用流水冲洗，凡用含铬或锇的固定液固定的组织块， 必须用流水冲洗24h左右。常用的固定液为10%的甲醛水溶 液，也必须用流水冲洗，一般时间也为24h左右，固定时间 长的标本，冲洗时间也应延长。
包埋，一般常用的包埋熔点使 52-56℃，如果需要
切 4 微米以下的切片，则用 56-60 ℃的石蜡，较厚
的切片则用熔点为 52-54℃的石蜡。新蜡必须在温
箱内溶化一次，以使其所含的挥发性物质蒸发，无 论新蜡和旧蜡都必须加热过滤后再包埋。
28
（二）、石蜡包埋法包埋过程
组织块透明后，即可放入已熔的石蜡内浸蜡；
22
（3）正丁醇和叔丁醇：正丁醇是无色液体，脱
水能力较弱，可和水、酒精和石蜡互溶，因此 这种脱水的组织块可直接浸蜡和包埋。叔丁醇 是目前常用的一种脱水剂，它不易使组织收缩 或变硬，且脱水后不经透明直接浸蜡，电镜标
本制作时常用作中间脱水剂。
（4）其余脱水剂：还可以用作脱水剂的有：异
丙醇、还氧己烷、四氢呋喃、环己酮和松脂醇
亲和力。
12
2、单纯固定液
（1）酒精：既是配制混合固定液的基本成分，
又可作为单纯固定液使用。用于固定时以80%95%浓度为好。缺点是经酒精固定的组织容易变 硬，对组织收缩较大。 （2）甲醛水溶液：常用的甲醛水溶液即市售的 福尔马林，常用浓度为10%，指以10ml的商品甲
醛（37%-40%甲醛水溶液）加入90ml水配成的，
此液实际上只有4%的甲醛。
13
（3）醋酸：亦名乙酸，能与酒精、水、氯仿等多
种试剂混合，故为许多混合固定液成分之一，其 穿透速度很快，固定小组织仅1h即可，对组织和 细胞有膨胀作用，且不能凝固细胞质中的蛋白质， 一般与引起收缩的固定液一起使用，以达到平衡
目的。
（4）苦味酸：苦味酸能沉淀蛋白质，对脂肪、类
（6）锇酸：锇酸一般只用于某些特殊染色或电镜
切片染色或固定，配制时要用洗涤干净的玻塞棕
色瓶，最好用双蒸水配制，锇酸穿透力弱，且易
使组织硬脆，因此它固定的组织必须小而薄，体
积最好在3×3×2mm以内。
15
（7）铬酸：铬酸能沉淀蛋白质，适用于核蛋白的
固定，并能增强核的染色能力，穿透速度慢，一
般组织块的固定，需经12-24h，硬化程度中等，
能与透明剂混合。
21
1、脱水剂
（1）酒精：是最常用的脱水剂，脱水能力强，
并能使组织硬化。其主要缺点是易使组织收缩、
变脆，故应勿直接用高浓度酒精，一般从70%酒 精开始；脱水时间勿过长。在70%可长时间保存。 （2）丙酮：脱水作用比酒精强，但对组织块的 收缩较大，价格较高，主要用于快速脱水或固
定兼脱水，脱水时间一般为1-3h左右。
等，但由于某些原因，现在都不常用。
23
2、透明或媒浸
（1）二甲苯：是最常用的常规透明剂，它对组织
的收缩性强，易使组织变硬变脆，在二甲苯中一
般30min即可使组织透明，组织块可先经过无水
酒精-二甲苯混合液处理，再浸入二甲苯。也常
用于切片染色后透明，且不会使染料退色。
（2）苯和甲苯：对组织收缩性较小，与二甲苯相 比不易使组织变脆，但透明速度慢且挥发快，适 用于处理致密结缔组织、肌肉及腺体等组织的透 明。
3、勿使组织块受挤压
切取组织块时刀剪要锋利，不要来回挫动，夹取组织时切 勿猛压，取材时组织块可稍大，以便固定后修块。
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三、 脱水与透明
（一）、脱水的意义与目的
组织经固定和水洗后含大量水分，水与石蜡不
能混合，因此在浸蜡和包埋前，必须进行脱水，脱
水是借某些溶媒臵换组织内水分的过程。脱水时必
须由低浓度脱水剂开始，逐步转入高浓度脱水剂， 以防组织过度收缩而变形，或脱水不完全而影响制 片效果。脱水剂必须具有下列特性:脱水剂能与水 按比例混合；高浓度，一般指不含水分；脱水剂也
29
（三）、其他包埋法
除上述常用包埋法以外，还有其他一些包埋方法，
染色标本不利；股动脉放血法有利于肠系膜铺片的制作。
3
二、 取材注意事项