柱色谱和薄层色谱----预习报告

预习报告

实验项目名称：薄层色谱和柱色谱

一、实验目的

1、学习薄层色谱和柱色谱技术的原理和应用

2、掌握薄层色谱和柱色谱分离技术和操作要点。

3、掌握如何正确的配置展开剂

二、实验原理

色谱法的基本原理，是利用混合物各组分在固定相和流动相中分配平衡常数的差异。简单地说就是，当流动相流经固定相时，由于固定相对各组分的吸附或溶解性能的不同，使吸附力较弱或溶解度较小的组分在固定相中移动的速度较快，在多次反复平衡过程中导致各组分在固定相中形成了分离的“色带”，从而得到分离。

三、主要试剂规格及用量

1%偶氮苯的甲苯溶液，1%苏丹Ⅲ的甲苯溶液，1%的羧甲基纤维素

钠（CMC）水溶液，硅胶G，立即比为9:1的甲苯-乙酸乙酯。

五、实验装置图（见实验记录本）

六、实验步骤

（一）薄层色谱实验步骤：

1、薄层板的制备（此实验中不考虑，有直接的可用）

2、取两块薄层板，分别在距一端1cm处用铅笔轻轻地画一条线，作为起始线。用分别两根毛细管，分别取偶氮苯、苏丹甲苯溶液和其合液放在起始线上，取两个样点，且两样点相距1到1.5厘米，且样点的直径不超过2毫米。如果样点颜色太浅，可以等其变干后在重复几次。

3、用上述的甲苯-乙酸乙酯作为展开剂，待样点干燥后，小心放入已加入展开剂的广口瓶中，点样一端应进入展开剂0.5cm，盖好瓶盖，观察实验现象，观察展开剂前沿上升至离板的上端1cm处取出，尽快用铅笔在展开剂上升的前沿处划一记号，比较两者的Rf值的大小。

（二）柱色谱实验步骤

1、在色谱柱上端放一个干燥的漏斗，将吸附剂倒入其中，并轻轻的敲打色柱柱身使其填充均匀，然后加入洗脱剂湿润。

2、当溶剂下降到吸附剂表面时立即开始使用色谱柱，用滴管把样品溶液转移到上色谱柱中，并用少量溶剂分几次洗涤柱壁上所沾试液，直至无色。样品加完后，打开下旋塞，使样品进入石英砂层后，再加入洗脱剂进行洗脱。

3、在分有色物质是，直接观察到分离后的“色带”，然后用洗脱剂将分离后的“色带”依次自柱中洗脱出来，再用适宜的溶剂将溶质萃取出来。

七、注意事项

（1）薄层色谱

（2）1、吸附剂必须均匀地填在柱内，没有气泡、没有裂缝，否则将影响洗脱和分离。

2、加入沙子的目的是使加料时不致把吸附剂冲起，影响分高效果。若无沙子，也可用滤纸覆盖在吸附剂表面。

3、为了保持柱子的均一性，使整个吸附剂浸泡在溶剂或溶液中是必要的。否则当柱中溶剂或溶液流干时，就会使柱身干裂，影响渗滤和显色的效果。

（2）柱色谱

1、制板时，硅胶用水调成刚好能流动的糊状物为佳，勿太浓或太稀，并即刻铺在层析板上。做好的层析板应均匀一致，否则会影响分离效果。

2、待溶剂前沿离层析板顶端仅1~2mm时方能取出，否则色点分离不完全。但溶剂不能冲顶，否则色点会扩散而影响分离效果。