药物的含量测定与分析方法验证

CX
CR
AX AR
对照品溶液的浓度
对照品溶液的吸光度
A. 待测物与对照品在相同条件下测定 条件：
B. 待测物与对照品浓度相近
第四章：药物的含量测定与分析方法的验证
第一节：定量分析方法的分类 二、光谱分析法
（一）紫外-可见分光光度法 (UV-Vis稀) 释体积 5. 测定方法 1）对照品比较法：
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流动相
四元泵 自动进样器 紫外检测器 荧光检测器
真空脱气机 蒸发光散射检测3器4
自动进样器
35
四元泵
36
色谱柱
填充剂常用：十八烷基硅烷键合硅胶
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（1）泵：恒压泵：流量精度不稳；恒流泵：常用
（2）进样装置 1）隔膜进样（高分子有机硅胶垫→进样室）
HPLC系统压力太大，必须停泵进样（早期） 2）阀进样：不必停泵，六通阀
（3）色谱柱：直径4~6mm,柱长10~30cm 柱效评价：色谱系统适应性试验 柱再生：维护、保养、柱子的冲洗
cC + dD
M：被测物分子量
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第四章：药物的含量测定与分析方法的验证
第一节：定量分析方法的分类 一、容量分析法 （二）容量分析法的有关计算
用溴酸钾法测定异烟肼[M(C6H7N3O)＝ 137.14]的含量时，溴酸钾滴定液的摩尔浓 度为0.02mol/L（以KBrO3为单元），化 学反应式如下：
3C6H7N3O＋2KBrO3→3C6H5NO2+3N2↑+KBr+3H2O
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第四章：药物的含量测定与分析方法的验证
第一节：定量分析方法的分类 三、色谱分析法 （一）HPLC法
1. 对仪器一般要求
固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变
其他均可适当改变
色谱图20分钟内记录完毕
2. 系统适用性试验
色谱柱的理论板数：n = 5.54(tR /Wh/2)2
流出方向
分离度：R = 2（tR2 – tR1)/(W1 + W2); 应大于1.5
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保留因子κ 是溶质在固定相中的分子数与流动相中的分
子数的比率。k=(tR-t0)/t0
分离因子α 又称选择性。 α= k2/k1
分离度R
R

保留值之差（峰顶间距）
峰宽和之半

tR2 W1
tR1 W2
2
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理论塔板数
经典的色谱理论将色谱分离过程看作一系列相 继的平衡过程，每一平衡过程称之为一个理论塔板， 即把色谱柱假象成由许多板组成，在每一板上，成 分在两相间建立一次平衡。
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第四章：药物的含量测定与分析方法的验证
第一节：定量分析方法的分类 一、容量分析法 （二）容量分析法的有关计算 3.百分含量的计算
（1）直接滴定法 P156
设至终点时，消耗滴定液体积为V ml
则药物理论质量为V·T
浓度校正因数 F＝C实际
C规 定
含量%＝
实测药物质量 供试品取样量
100％＝ V
FT W
5
第四章：药物的含量测定与分析方法的验证
第一节：定量分析方法的分类 一、容量分析法 （二）容量分析法的有关计算
1.滴定度（T）：
每1ml规定浓度的滴定液相当于被测物质的质量(mg)
2.滴定度的计算
aA（待测物） + bB（滴定液）
a
b
T/M
1×c
T = c×a/b×M
c：滴定液浓度 (mol/L)
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第四章：药物的含量测定与分析方法的验证
主要内容
第一节 定量分析方法的分类 第二节 药物分析方法的验证 第三节 定量分析样品的制备
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第四章：药物的含量测定与分析方法的验证
相关概念
药物的含量系指药物中所含主要成分的量。
含量测定：基于化学或物理原理的“含量测定”（本 章）；基于生物学原理的“效价测定”（包括生物 检定法、微生物检定法、酶法等）。
灵敏度高，可达 10-6 g/ml （nM级） 1. 特点 准确度较高，相对误差不大于2%
仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用广泛
2. 朗伯-比耳定律 A = ECL P159（4-8）
吸收系数：摩尔吸收系数ε
百分吸收系数 —— 含E11c量%m 测定
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第四章：药物的含量测定与分析方法的验证
第一节：定量分析方法的分类 二、光谱分析法
重复性：对照液连续进样5次，峰面积RSD≤2.0％
拖尾因子：T = W0.05h/2Ａ 应在0.9 5～ 1.05
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三、色谱分析法
（一）高效液相色谱法
高效液相色谱法基本原理 1.定义： 2.液相色谱分离原理
• 根据各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分
配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异进行
原料药： 含量％＝
实测药物质量 供试品取样量
＝ Cx W
D
100％
取样量 平均片重
制剂：
标示量％＝实测含量 ＝ 标示含量
C xD W
W 标示量

P161
100％
Ｗ＝总片重 片数
片粉量 18
2）吸收系数法（绝对法） 液层厚度，
cm，如无特
来自百度文库
吸光度
A

E1% 1cm

L
C
C（g/100ml
（二）荧光分光光度法
(2)特点
灵敏度高,可达10-10g/ml～10-12g/ml. 多在低浓度进行，荧光自熄灭. 应用范围窄. 取样少,方法快速.
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第四章：药物的含量测定与分析方法的验证
第一节：定量分析方法的分类 二、光谱分析法
（二）荧光分光光度法
(3)含量测定：荧光强度与浓度成线性
对照品比较法
第四章：药物的含量测定与分析方法的验证
第一节：定量分析方法的分类 二、光谱分析法
（二）荧光分光光度法
⑴ 原理：物质在受到激发光（λex）照射后产生 了较长波长的荧光（λem）。
溶液的荧光强度和溶液的吸光程度、溶液中荧光 物质的荧光效率等因素有关。
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第四章：药物的含量测定与分析方法的验证
第一节：定量分析方法的分类 二、光谱分析法
λ(nm) 溶剂 + 吸收池A
220～240 ≤0.40
241～250 ≤ 0.20
251～300 ≤ 0.10
300以上 ≤ 0.05
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第四章：药物的含量测定与分析方法的验证
第一节：定量分析方法的分类 二、光谱分析法
（一）紫外-可见分光光度法 (UV-Vis) 5. 测定方法 确定波长：规定范围内。吸光度最大处
要求供试品溶液的A应在0.3～0.7
狭缝调整：小于吸收带半高宽的十分之 一 （通常不需要调。）
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5. 测定方法
1）对照品比较法：
供试品溶液的吸光度
AX E11c%mC X L
AR

E1% 1cm
C
R
L
AX AR

E11c%mC X L E11c%mCR L
供试品溶液的浓度
AX C X AR C R
）
A
E1% 1cm

L
别注明，
L=1cm
C（g/ml ）
A
E1% 1cm

L
100
百分吸收系数
可在手册或文献中查到
第四章：药物的含量测定与分析方法的验证
第一节：定量分析方法的分类 二、光谱分析法
（一）紫外-可见分光光度法 (UV-Vis) 5. 测定方法 2）吸收系数法：
盐酸氯丙嗪（规格1ml:10mg，E1%1cm＝915)的含 量测定：精密量取本品5ml，置200ml量瓶中，
第一节：定量分析方法的分类 二、光谱分析法
吸收光谱分析法： UV-Vis, FTIR, AAS
发射光谱分析法：FL，
光谱分析法 PL
光散射光谱：拉曼光 谱、瑞利共振…
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第四章：药物的含量测定与分析方法的验证
第一节：定量分析方法的分类 二、光谱分析法
（一）紫外-可见分光光度法 (UV-Vis)
吸收光谱范围：紫外：200～400nm 可见：400～760nm
规定波长处测定透光率，应符合P160表4-2中规
定
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第四章：药物的含量测定与分析方法的验证
第一节：定量分析方法的分类 二、光谱分析法
（一）紫外-可见分光光度法 (UV-Vis)
4. 对溶剂的要求:
含杂原子的有机溶剂通常具有很强的末端吸收
它们的使用范围均不能小于截止使用波长 石英吸收池、空气为空白
100％
W：供试品取样量
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第四章：药物的含量测定与分析方法的验证
第一节：定量分析方法的分类 一、容量分析法
（二）容量分析法的有关计算 3.百分含量的计算
（2）简接滴定法 P156 1）生成物滴定法 （葡萄糖酸锑钠） 药物 + A → B 滴定剂滴定
2）剩余滴定法（回滴法）
药物 + A（定、过量） →················
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第四章：药物的含量测定与分析方法的验证
第一节：定量分析方法的分类 三、色谱分析法
根据混合物中各组分的色谱行为差异，先
行分离后再在线或离线对各组分逐一进行分析的
方法，是分离分析混合物的最有力手段。
分类
按分离原理：吸附；分配；离子交换；排阻色谱 按分离方法：PC；TLC；柱色谱；GC；HPLC
特点：高灵敏度、 高效能、高速度、应用广泛
C供＝
R R
供－R 对－R
供 对
空 空
白 白

C对
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第四章：药物的含量测定与分析方法的验证
第一节：定量分析方法的分类 二、光谱分析法
（二）荧光分光光度法
③ 说明 a. 药物本身无荧光： 加衍生试剂（荧胺、邻苯二甲醛（OPA）丹酰 氯）,使成荧光物质后测定。 b.荧光测定影响因素多： 溶剂、pH值、散射光、荧光物质浓度 故做空白试验，不易测得绝对荧光强度。
2.计算百分含量。
MC12H17N2NaO3=260.27，FNa2S2O3＝1.038。
第四章：药物的含量测定与分析方法的验证
第一节：定量分析方法的分类 一、容量分析法 （二）容量分析法的有关计算 3.百分含量的计算
（2）简接滴定法 P156 2）剩余滴定法（回滴法）
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第四章：药物的含量测定与分析方法的验证
容量分析、光谱分析、色谱分析：各自的适用情况、 优缺点。P154
方法验证：准确度、精密度、专属性、检测限、定量
限、线性范围、耐用性。
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第四章：药物的含量测定与分析方法的验证
第一节：定量分析方法的分类 一、容量分析法
（一）容量分析法的特点
几个概念：容量分析法、滴定终点、滴定误差 （P154） （1）操作简单、快速，耐用性高； （2）测定结果准确（相对误差＜0.2%），适用于对准 确度要求高的分析； （3）方法专属性差； （4）常用于测定高含量或中含量组分，原料药含量测定 首选。
剩余的 A + B →·······（回滴）······V
空白试验···································V0
含量％＝（V0－V）FT 100％
W
9
司可巴比妥钠的含量测定
W司可巴比妥钠=0.1022g， cBr2=0.05mol/L，
1.计算滴定度；
cNa2S2O3＝0.1mol/L； V1=15.73ml，V0=23.21ml；
第四章：药物的含量测定与分析方法的验证
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第四章：药物的含量测定与分析方法的验证
学习要求
掌握: 药物含量的容量、光谱、色谱分析法，色谱系统适 用性试验的内容、要求及相关计算，定量分析方法的含量 计算，定量分析方法的验证内容，定量分析样品的制备方 法。 熟悉: 各类分析法的基本原理与条件选择，不同分析方法 对验证内容的基本要求、分析样品制备方法的适用范围。 了解: 滴定度的计算、分析仪器的校正和检定。
分离。 • 色谱分离实质是样品分子与溶剂以及固定相分子 间的作用。
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3.基本术语
保留时间和调整保留时间tR
保留时间tR： 从进样开始到某组分色谱峰顶（浓度极大点）
的时间，即组分在色谱柱中的停留时间或组分流经 色谱柱所需要的时间。
死时间t0或tm： 分配系数为零的组分的保留时间，即组分在流
动相中的停留时间或流动相流经色谱柱所需要的时 间（又称流动相保留时间）。
（一）紫外-可见分光光度法 (UV-Vis)
3.仪器的校正和检定 波长的校正：汞灯中的几根较强的谱线或用仪器自身
所带的氘灯的特定谱线为参照进行校正
Ho溶液。 吸收度准确性的检定：重铬酸钾的硫酸溶液，规定波
长处测定 ，应E符11c%m合P160表4-1中规定 杂散光的检查：一定浓度的碘化钠和亚硝酸钠溶液，
Neff

16(tR' )2 W

5.54( tR' )2 W1 2
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峰不对称性T 峰不对称性在药典中称拖尾因子T。
拖尾：。 前伸：。
T= W 0.05h （T=0.95～1.05）
2d1
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4.组成
高效液相 色谱仪由 高压输液 系统、进 样系统、 分离系统、 检测系统、 记录系统 等五大部 分组成。
用盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀；
精密量取2ml，置100ml量瓶中，用盐酸溶液
（9→1000）稀释至刻度，摇匀，在254nm波
长处测定吸光度为0.469。计算其百分含量。
D是多少？？？
20
3）计算分光光度法： 多种，具体按每种药物规定的方法进行
如：VA的三点校正法
4）比色法 加入显色剂后，按照对照品比较法测定。 影响显色因素很多，故需注意平行操作。 空白溶剂：溶剂+显色剂，同法处理