槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定二.ppt
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槐花米中芸香的提取及槲皮素的制备与检识
芸香苷、槲皮素及糖的检识 芸香苷、
3、盐酸 镁粉反应： 、盐酸-镁粉反应 镁粉反应： 取芸香苷1 取芸香苷 mg，加乙醇 ml，在水浴上加热 ，加乙醇2 ， 溶解，加镁粉约50 溶解，加镁粉约 mg，滴加数滴浓盐酸，溶液由 ，滴加数滴浓盐酸， 黄色渐变红色者表示有黄酮类化合物。 黄色渐变红色者表示有黄酮类化合物 。 以同法试 验槲皮素。 验槲皮素。 如用锌粉代替镁粉，则芸香苷（ 羟基与糖结 如用锌粉代替镁粉，则芸香苷（3-羟基与糖结 合成苷）仍有作用，而槲皮素（黄酮醇类） 合成苷） 仍有作用 ，而槲皮素 （ 黄酮醇类） 不呈 还原显色反应。因此可区别两者。 还原显色反应。因此可区别两者。
思考
1、苷类水解有几种催化方法？ 、苷类水解有几种催化方法？ 2、黄酮类化合物还有哪些提取方法？芸香苷 、黄酮类化合物还有哪些提取方法？ 的提取还可用什么方法？ 的提取还可用什么方法？ 3、酸水解常用什么酸？为什么用硫酸比用盐 、酸水解常用什么酸？ 酸水解后处理更方便？ 酸水解后处理更方便？
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
芸香苷的提取
方法Ⅰ 方法Ⅰ：水提取法
槐花米粗粉20g 槐花米粗粉20g 20 加10倍量沸水煮沸20min，反复2 10倍量沸水煮沸20min，反复2 倍量沸水煮沸20min 次，趁热脱脂棉滤过
药渣
滤液 静置过夜， 静置过夜，滤过
滤液
芸香苷粗品
粗提） 芸香苷的提取 （粗提）
方法Ⅱ 方法Ⅱ ：碱溶酸沉法
芸香苷、槲皮素及糖的检识 芸香苷、
4、三氯化铝反应： 、三氯化铝反应： 取样品1 溶于甲醇中， 取样品 mg溶于甲醇中，加1%三氯化铝甲醇溶液 溶于甲醇中 三氯化铝甲醇溶液 2~3滴，黄酮类呈鲜黄色，并有荧光。 滴 黄酮类呈鲜黄色，并有荧光。 5、锆-柠檬酸反应： 、 柠檬酸反应 柠檬酸反应： 取样品1 取样品 mg，加甲醇 ml，在水浴上加热溶解， ，加甲醇2 ，在水浴上加热溶解， 再加2%二氯氧锆甲醇溶液 二氯氧锆甲醇溶液3~4滴 ， 凡有 羟基或 再加 二氯氧锆甲醇溶液 滴 凡有3-羟基或 5-羟基的黄酮即呈鲜黄色。然后加 羟基的黄酮即呈鲜黄色。 羟基的黄酮即呈鲜黄色 然后加2%柠檬酸甲醇 柠檬酸甲醇 溶液3~4滴，有3-羟基的黄酮黄色不褪。比较芸香 羟基的黄酮黄色不褪。 溶液 滴 羟基的黄酮黄色不褪 苷和槲皮素的不同。 苷和槲皮素的不同。
槐花米中芸香的提取及槲皮素的制备与检识
滤液 药渣 放冷至60～70℃，浓盐酸调 pH2～3，冰箱中析晶，抽滤 滤液 沉淀 室温下晾干
芸香苷粗品
芸香苷的提取（精制）
芸香苷粗品2g 加蒸馏水400ml，煮沸 溶解15min趁热抽滤 滤液 静置析晶，抽滤 滤液 药渣
结晶 室温下晾干 精制芸香苷
芸香苷的水解
精制芸香苷 加止，放冷抽滤 沉淀
芸香苷、槲皮素及糖的检识
6、Fehling试验：
取试样数 mg，溶于0.5 ml热水中，加斐林氏试剂 甲、乙等量混合液2 ml，沸水浴上加热，如产生 氧化亚铜的暗红色或黄色沉淀表示有还原糖或其 它还原性物质。充分加热作用后滤去沉淀，滤液 滴加浓盐酸酸化，在水浴上加热水解，水解液以 10% NaOH 中和，再进行斐林氏试验，此时显阳 性反应者表示样品为糖苷化合物。比较芸香苷和 槲皮素的不同。
2、计算槲皮素的得率
3、记录芦丁的检测结果
注意事项
3 ．本实验直接用沸水由槐花米中提取芸香 苷，收得率稳定，且操作简便。如用碱溶酸沉 法提取，加入石灰乳可以达到碱性溶解的目的， 又可除去槐花 7 米中所含的大量粘液质，但应 严格控制其碱性pH8～9，不可超过pH10。如 pH 值过高，加热提取过程中芸香苷可被水解 破坏，降低收得率。加酸沉淀时，控制pH3～ 4,不宜过低，否则芸香苷可生成yang盐而溶于 水，也降低收得率。
注意事项
1 ．在提取前应将槐花米略捣碎，使芸香苷 易于被热水溶出。 2 ．在提取过程中，加入硼砂的目的是使其 与芸香苷分子中的邻二酚羟基发生络合，既保 护了邻二酚羟基不被氧化破坏，又避免了邻二 酚羟基与钙离子络合（芸香苷的钙络合物不溶 于水），使芸香苷不受损失，提高收得率。
实验结果
1、计算芦丁的得率
实验原理
芸香苷粗品
芸香苷的提取（精制）
芸香苷粗品2g 加蒸馏水400ml，煮沸 溶解15min趁热抽滤 滤液 静置析晶，抽滤 滤液 药渣
结晶 室温下晾干 精制芸香苷
芸香苷的水解
精制芸香苷 加止，放冷抽滤 沉淀
芸香苷、槲皮素及糖的检识
6、Fehling试验：
取试样数 mg，溶于0.5 ml热水中，加斐林氏试剂 甲、乙等量混合液2 ml，沸水浴上加热，如产生 氧化亚铜的暗红色或黄色沉淀表示有还原糖或其 它还原性物质。充分加热作用后滤去沉淀，滤液 滴加浓盐酸酸化，在水浴上加热水解，水解液以 10% NaOH 中和，再进行斐林氏试验，此时显阳 性反应者表示样品为糖苷化合物。比较芸香苷和 槲皮素的不同。
2、计算槲皮素的得率
3、记录芦丁的检测结果
注意事项
3 ．本实验直接用沸水由槐花米中提取芸香 苷，收得率稳定，且操作简便。如用碱溶酸沉 法提取，加入石灰乳可以达到碱性溶解的目的， 又可除去槐花 7 米中所含的大量粘液质，但应 严格控制其碱性pH8～9，不可超过pH10。如 pH 值过高，加热提取过程中芸香苷可被水解 破坏，降低收得率。加酸沉淀时，控制pH3～ 4,不宜过低，否则芸香苷可生成yang盐而溶于 水，也降低收得率。
注意事项
1 ．在提取前应将槐花米略捣碎，使芸香苷 易于被热水溶出。 2 ．在提取过程中，加入硼砂的目的是使其 与芸香苷分子中的邻二酚羟基发生络合，既保 护了邻二酚羟基不被氧化破坏，又避免了邻二 酚羟基与钙离子络合（芸香苷的钙络合物不溶 于水），使芸香苷不受损失，提高收得率。
实验结果
1、计算芦丁的得率
实验原理
槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定二.ppt
煮沸，使芸香苷全部溶解，趁热抽滤，滤液静置析晶。 • （三）芸香苷的化学鉴定 • 取芸香苷粗品1/6份，加乙醇5-6ml（水浴加热）溶解，芸
香苷的乙醇液作为供试液做芸香苷化学检识反应。
槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定（二）
• 1、盐酸—镁粉反应：取供试液2ml于试管中，加 入少许镁粉，再向试管中滴加浓盐酸数滴，观察 现象。
• 2、三氯化铝反应：在滤纸片上分别滴两滴供试液 （注意相互不要晕染），其中一滴作为空白对照， 另一滴上面滴一滴三氯化铝溶液。观察二者颜色 变化，并在紫外灯下观察荧光。
• 3、氨熏反应：在滤纸片上分别滴两滴供试液，其 中一滴作为空白对照，将另一滴点有供试液的部 分倒扣在浓氨水的瓶口上。观察二者颜色变化。
槐花中芸香苷的提取分 离、精制、鉴定（二）
Байду номын сангаас
槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定（二）
• 一、实验目的：使芸香苷在水中重结晶，去除杂质达到精 制的目的。
• 二、实验原理：芸香苷粗品易溶于热水，难溶于冷水。 • 三、操作步骤： • （一）抽滤得到芸香苷粗品。 • （二）芸香苷的精制 • 取芸香苷粗品5/6份，置于500ml烧杯中，加蒸馏水300ml
香苷的乙醇液作为供试液做芸香苷化学检识反应。
槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定（二）
• 1、盐酸—镁粉反应：取供试液2ml于试管中，加 入少许镁粉，再向试管中滴加浓盐酸数滴，观察 现象。
• 2、三氯化铝反应：在滤纸片上分别滴两滴供试液 （注意相互不要晕染），其中一滴作为空白对照， 另一滴上面滴一滴三氯化铝溶液。观察二者颜色 变化，并在紫外灯下观察荧光。
• 3、氨熏反应：在滤纸片上分别滴两滴供试液，其 中一滴作为空白对照，将另一滴点有供试液的部 分倒扣在浓氨水的瓶口上。观察二者颜色变化。
槐花中芸香苷的提取分 离、精制、鉴定（二）
Байду номын сангаас
槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定（二）
• 一、实验目的：使芸香苷在水中重结晶，去除杂质达到精 制的目的。
• 二、实验原理：芸香苷粗品易溶于热水，难溶于冷水。 • 三、操作步骤： • （一）抽滤得到芸香苷粗品。 • （二）芸香苷的精制 • 取芸香苷粗品5/6份，置于500ml烧杯中，加蒸馏水300ml
黄酮类化合物—槐米中芦丁的提取分离与鉴定(天然药物化学课件)
芸香苷（槲皮素-3-O-芸香糖）
二、槐米中芸香苷的理化性质
❖芸香苷广泛存在于植物界，已发现的含芦丁 植物至少在70种以上，其中以槐花米和荞麦 叶含量较高，可作为提取芦丁的原料。
❖芸香苷是由槲皮素3位上的羟基与芸香糖（ 葡萄糖与鼠李糖组成的双糖）脱水而成的苷 。
槲皮素
芸香苷（槲皮素-3-O-芸香糖）
实训 槐米中芸香苷及槲皮素的提取分 离检识技术
Байду номын сангаас
一、槐米中芸香苷的化学结构
【来源】豆科槐属植物槐Sophora japonica L.的干燥花蕾（槐米） 【生物活性】祛痰、止咳、降压、增加冠脉血流量等活性
❖ 2015版《药典》以总黄酮为指标成分对槐米或槐花进 行定性鉴定和含量测定。
❖ 要求槐花总黄酮（以芸香苷计）大于等于8.0%，槐米 总黄酮大于等于20.0%，对照品采用芸香苷。
二、槐米中芸香苷的理化性质
【溶解度】芸香苷溶解度在冷水中为1：10000，沸水中 为1：200，沸乙醇中为1：60，沸甲醇中为l：7，可溶 于乙醇、吡啶、甲酰胺、甘油、丙酮、冰乙酸和乙酸乙 酯中，不溶于苯、乙醚、三氯甲烷和石油醚。
❖ 芸香苷分子中因含有邻二酚羟基，性质不太稳定，暴露 在空气中能缓缓变为暗褐色，在碱性条件下更容易被氧 化分解。硼酸盐能与邻二酚羟基结合，达到保护的目的 ，故在碱性溶液中加热提取往往加入少量硼砂。
芸香苷粗提 ：碱溶酸沉法
槐花米粗粉20g 加0.4％硼砂水250ml，石灰乳调 pH8～9 煮沸30min，4层纱布滤过，反复2次
滤液
药渣
放冷，浓盐酸调pH3～4，析 晶，滤过
滤液
沉淀 室温下晾干
芸香苷粗品
注意：在加热过程中，需要随时补充失去的水分和保持pH值8～9。
二、槐米中芸香苷的理化性质
❖芸香苷广泛存在于植物界，已发现的含芦丁 植物至少在70种以上，其中以槐花米和荞麦 叶含量较高，可作为提取芦丁的原料。
❖芸香苷是由槲皮素3位上的羟基与芸香糖（ 葡萄糖与鼠李糖组成的双糖）脱水而成的苷 。
槲皮素
芸香苷（槲皮素-3-O-芸香糖）
实训 槐米中芸香苷及槲皮素的提取分 离检识技术
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一、槐米中芸香苷的化学结构
【来源】豆科槐属植物槐Sophora japonica L.的干燥花蕾（槐米） 【生物活性】祛痰、止咳、降压、增加冠脉血流量等活性
❖ 2015版《药典》以总黄酮为指标成分对槐米或槐花进 行定性鉴定和含量测定。
❖ 要求槐花总黄酮（以芸香苷计）大于等于8.0%，槐米 总黄酮大于等于20.0%，对照品采用芸香苷。
二、槐米中芸香苷的理化性质
【溶解度】芸香苷溶解度在冷水中为1：10000，沸水中 为1：200，沸乙醇中为1：60，沸甲醇中为l：7，可溶 于乙醇、吡啶、甲酰胺、甘油、丙酮、冰乙酸和乙酸乙 酯中，不溶于苯、乙醚、三氯甲烷和石油醚。
❖ 芸香苷分子中因含有邻二酚羟基，性质不太稳定，暴露 在空气中能缓缓变为暗褐色，在碱性条件下更容易被氧 化分解。硼酸盐能与邻二酚羟基结合，达到保护的目的 ，故在碱性溶液中加热提取往往加入少量硼砂。
芸香苷粗提 ：碱溶酸沉法
槐花米粗粉20g 加0.4％硼砂水250ml，石灰乳调 pH8～9 煮沸30min，4层纱布滤过，反复2次
滤液
药渣
放冷，浓盐酸调pH3～4，析 晶，滤过
滤液
沉淀 室温下晾干
芸香苷粗品
注意：在加热过程中，需要随时补充失去的水分和保持pH值8～9。
槐米中芦丁(芸香苷)的提取分离及检识
结晶
静置液减压抽滤在 60-70温度下烘干 得粗品芸香苷 置于300ml蒸馏水 煮沸至芸香苷全部溶解 趁热抽滤 滤液放冷析晶
天然产物化学
水解 取精制芸香苷1g 置250ml圆底烧瓶中 加2%H2SO4溶液80ml 加热回流30分钟至1小时， 开始加热10分钟为澄清液，逐渐析出黄色小针状结晶， 即为槲皮素。放冷抽滤 沉淀物用蒸馏水洗至中性， 抽干水份，晾干称重，得粗制槲皮素
天然产物化学
提取
碱溶酸沉法
芸香苷分子中含有酚羟基，显弱酸性，能与 碱成盐而溶于碱液中加酸酸化后又可以沉淀 析出，因此可用碱溶酸沉法提取芸香苷。
天然产物化学
实验步骤
重复以上操作， 硼砂水150ml,时 间20min
加0.4%硼砂水200ml 加热微沸30min,用石 灰乳保持pH8-9
结晶
天然产物化学
天然产物化学
聚酰胺薄层色谱检识
点 样：（1）自制1%芸香苷乙醇溶液 （2）自制1%槲皮素乙醇溶液 对照品：1%芸香苷对照品乙醇溶液乙酯（3∶1∶0.5）
显色：（1）先在可见光下观察斑点颜色，然后在紫 外灯下观察斑点颜色 （2）用氨水熏，记录斑点颜色和位置 结果：记录图谱，斑点颜色，计算芸香苷和槲皮素 Rf
天然产物化学
槐米中芦丁（芸香苷）的提取、分离和检识
天然产物化学
芦 丁
芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含 有三分子的结晶水，熔点为174~178℃， 无水物188~190℃。 溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200； 冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。 微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、 氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。
天然产物化学
化学检识
• 取芸香苷和槲皮素约10mg，各用5ml乙醇溶解，制成样 品溶液，按下列方法进行试验，比较苷元和苷的反应情况。 • （1）Molish反应 取样品溶液1ml，加10%α-萘酚溶液 1ml，振摇后斜置试管，沿管壁滴加0.5ml浓硫酸，静置， 观察并记录液面交界处颜色变化。 • （2）盐酸镁粉反应 芸香甙与槲皮素溶液分别置于试管 中，加入金属镁粉少许，浓盐酸2~3滴，观察并记录颜色 变化。
槐花米中芸香的提取及槲皮素的制备与检识
芸香苷、槲皮素及糖的检识
2、Molish反应：
取试样1 mg置小试管中，加乙醇0.5 ml溶解，加α萘酚试剂1~2滴，摇匀。倾斜试管，沿管壁徐徐注 入浓硫酸约0.5 ml静置。观察两层溶液的界面变化， 出现紫色环者为阳性，表示样品分子中含有糖的 结构（糖和苷类均呈阳性反应），比较芸香苷和 槲皮素的不同。
注意事项
1 ．在提取前应将槐花米略捣碎，使芸香苷 易于被热水溶出。 2 ．在提取过程中，加入硼砂的目的是使其 与芸香苷分子中的邻二酚羟基发生络合，既保 护了邻二酚羟基不被氧化破坏，又避免了邻二 酚羟基与钙离子络合（芸香苷的钙络合物不溶 于水），使芸香苷不受损失，提高收得率。
实验结果
1、计算芦丁的得率
目的要求
学习和掌握芸香苷的提取及检测
技术
学会利用芸香苷的水解作用制备
糖类及苷元
实验原理
芸香苷俗称芦丁。广泛存在于植物界中，现 已发现含芦丁的植物至少在 70 种以上，如烟叶、 槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为 植物槐树的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高， 可作为大量提取芦丁的原料。
芦丁是由槲皮素（ Quercetin ） 3 位上的羟基 与芸香糖脱水缩合形成的苷。[芸香糖（Rutinose） 为葡萄糖（ Glucose ）与鼠李糖（ Rhamnose ）组 成的双糖。
芸香苷的提取
方法Ⅰ：水提取法
槐花米粗粉20g 加10倍量沸水煮沸20min，反 复2次，趁热脱脂棉滤过 药渣 滤液 静置过夜，滤过 滤液 芸香苷粗品
芸香苷的提取 （粗提）
方法Ⅱ ：碱溶酸沉法
槐花米粗粉20g 加0.4％硼砂水200ml，石灰乳调 pH8～9 煮沸30min，趁热抽滤或4层纱布过滤
实验原理
芸香苷的提取、精制、水解和鉴定
2.黄酮苷可通过酸水解得到苷元和糖，并 可通过薄层色谱法进行检识。
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• 实验器材： • 试药：槐花米、0.4%硼砂水溶液、石灰乳、蒸馏
水、浓盐酸、2%硫酸、乙醇、1%氢氧化钠溶液、 1%盐酸溶液、10%α-萘酚溶液、浓硫酸、镁粉、 1%醋酸镁甲醇溶液、正丁醇、醋酸 • 仪器：电炉、漏斗、紫外分析仪、锥形瓶、量筒、 烧杯、层析筒、试管
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实验内容与方法：
• 一、芸香苷的提取 • 取槐花米20g（研碎），置于1000ml圆底烧瓶中，
加0.4%硼砂水溶液200ml，在搅拌下加石灰乳调PH8， 加热微沸30分钟，静置几分钟倾出上清液，用棉花 过滤，药渣同上重复一次。合并滤液用6N盐酸调 PH2~3，放置冰箱中析晶（一夜以上），待全部结 晶析出，抽滤，得粗芸香苷（滤饼用水洗3~4次）， 放置空气中自然干燥得粗品，称重、计算提取率。
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实验内容与方法：
• 二、芸香苷的精制
• 取2g加蒸馏水400ml，加热煮沸溶解，趁热 抽滤，滤液放置过夜，析晶，抽滤，得精制 芸香甙。烘干。
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实验内容与方法：
• 三、芸香苷的水解
• 取精制芸香甙1g，置250ml圆底烧瓶中，加 2%H2SO4溶液80ml，加热回流30分钟至1小时， 开始加热10分钟为澄清液，逐渐析出黄色小针状结 晶，即为槲皮素。放冷抽滤得结晶，滤液保留作为 糖的检查，沉淀物用蒸馏水洗至中性，抽干水份， 晾干称重，得粗制槲皮素。必要时可用稀乙醇重结 晶。
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• 五、芸香苷及槲皮素的纸层析鉴定 • 层析材料：层析滤纸 • 点 样：（1）提取的芸香苷乙醇溶液
（2）提取的槲皮素乙醇溶液 • 展开剂：正丁醇∶醋酸∶水（4∶1∶5）上层溶液 • 显色：（1）先在可见光下观察斑点颜色，然后在
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• 实验器材： • 试药：槐花米、0.4%硼砂水溶液、石灰乳、蒸馏
水、浓盐酸、2%硫酸、乙醇、1%氢氧化钠溶液、 1%盐酸溶液、10%α-萘酚溶液、浓硫酸、镁粉、 1%醋酸镁甲醇溶液、正丁醇、醋酸 • 仪器：电炉、漏斗、紫外分析仪、锥形瓶、量筒、 烧杯、层析筒、试管
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实验内容与方法：
• 一、芸香苷的提取 • 取槐花米20g（研碎），置于1000ml圆底烧瓶中，
加0.4%硼砂水溶液200ml，在搅拌下加石灰乳调PH8， 加热微沸30分钟，静置几分钟倾出上清液，用棉花 过滤，药渣同上重复一次。合并滤液用6N盐酸调 PH2~3，放置冰箱中析晶（一夜以上），待全部结 晶析出，抽滤，得粗芸香苷（滤饼用水洗3~4次）， 放置空气中自然干燥得粗品，称重、计算提取率。
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实验内容与方法：
• 二、芸香苷的精制
• 取2g加蒸馏水400ml，加热煮沸溶解，趁热 抽滤，滤液放置过夜，析晶，抽滤，得精制 芸香甙。烘干。
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实验内容与方法：
• 三、芸香苷的水解
• 取精制芸香甙1g，置250ml圆底烧瓶中，加 2%H2SO4溶液80ml，加热回流30分钟至1小时， 开始加热10分钟为澄清液，逐渐析出黄色小针状结 晶，即为槲皮素。放冷抽滤得结晶，滤液保留作为 糖的检查，沉淀物用蒸馏水洗至中性，抽干水份， 晾干称重，得粗制槲皮素。必要时可用稀乙醇重结 晶。
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• 五、芸香苷及槲皮素的纸层析鉴定 • 层析材料：层析滤纸 • 点 样：（1）提取的芸香苷乙醇溶液
（2）提取的槲皮素乙醇溶液 • 展开剂：正丁醇∶醋酸∶水（4∶1∶5）上层溶液 • 显色：（1）先在可见光下观察斑点颜色，然后在
实验四--槐米中芸香苷的提取分离与鉴定
实验四槐米中芸香苷的提取分离与鉴定芦丁(Rutin)亦称芸香甙(Rutisude)，广泛存在于植物界中。
现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、荞麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。
尤以槐花米和荞麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。
槐花米为豆科植物槐(Sophora japonica L。
)的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达12%~16%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。
芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性。
临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。
槐花米中主要化学成分的结构及性质：1.芦丁(Rutin)淡黄色细小针状结晶，mp.174℃~178℃(含三分子结晶)，188℃(无水物)。
溶解度：水：1:100(冷)，1:200(热)甲醇：1:100(冷)，1:9(热)乙醇：1:650(冷)，1:60(热)吡啶：1:11.7(冷)，易溶(热)不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。
可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。
2. 槲皮素(Quercetin)即芸香甙甙元，为黄色结晶，mp.313℃~314℃(含2分子结晶水)，316℃(无水物)。
溶解度：乙醇：1:290(无水乙醇)，1:23(热)可溶于甲醇、乙酸乙酯、丙酮、吡啶、冰醋酸。
不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚等。
3. 皂甙粗品为白色粉末，mp.210℃~220℃(分解)。
易溶于水、吡啶，能溶于200倍的甲醇中。
酸水解后得白桦脂醇、槐二醇二种皂甙元及葡萄糖，葡萄糖醛酸及葡萄糖醛酸内酯。
(1) 白桦脂醇(Betulin)无色针晶，mp.251℃~252℃。
能溶于醋酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿、苯、乙醚等溶剂，难溶于石油醚及水。
(2) 槐二醇(Sophoradiol)无色针晶，mp.219℃~220℃或224℃。
能溶于石油醚、苯、丙酮、甲醇中，难溶于水。
槐花米中芸香的提取及槲皮素的制备与检识
芸香苷的提取
方法Ⅰ：水提取法
槐花米粗粉20g 加10倍量沸水煮沸20min，反 复2次，趁热脱脂棉滤过 药渣 滤液 静置过夜，滤过 滤液 芸香苷粗品
芸香苷的提取 （粗提）
方法Ⅱ ：碱溶酸沉法
槐花米粗粉20g 加0.4％硼砂水200ml，石灰乳调 pH8～9 煮沸30min，趁热抽滤或4层纱布过滤
实验原理
纯品为浅黄色粉末或 极细的针状结晶，含有三 分子的结晶水，熔点为 174-178℃ 。 微 溶 于 水 ， 易溶于醋酸乙酯等 , 不溶 于丙酮、乙醚、氯仿、石 油醚，溶于碱而呈黄色。
OH OH O OH
O
OH
OH H H H OH OH H H O O
O
O H H OH
H
H H HO OH
芸香苷、槲皮素及糖的检识
3、盐酸-镁粉反应：
取芸香苷1 mg，加乙醇2 ml，在水浴上加热 溶解，加镁粉约50 mg，滴加数滴浓盐酸，溶液由 黄色渐变红色者表示有黄酮类化合物。以同法试 验槲皮素。
如用锌粉代替镁粉，则芸香苷（ 3- 羟基与糖结 合成苷）仍有作用，而槲皮素（黄酮醇类）不呈 还原显色反应。因此可区别两者。
2、计算槲皮素的得率
3、记录芦丁的检测结果
注意事项
3 ．本实验直接用沸水由槐花米中提取芸香 苷，收得率稳定，且操作简便。如用碱溶酸沉 法提取，加入石灰乳可以达到碱性溶解的目的， 又可除去槐花 7 米中所含的大量粘液质，但应 严格控制其碱性pH8～9，不可超过pH10。如 pH 值过高，加热提取过程中芸香苷可被水解 破坏，降低收得率。加酸沉淀时，控制pH3～ 4,不宜过低，否则芸香苷可生成yang盐而溶于 水，也降低收得率。
芸香苷、槲皮素及糖的检识
槐花米中芸香的提取及槲皮素的制备与检识
芸香苷、槲皮素及糖的检识
6、Fehling试验：
取试样数 mg，溶于0.5 ml热水中，加斐林氏试剂 甲、乙等量混合液2 ml，沸水浴上加热，如产生 氧化亚铜的暗红色或黄色沉淀表示有还原糖或其 它还原性物质。充分加热作用后滤去沉淀，滤液 滴加浓盐酸酸化，在水浴上加热水解，水解液以 10% NaOH 中和，再进行斐林氏试验，此时显阳 性反应者表示样品为糖苷化合物。比较芸香苷和 槲皮素的不同。
思考
1、苷类水解有几种催化方法？ 2 、黄酮类化合物还有哪些提取方法？芸香苷 的提取还可用什么方法？ 3 、酸水解常用什么酸？为什么用硫酸比用盐
酸水解后处理更方便？
芸香苷、槲皮素及糖的检识
1、酸性试验：
取小试管 8 支，每 4 支一组，第一组每管中加 入芸香苷1mg，第二组每管中加入槲皮素1mg，每 组四管中分别加入稀氨水、5%碳酸氢钠水溶液、 5%碳酸钠水溶液、1%氢氧化钠水溶液各 2 ml， 振摇后观察各管溶解情况。溶解的溶液应呈黄色。 再加浓盐酸数滴酸化，黄色褪去或变浅，并有沉 淀析出或产生混浊。
滤液 药渣 放冷至60～70℃，浓盐酸调 pH2～3，冰箱中析晶，抽滤 滤液 沉淀 室温下晾干
芸香苷粗品
芸香苷的提取（精制）
芸香苷粗品2g 加蒸馏水400ml，煮沸 溶解15min趁热抽滤 滤液 静置析晶，抽滤 滤液 药渣
结晶 室温下晾干 精制芸香苷
芸香苷的水解
精制芸香苷 加2％硫酸50ml，加热回流40min，至 沉淀不再增加为止，放冷抽滤 沉淀
实验原理
芦丁具有维生素P样作用。有助于保持 及恢复毛细血管的正常弹性，主要用作防 治高血压病的辅助治疗（但不能降压）剂， 亦可防治因缺芦丁所致的其它出血症。多 作口服，也可作注射用。
槐花米中芸香的提取及槲皮素的制备与检识
目的要求
学习和掌握芸香苷的提取及检测
技术
学会利用芸香苷的水解作用制备
糖类及苷元
实验原理
芸香苷俗称芦丁。广泛存在于植物界中，现 已发现含芦丁的植物至少在 70 种以上，如烟叶、 槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为 植物槐树的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高， 可作为大量提取芦丁的原料。
芦丁是由槲皮素（ Quercetin ） 3 位上的羟基 与芸香糖脱水缩合形成的苷。[芸香糖（Rutinose） 为葡萄糖（ Glucose ）与鼠李糖（ Rhamnose ）组 成的双糖。
芸香苷、槲皮素及糖的检识
4、三氯化铝反应：
取样品1 mg溶于甲醇中，加1%三氯化铝甲醇溶液 2~3滴，黄酮类呈鲜黄色，并有荧光。 5、锆-柠檬酸反应：
取样品1 mg，加甲醇2 ml，在水浴上加热溶解， 再加 2% 二氯氧锆甲醇溶液 3~4 滴，凡有 3- 羟基或 5-羟基的黄酮即呈鲜黄色。然后加2%柠檬酸甲醇 溶液3~4滴，有3-羟基的黄酮黄色不褪。比较芸香 苷和槲皮素的不同。
芸香苷、槲皮素及糖的检识
1、酸性试验：
取小试管 8 支，每 4 支一组，第一组每管中加 入芸香苷1mg，第二组每管中加入槲皮素1mg，每 组四管中分别加入稀氨水、5%碳酸氢钠水溶液、 5%碳酸钠水溶液、1%氢氧化钠水溶液各 2 ml， 振摇后观察各管溶解情况。溶解的溶液应呈黄色。 再加浓盐酸数滴酸化，黄色褪去或变浅，并有沉 淀析出或产生混浊。
芸香苷、槲皮素及糖的检识
2、Molish反应：
取试样1 mg置小试管中，加乙醇0.5 ml溶解，加α萘酚试剂1~2滴，摇匀。倾斜试管，沿管壁徐徐注 入浓硫酸约0.5 ml静置。观察两层溶液的界面变化， 出现紫色环者为阳性，表示样品分子中含有糖的 结构（糖和苷类均呈阳性反应），比较芸香苷和 槲皮素的不同。
学习和掌握芸香苷的提取及检测
技术
学会利用芸香苷的水解作用制备
糖类及苷元
实验原理
芸香苷俗称芦丁。广泛存在于植物界中，现 已发现含芦丁的植物至少在 70 种以上，如烟叶、 槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为 植物槐树的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高， 可作为大量提取芦丁的原料。
芦丁是由槲皮素（ Quercetin ） 3 位上的羟基 与芸香糖脱水缩合形成的苷。[芸香糖（Rutinose） 为葡萄糖（ Glucose ）与鼠李糖（ Rhamnose ）组 成的双糖。
芸香苷、槲皮素及糖的检识
4、三氯化铝反应：
取样品1 mg溶于甲醇中，加1%三氯化铝甲醇溶液 2~3滴，黄酮类呈鲜黄色，并有荧光。 5、锆-柠檬酸反应：
取样品1 mg，加甲醇2 ml，在水浴上加热溶解， 再加 2% 二氯氧锆甲醇溶液 3~4 滴，凡有 3- 羟基或 5-羟基的黄酮即呈鲜黄色。然后加2%柠檬酸甲醇 溶液3~4滴，有3-羟基的黄酮黄色不褪。比较芸香 苷和槲皮素的不同。
芸香苷、槲皮素及糖的检识
1、酸性试验：
取小试管 8 支，每 4 支一组，第一组每管中加 入芸香苷1mg，第二组每管中加入槲皮素1mg，每 组四管中分别加入稀氨水、5%碳酸氢钠水溶液、 5%碳酸钠水溶液、1%氢氧化钠水溶液各 2 ml， 振摇后观察各管溶解情况。溶解的溶液应呈黄色。 再加浓盐酸数滴酸化，黄色褪去或变浅，并有沉 淀析出或产生混浊。
芸香苷、槲皮素及糖的检识
2、Molish反应：
取试样1 mg置小试管中，加乙醇0.5 ml溶解，加α萘酚试剂1~2滴，摇匀。倾斜试管，沿管壁徐徐注 入浓硫酸约0.5 ml静置。观察两层溶液的界面变化， 出现紫色环者为阳性，表示样品分子中含有糖的 结构（糖和苷类均呈阳性反应），比较芸香苷和 槲皮素的不同。
芸香苷的提取分离和鉴定
一、实验目的
1、熟悉苷类化合物的提取、精制及鉴定方法。 2、掌握黄酮苷水解制苷元的方法。 3、掌握紫外光谱在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。
二、实验内容
• 芦丁的提取和精制 • 芦丁水解制取苷元槲皮素 • 化合物的检识 • 波谱鉴定
三、药材简介
槐米：豆科植物槐树的花蕾。 功效：止血药，治疗吐血，痔疮便血、子宫 出血、鼻血等，还常作为高血压的辅助用药。 主要化学成分：芦丁rutin，含量10%~20%。
核磁共振谱： 归属芦丁和槲皮素的氢谱和碳谱信号
四、基本原理
HO
O
OH OH
OR
OH
O
芦丁 R=-Glu-Rha
槲皮素 R=H
冷水：1：
8000 热水：1：200
五、提取、分离流程
槐米(压碎) 20 g 沸水300 ml, 加热30 min,棉花过滤 两次滤液合并
室温放置，析晶
抽滤
粗制芦丁
取 2 g，加水400 ml，煮沸 趁热抽滤 冷却后，析晶，抽滤
呈色反应 色谱分析
呈色反应
Molish 反应 盐酸-镁粉 反应 三氯化铝 反应
色谱分析
聚酰胺色谱：检测芦丁，槲皮素 展开剂： 甲醇－水（8：2） 显色剂：三氯化铝试剂
纸色谱：检测糖 开剂：正丁醇-醋酸-水（4：1：5）上层 显色剂：苯胺-邻苯二甲酸
波谱鉴定
紫外光谱：加入诊断试剂，分析光谱 数据，解析结构 参数：200～600 nm
精制芦丁
六、芦丁的水解
精制芦丁1 g 置于250 ml 圆底烧瓶， 加入2%H2SO4100ml， 加热回流30min
生成黄色沉淀（注意观察现象）
放冷，析晶，抽滤
滤液 取10ml,加饱和Ba(OH)2中和，
1、熟悉苷类化合物的提取、精制及鉴定方法。 2、掌握黄酮苷水解制苷元的方法。 3、掌握紫外光谱在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。
二、实验内容
• 芦丁的提取和精制 • 芦丁水解制取苷元槲皮素 • 化合物的检识 • 波谱鉴定
三、药材简介
槐米：豆科植物槐树的花蕾。 功效：止血药，治疗吐血，痔疮便血、子宫 出血、鼻血等，还常作为高血压的辅助用药。 主要化学成分：芦丁rutin，含量10%~20%。
核磁共振谱： 归属芦丁和槲皮素的氢谱和碳谱信号
四、基本原理
HO
O
OH OH
OR
OH
O
芦丁 R=-Glu-Rha
槲皮素 R=H
冷水：1：
8000 热水：1：200
五、提取、分离流程
槐米(压碎) 20 g 沸水300 ml, 加热30 min,棉花过滤 两次滤液合并
室温放置，析晶
抽滤
粗制芦丁
取 2 g，加水400 ml，煮沸 趁热抽滤 冷却后，析晶，抽滤
呈色反应 色谱分析
呈色反应
Molish 反应 盐酸-镁粉 反应 三氯化铝 反应
色谱分析
聚酰胺色谱：检测芦丁，槲皮素 展开剂： 甲醇－水（8：2） 显色剂：三氯化铝试剂
纸色谱：检测糖 开剂：正丁醇-醋酸-水（4：1：5）上层 显色剂：苯胺-邻苯二甲酸
波谱鉴定
紫外光谱：加入诊断试剂，分析光谱 数据，解析结构 参数：200～600 nm
精制芦丁
六、芦丁的水解
精制芦丁1 g 置于250 ml 圆底烧瓶， 加入2%H2SO4100ml， 加热回流30min
生成黄色沉淀（注意观察现象）
放冷，析晶，抽滤
滤液 取10ml,加饱和Ba(OH)2中和，
实验一槐花米中芸香甙的提取
实验一槐花米中芸香甙的提取、精制和检识芸香甙亦称芦丁（Rutin），广泛存在于植物界，已发现的芦丁植物至少在70种以上，以槐米、荞麦叶、蒲公英和烟叶中含量较多，本实验以槐花米作为提取芦丁的原料。
槐花米系豆科植物Sophora joponia L的未开放花蕾，其中芦丁含量高达23.5%，槐花开放后降至13.0%。
芦丁除用作治疗毛细管脆弱引起的出血症和高血病的辅助治疗剂外，还可作为制药原料，用于制造槲皮素（Ruercetin）、羧乙基槲皮素、羧乙基芦丁、二羧丙基芦丁、β-乙基吗啉芦丁、6-二乙胺基芦丁等。
槐花米中除含有芦丁外，还含有白桦脂醇（Betulin）、槐二醇（Sophoradiol）、皂甙以及槐花米甲、乙、丙素（Sophorin A、B、C）和多糖粘液质等。
芸香甙的结构一、槐花米主要成份的理化性质1. 芦丁：是槲皮素3位羧基与芸香糖（Rutinose）脱水缩合成的甙。
浅黄色粉末或极细的针状结晶，含3分子结晶水（C27H36O16·3H2O），mp ll7~178℃。
在110℃ 10mmHg下真空干燥12小时变成无水物，无水物易吸湿，可从大气中吸收约2.5分子水份。
无水芦丁在125℃变褐，在190~192℃变成胶状，当温度升至214~215℃发泡分解。
芦丁溶解度在冷水中1∶10000，热水中1∶200，冷乙醇中1∶300，热乙醇中1∶30，沸甲醇中1∶7，冷吡啶中1∶12，微溶于丙酮、乙醇乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚。
UV λmax nm：259，266（sh），299（sh）。
芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液中，酸化后又析出，因此可以用碱溶液沉的方法提取芦丁。
芦丁分子因含有邻二酚羟基，性质不太稳定，暴露空气中，在光的作用下，能缓缓分解，变为暗褐色，在碱性条件下更容易被氧化分解，硼酸盐能与邻二酚羟基结合，达到保护的目的，故在碱性条件溶液中加热提取芦丁时，往往在加入少量硼砂，就是保护芦丁减少氧化分解。
槐花米中芦丁的提取与鉴定PPT演示文稿
芦丁属黄酮类化合物分子中有较多酚羟基具弱酸性易溶于热碱中酸化后又析出因此可以用碱溶酸沉的方法提取芦丁又利用芦丁在冷水和热水中溶解度相差较大的特性进行重结晶精制
槐花米中芦丁的提取与鉴定
1
背景知识
1.来源
芦丁（Rutin）又称芸香苷，广泛存在于植物界中，现已 发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦
2.pH值过低会使芦丁形成烊盐而增加了水溶性，降 低收率。
11
七、芦丁的鉴定
芦丁的定性反应 取芦丁3-4mg，加乙醇5-6ml使其溶解，分成二份
作下述试验： A.盐酸-镁粉反应：取上述溶液1-2ml，加2滴浓盐酸，
再加少许镁粉，注意观察颜色变化情况。（红色） 鉴别黄酮类化合物。
12
B. Molish反应：糖在浓硫酸或浓盐酸的作用下脱 水形成糠醛及其衍生物，再与α-萘酚作用形成 紫红色复合物，在糖液和浓硫酸的液面间形成 紫环，因此又称紫环反应。 Molish反应可以鉴定单糖的存在。 取上述溶液1-2ml，先加入几滴浓盐酸（硫 酸），再加入等体积的10%α-萘酚乙醇溶液， 注意观察两液面产生的颜色变化（紫红色）。
和蒲公英中均含有。尤a L 的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高，可作
为大量提取芦丁的原料。（含量为12％—16％.）
2.结构组成
芦丁是由槲皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖 （Rutinose）〔葡萄糖（Glucose）与鼠李糖 （Rhamnose）组成的双糖〕脱水形成的苷。分子式： C27H30O16
残渣
滤液
在 60~70℃ 下 用 浓 盐 酸 调 至 PH4~5， 精 置 1hr,抽 滤 。
滤液
沉淀（粗制芦丁）
芦丁的提取重将与结沉 分晶淀 悬离浮流于程蒸 图馏 水 中 ， 加 热
槐花米中芦丁的提取与鉴定
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背景知识
1.来源
芦丁（Rutin）又称芸香苷，广泛存在于植物界中，现已 发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦
2.pH值过低会使芦丁形成烊盐而增加了水溶性，降 低收率。
11
七、芦丁的鉴定
芦丁的定性反应 取芦丁3-4mg，加乙醇5-6ml使其溶解，分成二份
作下述试验： A.盐酸-镁粉反应：取上述溶液1-2ml，加2滴浓盐酸，
再加少许镁粉，注意观察颜色变化情况。（红色） 鉴别黄酮类化合物。
12
B. Molish反应：糖在浓硫酸或浓盐酸的作用下脱 水形成糠醛及其衍生物，再与α-萘酚作用形成 紫红色复合物，在糖液和浓硫酸的液面间形成 紫环，因此又称紫环反应。 Molish反应可以鉴定单糖的存在。 取上述溶液1-2ml，先加入几滴浓盐酸（硫 酸），再加入等体积的10%α-萘酚乙醇溶液， 注意观察两液面产生的颜色变化（紫红色）。
和蒲公英中均含有。尤a L 的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高，可作
为大量提取芦丁的原料。（含量为12％—16％.）
2.结构组成
芦丁是由槲皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖 （Rutinose）〔葡萄糖（Glucose）与鼠李糖 （Rhamnose）组成的双糖〕脱水形成的苷。分子式： C27H30O16
残渣
滤液
在 60~70℃ 下 用 浓 盐 酸 调 至 PH4~5， 精 置 1hr,抽 滤 。
滤液
沉淀（粗制芦丁）
芦丁的提取重将与结沉 分晶淀 悬离浮流于程蒸 图馏 水 中 ， 加 热
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• 2、三氯化铝反应：在滤纸片上分别滴两滴供试液 （注意相互不要晕染），其中一滴作为空白对照， 另一滴上面滴一滴三氯化铝溶液。观察二者颜色 变化，并在紫外灯下观察荧光。
• 3、氨熏反应：在滤纸片上分别滴两滴供试液，其 中一滴作为空白对照，将另一滴点有供试液的部 分倒扣在浓氨水的瓶口上。观察二者颜色变化。
煮沸，使芸香苷全部溶解，趁热抽滤，滤液静置析晶。 • （三）芸香苷的化学鉴定 • 取芸香苷粗品1/6份，加乙醇5-6ml（水浴加热）溶解，芸
香苷的乙醇液作为供试液做芸香苷化学检识反应。
槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定（二）
• 1、盐酸—镁粉反应：取供试液2ml于试管中，加 入少许镁粉，再向试管中滴加浓盐酸数滴，观芸香苷的提取分离、精制、鉴定（二）
• 一、实验目的：使芸香苷在水中重结晶，去除杂质达到精 制的目的。
• 二、实验原理：芸香苷粗品易溶于热水，难溶于冷水。 • 三、操作步骤： • （一）抽滤得到芸香苷粗品。 • （二）芸香苷的精制 • 取芸香苷粗品5/6份，置于500ml烧杯中，加蒸馏水300ml
• 3、氨熏反应：在滤纸片上分别滴两滴供试液，其 中一滴作为空白对照，将另一滴点有供试液的部 分倒扣在浓氨水的瓶口上。观察二者颜色变化。
煮沸，使芸香苷全部溶解，趁热抽滤，滤液静置析晶。 • （三）芸香苷的化学鉴定 • 取芸香苷粗品1/6份，加乙醇5-6ml（水浴加热）溶解，芸
香苷的乙醇液作为供试液做芸香苷化学检识反应。
槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定（二）
• 1、盐酸—镁粉反应：取供试液2ml于试管中，加 入少许镁粉，再向试管中滴加浓盐酸数滴，观芸香苷的提取分离、精制、鉴定（二）
• 一、实验目的：使芸香苷在水中重结晶，去除杂质达到精 制的目的。
• 二、实验原理：芸香苷粗品易溶于热水，难溶于冷水。 • 三、操作步骤： • （一）抽滤得到芸香苷粗品。 • （二）芸香苷的精制 • 取芸香苷粗品5/6份，置于500ml烧杯中，加蒸馏水300ml