总胆固醇测定试剂盒标准操作程序.

总胆固醇测定试剂盒标准操作程序

1. 摘要

本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清或血浆样本中总胆固醇的含量。

2. 适用范围

程序适用于AU5811自动生化分析仪检测血清样本中总胆固醇的含量。

3. 职责

使用AU5811自动生化分析仪进行测定总胆固醇浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行，室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。

4. 检测方法

上海科华生物工程股份有限公司生产的总胆固醇测定试剂盒采用的是氧化酶法。

5. 原理

O

H ESPAS O H O H O O H 222222244+−−−→−+-+-∆+−−−−→−++−−−→−+醌亚胺氨基安替比林胆甾烯酮

游离胆固醇脂肪酸

游离胆固醇总胆固醇过氧化物酶胆固醇氧化酶胆固醇酯酶

ESPAS:N-乙基-N-(3-磺丙基)-间-茴香胺

血清中的总胆固醇在胆固醇酯酶的作用下水解成游离胆固醇和脂肪酸,游离胆固醇在胆固醇氧化酶的催化下,氧化成Δ4-胆甾烯酮和双氧水,最后双氧水在过氧化物酶的催化下与色原底物4-氨基安替比林和ESPAS 反应生成红色化合物醌亚胺。

由于醌亚胺在波长550nm 处有吸收峰,所以在一定底物浓度范围内，550nm 处吸光度的变化值与样本中总胆固醇的含量成正比

6. 仪器

AU5811自动生化分析仪

7. 试剂

7.1 试剂来源：

上海科华生物工程股份有限公司提供

7.2 试剂瓶内主要成分：

R1：胆固醇酯酶、抗坏血酸氧化酶、过氧化物酶、ESPAS （ADPS ）；

R2：胆固醇氧化酶、4-氨基安替比林；

校准品：胆固醇

7.3 试剂稳定性：

未打开试剂于2℃-8℃避光保存可至失效期。校准品应密闭保存，以免液体挥发。

8.标准品和质量控制

8.1校准程序：

使用科华公司的校准品对自动分析仪进行校准。按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品通过合适的数学模型绘制校准曲线。

8.2质控品：

罗氏公司提供的生化复合定值质控血清作为室内质控品。每日在测定前做一次质控，加试剂后做一次质控。该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。

8.3质控数据管理：

按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。

8.4质控判断规则：

按《Westgard多规则质控方法测定标准操作程序》

8.5室间质评：

分别参加河北省临检中心室间质评，对回报的室间质评结果按《室间质量评价程序》进行处理。

9.标本

9.1标本要求：

血清及肝素或EDTA抗凝血浆2-8℃保存可稳定7天，或冰冻保存，但不能反复冻融。

9.2标本拒收：

由实验室人员核收送来标本，如有溶血、已被污染、标识不清或与申请单不符状况，一律要求重新留取标本。

9.3标本处理：

收集编号后离心获取血清/血浆以备检测使用。

10.测定程序：

10.1分析参数：

详见参数表。

10.2操作步骤：

签收样本→离心→上机检测→审核报告→签发报告→标本保存。

10.3获取结果：

在AU5811仪器上或AU5811传送的中文系统电脑上查找相应结果。

10.4结果报告：

对检验后的结果进行审核，系统分析，判断结果的可报告性。可报告的结果直接发报告，对不可报告结果进行复检后发报告。

11.计算

标准品校准项目后，测定室内质控，质控结果符合质控要求后方可测定样本。无需手工计算，每个标本的结果自动打印。

12.废液处理

参阅检验科《安全手册》废液处理标准规程处理。

13.操作性能：

13.1可报告范围：

0.09-25.85mmol/L范围内线性相关系数r≥0.99，线性相对偏差应在±15%范围内。

13.2特异性/干扰：

样本中Vc≤4g/L，血红蛋白≤5g/L,胆红素≤684 mol/L，甘油三酯≤20mmol/L对测定结果的影响可忽略。

13.3精密度：

批内精密度CV≤6%；

批间相对极差≤6%

13.4准确度：

用质控品做样本，其测定结果应在该批质控品规定的范围内。

14.注意事项：

14.1试剂盒仅用于体外诊断，测定结果仅作为相关疾病的临床辅助诊断依据。

14.2使用试剂时请根据实际使用量多少，将试剂倒入干净容器内在测定，其余试剂盖紧

后放回冰箱。

14.3如试剂变浑浊，或以纯化水作空白，试剂在550nm处吸光度值大于0.08A，请勿使

用。

14.4本试剂中含有叠氮钠，切勿吞咽，避免与皮肤及粘膜接触。如不慎接触，应用大量

清水冲洗，如误服，应立即上医院诊治。

15.参考范围：

《全国临床检验操作规程》第三版提出的判断标准：

理想范围：＜5.2mmol/L（＜200mg/dl）

边缘升高：5.23-5.69mmol/L（201-219mg/dl）

升高：≥5.72mmol/L（≥220mg/dl）

各实验室应建立自己的参考值范围。

16.临床意义：

临床上胆固醇浓度受年龄、饮食、遗传和工作状况影响。高TC血症是冠心病的主要危险因素之一。高TC有原发和继发两种，包括见于家族性高胆固醇血症、家族性ApoB 缺陷症、多源性高TC、混合性高脂血症以及其它的如肾综合症，胆总管阻塞，黏液性水肿和糖尿病，肥大性骨关节炎，老年性白内障和牛皮癣等血清胆固醇也会增高。

在恶性贫血，溶血性贫血以及甲状腺机能亢进时，血清胆固醇降低，其他如感染和营养不良等情况下，胆固醇总量常见降低。

17.支持性文件：

17.1AU5811自动生化分析仪使用说明书。

17.2AU5811自动生化分析仪分析参数。

17.3上海科华生物工程股份有限公司提供的试剂说明书。

18.参考文献

1.叶应妩等，全国临床检验操作规程》第三版

2.W.Richmond.Clin.Chem.19:1350(1973).

3.C.Allain.,et al.Clin.Chem.20:470(1974)