第8章 弧菌科
弧菌
分 类
WHO腹泻控制中心将该菌属为四类
O-1群霍乱弧菌
不典型O-1群霍乱弧菌
非O-1群霍乱弧菌
其他弧菌
致病性
致病物质
定居因子：菌毛（acf、tcpA基因）、鞭 毛、溶血溶细胞蛋白（hlyA基因）、血 凝素（hap基因）、荚膜等 霍乱肠毒素（c为强烈的致泻毒素。
鉴定
根据霍或乱弧菌在各种选择培养基上的特点， 挑选可疑菌落进行鉴定。鉴定以血清学（玻 片凝集）为主，结合形态学、生化反应作出 判断。
鉴定
1） 玻片凝集试验：从分离培养基上挑取可疑菌落于霍乱弧菌 多价诊断血清作玻片凝集试验。诊断血清应稀释成1:321:64的效价使用，立即出现凝集者为阳性，同时设生理盐水
和阳性细菌株对照。
2） 形态学检查：取纯培养物涂片革兰氏染色，观察菌体形态 及染色性。用悬滴法或半固体穿刺法检测动力。
鉴定
3） 生化反应：霍乱弧菌氧化酶试验、靛基质试验、粘丝试验 和霍乱红试验均阳性。 ①粘丝试验：用于测定霍乱弧菌形成粘丝的特性。将0.5％去氧 胆酸钠水溶液于霍乱弧菌混匀制成浓厚菌液，1min内悬液由 混变清，并变得粘稠，以接种环挑取时可以拉出丝来。霍乱 弧菌古典生物型和El Tor生物型均呈阳性。
鉴定
② 霍乱红试验：出现蔷薇色，为霍乱红试验阳性。由
于霍乱弧菌和其他弧菌均有此种反应，故无特异性。 霍乱弧菌含有色氨酸酶，能分解色氨酸产生吲哚，霍 乱弧菌液能还原硝酸盐为亚硝酸盐，因此当霍乱弧菌 培养在含有硝酸盐成分的蛋白胨水中，所产生的亚硝 酸盐可与吲哚结合成亚硝酸吲哚，滴加浓硫酸即可出 现蔷薇色，称为霍乱红试验阳性）
免 疫 力
病后免疫力不强，可重复感染。
生物学性状
1、形态：弧状、杆状、丝状等多形性，G-，单端单鞭毛
检验微生物学 弧菌科
26
霍乱弧菌
致病物质
*霍乱肠毒素
A亚单位 活性亚单位 ctxA
B亚单位 ctxB
与受体结合，介导A亚单位进入细胞
1A+5B
27
霍乱弧菌
致病机理
B亚单位与小肠粘膜上皮细 胞GM1神经节苷脂受体结 合，介导A亚单位进入细胞
A亚单位裂解为A1和A2两条多 肽，A1亚单位发挥毒性作用
28
霍乱弧菌
致病机理 A1
庆大霉素琼脂平板（含亚碲酸钾）
同双洗
15
16
17
18
霍乱弧菌
生化反应
迟发酵
霍乱红
+
19
霍乱弧菌
抗原结构与分型
Ｏ抗原 耐热(100℃2h不被破坏) 特异性高，具有群特异性和型特异性， 是霍乱弧菌分群和分型的基础
Ｈ抗原 不耐热 弧菌属共同抗原，特异性低
20
霍乱弧菌
分群、型
O抗原是霍乱弧菌分群和型的基础
血清型 小川型（AB） 稻叶型（AC） 彦岛型（ABC）
A抗原 + + +
B抗原 + +
C抗原 + +
22
霍乱弧菌
生物分型：二个生物型
O1群根据生物学特性上的差异分为两个生物型
鉴别试验 50U/片多粘菌素B 鸡红细胞凝集试验 羊红细胞溶血试验
V-P Ⅳ组噬菌体裂解 Ⅴ组噬菌体裂解
古典生物型 S + -
14
霍乱弧菌 霍乱弧菌常用培养基
碱性蛋白胨水
增菌６-９ｈ，液体表面大量繁殖形成菌膜
碱性琼脂平板
圆形、较大、扁平、无色透明或半透明似水滴状菌落
硫代硫酸钠-枸櫞酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板（TCBS）
弧菌科
不耐热的H抗原
为共同抗原
耐热的O抗原
具有群特异性和型特异性，是霍乱弧菌分群和 分型的基础
分型
根据O抗原的不同，现有155个血清群 O1群、O139群引起霍乱
O139血清群的抗原编码基因中出现了36kb的新基因 缺少了O1群高分子量的O抗原侧链 与O1群抗血清无交叉反应，但可与O22血清群和 O155血清群产生交叉反应，遗传学特征和毒力基因 与O1群相似。
培养特性
TCBS琼脂平板: 0.5~2.0mm大小，蔗糖不发酵而呈蓝绿色菌落 普通血平板: 不溶血或只产生α溶血 从腹泻患者中分离到的菌株95%以上在我妻（wagatsuma）琼脂上产生 β溶血现象，称为神奈川现象（Kanagawa phenomenon, KP） 嗜盐性选择平板: 较大，圆形，隆起，稍浑浊，半透明或不透 明，无粘性
（二）生物学特性
1. 形态
革兰阴性杆菌，有鞭毛（极单毛），无荚膜， 无芽胞
2. 抗原结构
耐热的菌体（O）抗原，具有群特征性，副溶 血性弧菌的O抗原有13种 鞭毛抗原，不耐热，无型特异性
3．培养特性
营养要求不高 在无盐培养基上不能生长，最适合生长的 氯化钠浓度为3.5%，超过8%不能生长 最适pH为7.7~8.0，但pH9.5时仍能生长， 最适生长温度为30~37℃ 在碱性胨水中经6~9h增菌可形成菌膜
用于霍乱弧菌的鉴别试验
霍乱红试验 霍乱弧菌有色氨酸酶和硝酸盐还原能力。 霍乱弧菌和其他弧菌均有此种反应 粘丝试验（String Test） 弧菌属细菌除副溶血性弧菌部分菌株外，均有此反应 O/129敏感试验 O/129 （2，4－Diamino－6，7－Diisopropylpteridine，2，4二氨基 －6，7－二异丙基喋啶） 10μg及150μg纸片周围出现任何大小的抑菌环均为敏感。 O1群和非O1群霍乱弧菌均敏感。 但已有对O/129耐药的菌株出现。用此试验作鉴定时，需特别谨 慎。需结合其他试验结果如耐盐生长试验等综合考虑
弧 菌 科
二、邻单胞菌属
只有类志贺邻单胞菌—个菌种，可致肠胃炎， 好发于夏季，通常为散发流行，临床症状是 短时间的水样泻或痢疾样腹泻。病人有进食 生水或海产品史，机体抵抗力下降的人群发 生菌血症、脑膜炎。邻单胞菌脑膜炎常见于 助产分娩的婴儿，病死率高达70％。
在血平板中生长良好，可形成灰色，不透明， 1 ． 5mm 的菌落，无溶血现象。氨苄西林可抑 制其生长。 氧化酶和触酶、吲哚、硝酸盐还原试验均为 阳性，发酵葡萄糖产酸不产气，赖氨酸脱羧 酶、鸟氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶及肌醇 试验均为阳性 G- 直杆菌，成双或短链状排列，生长温度为 8℃～45℃。
Hale Waihona Puke 四、其他弧菌1. 拟态弧菌 与非01 群相似, 并和 O 抗原有交叉反应。 引起胃肠炎,偶见伤口感染或菌血症。 2. 创伤弧菌 引起的疾病最为严重，引起的菌血症和 伤口感染的病程进展非常快而致命。 3.溶藻弧菌 常见于外耳，中耳感染的病人，也常见于 伤口感染。本菌是耐盐的致病弧菌。 4. 河弧菌 从腹泻病人中分离到，世界各地均有引起 腹泻的报道。 5.弗尼斯弧菌 致病性尚不明确，从腹泻病人中分离到， 提示有—定的临床意义。
(三)微生物特性
1.G-直杆菌，有动力，营养要求不高，在普通培 养基上可以生长。分为嗜冷菌群35℃以下生长， 37℃不生长。嗜中温菌群 10℃—42℃之间生长。 2.氧化酶和触酶阳性，发酵葡萄糖产酸或产酸产 气，还原硝酸盐。22℃生化反应比37℃活跃， pH为4．5～9．0。 3.抗原结构复杂，血清学分型有异质性。011、 034和016在人类的感染中特别重要。
(3)0／129敏感试验：参照标准药敏试验的方法 进行。将O／129(2，4二氨基-6，7-二异丙基 喋啶 ) 药敏纸片lOμg及 150μg的纸片贴在接 种有待测菌的琼脂平板，35℃18～24h孵育后， 纸片周围任何大小的抑菌环均表现为敏感。 (4)鸡红细胞凝集试验：古典生物型阳性，E1Tor生物型阴性。在洁净的玻片上滴加生理盐 水1滴，取18-24h的细菌斜面培养物与生理盐 水混匀成浓厚菌悬液。加入用生理盐水洗涤 三次的2．5％新鲜鸡红细胞盐水悬液一滴充 分混匀，１ｍin内出现凝集为阳性。
弧菌科及检验培养碱性环境动力制动试验刘涛.ppt
鞭毛运动有助于细菌穿过肠粘膜表面粘 液层而接近肠壁上皮细胞。
普通菌毛是细菌定居于小肠所必须的因 子。
二、致病性与免疫性
（二）所致疾病
霍乱：烈性肠道传染病，为我国的甲类 法定传染病。
传 染 源：患者及无症状感染者 传播途径：粪-口途径，通过污染的
水源或食物 临床表现：剧烈的腹泻和呕吐（米泔
弧菌科及检验
培养碱性环境 动力制动试验
刘涛
弧菌属（Vibrio）
细菌是一大群菌体短小，弯曲成 弧形的革兰阴性菌
第一节 霍乱弧菌
Vibrio cholerae
流行病学概况
烈性肠道传染病霍乱的病原菌 19世纪初至今已引起7次世界性大流行。
1817～1923年的百余年间，在亚、非、欧、 美、澳等发生的六次世界性霍乱大流行—— 皆由古典生物型引起。
• 血平板：E1Tor可产生溶血素，古典生物 型霍乱弧菌不产生可溶性溶血素，不出 现透明溶血环。但能产生一种蛋白分解 酶可使血液消化出现草绿色环。绵羊红 细胞溶解试验常作为两个生物型鉴别的 方法之一。
（三）生化反应 发酵多种糖，迟缓发酵乳糖，不分解阿 拉伯糖、水杨酸； 氧化酶（+） 明胶酶（+） DNA（+） 硝酸盐还原（+）吲哚（+）
二、致病性与免疫性
（一）致病物质
1.霍乱肠毒素
霍 A亚单位 乱 肠 毒 素 B亚单位
腺苷酸环化酶活性增高，使细胞 内cAMP水平升高，主动分泌 Na+、K+、HCO3－和水，导致严 重的腹泻与呕吐。
与小肠粘膜上皮细胞GM1神经节 苷脂受体结合，介导A亚单位进 入细胞。
二、致病性与免疫性
（一）致病物质
最适生长温度为30~37℃ • 在碱性胨水中经6~9h增菌 • 可形成菌膜
弧菌科学习教案
致病机制
黏附(顶端结构、P1蛋白等)
细胞损伤
(获取脂质、固醇;有毒代谢物;免疫损伤)
-
如 神 经 毒 素 、核酸 酶、蛋 白酶、 磷脂酶 、O2
，氨
粘膜上皮损害 (粘膜肿胀、坏死、脱落，微纤毛运动减弱)
第17页/共150页
第十八页，编辑于星期二：二点 三十八分。
慢性呼吸道病 （CRD）
第18页/共150页
第13页/共150页
（直径－）
第十四页，编辑于星期二：二点 三十八分。
第14页/共150页
第十五页，编辑于星期二：二点 三十八分。
：
二、致病性与免疫性：
1、广泛分布于人、动物体内，对人致病的主要有：
肺炎支原体→原发性非典型肺炎。
溶脲脲原体
人型支原体 生殖器支原体
粘附 穿透支原体
侵入
泌尿生殖道感染,不育症,似
发展缓慢，病程长，成年鸡多为隐性感染，
可在鸡群长期存在和蔓延。
一般发病不高，如有不利因素会使本病更加
严重。
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第二十一页，编辑于星期二：二点 三十八分。
病原：
败血支原体（Mycoplasma
Gallisepticum）
滑液囊支原体（Mycopasma
Synoviae）
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感 染鸡
通过飞沫媒介 （野鸟、人及
器具等与易 感 鸡间接接触
带菌者
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第二十五页，编辑于星期二：二点 三十八分。
鸡慢性呼吸道病的发生与危害
1. 可使产蛋率下降10-40%
2. 每只种鸡在产蛋周期内少产18枚蛋
3. 种蛋孵化率下降10-20%
4. 弱雏增加10%
兽医微生物学重难点 -(二)细菌学各论
兽医微生物学各章重难点第二篇细菌学各论第7章革兰阳性球菌葡萄球菌属与链球菌属是最具代表性的革兰阳性菌。
金黄色葡萄球菌可致动物乳腺炎等疾病，α溶血素、凝固酶、耐热核酸酶等均是其重要的毒力因子。
它的SPA特殊结构不仅具有抗吞噬活性，而且被广泛用于免疫学诊断。
链球菌属的若干成员与乳腺炎、败血症等有关，根据多糖抗原及溶血特性可将其分类；其胞壁的M蛋白等结构及产生的溶血素毒素等与致病性有关。
猪链球菌2型不仅对猪有较强的致病性，也是人类的机会致病菌。
形态观察对这两属细菌的鉴定有重要意义，溶血作用往往需作CAMP试验强化，有时还需接种动物以证实其致病性。
肠球菌属原先归于链球菌属，近年来发现某些成员对动物有致病性。
第8章肠杆菌科（Enterobacteriaceae）肠杆菌科广泛分布，具有重要致病意义。
埃希菌属的血清型、肠毒素、志贺毒素与菌毛粘附素等毒力因子、毒力岛以及致病机理等在革兰阴性菌中具有代表性，有关研究推动了微生物学的发展。
沙门菌属中最常见的为肠道沙门菌，其血清型繁多，抗原结构有独特的表述形式，致病类型亦有专嗜、偏嗜与泛嗜的差异。
肠杆菌科的检验有重要的实际意义，检验手段主要是依据生化特性、血清学试验、PCR等。
有常规疫苗及基因工程疫苗可用于免疫预防。
耶尔森菌属中的鼠疫、假结核及小肠结肠炎耶尔森菌三种是重要的病原菌。
克雷伯菌属及变形杆菌属的某些成员有一定致病性，迟缓爱德华菌是人及水生动物等共患的病原菌，值得重视。
第9章弧菌科（Vibrionaceae）弧菌属成员众多，其中副溶血弧菌及鳗弧菌具有代表性。
副溶血弧菌常污染海产品导致人类食物中毒，具有公共卫生意义。
鳗弧菌等弧菌是海水养殖鱼类的致病菌。
气单胞菌可分为运动性与非运动性两大类，前者分布广泛，是较常见的致病菌，主要引致淡水养殖鱼类败血症及人类腹泻等，最常见的为嗜水气单胞菌，目前分为三个亚种，其致病株具有胞外蛋白酶、溶血毒素、S蛋白等毒力因子。
非运动性气单胞菌的代表为杀鲑气单胞菌，是冷水鱼的重要致病菌之一。
第8章 螺形菌
课堂小结
掌握：痢疾杆菌、 掌握：痢疾杆菌、伤寒沙门菌致病性与免 疫性 掌握： 掌握：霍乱弧菌的生物学特性和主要致病 物质 熟悉：霍乱的微检、 熟悉：霍乱的微检、副溶血弧菌的致病性 了解：伤寒、 了解：伤寒、霍乱的防治原则
Байду номын сангаас
课堂练习
1、关于预防霍乱的措施，下列哪项是无关 关于预防霍乱的措施， 的？（ ） A B C D E 严格处理病人的呕泻物 饮用开水以防通过污染生水感染 接种霍乱菌苗保护易感者 注意食品卫生以防食入污染食品感染 防止医源性感染如注射、 防止医源性感染如注射、输血等
（一）生物学特性
形态与染色
弧型或逗点状， G—、弧型或逗点状， 单鞭毛 液体中： 液体中： 运动非常活泼 呈穿梭样 涂片中： 涂片中： 排列整齐 呈鱼群状
培养特性
耐碱不耐酸
pH8.8~9.2
碱性蛋白胨水－菌膜 碱性蛋白胨水－ 碱性琼脂平板上生长良好
抗原构造与分型：
根据O抗原不同： 现已有155个血清群 根据O抗原不同： 现已有155个血清群 155 其中O1 139群引起霍乱 其中 1群、O139群引起霍乱 139 和非O 群霍乱弧菌——腹泻 腹泻 非O-1 和非 139群霍乱弧菌 根据表型差异： O1群霍乱弧菌分为 根据表型差异： O1群霍乱弧菌分为2个生物型 群霍乱弧菌分为2 古典生物型 El Tor生物型 Tor生物型
第八章 螺 形 菌
第一节 弧菌属
一大群菌体短小，弯曲成弧形的G—菌 一大群菌体短小，弯曲成弧形的G
问 题
1、什么是霍乱？ 什么是霍乱？ 2、引起霍乱的病原体的特性？ 引起霍乱的病原体的特性？ 3、霍乱弧菌的致病物质及其作用机制是什么？ 霍乱弧菌的致病物质及其作用机制是什么？ 4、对可疑霍乱患者如何进行微生物学检查？ 对可疑霍乱患者如何进行微生物学检查？
霍乱弧菌课件
霍乱弧菌
二、微生物学检验
1.标本采集： 采集粪便标本，采集的标本应及时接种于碱性蛋白 胨水增菌。不能及时接种者，应将标本置于文-腊二氏保存液或卡布运送培养基中由专人运送 2. 涂片染色镜检：取标本直接涂片革兰染色，油镜下观察到呈鱼 群状排列的革兰阴性弧菌可初步报告 3.动力及制动试验：取患者粪便制成悬滴（或压滴）标本，观察细 菌动力，见穿梭或流星样运动，O1群霍乱弧菌多价血清制动试验阳 性，可早期报告
Q1、患者最有可能患有何种疾病？ Q2、如何确诊？
霍乱弧菌
三、临床意义
1.致病物质：菌毛定植、霍乱肠 毒素 2.所致疾病：引起霍乱，为肠道 烈性传染病，主要是通过污染的 水源或食物经口摄入。临床表现 为剧烈上吐下泻，严重脱水、酸 中毒、痉挛、尿闭、休克、死亡
• 致病物质： 鞭毛与菌毛：运动并粘附至小肠粘膜 肠毒素： A—A1：毒性组分，使腺苷酸环化酶活 性增高，cAMP 大量增加。 A2：与 B 结合 B—与小肠上皮细胞神经节苷脂受体结合
/碱性琼脂平板上生长良好
碱性蛋白胨水—运送标本/增菌
碱性琼脂平板—透明/半透明
无色扁平菌落
霍乱弧菌在TCBS琼脂平板上形成
发酵蔗糖的较大的黄色菌落
霍乱弧菌
霍乱弧菌在含亚碲酸钾的琼脂平板上将碲离子还原成 原子态的碲，形成有灰褐色中心的菌落
霍乱弧菌
3. 抗原构造与分型：根据O抗原的不同将霍乱弧菌分为155个 血清群，其中O1群、O139群引起霍乱，O2群～O138群只引起 人类胃肠炎，不引起霍乱流行，称之非O1群霍乱弧菌 4. 抵抗力： 霍乱弧菌在淡水及海水中存活1～3周。对热、 干燥、日光、酸、消毒剂敏感，耐碱力较强。100℃，1～ 2min即死亡；在正常胃酸中仅能生存4min；0.5ppm氯15min能 杀死；对链霉素、氯霉素和四环素敏感，对庆大霉素耐药
弧菌科及检验
弧菌科及检验弧菌科共同特点是一群氧化酶阳性、具有极端鞭毛、动力阳性、发酵葡萄糖的革兰阴性直或微弯的杆菌。
弧菌科包括4个菌属，即弧菌属、气单胞菌属、邻单胞菌属和发光杆菌属。
前三属细菌均可引起人类感染，发光杆菌属对人无致病性。
一、弧菌属弧菌属的细菌分布广泛，以水中最多。
世界卫生组织腹泻病控制中心根据细菌的抗原性、生化特性、DNA同源性、致病性和耐盐性等将弧菌分为四类：①O1群霍乱弧菌；②不典型01群霍乱弧菌；③非01群霍乱弧菌；④其他弧菌（副溶血性弧菌）。
对人类致病的主要有霍乱弧菌和副溶血性弧菌，分别引起霍乱和食物中毒。
（一）霍乱弧菌霍乱弧菌是霍乱的病原菌，该病为一种急性烈性肠道传染病，发病急，传染性强，死亡率高。
1.生物学特性（1）形态染色：本菌呈弧形或逗点状，无芽胞，有菌毛，有些菌株有荚膜。
一端有一根粗而长的鞭毛，运动活泼。
取患者米泔水样粪便作悬滴观察，可见该菌呈穿梭样或流星状运动。
液体培养物滴片染色镜检，可见排列如“鱼群状”革兰阴性弧菌。
（2）培养特性：需氧或兼性厌氧菌，在普通培养基上生长良好。
耐碱不耐酸。
可在无盐环境生长。
碱性蛋白胨水中，经35℃培养6～9h，在液体表面大量繁殖形成菌膜，可达快速增菌的目的。
碱性琼脂平板上，经培养18～24h，形成较大、圆形、扁平、无色透明或半透明似水滴状菌落。
硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板（TCBS）上，形成较大黄色菌落。
含亚碲酸钾琼脂平板上，因还原亚碲酸钾成金属碲，使菌落中心呈灰褐色。
庆大霉素琼脂上形成的菌落中心呈灰褐色。
（3）生化反应：能分解甘露醇、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖，产酸不产气。
迟缓发酵乳糖，不分解阿拉伯糖。
氧化酶、明胶酶试验和ONPG试验均阳性。
能产生靛基质，霍乱红反应（即亚硝基靛基质试验）阳性。
（4）抗原结构与分型：霍乱弧菌具有耐热的特异性0抗原和不耐热的非特异性H抗原。
H抗原为弧菌属所共有，特异性低。
O抗原特异性高，具有群特异性和型特异性，是分群和分型的基础。
弧菌科
+ 致病物质：
KP阳性株产生耐热直接溶血素（TDH）和耐 热相关溶血素（TRH）两种致病因子，都具有 细胞毒性 和 心脏毒性,与人或兔红细胞膜上的 神经节苷脂结合引起溶血，致病性与溶血能力 呈平行关系。
+ 所致疾病：
食入被副溶血性弧菌污染的海产品或盐渍食 品，引起食物中毒。潜伏期5—7２h，多数为 24小时左右，起病急骤，常有腹痛、腹泻、呕 吐、低热 ，粪便呈水样或糊状，较少为粘液血 便。
致病物质
１．霍乱肠毒素choleratoxin :
A亚单位 ctxA B亚单位 ctxB
活性亚单位
与受体介导A亚单位进入细胞
1A+5B
致病机理
A亚单位裂解为A1和A2两条多 肽，A1亚单位发挥毒性作用
A1 G蛋白 Gs 活化腺苷酸环化酶
ATP
cAMP
胞内cAMP↑，导致肠腺上 皮细胞分泌功能亢进，分泌 Na+、K+、HCO3-和水，大 量水和电解质在肠腔堆积， 引起剧烈腹泻与呕吐
标本
血标本
分离培养 （BAP、MAC）
增菌
氧化酶 TCBS生长 O/129 耐盐试验
+
+ +
+
+
+ ElTor型抵抗力较古典型强
+ 在水中存活时间长，1-3周 + 怕酸耐碱，常用消毒剂敏感
+ 对庆大霉素耐受
+ 形态变异
多次传代可失去典型形态而成为杆状 + 菌落变异 S型→R型 + 血清型别变异 + 毒力变异
致病物质： 霍乱肠毒素 导致小肠上皮细胞分泌功能亢进，分泌大量肠 液。 鞭毛、菌毛及其他毒力因子 所致疾病： + 经肠道传染，引起烈性肠道传染病－－霍乱，为 甲类传染病。 + 典型病人粪便呈“米泔水”样 + 病后可获得牢固免疫，以SIgA为主。 + 我国霍乱流行菌株以ElTor小川型为主。
弧菌科及检验
最适生长温度为30~37℃ 在碱性胨水中经6~9h增菌可形成菌膜
TCBS琼脂平板: 0.5~2.0mm大小，蔗糖不发酵而呈蓝绿色 菌落
一般血平板: 不溶血或只产生α溶血 从腹泻患者中分离到旳菌株95%以上在我妻琼脂上产生β
2024/9/22
21
O139霍乱弧菌病原体起源
EVC流行株O抗原变异 ? 非O1霍乱弧菌获产毒基因 ?
2024/9/22
22
全国霍乱O139流行情况（1）
1992年在印度、孟加拉首次发觉霍乱O139后， 短期内在这两个国家造成流行，发病人数高 达10多万例，并在几年间已传入亚洲、欧洲、 美洲等20多种国家
霍乱能引起机体剧烈吐泻、失水、电介质紊乱以 致死亡
病死率高下与病情轻重以及医疗条件、急救旳时 效性有关。病情重、医疗条件差、急救不及时病 死率可高达20%-50%
2024/9/22
18
霍乱预后及危害
霍乱属烈性传染病，一旦暴发和流行，累及 面广，病死率高，对人民身体健康以及国民 生活、生产秩序、社会稳定、投资环境、对 外贸易等造成直接影响
2024/9/22
25
检验措施－显微镜检验
涂片染色： -标本直接涂片革兰染色，注意形态、排列
动力观察： -压滴法或暗视野镜检，注意运动方式
制动试验： -诊疗血清与菌体结合，动力消失
2024/9/22
26
形态染色
革兰阴性 弧形或逗点状 单鞭毛，运动呈“穿梭样”或“流星样” 无芽胞，无荚膜（O139有薄旳荚膜） 在新鲜粪便中成“鱼群样”排列
2024/9/22
35
鉴定
革兰阴性需氧和兼性厌氧杆菌鉴定ppt课件
（二）临床意义
2.所致疾病： 肠道外感染（内源性感染） ▪ 1.化脓性感染——定位转移 腹膜炎、阑尾炎、创伤感染、手术刀口感染、肺炎、 败血症、新生儿脑膜炎等 ▪ 2.泌尿道感染——病原菌来自病人肠道（上行性） 占泌尿道感染首位、女性多见（尿道炎、膀胱炎、 肾盂肾炎等）
引起肠道感染的大肠埃希菌的主要致病特征
旅行
类志贺毒素
腹泻、出血 性肠炎
腹泻（无 WBC），腹 痛、血便、发 热、HUS
儿童、老人
未熟牛肉 牛奶
未明
急、慢性腹 水泻、呕吐 泻
所有年龄
耐药性越来越严重：产超广谱β-内酰胺酶 （ESBL)比例增高，对青霉素类和1～4代头孢 菌素及单环菌素耐药，仅对头霉素类、碳青霉 烯类、含酶抑制剂类抗生素敏感。
死亡
毒 血 症
中 毒 性 菌
痢
高热、休克中毒 性脑病、DIC
（二）致病性与免疫性
所致疾病——细菌性痢疾 传染源：病人、带菌者 传播途径：经口 致病机制 临床类型 急性菌痢 中毒性菌痢 慢性菌痢 带菌者
免疫力:不牢固，易再感染
在抗生素使用前采集新鲜粪便中脓、血、黏液部分，床边 接种或立即送检，不能及时接种者可用卡-布运送培养基送 检，昏迷不能排便病人可用肛拭取样。
抗原结构: 菌体（O）抗原 鞭毛（H）抗原 表面（K、Vi）抗原
易出现各种变异：耐药性（重要）
第一节 肠杆菌科
葡萄糖发酵（+） 硝酸盐还原（+） 氧化酶（-） 触酶（+）痢疾志贺菌除外 结合血清学鉴定到属、种（型）
硝酸盐还原试验 阳性：红色 阴性：淡黄色
氧化酶试验
阳性：紫红色 阴性：无色
抵抗力 比其它肠杆菌弱，尤其对酸敏感
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第八章弧菌科
一、选择题
（一）、A1型题（标准型）
1.弧菌科细菌区别于肠杆菌科细菌的特征为
A.氧化酶阳性
B.有动力
C.发酵葡萄糖
D.有鞭毛
E.吲哚试验阳性
2.弧菌科细菌区别于非发酵菌的特征为
A.氧化酶阳性
B.发酵葡萄糖
C.有动力
D.有鞭毛
E.无芽孢
3.霍乱肠毒素通过激活何种物质使机体陷于脱水和电解质、酸碱平衡紊乱状态
A.ATP
B.cGMP
C.cAMP
D.ADP
E.Ca2+
4.下列哪种微生物可导致患者粪便呈“米泔水”样
A.大肠杆菌
B.志贺氏菌
C.伤寒沙门氏菌
D.霍乱弧菌
E.金黄色葡萄球菌
5.霍乱弧菌根据下列哪种抗原进行分群和分型
A.H抗原
B.Vi抗原
C.O抗原
D.K抗原
E.M抗原
6.霍乱弧菌在TCBS平板上的菌落颜色为
A.绿色
B.黄色
C.深蓝色
D.黑色
E.灰褐色
7.我国沿海地区及海岛食物中毒最常见的病原菌为
A.霍乱弧菌
B.副溶血性弧菌
C.金黄色葡萄球菌
D.拟态弧菌
E.伤寒沙门氏菌
8.副溶血弧菌的致病因子为
A.TSST-1
B.CT
C.TDH
D.ST
E.LT
9.副溶血性弧菌生长所需NaCl的最适浓度为
A.3.5%
B.6%
C.8%
D.9%
E.10%
10.副溶血性弧菌在TCBS琼脂平板上形成的菌落颜色为
A.黄色
B.红色
C.黑色
D.蓝绿色
E.灰褐色
11.具有神奈川现象的细菌是
A.大肠埃希菌
B.霍乱弧菌
C.副溶血性弧菌
D.小肠结肠炎耶尔森菌
E.幽门螺杆菌
12.在致病性弧菌中,引起疾病最为严重的是
A.拟态弧菌
B.创伤弧菌
C.溶藻弧菌
D.河弧菌
E.霍乱弧菌
13.弧菌属中最耐盐的致病菌是
A.拟态弧菌
B.创伤弧菌
C.霍乱弧菌
D.河弧菌
E.溶藻弧菌
14.既能分解色氨酸又能还原硝酸盐的试验是
A.霍乱红试验
B.甲基红试验
C.ONPG试验
D.七叶苷试验
E.苯丙氨酸脱氨酶试验
15.霍乱红试验
A.可鉴别古典生物型和Eltor生物型
B.可鉴别霍乱弧菌和副溶血性弧菌
C.为霍乱弧菌特异试验
D.无特异性
E.结果观察无需加入酸性试剂
16.气单胞菌属和邻单胞菌属的鉴别试验常用
A.脲酶试验
B.O/129敏感试验
C.吲哚试验
D.氧化酶试验
E.触酶试验
17.可用于鉴别弧菌属和邻单胞菌属的是
A.氧化酶试验
B.发酵葡萄糖
C.O/129敏感试验
D.TCBS生长试验
E.有动力
（二）、A1型题（否定型）
1.弧菌科的细菌不包括下列哪一菌属
A.弧菌属
B.气单胞菌属
C.邻单胞菌属
D.发光杆菌属
E.弯曲菌属
2.弧菌属细菌的特点下列哪一项除外
A.氧化酶阴性
B.发酵葡萄糖
C.TCBS生长
D.需要Na+
E.分解甘露醇
3.下列哪一项不符合霍乱弧菌的特点
A.NA上可生长
B.耐碱性
C.发酵蔗糖
D.在含9%NaCl培养基上可生长
E.氧化酶阳性
4.下列哪项生化试验不能用于鉴别霍乱弧菌古典生物型和Eltor生物型
A.V-P试验
B.鸡红细胞凝集试验
C.多粘菌素B敏感试验
D.IV组噬菌体裂解试验
E.脲酶试验
5.关于霍乱红试验不正确的说法是
A.与靛基质试验相同之处是都可分解色氨酸产生吲哚
B.但本反应过程尚可还原硝酸盐为亚硝酸盐
C.结果观察都需加入酸性试剂
D.为霍乱弧菌鉴定的特有试验
E.阳性结果为呈现蔷薇色
6.弧菌科中尚未发现对人有致病性的是
A.发光杆菌属
B.气单胞菌属
C.邻单胞菌属
D.弧菌属
E.螺杆菌属
7.初次分离副溶血性弧菌不使用
A.SS琼脂平板
B.BA
C.EMB
D.TCBS
E.嗜盐菌选择平板
（三）、B1型题（配伍题）
问题1～4
A.霍乱红试验
B.多粘菌素B敏感试验
C.耐盐试验
D.氧化酶试验
E.粘丝试验
1.用于鉴别古典生物型和Eltor生物型的试验是
2.气单胞菌属的鉴别常用
3.志贺菌属和邻单胞菌属的鉴别常用
4.霍乱弧菌与0.5%去氧胆酸钠相互作用的试验是
问题5～8
A.碱性蛋白胨水
B.GN肉汤
C.1%NaCl蛋白胨水
D.胆汁葡萄糖肉汤
E.PBS
5.志贺菌属增菌培养时选用
6.副溶血性弧菌增菌培养时选用
7.霍乱弧菌增菌培养时选用
8.沙门菌属的血液标本增菌选用
二、填空题
1.根据O1群霍乱弧菌的菌体抗原可将O1群霍乱弧菌分成三个血清型_____________，_______________，____________。
2.邻单胞菌属唯一的菌种是____________。
三、判断题
1.病原性弧菌的赖氨酸脱羧酶试验、鸟氨酸脱羧酶试验、精氨酸双水解酶试验均为阳性。
2.非O1群霍乱弧菌有古典生物型和Eltor两种生物型。
四、名词解释
1.神奈川现象(KP)
五、简答题
1.简述如何鉴别霍乱弧菌古典生物型和Eltor生物型。
2.简述副溶血性弧菌产生的耐热性溶血素(TDH)的特点。
3.简述霍乱弧菌的抗原结构特点及分群分型。
六、论述题
1.一患者食用海鲜发生食物中毒,取其呕吐物培养得到一种G-菌,移种KIA、MIU培养基:葡萄糖(+),乳糖(-),H2S(-),动力(+),吲哚(+),尿素酶(-),该菌很可能为何种菌?如何进一步鉴定。
2. 对一例由霍乱弧菌引起的腹泻患者,如何进行微生物学检查?
标准答案一、选择题
(一)、A1型题(标准型)
1.A
2.B
3.C
4.D
5.C
6.B
7.B
8.C
9.A 10.D 11.C 12.B 13.E 14.A 15.D 16.B
17.D
(二)、A1型题(否定型) 1.E 2.A 3.D 4.E 5.D
6.A
7.C
(三)、B1型题(配伍题)
1.B
2.C
3.D
4.E
5.B
6.C
7.A
8.D
二、填空题
1.小川型, 稻叶型, 彦岛型
2.类志贺邻单胞菌
三、判断题
1.X
2.X
四、名词解释
1.神奈川现象：从腹泻病人中分离到的副溶血性弧菌菌株95%以上在含高盐（7%）的人O型血或兔血及以甘露醇为碳源的我萋琼脂培养基上产生β-溶血现象,称为神奈川现象。
五、简答题
1.
特征 古典生物型 Eltor 生物型
羊SRBC 溶血 ― D
鸡RBC 凝集 ― +
V-P 试验 ― +
多粘菌素B
敏感试验 + ―
IV 组噬菌体
裂解 + ―
V 组噬菌体裂解― +
———————————————
2.①TDH 对人和兔RBC 的溶血性较
高，对马RBC 不溶血；
②对多种培养细胞如Hela 细胞、FL
细胞及鼠心肌细胞有细胞毒性；
③心毒性作用，可导致心电图异常表现
④肠毒性作用，使肠黏膜的毛细血管通透性增高，肠液分泌亢进。
3.霍乱弧菌有不耐热的H 抗原和耐热的O 抗原，O 抗原具有群特异性和型特异性，是霍乱弧菌分群和分型的基础。
根据O 抗原的不同，现有155个血清群，其中O1群、O139群引起霍乱，其余O2-O138群血清群可引起人类的胃肠炎，无明显的季节分布， 不引起霍乱流行，称之为非O1群霍乱弧菌。
O1群霍乱弧菌的O 抗原由A 、B 、C 三种抗原因子组成，通过不同组合可分成三个型别，由AB 组成小川型，AC 组成稻叶型，ABC 组成彦岛型。
六、论述题
1. ①引起食物中毒的G-杆菌一般有某些沙门菌、变形杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌以及副溶血性弧菌等，从提示结果分析可能为耐盐的副溶血性弧菌；②进一步的鉴定试验包括嗜盐试验，赖氨酸脱羧酶试验、鸟氨酸脱羧酶试验及精氨酸双水解酶试验，神奈川现象，毒素测定，药敏试验。
2.①采集患者“米泔水”样粪便； ②直接荧光抗体染色和抗O1群抗原 的单克隆抗体凝集试验，可快速诊
断霍乱弧菌感染；
③霍乱毒素测定：乳胶凝集试验； ④若上述试验初步诊断为霍乱弧菌感染，则要立即报告疫情部门； ⑤分离培养：将标本接种碱性蛋白胨水增菌6-8h ，然后接种TCBS 或庆大霉素平板
⑥挑选可疑菌落进行鉴定：涂片染色镜检，全面生化反应，血清凝集试验进行分群和分型； ⑦K-B 法药敏试验； ⑧报告
(张文玲)。