花色素实验

花色素的分离提取纯化实验

一实验目的

掌握花色素提取的方法（溶剂萃取法提取），了解做一个完整的实验需要具备哪些条件，探究肿柄菊花色素提取的最佳条件。

二实验原理

花色素多存在于有色果皮和花中

花色素是黄酮类物质，是多羟基的化合物，易溶于水等极性溶剂中，在植物细胞中多与糖类结合成花色素苷，花色素在偏酸性溶液中偏红，碱性溶液中偏蓝，花色素不稳定，易分解，具有还原性。

三实验试剂与器材

器材：水浴锅，电炉，；冷冻干燥机，天平，研钵，分光光度计，旋转蒸发仪，离心机，移液管等玻璃仪器

试剂：花色素标准样品，甲醇，0.1%HCl-95%乙醇（V/V=70：30）,无水乙醇，石油醚，氯仿，乙酸乙酯，HCl-正丁醇（浓HCl 5.0ml 加入正丁醇95.0ml，混合即可），2%硫酸铁铵（硫酸铁铵2.0g溶于2.0mol/mlHCl 100.0ml即可）。

新鲜花：扶桑花（大红花）肿柄菊

四实验步骤

（一）扶桑花花色素提取验证实验：

1、原料预处理：取扶桑花，60o C烘干。称取一定量干燥啊、样品，

剪碎，加3倍左右的石油醚（沸程60~90o C），室温浸泡，以脱去脂质物质和叶绿素，过滤，将扶桑花样品自然晾干，挥发石油醚

成分，备用。

2、花色素提取：提取剂为0.1%HCl-95%乙醇（V/V=70：30），料液比（m/V）为1:150，提取时间为30min，提取温度为60o C，提取次数2次，即提取剂分两次加入。

3、花色素纯化：粗提液加2倍左右的无水乙醇，沉淀除去色素粗提

液中的蛋白质、多糖等杂质，上清液再用石油醚、氯仿、乙酸乙酯依次萃取，继续除去粗提液中的脂质、叶绿素和多酚等杂质，弃有机溶剂层。

4、花色素浓缩冻燥：提取液（水层）用旋转蒸发仪浓缩后，冷冻干

燥，即为待测花色素样品。

5、花色素标准溶液配制（1.0mg/ml）：精确称取花色素标准样品

10.0mg，用甲醇溶解，定容至10.0ml，备用。

6、花色素样品溶解：将分离得到的花色素样品，用甲醇溶解定容至

25.0ml，试样浓度控制在1.0~3.0mg/ml。

7、标准曲线制备：取干净试管7支，按表1进行操作。以吸光值A546

为纵坐标，花色素含量（ g）为横坐标作图的标准曲线。

表1：HCl-正丁醇测定花色素含量标准曲线绘制

试管号

试剂/ml 0 1 2 3 4 5 6 1.0mg/ml花色素标准液0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30

甲醇0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 0. 20 2%硫酸铁铵0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10

HCl-正丁醇 3.40 3.40 3.40 3.40 3.40 3.40 3.40 沸水浴30min取出，冷却至室温后，15min内以0号为参比溶液在波长546nm处测定各管吸光值

花色素质量/μg 0.0 50 100 150 200 250 300 A546

8、待测花色素样品含量测定：吸取样夜0.10ml加入试管中（平行做

两份），各补加甲醇0.4ml，再分别加2%硫酸铁铵溶液0.1ml和HCl-正丁醇溶液3.4ml，沸水浴中煮沸30min，冷却至室温后，15min内以表1的0号管为参比溶液在波长546nm处测定各管吸光度。根据测得的吸光度从标准曲线上查出待测样品液样品中花色素质量（μg）。

结果处理

W=m0*25/m*0.1

式中，w为花色素的提取率（μg/mg）; m0为根据吸光度A546从标准曲线上查出的花色素的质量（μg）；25为提取样品溶解定容的总体积（ml）；0.1为比色测定时所取待测样品的体积（ml）；m为称取样品（新鲜扶桑花/肿柄菊）的质量（mg）。

（二）肿柄菊花色素提取探究实验：

五实验结果及分析

六实验注意事项