MMP2及MMP9在糖尿病患者的动脉粥样硬化动脉上的表达

中国医科大学硕士学位论文MMP2和MMP9在糖尿病患者的动脉粥样硬化动脉上的表达姓名：周一军申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：张锦20030301中文摘要目的通过检测２型糖尿病患者动脉粥样硬化动脉ＭＭＰ２和ＭＭＰ９的表达和分布，并与健康人正常动脉和非糖尿病伴动脉粥样硬化患者ＭＭＰ２和ＭＭＰ９的表达和分布比较，进一步证实，在糖尿病动脉粥样硬化病变血管及粥样斑块中ＭＭＰ２和ＭＭＰ９表达增强及基质降解活性增强，糖尿病患者易于发生动脉粥样硬化斑块破裂。

初步探索ＭＭＰ２和ＭＭＰ９在糖尿病大血管病变的发生、发展中所起的作用。

进一步探索糖尿病大血管并发症的发病机制。

厂方法应用免疫组织化学方法（ＳＡＢＣ法），分别检测ｌＯ例糖尿病伴动脉粥样硬化患者动脉（Ｃ组），ｌＯ例非糖尿病伴动脉粥样硬化患者动脉（Ｂ组）及９例正常动脉（Ａ组）ＭＭＰ２和ＭＭＰ９的表达和分布，利用计算机图像分析仪进行灰度扫描，测定抗ＭＭＰ２、抗ＭＭＰ９免疫沉淀物积分光密度值（ＩｎｔｅｇｒａｔｅｄＯＤＴｏｔａｌ，ＩＯＤ）、阳性面积百分比（ＴｈｒｅｓｈｏｌｄＡｒｅａ％，ＴＡ％），对染色程度作相对定量分析。

结果１）动脉内膜组织学变化：Ａ组动脉内膜表面光滑，内膜无浸润性增厚；Ｂ、Ｃ组动脉内膜呈浸润性增厚，粥样硬化斑块内含有增生的平滑肌细胞、巨噬细胞、泡沫细胞及胶原纤维。

Ｃ组更明显。

２）免疫组织化学：正常人动脉内膜（Ａ组），见到散在抗ＭＭＰ２、抗ＭＭＰ９棕褐色颗粒状免疫沉积物表达。

非糖尿病伴动脉粥样硬化组（Ｂ组）动脉内膜，可见抗ＭＭＰ２、抗ＭＭＰ９棕褐色颗粒状免疫沉积物，分布在泡沫细胞、平滑肌细胞、巨噬细胞。

糖尿病伴动脉粥样硬化组（ｃ组）动脉内膜，可见到在泡沫细胞、平滑肌细胞、巨噬细胞及胶原纤维抗ＩＭＰ２、抗ＮＩｄＰ９免疫沉积物表达明显增多。

ＮＮＰ２在糖尿病伴动脉粥样硬化动脉内膜的表达明显离于对照组（Ａ、Ｂ、Ｃ三组抗ＭＭｔ：＇２ＩＯＤ分别为３９２７９．８０±１３６１６．５８ｖｓ５７００３．８４±１６１７１．４９ｖｓ６９０１４．１２土１４４５９。

４１，Ｐ＜０．０１；抗ＭＭ船ＴＡ％分别为１０。

６５３６±５，９４６９ｖｓ１１．０８２５±３．３２３７ｖｓ１２．９７１５±２．６６８１，Ｐ＜０．０５），糖尿病伴动脉粥样硬化动脉内膜ＭＭＰ９表达亦显著高于对照组（Ａ、Ｂ、Ｃ三组抗ＭＭＰ９ＩＯＴ分别为６７９４４．５７士１０３８７。

００ｖｓ７５２７９。

６３±１３１０５．６０ｖｓ１０２４８５．２８±２０４３０，８３，Ｐ＜０．０５；抗ＭＭｐ９ＴＡ％分别为１２。

５７５７±１二８１３７ｖｓ１３。

６５３６±２．２９１８ｖｓ１８。

３４７２±３。

５８９１，Ｐ＜Ｏ。

０５）。

Ａ、Ｂ、Ｃ三组组闽差异比较均有显著意义（Ｐ＜０．０５）ｒｋ一／’结论（１）壤尿癀动脉粥样硬化瘸变血管及粥榉斑块中ＭＭＰ２和／坯ＭＰ９表达增强及基质降勰活性增强。

（２）ＭＭＰ２穰ＭＭＰ９在糖尿痣患者动勰渖表达增强可以部分解释糖汞病患者易于发生动姝粥样硬化斑块破裂。

、关键谰基黢金属蛋白酶；糖暴病；动脒粥撵硬化・２・ＭａｔｒｉｘＭｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ２ａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭａｔｒｉｘＭｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ９ｉｎＡｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃＰｌａｑｕｅｓｏｆＤｉａｂｅｔｉｃＰａｔｉｅｎｔｓＡｂｓｔｒａｃｔＭａｔｄ．ｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ（ＭＭＰｓ）越ｍｅｒｌｌｂｅｒｓｏｆａｆａｍｉｌｙｏｆＺｎ２＋一ａｎｄＣａ２＋一ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｅｎｄｏｐｅｐｆｉｄａｓｅｓ．ｗｈｉｃｈａｒｅｅｓｓｅｎｔｉａｌｆｏｒｃｅＨｕｌａｒｍｉｇｒａｔｉｏｎａｎｄｔｉｓｓｕｅｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇｉｎｂｏｔｈｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．Ｉｎａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃｌｅｓｉｏｎｓ，ｔｈｅｅｘｃｅｓｓｉｖｅｐｒｏ‘ｄｕｃｔｉｏｎｏｆｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓｂｙｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｎｓ（ＳＭＣ）ａｎｄ”ｆｏａｍｃｅｎｓ”（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ）ｈａｓｂｅｅｎｒｅｐｏｒｔｅｄ．Ｉｎｐａｒｔｉｃｕｌａｒ，ＭＭＰ２ａｎｄＭＭＰ９ｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓａｒｅｔｈｏｕｇｈｔｂｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ，ｏｆａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｆｉｃｐｌａｑｕｅｓ．Ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ（ＤＭ）ｉｓａｐｒｉｍａｒｙｆｏｒｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒｄｉｓｅａｓｅ．Ａｌｔｈｏｕｇｈｒｅｃｅｎｔｓｔｕｄｉｅｓｈａｖｅｄｅｍｏｎｓｔ．ｒａｔｅｄａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｆｏｒＭＭＰｓｉｎａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，ｈｔｄｅｉｓｋｎｏｗｎａｂｏｕｔｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｈｙｐｅｒｇｌｙｅｅｍｉａＯｆｆＭＭＰｒｅｇｕｌａｎｏｎｉｎＶａｓＣｕｌａｒ．ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓｅｎｈａｎｃｅｓｖａｓｃｕｌａｒＭＭＰ２ａｎｄＭＭＰＯａｃｔｉｖｉｔｙ，ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎａｌ．ｙｓｉｓｏｆＭＭＰ２ａｎｄＭＭＰ９ｗｅｒｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄｉｎａｔｈｅｒｏｓｅｌｅｒｏｆｉｃｐｌａｑｕｅｓｏｆｄｉａｂｅｔ－ｉｃａｎｄｎｏｎ—ｄｉａｂｅｔｉｃｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｔｈｅｆｉｎｄｉｎｇｓｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔａｃｔｉｖｉｔｙ．ａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭＭＰ２ａｎｄＭＭＰ９ｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｎａｔｈｅｒｏ－ｓｃｌｅｒｏｔｉｃｐｌａｑｕｅｓｏｆｄｉａｂｅｔｉｃｐａｔｉｅｎｔｓ．ＳｕｂｊｅｃｔｓＡｌｌａｒｔｅｒｙｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄａｔｓｕｒｇｉｃａｌｏｐｅｒａｔｉｏｎｓ．Ａｒｔｅｒｙｓａｍｐｌｅｓ，１０ｆｒｏｍＤＭｐａｔｉｅｎｔｓ（ｇｒｏｕｐＣ）ａｎｄ１０ｆｒｏｍｎｏｎ—ｄｉａｂｅｔｉｃ・３・ｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ（ｇｒｏｕｐＢ）．Ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎ，９ｎｏｍｍｌａｒｔｅｒｙｓ面ｃａｌｏｐｅｒａｔｉｏｎｗｅｒｅｉｍ—ａｓｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（ｇｒｏｕｐＡ）．Ａｒｔｅｒｉｅｓｆｒｏｍｍｅｄｉａｔｅｌｙｒｅ６－ｏｚｅｎａｔ一７０℃．ＨｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｔａｉｎｉｎｇＦｒｏｚｅｎａｒｔｅｒｉｅｓｗｅｒｅｓｅｒｉａｌｌｙｓｅｃｔｉｏｎｅｄｉｎｔｏ７Ｖｘｎ—ｔｈｉｃｋｓｅｃｔｉｏｎｓ，ａｎｄｓｔａｉｎｅｄｗｉｔｈｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎａｎｄｅｏｓｉｎ．Ｓｏｍｅｏｆｔｈｅｓｅｒｉａｌｓｅｃｔｉｏｎｓｗｅｒｅｆｏｒｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｅｈｅｍｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓ．Ｔｈｅａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｕｓｅｄｗｅｒｅｒａｂ—ｂｉｔａｎｔｉ—ＭＭＦ２ａｎｄａｎｔｉ—ＭＭＰ９（Ｂｏｓｔｅｒ，ｄｉｌｕｔｅｄ１：２００ｉｎＰＢＳ）．Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄａｎｔｉｓｅｒｕｍｔｏｍｏｕｓｅｌ薛ｗａｓｕｓｅｄａｓｔｈｅｓｅｃｏｎｄａｒｙａｎｔｉ—ｈｏｄ），．ＦｕｒｔｈｅｒｒｅａｃｔｉｏｎｗｉｔｈｌａｂｅｌｅｄｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎａｎｄＤＡＢ，ｗｈｉｃｈｓｈｏｗｅｄｉｍｍｕｎｏｒｅａｃｔｉｖｉｔｙａＳａｂｒｏｗｎｃｏｌｏｒ．Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓ、ＳｔａｔｉｓｔｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｂｙＳＳＰＳｐｒｏｇｒａｍ．ＳＮＫｔｅｓｔＷａＳｕｓｅｄｔｏｃｏｍｐａｒｅｔｈｒｅｅｇｒｏｕｐｉｎｔｅｇｒａｔｅｄＯＤｔｏｔａｌａｎｄｔｈｒｅｓｈｏｌｄａｒｅａ％ｂｙＡＮＯＶＡ．ＲｅｓｕｌｔｓａｒｅｅｘｐｒｅｓｓａＳｌＴｌｅａｎＳＤ．Ｌｅｖｅｌｓｏｆｓｔａｔｉｓ—ｔｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｗｅｒｅｓｅｔａｔＰ＜０．０５．ＲｅｓｕｉｔｓＩｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌａｒｔｅｒｉｅｓｒｅｇｕｌａｒｌｙａｒｒａｎｇｅｄｅｌａｓｔｉｃｆｉｂｅｒｓａｎｄＳＭＣｗｉｔｈｎｏｆｏａｍｃｅｌｌ．Ｉｎｔｈｅｓｅａｔｈｅｍｓｃｌｅｍｓｉｓａｒｔｅｒｉｅｓ，ｍａｃｒｏｐｈａｇｅａｎｄＳＭＣａｌ－ｅｓｅｅｎｉｎｔｈｅｎｅａｒｅｓｔｌｕｍｅｎ，ＭａｒｋｅｄｍａｃｒｏｐｈａｇｅａｎｄＳＭＣａｃ—ｃｕｍｕｌａｔｅｌａｒｇｅｌｙｉｎｔｈｏｓｅｄｉａｂｅｔｉｃａｒｔｅｒｉｅｓ．ＩｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｔａｉｎｉｎｇｓｈｏｗｎｓｔｒｉｋｉｎｇｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｉｎＭＭＰ２ａｎｄＭＭＰ９ｂｅｔｗｅｅｎｄｉａｂｅｔｉｃａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ＴｈｅｓｅｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎＭＭＰ２ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄＯＤｔｏｔａｌ（ｍｅａｎＳＤ）ｂｅ—ｔｗｅｅｎｄｉａｂｅｔｉｅａｒｔｅｒｉｅｓｗｉｔｈａｔｌｌｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ（６９０１４．１２±１４４５９．４１）ａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（３９２７９．８０±１３６１６．５８）．Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄａｒｅａ％ｏｆＭＭＰ２ｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｅｌｅｖａｔｅｄ（Ｐ＜Ｏ．０５）ｉｎｓａｍｐｌｅｓｆｒｏｍｄｉａｂｅｔｉｃ・ｄ・ｐａｔｉｅｎｔｓ（１２。

９７１５±２。

６６８１）ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｓａｍｐｌｅｓｆｒｏｍｅｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（１０．６５３６±５．９４６９）。

ＩｎｔｅｇｒａｔｅｄＯＤｔｏｔａｌｏｆＭＭＰ９ｗａｓａｌｓｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒ（Ｐ＜０．０１）ｉｎｄｉａｂｅｔｉｃｇｒｏｕｐ（６７９４４。

５７±１０３８７．００）ｔｈａｎｉｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（１０２４８５．２８＋２０４３０．８３）．Ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ（ＭＭＰｓ）ａｒｅｍｅｍｂｅｒｓｏｆａｆａｍｉｌｙｏｆＺｎ“～ａｎｄＣａ“一ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｅｎｄｏｐｅｐｆｉｄａｓｅｓ．ｗｈｉｃｈａｒｅｅｓｓｅｎｔｉａｌｆｏｒｃｅ娃ｕｌａｒｍｉｇｒａｔｉｏｎａｎｄｔｉｓｓｕｅｒｅｍｏｄｅｈｎｇｉｎｂｏｔｈｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．ＭａｎｙｔｙｐｅｓｏｆｃｅＨｓａｓｐｒｏｅｎｚｙｍｅｓｓｅｃｒｅｔｅＭＭＰｓ．＆ｌａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｅｌｅｓｉｏｎｓ，ｔｈｅｅｘｃｅｓｓｉｖｅｐｒｏｄｕｅｔｉｏｎｏｆｍａｔｒｉｘｍｅｔａ］Ｊｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓｂｙｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｅｅｌｓ（ＳＭＣ）ａｎｄ”ｆｏａｍｃｅＵｓ”（ｍａｃｍｐｈａｇｅｓ）ｈａｓｂｅｅｎｒｅｐｏｒｔｅｄ．Ｉｎｓｉｒｅｚｙｍｏｇｒａｐｈｙａｎｄｉｍｍｕｎｏ．ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｌｃａｌｓｔｕｄｉｅｓｈａｖｅｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔＭＭＰｓ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙＭＭＰ２（７２一ｋＤａｇｅｌａｔｉｎａｓｅＡ）ａｎｄＭＭＰ９（９２一ｋＤａｇｅｌａｔｉｎａｓｅＢ），ａｒｅａｃｔｉｖｅｌｙｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄｉｎａｔｈｅｒｏｍａｔｏｕｓｐｌａｑｕｅａｎｄａｒｅｐａｒｔｉｃｕｌａｒｌｙｐｒｅｖａ．１ｅｎｔｉｎｒｕｐｔｕｒｅ—ｐｒｏｎｅｓｈｏｕｌｄｅｒｒｅｇｉｏａｓ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｅｕｌａｒｃｏｍｐｈｃａｆｉｏｎｓａｒｅｌｅａｄｉｎｇｃａｕｓｅｏｆｍｏｒｂｉｄｉｔｙａｎｄｍｏｒｔａｌｉｔ＿ｙｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＤＭ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｂｅｔｗｅｅｎｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉａａｎｄｖａｓｃｕｌａｒｄｉｓｅａｓｅｒｅｍａｉｎｕｎｃｌｅａｒ．Ｔｈｅｆｉｎｄ．ｉｎｇｓｉｎｄｉｃａｔｉｎｇｔｈａｔｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ——ＫＢａｎｄａｃｔｉｖａｔｏｒｐｒｏｔｅｉｎ——１ａｒｅｒｅｄｏｘｓｅｎｓｉｔｉｖｅｏｆｆｅｒａｐｏｔｅｎｔｉａｌｍｅｃｈａｎｉｓｍｂｙｗｈｉｃｈｓｌｕｅｏｓｅ．，ｉｎｄｕｃｅｄｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓｍａｙｒｅｇｕｌａｔｅＭＭＰ２ａｎｄＭＭＰ９ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｎｄａｃ，ｔｉｖｉｔｙ．ＡｎｏｔｈｅｒｐｏｓｓｉｂｌｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｆｏｒｔｈｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＭＭＰ２ａｎｄＭＭＰ９ａｃｔｉｖｉｔｙｉｓｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｂｙＲＯＳ．ＷｅｈａｖｅｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔＭＭＰ２ａｎｄＭＭＰ９ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎａｔｈｅｍｍａｔｏｕｓｐｌａｑｕｅａｒｅｔｍｒｅｇｕｌａｔｅｄｄｕｒｉｎｇｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉａ。