COX IV线粒体内参抗体说明书
纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）
纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂是一种旨在通过极谱法检测系统（polarographic system）测定新鲜活体线粒体在ADP存在（III态呼吸）与否（IV态呼吸）的情况下溶解氧（dissolved oxygen）的消耗差异，即呼吸控制率（RCR），以评价线粒体结构和功能完整性以及氧化磷酸化效率的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
可以被用于线粒体生理功能和药物作用机制等的研究。
产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。
技术背景线粒体是细胞呼吸链和氧化磷酸化的中心。
电子传递和ATP合成通过质子梯度偶联成一体。
线粒体结构完整，功能正常，底物充分，电子传递形成的质子梯度不断被消耗，电子得以顺畅传递，氧气快速消耗，其耗氧率大，为III态呼吸。
ADP耗竭，质子梯度不能消耗，阻碍电子传递，氧气消耗减少，为IV态呼吸。
呼吸控制率（respiratory control ratio或respiratory control index；RCR），又称呼吸调节比，是指III态（加入ADP）的呼吸速率与IV态（ADP耗竭）的呼吸速率之比。
正常线粒体的RCR为3至10：RCR降低意味着线粒体ATP 合成功能损伤，呼吸障碍；RCR增高意味着细胞活动旺盛，代谢加快。
产品内容介质液（Reagent A）毫升态底物液（Reagent B）微升态底物液（Reagent C）微升产品说明书 1份保存方式保存在－20℃冰箱里，有效保证6月用户自备CLARK氧电极仪：用于测定溶解氧浓度实验步骤实验开始前，制备好新鲜的线粒体置于冰槽里备用；同时将－20℃冰箱里的试剂融化，并预热氧电极仪到25℃。
然后进行下列操作。
1．加入xx毫升介质液（Reagent A）到反应玻璃槽2．使用微型磁力子搅拌，充分混匀3．密封反应槽4．开始记录氧浓度：起始饱和氧浓度值为0.240微摩尔分子氧/毫升（25℃）5．持续记录1分钟后，注射加入xx微升待测的线粒体（总量2毫克）（注意：氧浓度可能瞬时增加5％）6．持续记录1分钟后，注射加入xx微升态底物液（Reagent B）――开始IV态呼吸（注意：参见注意事项9）7．持续记录2分钟：出现氧浓度缓慢下降）（8．继续注射加入xx微升态底物液（Reagent C注意：氧浓度在10秒钟内开始下滑）――开始III态呼吸（注意：参见注意事项9）9．持续记录直至出现线性下行斜线出现拐点10．分别测算III态呼吸速率和IV态呼吸速率：氧浓度降低值÷实际时间（分钟）11．计算呼吸控制率：III态呼吸速率÷IV态呼吸速率注意事项1．本产品为20次操作2．操作时，须戴手套3．确保反应玻璃槽洁净，密闭，以免氧气流入4．线粒体样品须新鲜制备，建议不要冻存；制备的线粒体膜须完整，非常重要；建议使用GENMED线粒体分离试剂盒－GMS10006.15．注射加入反应槽时，避免气泡和空气注入6．避免乙醇污染；乙醇增加氧浓度；如果底物或抑制剂须使用乙醇溶解，则加注10微升7．保持反应槽温度恒定，温度降低，氧浓度升高8．反应液充分混匀，和环境氧保持平衡9．加注态底物液（Reagent B）和态底物液（Reagent C）前，须充分冻融和混匀10．严格按照规定加注试剂，切莫增加加注试剂容量11．本公司提供系列线粒体检测试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定检测敏感。
线粒体复合体Ⅳ试剂盒说明书
货号: QS3303 规格：25管/24样线粒体复合体Ⅳ试剂盒说明书可见分光光度法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：线粒体复合体Ⅳ又称细胞色素C氧化酶，也是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分，负责催化还原型细胞色素C的氧化，并最终把电子传递给氧，生成水。
测定原理：还原型细胞色素C在550nm有特征光吸收，线粒体复合体Ⅳ催化还原型细胞色素C生成氧化型细胞色素C，因此550nm光吸收下降速率能够反映线粒体复合体Ⅳ酶活性。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：试剂一：25mL×1瓶，-20℃保存；试剂二： 5mL×1瓶，-20℃保存；试剂三：0.5 mL×1瓶，-20℃保存；试剂四：液体10mL×2瓶，4℃保存；试剂五：粉剂×2支，-20℃保存；试剂六：粉剂×2支，-20℃保存；样本的前处理：组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：①准确称取0.1g组织或收集500万细菌或细胞，加入1mL试剂一和10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
②将匀浆600g，4℃离心5min。
③弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
④上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅳ（此步可选做）。
⑤步骤④中的沉淀即为线粒体，加入200uL试剂二和2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10秒，重复30次），用于复合体Ⅳ酶活性测定。
测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至550nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（1）工作液的配制：临用前取试剂四、试剂五、试剂六各一支，将试剂五和试剂六依次转移到试剂四中混合溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
（2）将工作液置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min；（3）在1mL玻璃比色皿中加入80μL样本和800μL工作液，混匀，记录550nm处初始吸光值A1和 37℃反应30min后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。
免疫试验必备 内参抗体
品名 货号 价格 宿主
应用
His, HRP Labeled
CB101001 ￥3000/100ug
Rabbit
WB 1:1000 IHC 1:200 IP 1:200
北京西美杰科技有限公司 上海 电话：021-63599871 传真：021-63599873 Email：shanghai@
货号 25-01-01 24-01-01 25-00-01 24-00-02 24-00-01
品名 HisDetector Nickel-AP HisDetector Nickel-HRP HisDetector Western Blot Kit, AP Colorimetric HisDetector Western Blot Kit, HRP Chemiluminescent HisDetector Western Blot Kit, HRP Colorimetric
检测物种 Human, Mouse, Rat
品名 货号 价格 宿主
Rubisco Large Subunit AS03 037 ￥4770/100ug Rabbit
应用
WB 1:5000-1:10000 IF 1: 250
检测物种 plant and algal
北京西美杰科技有限公司 上海 电话：021-63599871 传真：021-63599873 Email：shanghai@
品名 货号 价格 宿主
β-actin CB100996 ￥1500/100ug Rabbit
应用
WB 1:1000 IP 5ug/mg lysate
检测物种 Human, Mouse
品名 货号 价格
β-actin 60008-1-Ig ￥1548/150ul
GENMED线粒体功能詹纳斯绿B染色试剂盒产品说明书范文(中文版)
GENMED线粒体功能詹纳斯绿B染色试剂盒产品说明书范文(中文版)GMS10015v.A主要用途GENMED线粒体功能詹纳斯绿B染色试剂是一种旨在通过一种毒性较小的碱性染料特异性地使具有活性功能的线粒体呈现蓝绿色，从而判断线粒体功能的完整性的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种线粒体（动物、人体、植物、昆虫等）制备物的功能检测。
产品严格无菌，即到即用，活体检测，操作简捷，性能稳定。
技术背景线粒体是细胞中重要的细胞器，其主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。
线粒体大量存在于代谢旺盛的细胞中，如动物的心肌、肝、肾等器官和组织的细胞中。
大量制备线粒体就是从这些器官组织中提取，或从组织培养细胞中提取。
在光学显微镜下线粒体呈现为颗粒状、棒状或弯曲细线。
詹纳斯绿B（JanugreenB），是一种毒性较小的碱性染料。
它可以对活细胞进行直接染色，在细胞质内可以看到被染成蓝绿色的线状或颗粒小体的线粒体。
线粒体所以能显示出蓝绿色，是由于线粒体中具有细胞色素氧化酶系统，它是染料始终处于氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中的染料被还原呈无色。
产品内容毫升毫升毫升份保存方式保存在－20℃冰箱里；GENMED染色液(ReagentB)，避免光照；有效保证6月用户自备毫升离心管：用于线粒体染色的容器光学显微镜：用于线粒体染色观察分析实验步骤实验开始前，将℃冰箱里的试剂盒中的GENMED染色液（ReagentB）置于冰槽里融化，并放在暗室里。
然后进行下列操作。
一、纯化线粒体染色1．从纯化的线粒体样品中移出至微升（含细胞中提取的线粒体）到新的预冷的毫升离心管，置于冰槽里（注意：线粒体须均匀分布，没有聚集成团）2．加入等量微升的GENMED染色液（ReagentB），轻柔混匀3．放进暗室里，在室温下孵育1分钟4．即刻移取微升到载玻片上，放上盖玻片5．在光学显微镜油镜下进行观察：功能完整的线粒体呈现蓝绿色圆形或椭圆形颗粒（注意：可见蓝绿色渐渐变淡现象）6．篮绿色强度显著减弱或呈现无色，表明线粒体细胞色素氧化酶系统功能不全或功能丧失二、活体细胞染色1．将待测细胞（某细胞）移入到1.5毫升离心管2．放进微型台式离心机离心1分钟，速度为500g（或2000RPM；例如eppendorf5415）3．小心抽去上清液4．加入微升GENMED清理液（ReagentC）或GENMED保存液（ReagentA）5．加入微升GENMED染色液（ReagentB），充分混匀6．放进暗室里，在冰槽里孵育分钟7．即刻移取微升到载玻片上，放上盖玻片8．在光学显微镜油镜下进行观察：功能完整的线粒体呈现蓝绿色线状或颗粒小体9．篮绿色强度显著减弱或呈现无色，表明线粒体细胞色素氧化酶系统功能不全或功能丧失注意事项1．本产品为20次（活体细胞）或400次（纯化线粒体）操作2．所有操作均须无菌状态下进行3．线粒体样品操作须在低温下进行，且操作快速4．操作时，须戴手套5．建议染色完成后，即刻进行显微镜观察分析6．孵育时，须避免光照7．本公司提供系列线粒体试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能长期稳定2．本产品经鉴定显色清晰使用承诺友情提醒IFITDOESN’TWORK，RECHECKYOURE某PERIMENTTOSEEWHATYOUDIDWRONG。
WB检测抗体如何选择(下)
WB检测抗体如何选择WB检测之二抗二抗选择二抗是用一抗免疫动物制备的抗一抗的抗体，选择范围较窄，基本是商品化的，在不考虑二抗修饰类型的前提下，二抗的选择需要遵循以下原则：二抗来源种属、一抗来源种属和抗原来源种属互不相同。
例如如果研究对象是人的蛋白X，选择了鼠抗X一抗，则可选择兔抗鼠二抗或者羊抗鼠二抗。
二抗选择要考虑的问题有：①对单抗类一抗，二抗需与一抗的类别或亚类相匹配（多抗类一抗主要是IgG类免疫球蛋白故相应二抗就是抗IgG F(ab’)2二抗，避免各种Ig保守结构域导致的交叉反应。
然而各种Ig仍具有保守的轻链结构域，因此还是有一定程度的交叉反应。
WB检测之内参抗体Western Blot检测方法不仅能检测靶蛋白存在与否，还能比较不同条件下或者不同组织中靶蛋白的相对表达量，可作为蛋白表达水平最直接的证据。
在WB实验中有众多不确定因素影响靶蛋白表达水平的测定，如方法学本身性质、操作误差等。
为准确衡量靶蛋白表达水平，需要精确一致的上样量，使用内参的意义即是保证上样量的一致。
内参即内部参照（Internal Control），对哺乳动物细胞一般指管家基因的表达蛋白(Housekeeping Proteins)。
此类蛋白在各组织和细胞中的表达相对恒定，可作为检测蛋白表达水平变化的参照物。
当内参条带亮度基本一致时，基本可以确定上样量是一致的，通常采用比较靶蛋白和内参蛋白条带亮度比值来进行相对定量。
WB实验中涉及到的蛋白-抗体结合是一个复杂的活性生物大分子间的相互作用，众多因素都会影响实验的结果。
例如时间、温度、浓度、离子强度等，在实验设计时就需要有严谨的对照方案，通过对照就容易判断问题所在，严谨的WB实验中需要设立蛋白分子量标准、空白载体对照、未诱导对照、已知量标准物正对照和内参。
内参使用方法1.标记内参：酶标的内参抗体可避免二抗结合总蛋白中某些免疫球蛋白产生的杂带，使用时只需在二抗孵育时加入酶标内参抗体，按照正常操作即可。
WB内参
Loading Control–WB不可或缺的武器内参的使用――WB过程监测以及目的蛋白定量的标准！在WB试验中中，最重要和最不可或缺的对照就是内参照（Loading Control，Internal Control）。
内参照的使用有两个方面的作用：1.是检测整个WB实验过程及体系是否正常工作，如果一个实验连内参照都出不料阳性结果的话（在内参抗体有效的情况下），那么这个体系就是存在问题的了2.半定量的标准：内参一般选择的管家基因编码表达的蛋白，在很多组织和细胞中中都是稳定表达的，因此可以作为检测靶蛋白表达量的标准。
Rabbit polyclonal to beta actin (ab8227) at 1/5000.Lane 1: HeLa whole cell extract (20ug);Lane 2: yeast cell extract (20ug)Lane 3: mouse brain tissue lysate (20ug).Developed using Goat anti-rabbit IgG (HRP) (ab6721) at 1/2000.Don’t be a cowboy, use a Loading Control!WB常用内参及其技术参数：内参名称分子量大小适用范围beta-actin 43kDa 胞浆和全细胞GAPDH 30-40kDa 胞浆和全细胞Tubulin 55kDa 胞浆和全细胞VCDA1/Porin 31kDa 线粒体COXIV 16kDa 线粒体TBP 38kDa 细胞核Abcam作为全球最大抗体供应商，拥有非常齐全的Loading Control，绝对能满足您WB的需求！WESTERN BLOT 常见问题解答(2007-07-12 16:09:27)分类：转载文章AA. 转膜后经丽春红染色的条带，为什么大蛋白分子的一端（即点样空的一侧）的转膜好象不是很好，为什么？解答：这是正常的，大分子的蛋白转移的慢，你延长转移时间和电流，大分子一端就会好的多，但是小分子的就有可能会变淡。
内参抗体和WB实验的关系
进口内参抗体——在WB实验中为什么需要使用内参抗体？
美国Abbkine品牌是一家提供高性价比免疫学和细胞学科研产品及解决方案的品牌，艾美捷将其
引入中国，作为其中国区域代理，将为客户提供最具性价比的常规免疫学试剂，如各种标签抗体、内参抗体、常规一抗以及全系列二抗，抗体检测底物以及相关试剂盒等。
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Abbkinecrownantibody
"皇冠"抗体因为验证，所以承诺结合完整的标签与内参抗体产品线，我们针对热门核心研究领域，如信号通路、神经科学、细胞骨架、癌症、表观遗传等，精心挑选具有文章热度的关键靶标，推出经过层层严苛质控和品质承诺的“皇冠”抗体。
简介Abbkine 技术专家多年来一直潜心研究、开发并生产高品质的免疫检测试剂。
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如有大订单，欢迎联系我们，您将获取更多的支持！产品目录其它抗体内参抗体内参简介. . . . . . . . . . . . . . . . 1内参抗体. . . . . . . . . . . . . . . . 2标签抗体WB：使用GAPDH单克隆抗体（组织，Hela细胞等样品。
样品类型内参抗体理论分子量全细胞/胞浆蛋白β-Actin43 kDaGAPDH37 kDaβ-Tubulin55 kDaα-Tubulin55 kDaCyclophilin B24 kDaCofilin19 kDaVinculin116 kDa线粒体COX IV16 kDaHSP6060 kDaVDAC1/Porin31 kDa核蛋白PCNA29 kDaHistone H315 kDaHDAC156 kDaLamin B166 kDaTBP/TATA38 kDa膜蛋白NaK ATPase113 kDa血清Transferrin77 kDa1产品名称产品货号应用类型Anti-β-Actin Mouse Monoclonal Antibody (1C7) A01010WB, IHC HRP Conjugated Anti-beta Actin Mouse Mab (1C7) A01015WBAnti-GAPDH Mouse Monoclonal Antibody (2B5) A01020WB, IHC HRP Conjugated Anti-GAPDH Mouse Mab (2B5) A01025WBAnti-β-Tubulin Mouse Monoclonal Antibody (3G6) A01030WB, IHC Anti-PCNA Mouse Monoclonal Antibody (1D7)A01040WB, IHC Anti-Plant Actin Mouse Monoclonal Antibody (3T3)A01050WBAnti-COX IV Mouse Monoclonal Antibody (14Y2)A01060WBAnti-Histone H3 Mouse Monoclonal Antibody (2D10)A01070WB, IF, IP Anti-α-Tubulin Monoclonal Antibody (3G5) A01080WB, IHC, IF, IP Anti-Lamin B1 Monoclonal Antibody (15T1) A01090WB, IPAnti-Rubisco (Large Chain) Monoclonal Antibody (9Y6) A01110WBAnti-TBP/TATA Binding Protein Mab (2C6) A01120WBAnti-Cyclophilin B Monoclonal Antibody (7B2) A01130WB Histone H3 Monoclonal Antibody (1G1)ABM40038WB, IHC, IF, IP Cofilin Polyclonal Antibody ABP51018WB, IHC, IF Histone deacetylase 1 Polyclonal Antibody ABP51519WB, IHC, IF HSP60 Polyclonal Antibody ABP51585WB, IHC, IF Na+/K+-ATPase α1 Polyclonal Antibody ABP51894WB, IHC, IF Vinculin Polyclonal Antibody ABP52701WB, IHC, IF Transferrin Polyclonal Antibody ABP52968WB, IHC VDAC1 Polyclonal Antibody ABP53121WB Na+/K+-ATPase α1 Polyclonal AntibodyWB：使用Na+/K+-ATPase α1检测293细胞裂解液。
WB检测抗体如何选择(下)
WB检测抗体如何选择WB检测之二抗二抗选择二抗是用一抗免疫动物制备的抗一抗的抗体，选择范围较窄，基本是商品化的，在不考虑二抗修饰类型的前提下，二抗的选择需要遵循以下原则：二抗来源种属、一抗来源种属和抗原来源种属互不相同。
例如如果研究对象是人的蛋白X，选择了鼠抗X一抗，则可选择兔抗鼠二抗或者羊抗鼠二抗。
二抗选择要考虑的问题有：①对单抗类一抗，二抗需与一抗的类别或亚类相匹配（多抗类一抗主要是IgG类免疫球蛋白故相应二抗就是抗IgG F(ab’)2二抗，避免各种Ig保守结构域导致的交叉反应。
然而各种Ig仍具有保守的轻链结构域，因此还是有一定程度的交叉反应。
WB检测之内参抗体Western Blot检测方法不仅能检测靶蛋白存在与否，还能比较不同条件下或者不同组织中靶蛋白的相对表达量，可作为蛋白表达水平最直接的证据。
在WB实验中有众多不确定因素影响靶蛋白表达水平的测定，如方法学本身性质、操作误差等。
为准确衡量靶蛋白表达水平，需要精确一致的上样量，使用内参的意义即是保证上样量的一致。
内参即内部参照（Internal Control），对哺乳动物细胞一般指管家基因的表达蛋白(Housekeeping Proteins)。
此类蛋白在各组织和细胞中的表达相对恒定，可作为检测蛋白表达水平变化的参照物。
当内参条带亮度基本一致时，基本可以确定上样量是一致的，通常采用比较靶蛋白和内参蛋白条带亮度比值来进行相对定量。
WB实验中涉及到的蛋白-抗体结合是一个复杂的活性生物大分子间的相互作用，众多因素都会影响实验的结果。
例如时间、温度、浓度、离子强度等，在实验设计时就需要有严谨的对照方案，通过对照就容易判断问题所在，严谨的WB实验中需要设立蛋白分子量标准、空白载体对照、未诱导对照、已知量标准物正对照和内参。
内参使用方法1.标记内参：酶标的内参抗体可避免二抗结合总蛋白中某些免疫球蛋白产生的杂带，使用时只需在二抗孵育时加入酶标内参抗体，按照正常操作即可。
衰老过程中线粒体顺乌头酸酶活性变化对能量合成的影响
衰老过程中线粒体顺乌头酸酶活性变化对能量合成的影响叶薇;陈赛慧;郝东杰;郑屹;曹建明;吕建新【摘要】AIM:To investigate the effect of mitochondrial aconitase (ACO2) on energy synthesis during aging in male SD rats and D-galactose-induced cell aging model.METHODS:D-galactose at concentration of 55 mmoL was used to establish MRC-5 cell aging model.Intact mitochondria in the rat brain and MRC-5 cells were isolated by a sucrose density gradient centrifugation.The formation of NADPH was used to represent the ACO2 activity and determined by observation of the absorbance at 340nm.Fluorescence quantitative PCR and Western blotting were applied to detected ACO2 expression.Superxide dismutase (SOD) activity and malondialdehyde (MDA) content were measured by the commercial assay kits.The tissue iron content was detected by ferrozinemethod.Mitochondrial membrane potential was detected by JC-1mitochondrial membrane potential detection kit.The content of ATP,ADP and AMP was measured by HPLC analysis,and the energy charge was then calculated by theformula.RESULTS:ACO2 activity and iron content presented age-related decline and increase,respectively,while the expression level of ACO2 kept stable.ACO2 activity significantly declined when the cells were treated with hydrogen peroxide at different concentrations.In the aging cells,SOD activity and ACO2activity were decreased and MDA content was increased significantly,while the expression level of ACO2 was unchanged.During aging,mitochondialmembrane potential,ATP synthesis and energy charge presented significant reduction.CONCLUSION:The activity of ACO2,which is sensitive to oxidative stress,declines during aging,and may affect the efficiency of the Krebs cycle.At the same time,mitochondrial membrane potential decreases,thus reducing the energy synthesis in mitochondria.%目的:利用自然衰老雄性SD大鼠和D-半乳糖(D-Gal)诱导的细胞衰老模型,研究在衰老细胞中线粒体顺乌头酸酶(mitochondrial aconitase,ACO2)活性的变化及其对能量合成的影响.方法:利用55 mmol/L D-Gal诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5衰老,并采用蔗糖连续密度梯度离心法分离大鼠脑组织和MRC-5细胞的线粒体；ACO2活性根据反应产物NADPH在340 nm的吸光度变化率进行检测,其表达水平分析分别用荧光定量PCR和Western blotting完成；利用试剂盒检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量以反映细胞氧化还原状态；组织铁含量的检测则通过菲咯嗪法进行；线粒体膜电位及腺苷酸含量分别应用JC-1荧光探针法和高效液相色谱法检测,并计算能荷.结果:随着大鼠月龄增加,ACO2活性逐渐下降,表达水平无明显差异,组织铁水平逐渐升高；体外氧化应激实验显示ACO2活性随H2O2处理浓度和时间增加而下降；细胞衰老模型中,SOD活性降低,MDA含量升高,ACO2活性下降而表达水平未变；自然衰老大鼠和细胞衰老模型中,线粒体膜电位、ATP 合成与能荷呈明显下降趋势.结论:衰老过程中,随着氧化压力增加,氧化应激敏感的ACO2活性下降,影响三羧酸循环效率,同时伴线粒体膜电位下降,进而使得能量合成降低.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2013(029)007【总页数】8页(P1275-1282)【关键词】衰老;线粒体;顺乌头酸酶;能量合成;氧化性应激【作者】叶薇;陈赛慧;郝东杰;郑屹;曹建明;吕建新【作者单位】温州医学院检验医学与生命科学学院,浙江温州325035;温州医学院检验医学与生命科学学院,浙江温州325035;温州医学院检验医学与生命科学学院,浙江温州325035;温州医学院检验医学与生命科学学院,浙江温州325035;温州医学院环境与公共卫生学院,浙江温州325035;温州医学院检验医学与生命科学学院,浙江温州325035【正文语种】中文【中图分类】R34线粒体不仅是真核细胞能量合成和活性氧(reactive oxygen species，ROS)产生的主要场所，线粒体内DNA、蛋白质和脂质更易成为ROS作用的位点。
血清抗线粒体抗体检查自身免疫
血清抗线粒体抗体检查自身免疫自身免疫性疾病是指机体免疫系统异常地攻击自身组织和器官，导致各种疾病的发生。
而抗线粒体抗体是一类自身抗体，其检测能够帮助医生判断和诊断自身免疫性疾病。
本文将从血清抗线粒体抗体的检查原理、检查方法以及临床应用等方面进行介绍。
一、检测原理血清抗线粒体抗体检测是通过检测血清中的特定抗体水平来判断机体是否存在自身免疫反应。
正常情况下，机体的免疫系统会抑制自身抗体的产生，防止免疫系统攻击自身组织。
而当机体的免疫系统出现异常时，自身抗体的产生会增加，对线粒体等自身组织发生免疫攻击，导致自身免疫性疾病的发生。
二、检查方法血清抗线粒体抗体检查可以通过酶联免疫吸附测定法（ELISA）或间接免疫荧光法进行。
这些方法通过特定蛋白质抗原与抗体的结合反应，来测定血清中的抗线粒体抗体水平。
1. 酶联免疫吸附测定法（ELISA）ELISA是目前常用的检测方法之一。
该方法通过将抗线粒体抗体与酶标记结合，再加入抗人IgG抗体与底物，产生颜色反应来进行定量测定。
ELISA法具有操作简便、结果准确等优点，被广泛应用于临床医学中。
2. 间接免疫荧光法间接免疫荧光法是另一种常用的检测方法。
该方法通过将患者血清和抗人免疫球蛋白荧光素标记结合，加入切片中的线粒体抗原，通过观察是否出现荧光信号来判断是否存在抗线粒体抗体。
三、临床应用血清抗线粒体抗体检查在临床中具有重要的应用价值。
它主要用于以下几个方面：1. 自身免疫性疾病的诊断抗线粒体抗体的检测可以帮助医生对自身免疫性疾病进行诊断。
例如，抗线粒体抗体的阳性结果可与系统性红斑狼疮、硬皮病等疾病的关联进行判断，有助于提供更准确的诊断依据。
2. 预测疾病进展和指导治疗抗线粒体抗体水平的变化可以作为评估疾病进展和治疗效果的重要指标。
医生可以通过定期检测抗体水平的变化，来了解疾病的活动性以及治疗效果，从而调整治疗方案，提高治疗效果。
3. 预防疾病的发生对于高危人群，如亲属中有自身免疫性疾病患者的人群，可以通过进行血清抗线粒体抗体的检测，了解自身免疫疾病的患病风险。
纯化线粒体呼吸控制率RCR定量检测试剂盒说明书
植物组织线粒体形态/活性荧光染色试剂盒
真菌/酵母细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒
活体细胞线粒体跟踪试剂盒 活体细胞线粒体长期跟踪试剂盒
全血线粒体 DNA 萃取试剂盒 纯化线粒体 DNA 萃取试剂盒 细胞/组织线粒体 DNA 萃取试剂盒 细胞/组织基因组/线粒体 DNA 同步萃取试剂盒 动物血小板线粒体 DNA 萃取试剂盒 真菌/酵母细胞线粒体 DNA 萃取试剂盒 植物线粒体 DNA 萃取试剂盒 动物硬组织线粒体 DNA 萃取试剂盒 非突触体脑组织线粒体分离试剂盒 植物线粒体粗提分离试剂盒 植物活性线粒体分离试剂盒 植物高质纯化线粒体分离试剂盒 真菌/酵母细胞线粒体粗提分离试剂盒 真菌/酵母细胞活性线粒体分离试剂盒 真菌/酵母细胞高质纯化线粒体分离试剂盒 细胞 ATP 生物发光法定量检测试剂盒 纯化线粒体蛋白质浓度定量测定试剂盒 动物血小板线粒体粗提分离试剂盒 动物血小板活性线粒体分离试剂盒 动物血小板高质纯化线粒体分离试剂盒 动物全血线粒体粗提分离试剂盒 动物全血活性线粒体分离试剂盒 动物全血高质纯化线粒体分离试剂盒 超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒 线粒体超氧化物歧化酶（Mn/Fe SOD）分离试剂盒 超氧化物歧化酶（SOD）标准曲线测定试剂盒 纯化线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 细胞/组织线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 真菌/酵母细胞线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 植物线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 全血线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒
技术背景
线粒体是细胞呼吸链和氧化磷酸化的中心。电子传递和ATP合成通过质子梯度偶联成一体。线粒体结构完 整，功能正常，底物充分，电子传递形成的质子梯度不断被消耗，电子得以顺畅传递，氧气快速消耗，其 耗氧率大，为III态呼吸。ADP耗竭，质子梯度不能消耗，阻碍电子传递，氧气消耗减少，为IV态呼吸。 呼 吸控制率（respiratory control ratio或respiratory control index；RCR），又称呼吸调节比，是指III态（加入ADP） 的呼吸速率与IV态（ADP耗竭）的呼吸速率之比。正常线粒体的RCR为3至10：RCR降低意味着线粒体ATP 合成功能损伤，呼吸障碍；RCR增高意味着细胞活动旺盛，代谢加快。
48T 组织 小鼠细胞色素C氧化酶(COX)酶联免疫检测试剂盒使用说明书
小鼠细胞色素C氧化酶(COX)酶联免疫检测试剂盒使用说明书种属小鼠适用样本组织保存条件 2-8℃仅用于科研，不得用于医学诊断使用前仔细阅读本说明书。
本酶联免疫试剂盒是基于生物素双抗体夹心技术原理，来检测小鼠细胞色素C氧化酶(COX)，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。
一、用途：用于小鼠组织及相关液体样本中细胞色素C氧化酶(COX)的测定。
二、工作原理本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法 (ELISA) 测定样品中细胞色素C氧化酶(COX)的水平。
向预先包被了小鼠细胞色素C氧化酶(COX)单克隆抗体的酶标孔中加入细胞色素C氧化酶(COX)，温育；温育后加入生物素标记的抗COX抗体，再与链霉亲和素-HRP 结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色深浅与样品中细胞色素C氧化酶(COX)的浓度呈正相关。
三、试剂盒组成编号产品名称48T 96T1 标准品（80ng/ml）0.5ml 0.5ml2 标准品稀释液3ml3ml3 酶标包被板12孔×4条12孔×8条4 链霉亲和素-HRP3ml6ml5 浓缩洗涤液20×20ml30×20ml6 生物素标记的抗-COX抗体1ml1ml7 显色剂A液3ml6ml8 显色剂B液3ml6ml9 终止液3ml6ml10 说明书1份1份11 封板膜2张(48T)2张(96T)12 密封袋1个1个四、需要而未提供的试剂和器材1、37℃恒温箱2、标准规格酶标仪3、精密移液器及一次性吸头4、蒸馏水5、一次性试管6、吸水纸五、注意事项1、从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。
酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2、各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
3、严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
碧云天线粒体膜电位检测试剂盒(Rhodamine 123)说明书
线粒体膜电位检测试剂盒(Rhodamine 123)产品简介：碧云天的线粒体膜电位检测试剂盒(Rhodamine 123) (Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit with Rhodamine 123)是一种以Rhodamine 123为荧光探针对线粒体进行染色并进行膜电位检测的试剂盒。
本试剂盒可用于活细胞线粒体膜电位的检测，也用于细胞凋亡的检测。
本试剂盒可使用荧光显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪等荧光检测设备进行检测。
Rhodamine 123也称2-(6-Amino-3-imino-3H-xanthen-9-yl)benzoic acid methyl ester ，中文名为罗丹明123，分子式为C 21H 17ClN 2O 3，分子量为380.82，CAS 号为62669-70-9。
Rhodamine 123是一种通透细胞膜的黄绿色阳离子荧光探针，最大激发光波长为507nm ，最大发射光波长为529nm 。
Rhodamine 123的化学结构式和激发、发射光谱图参考图1。
图1. Rhodamine 123的化学结构式和激发、发射光谱图。
本试剂盒检测线粒体膜电位的原理如下。
在正常细胞中，Rhodamine 123能够依赖线粒体跨膜电位(mitochondrial transmembrane potential, ΔΨm)选择性进入线粒体基质，可发出明亮的黄绿色荧光；当细胞发生凋亡或坏死时，线粒体膜电位丢失，线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore, MPTP)持续开放，引起线粒体跨膜电位(ΔΨm )的崩溃，Rhodamine 123从线粒体中释放出来，从而导致线粒体内黄绿色荧光强度的明显降低。
此外有报道，在个别特定情况下，Rhodamine 123探针在线粒体内过度聚集后可能会出现自发淬灭(self-quenching)现象，线粒体内黄绿色荧光强度降低，而在凋亡发生时，线粒体中黄绿色荧光增强。
western免疫印迹的注意事项
western免疫印迹实验流程和蛋白条带的注意事项一、条带中所遇到的情况1. 完全没有条带完全没有条带的原因主要有以下4点：（1）抗体加错（最常见一抗加错抗体，或二抗种属加错）。
（2）转膜出现了问题（常见膜放反）。
（3）发光液失效或不够灵敏。
（4）蛋白上样量过少，一抗浓度太低2. 目的条带有但高背景高背景可能是WB中最常见出现的问题，目的条带单一清晰，但是其他地方又弥漫性较为均一的背景，主要原因：（1）洗膜时间和次数不够（常用10min*3）。
（2）封闭不够好。
（3）一抗浓度过高，可通过调整一抗浓度来降低背景。
3.出现非均一性背景原因：膜可能曾经干过，在封闭的时候，洗一抗，洗二抗，以及发光的时候都时刻需要注意蛋白面不要风干，风干之后结果很可能就是这个样子。
注意与高背景区别。
4.背景出现黑点由于封闭时牛奶不纯，没有完全溶解致使颗粒残留，同时封闭后清洗不完全，也会导致背景出现黑色斑点。
5.条带上有白色小点由于电转中膜和胶之间存在气泡，转膜时一定要将气泡都去除。
6.非特异性条带主要由于一抗非特异性与蛋白结合，建议更换抗体。
7.条带拖尾主要原因：（1）蛋白量太大。
（2）一抗浓度过大，孵育时间太长。
8.条带呈哑铃状（1）胶在配置过程中未冷却完全，胶不够均一。
（2）样品中含有太多杂质，没有离心下来，杂质沉积在孔的中间。
9.电泳中出现问题（1）整个条带呈“ ︶” 状：凝胶冷却不均一，电泳时电压过大发热，应该降低电压或者冰浴。
（2）整个条带呈“ ︵”：凝胶左右两头没有凝固好（3）溴酚蓝拖尾：样品溶解不好。
（4）纵向的纹理：上样样品中存在不溶性颗粒（5）溴酚蓝很粗：浓缩胶浓缩效果不好，可能是浓缩胶太短，或者是浓缩胶配错。
（6）在分离胶中跑不动：Tris-Cl PH值不对，或者忘记加SDS。
二、内参的选择1. Actin，Tubulin，GAPDH都为最常用的内参抗体，Actin，Tubulin的缺点是有时候会出现复带，GAPDH与前两者相比比较稳定，建议选择。
线粒体膜电位检测试剂盒(JC-10)说明书
线粒体膜电位检测试剂盒（JC-10）说明书产品货号：CA1310产品规格：100T产品内容：产品名称包装JC-10（200×）100μL/管，共5管超纯水90mLJC-10染色缓冲液（5×）80mLCCCP（10mM）20μL保存条件：-20℃避光保存，尽量避免反复冻融，有效期一年。
超纯水和JC-10染色缓冲液（5×）也可4℃保存。
产品简介：线粒体膜电位检测试剂盒（JC-10）是一种以JC-10为荧光探针，快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化的试剂盒，可以用于早期的细胞凋亡检测。
JC-10是一种广泛用于检测线粒体膜电位△Ψm的理想荧光探针。
可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。
在线粒体膜电位较高时，JC-10聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，可以产生红色荧光；在线粒体膜电位较低时，JC-10不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-10为单体，可以产生绿色荧光。
这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。
常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。
线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。
通过JC-10从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，同时也可以用JC-10从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。
JC-10单体的最大激发波长为515nm，最大发射波长为529nm；JC-10聚合物的最大激发波长为585nm，最大发射波长为590nm。
实际观察时，使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。
本试剂盒提供了CCCP作为诱导线粒体膜电位下降的阳性对照。
对于六孔板中的样品，本试剂盒共可以检测100个样品；对于12孔中的样品，本试剂盒共可以检测200个样品。
操作步骤：1、JC-10染色工作液的配制：六孔板每孔所需JC-10染色工作液的量为1mL，其他培养器皿的JC-10染色工作液的用量以此类推；对于细胞悬液每50～100万细胞需0.5mL JC-10染色工作液。
携光生物抗内因子抗体说明书
携光生物抗内因子抗体说明书一、产品名称携光生物抗内因子抗体检测试剂盒二、产品概述抗内因子抗体是一种针对内因子的自身抗体。
内因子是由胃黏膜壁细胞分泌的一种糖蛋白，它与维生素 B12 结合，促进维生素 B12 在回肠末端的吸收。
当体内产生抗内因子抗体时，会干扰内因子与维生素B12 的结合及吸收，从而可能导致维生素 B12 缺乏相关的疾病，如恶性贫血等。
本试剂盒用于体外定性检测人血清中的抗内因子抗体，有助于相关疾病的诊断和监测。
三、检测原理本试剂盒采用酶联免疫吸附试验（ELISA）原理。
预先包被内因子抗原于微孔板上，加入待检血清样本后，若样本中存在抗内因子抗体，会与包被的抗原结合。
经过洗涤去除未结合的物质，再加入酶标记的二抗，形成抗原抗体酶标二抗复合物。
最后加入底物显色，通过测定显色的强度来判断样本中抗内因子抗体的存在与否及含量。
四、产品组成1、包被有内因子抗原的微孔板。
2、酶标记的二抗。
3、样本稀释液。
4、洗涤液。
5、显色液 A 和显色液 B。
6、终止液。
7、质控品（阳性质控和阴性质控）。
8、说明书。
五、适用仪器适用于具有 450nm 波长检测功能的酶标仪。
六、储存条件及有效期1、储存条件：试剂盒应在 2-8℃避光保存。
2、有效期：未开封试剂盒有效期为_____个月，开封后请在_____天内使用完毕。
七、样本要求1、样本类型：人血清。
2、样本采集：使用无菌采血针采集静脉血，置于无抗凝剂的采血管中，待血液自然凝固后，离心分离血清。
3、样本保存：采集后的血清样本应在 2-8℃保存不超过 7 天，如需长期保存应置于-20℃以下。
避免反复冻融。
八、检测步骤1、准备工作：将试剂盒从冰箱中取出，平衡至室温。
2、样本稀释：将待检血清用样本稀释液按一定比例稀释。
3、加样：分别向微孔板中加入稀释后的样本、阴性质控和阳性质控，每孔_____μl，轻轻振荡混匀。
4、温育：盖上封板膜，置于 37℃温育_____分钟。
5、洗涤：小心揭去封板膜，弃去孔内液体，用洗涤液洗涤_____次，每次浸泡_____秒，最后拍干。
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COX IV线粒体内参抗体，抗COX IV单抗，COX IV小鼠源单克隆抗体
Anti-COX IV Mouse Monoclonal Antibody （ 14Y2）
应用类型：WB（1:1000-1:5,000）
Fig.Western blot analysis (1:2,000) of COX IV expression in HepG2 (lane A), 293T (lane B), Rat Heart (lane C), Mouse Heart (lane D) and Mouse Muscle tissue Arabidopsis (lane E) with Anti-COX IV Mouse Monoclonal Antibody (14Y2).
免疫原：KLH偶联的COX IV部分多肽序列
来源宿主：小鼠
反应性：该COX IV线粒体内参抗体可识别人、小鼠、大鼠等种属的COX IV蛋白。
保存建议：在发货后能在-20℃保存1年。
为最大限度的避免损失，请在打开管盖之前融化抗体并离心。
我们建议使用前分装以避免反复冻融，分装后可在4℃保存1个月。
细胞色素c氧化酶(Cytochrome c oxidase，简称COX)是一种异源寡聚酶，通常含有1 3个亚基，定位于线粒体内膜，是线粒体呼吸链的酶复合物。
细胞色素c氧化酶中形成催化中心的3个最大的亚基由线粒体DNA编码，其余10个亚基包括COX IV由细胞核内的基因组DNA编码。
细胞色素c氧化酶(COX)活性缺陷和人类多种疾病相关。
COX IV抗体可用作线粒体蛋白上样量的内参抗体，其检测目标蛋白大小为16kD左右。
选择线粒体内参抗体注意事项
在Western Blotting中使用内参其实就是在WB过程中的另外用内参对应的抗体检测内参蛋白，这样在检测目的产物的同时可以检测内参的表达，由于内参在各组织和细胞中的表达相对恒定，借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。
此外使用内参可以作为空白对照，检测蛋白转膜情况是否完全、整个Western Blo t显色或者发光体系是否正常。
常用的细胞总蛋白质内参有GAPDH和细胞骨架蛋白β-Actin或β-Tubulin等。
对于一些植物的样本，则需要特别的植物Actin蛋白作为内参。
当实验样品中只是核蛋白，而不是细胞总蛋白提取液时，可以用组蛋白H（Histone H），或者增殖细胞核抗原（PCNA）等为核内参抗体。
而在一些特别的针对线粒体作为微环境的研究课题时，需要提取线粒体总蛋白并检测其中的目标蛋白含量，这时候常规的细胞总蛋白内参就不是很合适，我们推荐使用线粒体总蛋白的内参抗体，对于线粒体蛋白的检测，常用COX IV或VDAC1作为内参抗体，这里面COX IV又是被引用最多的线粒体内参。
COX IV的检测分子量大约在16kD左右，比较适合用于检测目标蛋白在较大的WB实验。