小鼠(Mouse)抗线粒体抗体II型(AMA-M2)-NEWA
抗线粒体抗体检测临床意义
抗线粒体抗体检测临床意义：免疫检验辅导由于抗M1抗体即抗心磷脂抗体，目前不列入抗线粒抗体中。
抗M2见于90%的PBC患者，常用作该病的重要实验室诊断指标，但AMA与PBC的病期、疾病严重程度、治疗效果均无相关性。
除PBC外，抗M2也见于慢性活动性肝炎（CAH）、HBsAg阴性的肝病。
抗M3AMA 见于吡唑酮（pyrazolone）系列药物诱发的假红斑狼疮（PLE）综合征患者；抗M4AMA也见于PBC；抗M9见于PBC早期；抗M5见于SLE、自身免疫性溶血性贫血；抗M6见于异丙烟肼（iproniazid，一种单胺氧化酶抑制药）诱导的肝炎医|学教育网整理；抗M7出现于一些原因不明的心肌病患者，它的靶抗原有器官特异性，存在于心肌细胞的线粒体中。
由于线粒体抗原成分复杂，对很多抗原的性质尚不了解，而原发性胆汁性肝硬化患者几乎都出现高效价抗M2AMA，因此，目前AMA（或抗M2AMA）测定主要用于PBC的诊断。
多克隆抗体的制备介绍大多数抗原是由大分子蛋白质组成，但只是抗原上有限部位的特殊分子结构能与其相应抗体结合，称此部位为抗原决定簇或表位。
一种天然抗原性物质（如细菌或其分泌的外毒素以及各种组织成分等）往往具有多种不同的抗原决定簇，而每一决定簇都可刺激机体一种抗体形成细胞产生一种特异性抗体医|学教育网整理。
在机体淋巴组织内可存在千百种抗体形成细胞（即B细胞），每种抗体形成细胞只识别其相应的抗原决定簇，当受抗原刺激后可增殖分化为一种细胞群，这种由单一细胞增殖形成的细胞群体可称之为细胞克隆（clone）。
同一克隆的细胞可合成和分泌在理化性质、分子结构、遗传标记以及生物学特性等方面都是完全相同的均一性抗体，亦可称之为单克隆抗体。
在早期传统的抗体制备方法是将一种天然抗原经各种途径免疫动物，由于抗原性物质具有多种抗原决定簇，故可刺激产生多种抗体形成细胞克隆，合成和分泌抗各种决定簇抗体分泌到血清或体液中，故在其血清中实际上是含多种抗体的混合物，称这种用体内免疫法所获得的免疫血清为多克隆抗体，也是第一代抗体。
体检人群血清M2型抗线粒体抗体流行率调查
∗基金项目:国家自然科学基金青年基金资助项目(编号81500463)作者单位:200080上海市上海交通大学附属第一人民医院消化科第一作者:曲颖,女,37岁,医学博士,主治医师㊂主要从事脂肪肝和肝纤维化的基础与临床研究㊂E-mail:levine4959@ 通讯作者:陆伦根,E-mail:lungenlu1965@ ㊃自身免疫性肝病㊃体检人群血清M2型抗线粒体抗体流行率调查∗曲颖,蔡晓波,张启迪,陆伦根㊀㊀ʌ摘要ɔ㊀目的㊀在健康体检人群中筛查原发性胆汁性胆管炎(PBC)的特异性抗体,即抗线粒体抗体(AMA)-M2,以了解其流行率㊂方法㊀2012年5月~2014年12月我院体检中心血清样本18515例,采用ELISA行AMA-M2定量检测,同时收集肝功能生化指标㊂结果㊀在筛查的18515名体检者中,245例(1.3%)血清AMA-M2阳性,男性97名,女性148名,男女比例约为1:1.5,46~55岁年龄段阳性比例率为28.6%;12名AMA-M2阳性者同时伴有血清ALP水平升高,符合中国PBC诊断和治疗共识的诊断标准;54例高滴度AMA-M2抗体(>150U/ml)者血清ALP为(92.8ʃ85.6U/L),GGT 水平为(84.3ʃ118.5U/L,显著高于191例低滴度组ʌ分别为(67.7ʃ38.3U/L)和(39.1ʃ61.8U/L),P<0.05ɔ㊂结论㊀健康体检人群血清AMA-M2抗体阳性并不少见,筛查AMA-M2抗体有助于早期识别PBC㊂㊀㊀ʌ关键词ɔ㊀原发性胆汁性胆管炎;抗线粒体抗体;筛查;诊断㊀㊀DOI:10.3969/j.issn.1672-5069.2022.02.013㊀㊀Prevalence of serum anti-mitochondrial antibody-M2antibody in health check-up individuals㊀Qu Ying,Cai Xiaobo, Zhang Qidi,et al.Department of Gastroenterology,Shanghai General Hospital,JiaoTong University School of Medicine,Shanghai 200080,China㊀㊀ʌAbstractɔ㊀Objective㊀The purpose of this study was to investigate the prevalence of serum anti-mitochondrial antibody-M2(AMA-M2)antibody in physical examination individuals.Methods㊀18515serum samples were collected from the Physical Examination Center,Shanghai General Hospital between May2012and December2014.Serum AMA-M2was quantitatively detected by ELISA,and blood biochemical parameters were assayed.Results㊀Among18515screened people,245persons (1.3%)were serum AMA-M2positive,of which97were men and148were women,with the ratio of men to women of about 1ʒ1.5,and the highest positive rate(28.6%)was found in46to55year old age group(n=70);serum alkaline phosphatase levels increased in12persons with serum AMA-M2positive,who met the diagnostic criteria of primary biliary cholangitis(PBC); serum ALP level in54persons with higher serum AMA-M2(>150U/ml)was(92.8ʃ85.6U/L),and serum GGT level was (84.3ʃ118.5U/L,significantly higher than[(67.7ʃ38.3U/L)and(39.1ʃ61.8U/L),respectively,P<0.05]in191 individuals with low serum AMA-M2.Conclusion㊀It is not uncommon that serum AMA-M2antibody is positive in healthy people,and early screening serum AMA-M2antibody is helpful for early diagnosis of PBC.㊀㊀ʌKey wordsɔ㊀Primary biliary cholangitis;Anti-mitochondrial antibody;Physical examination and screening;Diagnosis㊀㊀原发性胆汁性胆管炎(primary biliary cholangitis,PBC),又名原发性胆汁性肝硬化,是一种慢性肝内胆汁淤积性疾病,其发病与遗传背景和环境因素等相互作用导致的自身免疫反应有关㊂在临床前期可只表现为血清抗线粒体抗体(anti-mito-chondrial antibody,AMA)阳性,而无其他生化指标异常或临床症状[1]㊂早期诊断并尽早启动治疗可显著改变PBC患者的自然病程㊂因此,在健康人群筛查血清AMA尤为重要㊂AMA有9个亚型(M1~M9),其中AMA-M2对诊断PBC具有更高的敏感性和特异性,是最重要的亚型㊂AMA-M2亚型抗体靶抗原是线粒体内膜成分,可在患者出现临床症状㊁生化指标和组织学变化前几年甚至十几年即可检测出来[2]㊂本文分析了本院体检人群血清AMA-M2流行率,以早期诊断PBC㊂1㊀资料与方法1.1血清来源与检测㊀2012年5月~2014年12月上海交通大学附属第一人民医院体检中心留取的血清样本18515份,采用ELISA法检测血清AMA-M2. All Rights Reserved.(IgG,上海富莼科芯生物技术股份有限公司试剂和Thermo Multiskan MK3酶标仪);使用西门子AD-VIA2400型全自动生化分析仪检测血生化指标㊂1.2统计学处理㊀采用SPSS13.0软件进行统计学分析,计量资料以[M(P25~P75)]或(xʃs)表示,采用独立样本t检验或秩和检验,计数资料以%表示,采用卡方检验,P<0.05被认为差异具有统计学意义㊂2㊀结果2.1血清AMA-M2阳性者一般情况㊀在18515名体检者中,男女分别为8331名和10184名;年龄范围在15~80岁,平均年龄为(47.4ʃ3.2)岁㊂其中245例(1.3%)AMA-M2阳性㊂在AMA-M2阳性体检者中,男性97例,女性148例,男女比例约为1ʒ1.5㊂血清ALT升高25例,AST升高16例,GGT 升高50例,ALP升高12例(表1)㊂表1㊀245例血清AMA-M2阳性人群血清指标变化基本特征M P25~P75 AMA-M2(RU/ml)60.639.8~127.6 ALT(U/L)16.411.7~25.0 AST(U/L)19.015.5~23.5 GGT(U/L)24.715.2~42.5 ALP(U/L)60.050.0~75.0㊀㊀AMA-M2为0~25RU/ml2.2血清AMA-M2阳性者年龄分布情况㊀我们发现从15~79岁的各年龄段人群都有血清AMA-M2阳性者,阳性率自1.2%~28.6%不等,其中46~55岁年龄段阳性率最高,小于25岁和大于75岁人群阳性率较低㊂各个年龄段血清AMA-M2阳性率分布见表2㊂表2㊀不同年龄人群血清AMA-M2阳性率(%)比较年龄段(岁)例数AMA-M2阳性%女性AMA-M2阳性%男性AMA-M2阳性% 15~251212(4.9)88(3.3)44(1.6) 26~354242(17.1)2424(9.8)1818(7.3) 36~454646(18.8)2626(10.6)2020(8.2) 46~557070(28.6)4343(17.6)2727(11.0) 56~655151(20.8)3232(13.1)1919(7.7) 66~752121(8.6)1212(4.9)99(3.7)2.3不同血清AMA-M2阳性水平患者肝功能指标比较㊀将245例阳性者按照血清AMA-M2大于或小于150U/ml为界限分为低滴度和高滴度两组,结果发现血清AMA-M2水平大于150U/ml组血清GGT 和ALP水平显著高于小于150U/ml组(表3,P<0.05)㊂表3㊀不同血清AMA-M2水平人群肝功能指标(xʃs)比较AMA-M2例数ALT(U/L)AST(U/L)GGT(U/L)ALP(U/L)ɤ150U/ml19121.4ʃ18.223.5ʃ43.139.1ʃ61.867.7ʃ38.3 >150U/ml5427.7ʃ32.627.8ʃ20.784.3ʃ118.5①92.8ʃ85.6①㊀㊀与AMA-M2滴度ɤ150U/ml组比,①P<0.052.412例血清ALP升高患者情况㊀在245例AMA -M2阳性病例中,有12名体检者血清ALP水平升高(表4),虽然患者主诉均未出现明显的临床症状,但他们均符合PBC诊疗指南对PBC的诊断,其中8例伴随血清ALT升高,10例伴随血清AST升高㊂3㊀讨论与其他肝脏常见疾病比,PBC的总体患病率和发病率仍然较低,但是研究发现过去十几年间流行率却稳步上升,2018年纤维化肝病联合会报告了12年间PBC的患病率在23.9例/十万人,而女性患病率上升了72%(从33.5例/十万人上升到57.8例/十万人),而男性上升了114%(从7.7例/十万人上升到15.4例/十万人)[3-5]㊂Meta荟萃分析发现亚洲人群PBC总患病率为118.75例/百万人,以日本和中国最高(约为191.18例/百万人),而韩国最低(39.09例/百万人)㊂而PBC的发病率为每年8.55例/百万人,PBC患者进展为失代偿期㊁肝癌和死亡/肝移植的5a累积发生率分别为6.95%㊁1.54%和4.02%[6]㊂上海市通过对5011人的血清学调查,评估了中国人PBC的患病率㊂采用ELISA法对健康受. All Rights Reserved.表4㊀12例血清ALP 升高的AMA -M2阳性者血生化指标变化序号年龄(岁)性别AMA -M2(RU /ml)ALT(U /L)AST(U /L)GGT(U /L)ALP(U /L)166女60815.024.0119.0150.2266女37.123.458.165.3156.4355女474.070.850.5511.2160.3479女158.515.033.0192.0186.9556女>80075.058.0541.0197.5636男31.189.980.0366.3210.5715女330.316344.0169.5240.2825女33.479.9597.6407.4271.1937女122.095.075.8244.6297.41055男45.023.087.0522.3369.51143女>80078.664.2190.8379.41258女>80044.0106.0436.4515.8试者进行AMA -M2抗体检测,其中8例(0.16%)AMA -M2抗体阳性,其中女性7名,男性1名㊂年龄在40~74岁,4名伴随ALP 和GGT 升高,即使没有PBC 症状,仍有3名符合美国肝病协会推荐的PBC 的诊断标准,认为无症状PBC 在中国可能比想象得要普遍得多[7]㊂2010年报道对南方地区成人健康体检血清自身特异性抗体的检测,应用间接免疫荧光法对8126例成人(平均年龄44ʃ15岁,女性48%)进行AMA 和ANA 检测㊂采用ELISA /免疫印迹法检测AMA -M2㊁抗sp100和抗gp210㊂在8126例患者中35例为AMA 阳性,79例为ANA 阳性㊂在自身抗体阳性的39人中,有14人存在胆汁淤积性肝功能指标异常㊂半年后确诊4例,其中女性3例,男性1例,认为中国南方参加年度健康体检的成年人中,PBC 点患病率为492例/100万(95%置信区间(confidence interval,CI):128~1093),而在40岁以上女性PBC 点患病率为1558例/100万(95%CI:294~3815),这一发现与其他区域报告的患病率相似[8]㊂PBC 最常影响中年女性,尽管最近一些研究也发现男性的患病率正在上升[9]㊂PBC 女性占优势仍然无法解释,但据推测,与疾病性别和年龄分布不平衡的表观遗传现象并不明显,PBC 很少在儿童中发病㊂根据近期流行病学调查结果比较,近几十年来,诊断方面出现老龄化和轻症化的趋势,可能跟常规检测增加,医生对疾病意识程度提高以及环境因素相关[10]㊂我们在临床研究中发现18515名体检者中,一共检测到245例AMA -M2阳性者㊂根据中国PBC 诊断和治疗共识(2015年)的诊断标准,符合下列三个标准中的两项即可诊断为PBC(A1):①反映胆汁淤积的生物化学指标如ALP 升高;②血清AMA 或AMA -M2阳性;③肝脏组织病理学符合PBC㊂共有12例可诊断为PBC,女性10人,男性2人,年龄在15~79岁,推测患病率在540/100万,最小年龄和Dahlan 报道一致[11]㊂年龄分布当中46~55岁年龄段AMA -M2阳性比例最高,与姚光弼教授系统概述中国内地PBC 患者的临床特征中年龄为42~56.2岁一致[12]㊂诊断PBC 的标志是血清AMA 阳性,靶点是丙酮酸脱氢酶复合物E2亚基(E2-subunit of the pyruvate dehydrogenase complex,PDC -E2),90%PBC 患者可检测到AMA 阳性[13,14]㊂尽管AMA 阳性在无法解释的肝功能异常疾病中对诊断PBC 是强有力的指标,但也必须和异常肝功能指标结合一起才能诊断PBC㊂早期生化标志物包括血清ALP 和GGT,也可有结合胆红素升高㊂慢性胆汁淤积肝病通常无症状,历时数月或数年,可通过升高的ALP 和/或GGT 来识别[15]㊂我们分析了AMA -M2阳性的病例中,按照滴度不同,发现高滴度组中ALP 和GGT 升高的程度与低滴度组有显著的区别,而ALT 和AST 则无统计学差异,在早期筛查PBC 中尤其要注意ALP 和GGT 升高㊂AMA 检测并非只针对PBC 人群,低滴度或一过性的AMA -M2阳性也可以在急性肝功能衰竭[16]㊁药物性肝损伤[17]和其他自身免疫性疾病中出现[18]㊂但是,在无法解释的慢性胆汁淤. All Rights Reserved.积症中对PBC的诊断有高度敏感性和特异性㊂临床实践中新检测的AMA阳性中将近有一半不会导致PBC的诊断,六分之一的AMA以及正常的ALP人群五年后会发展成PBC[19]㊂前瞻性研究发现生化正常的AMA阳性的个体随着时间推移,可出现肝纤维化评分和体液自身免疫反应的增加,提示一定数量无症状的AMA抗体检测阳性的人会有高风险发展为PBC[20]㊂单凭AMA阳性不足以诊断PBC㊂欧洲肝病学会EASL(2017年)建议随访血清AMA 阳性的正常人,每年进行一次生化检查,进行肝病的再评估㊂对于PBC特异性抗体阴性,或者怀疑重叠综合征或合并其他疾病可考虑肝活组织检查,以明确病因和疾病分期㊂大部分最初诊断的PBC患者无症状,61.9%确诊人群会在随后五年之内出现瘙痒㊁乏力㊂PBC患者从诊断之日起的总生存期约为9年,男女相似,而通过标准化死亡率评估,PBC患者的死亡率较一般人群高3倍,这就意味着早期PBC的诊断也具有重要的预后预测意义㊂有症状的PBC患者平均生存时间只有5~8年,失代偿期肝硬化患者平均生存时间仅仅为2年㊂早期应用药物治疗可以显著改变PBC的自然病史,对药物治疗有应答的PBC患者的生物化学指标明显改善,生存期与健康对照组相似㊂因此,早期筛查,早期识别,早期诊断尤为重要,健康体检人群中对AMA-M2的检测,结合肝功能指标对于早期识别PBC患者具有临床实际意义㊂ʌ参考文献ɔ[1]中华医学会肝病学分会,中华医学会消化病学分会,中华医学会感染病学分会.原发性胆汁性肝硬化(又名原发性胆汁性胆管炎)诊断和治疗共识(2015).中华肝脏病杂志,2016,24(1):5 -13.[2]Terziroli Beretta-Piccoli B,Mieli-Vergani G,Vergani D.Theclinical usage and definition of autoantibodies in immune-mediated liver disease:A comprehensive overview.J Autoimmun,2018,95: 144-158.[3]Tanaka A,Leung PS,Gershwin ME.Environmental basis ofprimary biliary cholangitis.Exp Biol Med(Maywood),2018,243(2):184-189.[4]Joshita S,Umemura T,Tanaka E,et al.Genetics and epigeneticsin the pathogenesis of primary biliary cholangitis.Clin J Gastroen-terol,2018,11(1):11-18.[5]Galoosian A,Hanlon C,Zhang J,et al.Clinical updates in primarybiliary cholangitis:trends,epidemiology,diagnostics,and new therapeutic approaches.J Clin Transl Hepatol,2020,8(1):49 -60.[6]Zeng N,Duan W,Chen S,et al.Epidemiology and clinical courseof primary biliary cholangitis in the Asia-Pacific region:a systematic review and meta-analysis.Hepatol Int,2019,13(6): 788-799.[7]Jiang XH,Zhong RQ,Fan XY,et al.Characterization of M2anti-bodies in asymptomatic Chinese population.World J Gastroenterol, 2003,9(9):2128-2131.[8]Liu H,Liu Y,Wang L,et al.Prevalence of primary biliarycirrhosis in adults referring hospital for annual health check-up in Southern China.BMC Gastroenterol,2010,10:100. 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四种方法检测抗线粒体抗体M2亚型性能比较
四种方法检测抗线粒体抗体M ２亚型性能比较岳㊀燕１,王玥文２,白㊀婕１,杨本善１,何小魁１,张明珍３,郑宇淼３,李宜桐３,金㊀文３,刘向祎１(１．首都医科大学附属北京同仁医院检验科,北京１００７３０;２．香港大学李嘉诚医学院,香港９９９０７７;３．首都医科大学,北京１０００６９)D O I :１０．１１７４８/b j m y ．i s s n ．１００６－１７０３．２０２１．０５．０２９收稿日期:２０２１Ｇ２Ｇ２５;修回日期:２０２１Ｇ０３Ｇ１２基金项目:首都医科大学本科生科研创新项目(编号:X S K Y ２０２０１６９)通讯作者:刘向祎.摘要:目的㊀探讨抗线粒体抗体M ２亚型不同检测方法的分析性能㊁相关性及其对原发性胆汁性胆管炎的诊断价值.方法㊀选择２０１０年至２０１９年于北京同仁医院就诊的原发性胆汁性胆管炎(P B C )患者１０６例作为P B C 组,同期其他自身免疫病组患者１２０例,１００例体检健康人作为正常对照组.用免疫印迹㊁间接免疫荧光㊁酶联免疫吸附试验和胶体金４种方法分别测定三组的抗线粒体抗体M ２亚型水平,比较不同方法的分析性能㊁相关性及诊断价值.结果㊀灵敏度从高到低依次是酶联免疫吸附试验(９６．２％,１０２/１０６)㊁免疫印迹(８９．６％,９５/１０６)㊁胶体金(８７．７％,９３/１０６)㊁间接免疫荧光法(７３．６％,７８/１０６).特异性从高到低依次是间接免疫荧光(９８．２％,２１６/２２０)㊁酶联免疫吸附试验(９６．８％,２１３/２２０)㊁免疫印迹(８７．７％,１９３/２２０)㊁胶体金法(８５．５％,１８８/２２０).免疫印迹与胶体金法之间检出率差异无统计学意义(P ＝０．７３６).酶联免疫吸附试验与免疫印迹㊁酶联免疫吸附试验与间接免疫荧光㊁免疫印迹与胶体金法之间一致性较好(K a p p a ＞０．７５).结论㊀酶联免疫吸附试验是目前临床实验室检测抗线粒体抗体M ２亚型的最佳方法.关键词:抗线粒体抗体M ２亚型;㊀胶体金法;㊀免疫印迹法;㊀间接免疫荧光法;㊀酶联免疫吸附试验中图分类号:R ３９２Ｇ３３㊀㊀文献标识码:AAC o m p a r a t i v e S t u d y o f F o u rM e t h o d s f o r t h eD e t e c t i o n o fA n t i ＧM i t o c h o n d r i a lA n t i b o d y M２Y U E Y a n １,WA N G Y u e w e n ２,B A I J i e １,Y A N G B e n s h a n １,H E X i a o k u i１,Z H A N G M i n g z h e n ３,Z H E N G Y u m i a o ３,L IY i t o n g ３,J I N W e n ３,L I U X i a n g yi １(１．D e p a r t m e n t o fC l i n i c a l L a b o r a t o r y ,B e i j i n g T o n g r e nH o s p i t a l ,C a p i t a lM e d i c a lU n i v e r s i t y ,B e i j i n g １００７３０,C h i n a ;２．D e p a r t m e n t o f S u r g e r y ,L iK aS h i n g F a c u l t y o fM e d i c i n e ,T h eU n i v e r s i t y o fH o n g K o n g ,H o n g K o n g ９９９０７７,C h i n a ;３．C a p i t a lM e d i c a lU n i v e r s i t y ,B e i j i n g １０００６９,C h i n a )A b s t r a c t :O b j e c t i v e I n t h i s p a p e r ,w e e v a l u a t e d t h e a n a l y t i c a l pe rf o r m a n c e a sw e l l a s t h e c o r r e l a t i o no f d i f f e r e n t d e t e c t i o nm e t h o d s f o r a n t i Ｇm i t o c h o n d r i a l a n t i b o d y M ２s u b t y p ea n d i t sd i ag n o s t i cv a l u e f o r p r i m a r y b i l i a r y ch o l a n gi t i s ．M e t h o d s １０６p a t i e n t sw i t h p r i m a r y b i l i a r y c h o l a n g i t i s (P B C ),１２０p a t i e n t s w i t ho t h e r a u t o i m m u n ed i s e a s ea n d １００h e a l t h y c o n t r o l sw h ou n d e r w e n t p h ys i c a l e x a m i n a t i o nf r o m ２０１０t o ２０１９a tT o n g r e n H o s p i t a l (B e i j i n g )w e r ec o l l e c t e da sr e s e a r c ho b j e c t s ．A m o n g th e s et h r e e g r o u p s ,t h es e r u m a n t i ＧM ２a n t i b o d y l e v e l s w e r ed e t e r m i n e d b y w e s t e r n b l o t t i n g (WB ),i n d i r e c t i m m u n o Ｇf l u o r e s c e n c e (I I F ),e n z y m e Ｇl i n k e di m m u n o Ｇs o r b e n ta s s a y (E L I S A )a n d c o l l o i d a l g o l d c o l l o i di m m u n o c h r o m a t o g r a p h y a s s a y (C G C I A ),r e s p e c t i v e l y a n d t h e a n a l y t i c a l p e r f o r m a n c e ,c o r r e l a t i o na n dd i a g n o s t i cv a l u ew e r ea n a l y z e d t oc o m pa r e t h e p e r f o r m a n c e so f t h e s e f o u rm e t h o d s ．R e s u l t s A c c o r d i n g t os t a t i s t i c a l a n a l y s i s ,t h es e n s i t i v i t y o fE L I S A w a s t h e l a r g e s ta m o n g t h e s ef o u r m e t h o d s (９６．２％,１０２/１０６),f o l l o w e db y W B (８９．６％,９５/１０６),C G C I A (８７．７％,９３/１０６)a n dI I F (７３．６％,７８/１０６)．I na d d i t i o n ,I I Fh a d t h eh i g h e s t s p ec i f i c i t y (９８．２％,２１６/２２０),f o l l o w e db y EL I S A (９６．８％,２１３/２２０),W B (８７．７％,１９３/２２０)a n d C G C I A (８５．５％,１８８/２２０)．T h e r e w a sn os i gn i f i c a n t ３５８标记免疫分析与临床㊀２０２１年５月第２８卷第５期d i f fe r e n c e i n t h e d e t e c t i o n r a t e b e t w e e n i m m u n o b l o t t i n g a n d c o l l o i d a l g o l dm e t h o d(P＝０．７３６)．T h e r e s u l tm e a s u r e db y E L I S Aa n d W B,E L I S Aa n d I I F,WBa n dC G C I A w e r eh i g h l y c o n s i s t e n t(K a p p a v a l u e＞０．７５)．C o n c l u s i o n T h ec u r r e n t s t u d y s u g g e s t s t h a tE L I S Ai s t h eb e s tm e t h o dt od e t e c t t h e M２s u b t y p eof a n t iＧm i t o c h o n d r i a l a n t i b o d i e s(AMAＧM２)i nc l i n i c a l l a b o r a t o r i e s．K e y w o r d s:A n t iＧM２a n t i b o d y;㊀C G C I A;㊀W B;㊀I I F;㊀E L I S A㊀㊀原发性胆汁性胆管炎(p r i m a r y b i l i a r y c h o l a n g i t i s, P B C)是一种慢性胆汁淤积性肝病,其特征是进行性㊁非化脓性㊁破坏性小胆管炎,最终导致纤维化和潜在的合并肝硬化.该病男女比例为１ʒ９,以中老年女性多见[１].P B C发病与多种基因的多态性相关,研究[２Ｇ４]显示H L AＧⅡ基因与P B C发病具有强相关性,尤其是H L AＧD R B１㊁H L AＧD Q A１㊁H L AＧD Q B１.P B C进展经历４期,临床前期表现为抗线粒体抗体(a n t iＧm i t o c h o n d r i a l a n t i b o d y,AMA)阳性㊁碱性磷酸酶A L P正常;无症状期虽未出现明显症状但A L P逐渐升高;症状期出现瘙痒㊁乏力等症状;终末期出现腹水㊁消化道出血㊁肝性脑病等并发症[５].随访发现近５０％P B C早期患者在５年内会进展至中期或终末期.早期应用熊去氧胆酸治疗可改善高胆红素血症㊁延缓肝硬化.该病发展至终末期,则药物疗效甚微,唯一有效的治疗是肝移植[６].尽早诊断㊁及早给药能明显改善预后.㊀㊀２０１５年原发性胆汁性胆管炎诊断和治疗共识提出免疫学检查中AMA阳性是最具诊断价值的实验室检查.AMA分为９个亚型M１ＧM９,其中以M２最为重要,可在无症状期前被检测到.目前国内临床实验室检测AMAＧM２亚型的方法较多.本研究利用P B C组㊁其他自身免疫病组和正常对照组的临床样本,评价间接免疫荧光(i n d i r e c ti mm u n oＧf l u o r e s c e n c e,I I F)㊁胶体金(c o l l o i d a l g o l d c o l l o i d i mm u n o c h r o m a t o g r a p h y a s s a y,C G C I A)㊁酶联免疫吸附试验(e n z y m eＧl i n k e di mm u n oＧs o r b e n ta s s a y, E L I S A)和免疫印迹(W e s t e r nb l o t t i n g,W B)这４种方法检测AMAＧM２的分析性能㊁相关性及其对原发性胆汁性胆管炎的诊断价值.材料和方法㊀㊀１㊀研究对象㊀㊀２０１０年至２０１９年来北京同仁医院就诊的P B C 患者１０６例,其中男性３１例,女性７５例,年龄１７~７８岁,平均年龄４３．２岁.根据２０１８年美国肝病学会(A A S L D),P B C的诊断标准包括以下３条[７Ｇ８]:①存在６个月以上A L P升高的胆汁淤积的生化证据;②AMA阳性;③肝脏组织学与P B C相容,存在非化脓性破坏性胆管炎以及小叶间胆管损伤表现.以上３条标准中至少２条存在即可诊断P B C. AMA阴性者,需进行肝组织病理学检查确定诊断[９].另外纳入其他自身免疫病组１２０例,包括原发性干燥综合征５０例㊁自身免疫性肝炎２７例㊁系统性红斑狼疮３１例㊁混合性结缔组织病１２例.另选取１００例健康体检者作为正常对照组.㊀㊀２㊀主要试剂与仪器㊀㊀２．１㊀主要试剂㊀C G C I A法使用试剂购自上海科新生物技术股份有限公司抗线粒体抗体M２亚型检测试剂盒.W B法使用德国欧蒙医学实验诊断有限公司抗核抗体谱检测试剂盒.I I F法采用德国欧蒙医学实验诊断有限公司抗线粒体抗体M２亚型检测试剂盒.E L I S A采用德国欧蒙医学实验诊断有限公司抗线粒体抗体M２亚型测定用试剂盒.㊀㊀２．２㊀主要仪器㊀德国Z e i s s公司L a b．A１荧光显微镜;瑞士T E C A N S u n r i s e酶标仪;德国欧蒙印迹法自动操作仪.㊀㊀３㊀方法㊀㊀P B C组㊁其他自身免疫病组和正常对照组均要求空腹采取静脉血５m L,３０００r/m i n离心５m i n,留取血清冻存于－８０ħ冰箱待检.每年取出收集的待测血清,平衡至室温.同时用４种方法测定AMAＧM２亚型,并记录数据.㊀㊀E L I S A方法测定AMAＧM２:将１０μL待测血清用样本缓冲液１m L进行１ʒ１００稀释.分别将１００μL３个不同浓度的标准品(C１~C３浓度分别为２００㊁２０㊁２R U/m L)㊁阳性对照㊁阴性对照或稀释后的样本,注入相应微孔,室温(１８~２５ħ)温育３０m i n.用稀释后的清洗缓冲液清洗３次,每次４５０μL.滴加１００μL酶结合物至每一微孔,室温温育３０m i n.倒掉微孔板内液体,重复上述清洗步骤.每孔滴加１００μL底物溶液,室温避光温育１５m i n.滴加１００μL终止液至每一微孔.４５０n m比色,参考波长６２０~６５０n m,加完终止液后３０m i n之内比色.以C１~C３标准血清的浓度为横坐标㊁吸光度为纵坐４５８L a b e l e d I mm u n o a s s a y s&C l i n M e d,M a y．２０２１,V o l．２８,N o．５标作标准曲线,并根据标准曲线点对点求出患者血清中AMAＧM２的浓度.以２０R U/m L作为C u tＧo f f值,ȡ２０R U/m L为阳性.㊀㊀C G C I A法测定AMAＧM２:直接将血清滴加在金标板上,５m i n后根据T线颜色判读实验结果.T 线出现着色均匀和清晰可见的颜色反应时,结果判为阳性.㊀㊀W B法测定AMAＧM２:将１５μL待测血清标本用标本缓冲液１．５m L进行１ʒ１００稀释.取出实验膜条平衡至室温.将膜条上有编号的一面朝上放入室温育槽中.预处理:每槽中加入１．５m L标本缓冲液,室温条件下在摇床上震荡５m i n.吸去槽内液体.血清温育:温育槽中分别加入１．５m L已稀释血清.于室温在摇床上震荡３０m i n.吸去槽内液体.清洗:在摇床上用１．５m L清洗缓冲液清洗膜条３次,每次５m i n.酶结合物温育:在温育槽中加入１．５m L 已稀释的碱性磷酸酶标记的羊抗人I g G,室温在摇床上温育３０m i n.清洗:重复上述清洗步骤.在温育槽中分别加入１．５m L底物溶液,于室温在摇床上温育１０m i n.将实验膜条放置在结果判定模板中,风干后判断结果.在相应抗原线处出现明显的蓝紫色条带,结果判为阳性.抗原带着色的深浅与相应抗体的滴度相关.㊀㊀I I F法测定AMAＧM２:将１０μL待检血清样本用９９０μLP B S吐温缓冲液进行１ʒ９９稀释.加样板每一反应区分别加人２５μL稀释后的血清样本.将生物载片有生物薄片的一面朝下,盖在加样板的凹槽里.室温温育３０m i n.用P B S吐温缓冲液短暂冲洗载片后,将生物载片浸入装有P B S吐温缓冲液的洗杯中,浸泡５m i n.将２０μL F I T C标记的抗人I g A GM加至洁净加样板的反应区上.室温温育３０m i n,避免阳光直射载片.如上述步骤清洗浸泡.封片,荧光显微镜下进行结果判读.滴度１ʒ１００及以上为阳性.大鼠肾是确认AMA的标准基质.近端肾小管和远端肾小管细胞胞浆显示明显颗粒状荧光,肾小球显示微弱荧光.阳性对照血清必须显示相同的特异性荧光模式.在刷状缘出现的荧光不作为判断依据.如果AMAＧM２亚型抗体阳性,在包被有M２抗原的生物薄片上出现点状荧光.㊀㊀４㊀统计学处理㊀㊀本研究数据采用S P S S２５．０软件进行统计学分析.用例数和百分比描述计数资料;用F i s h e r精密概率进行样本之间率的比较.４种方法检测结果采用配对χ２检验;采用K a p p a检验对不同方法的一致性进行分析.一致性强度的判断:当K a p p a＜０．４,一致性强度较差;０．４ɤK a p p a＜０．７５,两者一致性一般;K a p p aȡ０．７５一致性较好.所有统计学检验均以P＜０．０５为差异有统计学意义.结㊀㊀果㊀㊀１㊀P B C组㊁疾病对照组㊁健康对照组A M AＧM２亚型检测结果㊀㊀４种方法检测P B C组㊁其他自身免疫病组㊁正常对照组血清中的AMAＧM２亚型,结果见表１.P B C 组以E L I S A法阳性检出率最高(９６．２％),其次为W B法(８９．６％),C G C I A法(８７．７％),阳性检出率最低的是I I F法(７３．６％).其他自身免疫病组和正常对照组４种方法AMAＧM２检出率均显著低于P B C组.表１㊀不同分组AMAＧM２亚型阳性检出率[％(n)]组别W B法I I F法E L I S A法C G C I A法P B C组８９．６(９５)７３．６(７８)９６．２(１０２)８７．７(９３)其他自身免疫病组１９．２(２３)２．５(３)４．２(５)２２．５(２７)正常对照组４．０(４)１．０(１)２．０(２)５．０(５)㊀㊀㊀注:括号内数字为检测阳性例数㊀㊀２㊀E L I S A法㊁W B法㊁C G C I A法和I I F法的分析性能比较㊀㊀以P B C临床诊断为标准,分别计算４种方法的灵敏度㊁特异性㊁阳性预测值㊁阴性预测值㊁阳性似然比㊁阴性似然比等指标,对其分析性能进行评价.结果见表２.灵敏度最高的为是E L I S A(９６．２％,１０２/１０６),其次为W B法(８９．６％,９５/１０６)㊁C G C I A法(８７．７％,９３/１０６)㊁I I F法(７３．６％,７８/１０６).特异性从高到低依次是I I F法(９８．２％,２１６/２２０)㊁E L I S A 法(９６．８％,２１３/２２０)㊁W B法(８７．７％,１９３/２２０)㊁C G C I A法(８５．５％,１８８/２２０).５５８标记免疫分析与临床㊀２０２１年５月第２８卷第５期表２㊀４种方法测定AMA ＧM ２亚型分析性能比较方法临床诊断＋－灵敏度(％)特异性(％)阳性预测值阴性预测值阳性似然比阴性似然比W B ＋９５２７８９．６８７．７０．７８０．９５７．３００．１２－１１１９３I I F ＋７８４７３．６９８．２０．９５０．８９４０．４７０．２７－２８２１６E L I S A ＋１０２７９６．２９６．８０．９４０．９８３０．２４０．０４－４２１３C G C I A＋９３３２８７．７８５．５０．７４０．９４６．０３０．１４－１３１８８㊀㊀３㊀４种检测方法的一致性与相关性分析㊀㊀将４种方法测得的数据进行配对χ２检验,结果显示,W B 法与E L I S A 法㊁I I F 法与E L I S A 法㊁C G C I A 法与E L I S A 法㊁I I F 法与C G C I A 法㊁W B 法与I I F 法之间检测结果差异均有统计学意义(P ＜０．０５).C G C I A 法与W B 法之间差异无统计学意义(P ＝０．７３６).同时对测得的结果进行一致性K a p pa 检验,结果显示:C G C I A 法与E L I S A 法㊁I I F 法与C G C I A 法㊁W B 法与I I F 法之间一致性一般(０．４ɤK a p pa ＜０．７５).W B 法与E L I S A 法㊁I I F 与E L I S A 法㊁C G C I A 法与W B 法之间一致较好(K a p pa＞０．７５).表３㊀４种方法检测AMA ＧM ２亚型一致性分析＋㊀－方法W B 法I I F 法C G C I A 法＋－＋－＋－E L I S A 法＋９７１２７９３０９５１４－２５１９２３２１４３０１８７P 值０．０４７＜０．０１０．０２３K a p p a ０．７５２０．７５８０．７０７方法I I F 法C G C I A 法＋－＋－方法C G C I A 法＋－W B 法＋８０４２１０６１６I I F 法＋８１１－２２０２１９１８５－４４２００P 值＜０．０１０．７３６P 值＜０．０１K a p pa ０．６９２０．７７２K a p pa ０．６８８㊀㊀C G C I A 法与W B 法为定性检测方法,I I F 法为半定量检测方法,E L I S A 法为定量检测方法.对I I F 法㊁E L I S A 法检测结果的相关性进行分析,结果显示两种方法检测AMA ＧM ２亚型水平呈正相关,即I I F 滴度越高,E L I S A 法测得的水平越高(图１).图１㊀E L I S A 法与I I F 法的相关性讨㊀㊀论㊀㊀AMA 是针对线粒体内膜脂蛋白成分的自身抗体,其抗原决定簇存在于肝㊁肾组织细胞的线粒体内膜中,其靶抗原成分复杂,可分为M １~M ９共９个亚型,其中AMA ＧM ２为P B C 特异性抗体[１０Ｇ１１].存在于线粒体内膜上的２Ｇ含氧酸脱氢酶复合体(２ＧO A D C )是AMA ＧM ２针对的靶抗原,包括丙酮酸脱氢酶复合体(P D C )㊁αＧ酮戊二酸脱氢酶复合体(O G D C )和支链二酮酸脱氢酶复合体(B C O A D C ).P D C 又分为E １α亚基㊁E １ß亚基和E ２亚基.其中P D C ＧE ２亚基硫辛酰区域的特定氨基酸残基是抗体识别的关键部位[１２Ｇ１３].９０％~９５％的P B C 患者针对P D C ＧE ２发生阳性反应;５０％~８０％的P B C 患者对B C O A D C ＧE ２发生阳性反应;O G D C ＧE 的抗体阳性率则为２０％~６０％.P D C ＧE ２或B C O A D C ＧE ２㊁O G D C ＧE ２㊁P D C ＧE ２三者的融合重组蛋白M ２Ｇ３E 均可作为AMA ＧM ２试剂盒采用的靶抗原[１３Ｇ１５].检测AMA ＧM ２的方法较多,有C G C I A 法㊁E L I S A 法㊁６５８L a b e l e d I mm u n o a s s a y s&C l i n M e d ,M a y．２０２１,V o l ．２８,N o ．５W B法㊁I I F法等,目前尚无对该指标方法学选择的统一意见,故实验室对AMAＧM２检测方法的选择上存在一定的困扰.㊀㊀本研究通过对上述４种方法进行分析性能比较发现,I I F法特异性和阳性预测值最高,其次是E L I S A法㊁W B法和C G C I A法;E L I S A法灵敏度和阴性预测值最高,其次是W B法㊁C G C I A法和I I F 法,这可能是由于检测体系中使用不同的抗原所致.I I F法采用的M２抗原是线粒体内膜上３个酶复合体的组份之一.W B法和C G C I A法检测的M２抗原是提取纯化的P D C.E L I S A微孔板包被的抗原是从牛心分离得到的P D C和重组融合蛋白B P O的混合物.B P O在E．c o l i中表达,由B C O A D CＧE２㊁P D CＧE２和O G D CＧE２的抗原位点共同组成,故称为３E.从对比的情况看,３E抗原作为３种抗原融合表达的重组蛋白,提高了E L I S A法检测的灵敏度.I I F法采用天然抗原,由于结构相对更完整,因此检测的特异性优于其他方法.W B法和C G C I A法检测的M２抗原成分相同,两者检出率无显著性差异且一致性较好.㊀㊀E L I S A法灵敏度为９６．２％,特异性为９６．８％,并可对A M AＧM２进行定量检测,综合评价是检测A M AＧM２首选方法.E L I S A法适合大样本量操作,并可定量检测,但样本量少时,试剂成本偏高,不适合中小医院开展.W B法灵敏度㊁特异性较好,与E L I S A 法一致性也较好,且W B法操作方便㊁适合小样本检测,是中小实验室采用的最优方法.I I F法特异性最高为９８．２％,阳性预测值为０．９５;但其灵敏度为７３．６％,明显低于其他３种方法,容易导致漏诊.此外,I I F法检测需由具备专业能力的检验人员使用荧光显微镜才能准确分析和判读,结果易受主观因素影响.C G C I A法灵敏度８７．７％㊁特异性８５．５％,无突出优势,但该法操作简便快捷,仅一步操作,５m i n出结果.无需任何实验设备,对人员技术㊁标本量要求低,能够满足快速筛查的检测要求,且与W B法相关性及一致性较好,适合基层实验室开展.㊀㊀综上所述,E L I S A法是目前较为准确灵敏的AMAＧM２测定方法.W B法与E L I S A法相关性及一致性较好,是临床实验室样本量较少时替代E L I S A法检测AMAＧM２的最佳方法.根据标本量选择E L I S A法或W B法检测AMAＧM２,对于P B C 具有重要的辅助诊断价值.I I F法特异性最高,但灵敏度低,可结合E L I S A法或W B法提高检测的性能.C G C I A法操作非常简便,对人员㊁设备要求最低,适合基层实验室开展.对AMAＧM２亚型的检测方法进行选择时,应结合临床诊断的实际需求㊁检测方法的分析性能㊁实验室具备的条件进行综合判断.参考文献[１]T E R Z I R O L B E R E T T AＧP I C C O L I B,M I E L IＧV E R G A N I G, V E R G A N I D,e t a l．T h e c h a l l e n g e s o f p r i m a r y b i l i a r y c h o l a n g i t i s:W h a ti sn e w a n d w h a tn e e d st o b ed o n e[J]．JA u t o i mm u n,２０１９,１０５:１０２３２８．[２]Q I U F,T A N G R,Z U O X,e t a l．A g e n o m eＧw i d ea s s o c i a t i o ns t u d y i d e n t i f i e s s i xn o v e l r i s k l o c i f o r p r i m a r y b i l i a r y c h o l a n g i t i s[J]．N a tC o m m u n,２０１７,８:１４８２８．[３]C O R D E L L HJ,HA N Y,M E L L S G F,e t a l．I n t e r n a t i o n a l g e n o m eＧw i d e m e t aＧa n a l y s i s i d e n t i f i e s n e w p r i m a r y b i l i a r y c i r r h o s i s r i s kl o c i a n dt a r g e t a b l e p a t h o g e n i c p a t h w a y s[J]．N a tC o mm u n,２０１５,６:８０１９．[４]马雄,王绮夏．自身免疫性肝病的研究现状[J]．中华传染病杂志,２０２０,３８(８):４６５Ｇ４６７．[５]靳睿,王晓晓,王力华,等．抗线粒体抗体与原发性胆汁性胆管炎临床血清学和肝硬化指标的相关性[J]．中华消化杂志,２０２０,４０(１):１６Ｇ２２．[６]张煊,林进,唐福林等．原发胆汁性肝硬化的临床及病理分析[J]．中华风湿病学杂志,２００１,５:９８Ｇ１０３．[７]E u r o p e a nA s s o c i a t i o n f o r t h eS t u d y o f t h eL i v e r．E A S LC l i n i c a l P r a c t i c eG u i d e l i n e s:T h e d i a g n o s i s a n dm a n a g e m e n t o f p a t i e n t s w i t h p r i m a r y b i l i a r y c h o l a n g i t i s[J]．J H e p a t o l,２０１７,６７(１):１４５Ｇ１７２．[８]L I N D O RKD,B OW L U SCL,B O Y E RJ,e t a l．P r i m a r y b i l i a r y c h o l a n g i t i s:２０１８p r a c t i c e g u i d a n c e f r o m t h e A m e r i c a n a s s o c i a t i o nf o rt h es t u d y o fl i v e r d i s e a s e s[J]．H e p a t o l o g y,２０１８,６９(１):３９４Ｇ４１９．[９]中华医学会肝病学分会,中华医学会消化病学分会,中华医学会感染病学分会．原发性胆汁性肝硬化(又名原发性胆汁性胆管炎)诊断和治疗共识(２０１５)[J]．中华肝脏病杂志,２０１６,２４(１):５Ｇ１３．[１０]K A P L A N M M,G E R S HW I N M E．P r i m a r y b i l i a r y c i r r h o s i s[J]．NE n g l JM e d,２００５,３５３(１２):１２６１Ｇ１２７３．[１１]M I Y A K AWA H,K AWA G U C H I N,K I K U C H I K,e t a l．D e f i n i t i o no fa n t i g e ns p e c i f i c i t y f o ra n t i m i t o c h o n d r i a l p r o t e i n s d e t e c t e d b y W e s t e r n b l o t t i n g u s i n g n a t i v em i t o c h o n d r i a l p r o t e i n s i n p r i m a r y b i l i a r y c i r r h o s i s[J]．H e p a t o lR e s,２００１,２１(２):１０１Ｇ１０７．[１２]WA N GJ J,B U D AMA G U N T A M S,V O S S J C,e t a l．A n t i m i t o c h o n d r i a l a n t i b o d y r e c o g n i t i o na n ds t r u c t u r a l i n t e g r i t y o ft h ei n n e rl i p o y l d o m a i n o ft h e E２s u b u n i t o f p y r u v a t e d e h y d r o g e n a s ec o m p l e x[J]．J I mm u n o l,２０１３,１９１(５):２１２６Ｇ２１３３．[１３]刘向东,王婵,吴秋媛,等．原发性胆汁性胆管炎的自身抗体标志物研究进展[J]．临床检验杂志,２０１８,３６(１０):７２１Ｇ７２４．[１４]孙丽梅,闫惠平,娄金丽,等．抗线粒体抗体M２亚型在药物性肝损伤与原发性胆汁性胆管炎患者中血清学特点分析[J]．中华肝脏病杂志,２０１９,２７(４):２９８Ｇ３０３．[１５]MA L G O R Z A T A M I L K I E W I C Z,L L O R E NÇC A B A L L E RÍA,D A N IE L S S MY K,e t a l．P r e d i c t i n g a n d p r e v e n t i n g a u t o i mm u n i t y:t h ec a s eo fa n t iＧm i t o c h o n d r i a la n t i b o d i e s[J]．A u t o I mm u nH i g h l i g h t s,２０１２,３(３):１０５Ｇ１１２．７５８标记免疫分析与临床㊀２０２１年５月第２８卷第５期。
抗线粒体抗体M2型(AMA—M2)测定试剂盒(化学发光免疫分析法)产品技术要求广州市康润生物
抗线粒体抗体M2 型（AMA-M2）测定试剂盒（化学发光免疫分析法）2性能指标2.1外观和性状（1）外观和性状试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏。
R1 组分应为棕色含固体微粒的液体，无板结、无絮状物。
R2、R3 组分和复融液应为清澈透明的液体，无沉淀、无悬浮物、无絮状物。
校准品C1-C2 应为粉末，无杂质。
（2）包装包装标签应清晰、准确、牢固。
R1 组分分装瓶应为半透明塑料瓶；R2 组分分装瓶应为黑色塑料瓶；R3 组分分装瓶应为白色塑料瓶；校准品C1-C2 和校准品复融液分装瓶应为棕色玻璃瓶，盖含橡胶软塞和塑料外盖。
盒贴、瓶贴、标签标识、说明书、校准品信息卡应完整、清晰牢固。
橡胶软塞、塑料外盖与塑料瓶身配合后应无泄漏；塑料外盖应无明显划痕、崩缺。
2.2装量应不少于试剂瓶的标示装量值。
2.3准确度对具有溯源性的两个浓度水平的工作校准品进行检测，检测结果与标定浓度的相对偏差在±10% 范围内。
2.4空白限空白限应不大于0.5U/mL。
2.5线性试剂盒在2~500U/mL 区间内，其相关系数（r）应不低于0.9900。
2.6重复性变异系数CV 应≤ 8%。
2.7批间差变异系数CV 应≤ 15%。
2.8校准品2.8.1校准品信息卡试剂盒应可提供一份校准品信息卡，包含试剂盒批号、有效期和校准品C1-C2 各浓度水平的信息。
2.8.2瓶内均一性校准品C1-C2 瓶内均一性以变异系数CV 为指标，满足CV≤10%。
2.8.3瓶间均一性校准品C1-C2 瓶间均一性以变异系数CV 为指标，满足CV≤10%。
抗线粒体抗体意义
抗线粒体抗体（AMA）由Maokey等于1958年首次于原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis，PBC）患者血清发现，是一种无器官特异性也无种属特异性的自身抗体，以后的研究发现，AMA也见于其他自身免疫病患者。
线粒体抗原位于真核细胞线粒体膜内，抗原成分为2-氧酸脱氢酶复合体的亚单位，为一组自身抗原。
AMA靶抗原分为9型（M1-M9）。
M1为线粒体外膜的心磷脂；M2是PBC患者血清中AMA反应的主要成分，其本质是线粒体内膜上的丙酮酸脱氢酶和α－酮酸脱氢酶的复合体；M3的本质尚不清楚；M4为亚硫酸氧化酶；M5是一种65kD 蛋白；M6、M7、M8的性质不明；M9是一种糖原磷酸化酶。
标本采集：静脉血2ml，不抗凝，分离血清进行测定。
参考值：正常人血清A M A 为阴性间接免疫荧光法小于1:10（阴性）。
临床意义：AMA是一种抗线粒体内膜脂蛋白成分的抗体,无器官和种属的特异性，可为五种免疫球蛋白的任何一种，是主要出现在原发性胆汁性肝硬化病人的血清中的一种自身抗体。
常用于黄疸及肝病病因的辅助诊断。
阳性见于：原发性胆汁性肝硬化。
有50%以上的这类病人血清抗线粒体抗体的滴度(即血清稀释的倍数)可达到1：200～1：3200。
此外，自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、进行性系统性硬化症、干燥综合征也可见阳性。
由于抗M1抗体即抗心磷脂抗体，目前不列入抗线粒抗体中。
抗M2见于9 0％的PBC患者，常用作该病的重要实验室诊断指标，但AMA与PBC的病期、疾病严重程度、治疗效果均无相关性。
除PBC外，抗M2也见于慢性活动性肝炎（CAH）、HBsAg阴性的肝病。
抗M3 AMA见于吡唑酮（pyrazolone）系列药物诱发的药物性红斑狼疮（PLE）综合征患者；抗M4 AMA也见于PBC；抗M9见于PBC早期；抗M5见于SLE、自身免疫性溶血性贫血；抗M6见于异丙烟肼（iproniazid，一种单胺氧化酶抑制药）诱导的肝炎；抗M7出现于一些原因不明的心肌病患者，它的靶抗原有器官特异性，存在于心肌细胞的线粒体中。
抗线粒体抗体阳性患者的AMA—M2亚型检测及ANA核型分析
ｗ ｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｔｅｒｓ ｏｆ ａｎｔｉ—ｍ ｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｍ ｅｔｈｏｄｓ Ｔ ｈｅ ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｓｐｅｃｉｍ ｅｎ ｗｅｒｃ ｎｌｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ｉｎｄｉｒｅｃｔ ｉｍ ｍ ｕｎｏ— ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ａｓｓａｙ（ＩＩＦ），ＡＭ Ａ Ｍ ２ ｓｕｂｔｙｐｅ ｉｎ ５０２ ｓｐｅｃｉｍ ｅｎｓ ｗ ｉｔｈ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ａｎｔｉ—ｍ ｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｗ ａｓ ｍ ｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ Ｅｌ ＩＳＡ ， ａｎｄ ｔｈｅ Ａ Ｍ Ａ—Ｍ ２ ａｎｄ Ａ Ｎ Ａ ｋａｒｙｏｔｙｐｅ ｉｎ ７１ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｐｒｉｍ ａｒｙ ｂｉｌｉａｒｙ ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ ｗ ｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅｓ ｏｆ Ａ Ｍ Ａ Ｍ ２ ｓｕｂｔｙｐｅ ｉｓ ７６．１ ｉｎ ４２５８ ｃｏｎｓｅｃｕｔｉｖｅ ｓｐｅｃｉｍ ｅｎ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ５０２ ｓｐｅｃｉｍ ｅｎｓ ｗｉｔｈ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ａｎｔｉ—ｍ ｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ． Ｏｆ
[精华]抗线粒体抗体意义
![[精华]抗线粒体抗体意义](https://img.taocdn.com/s3/m/3f5e7bc681eb6294dd88d0d233d4b14e85243e30.png)
抗线粒体抗体（AMA）由Maokey等于1958年首次于原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis，PBC）患者血清发现，是一种无器官特异性也无种属特异性的自身抗体，以后的研究发现，AMA也见于其他自身免疫病患者。
线粒体抗原位于真核细胞线粒体膜内，抗原成分为2-氧酸脱氢酶复合体的亚单位，为一组自身抗原。
AMA靶抗原分为9型（M1-M9）。
M1为线粒体外膜的心磷脂；M2是PBC患者血清中AMA反应的主要成分，其本质是线粒体内膜上的丙酮酸脱氢酶和α－酮酸脱氢酶的复合体；M3的本质尚不清楚；M4为亚硫酸氧化酶；M5是一种65kD 蛋白；M6、M7、M8的性质不明；M9是一种糖原磷酸化酶。
标本采集：静脉血2ml，不抗凝，分离血清进行测定。
参考值：正常人血清A M A 为阴性间接免疫荧光法小于1:10（阴性）。
临床意义：AMA是一种抗线粒体内膜脂蛋白成分的抗体,无器官和种属的特异性，可为五种免疫球蛋白的任何一种，是主要出现在原发性胆汁性肝硬化病人的血清中的一种自身抗体。
常用于黄疸及肝病病因的辅助诊断。
阳性见于：原发性胆汁性肝硬化。
有50%以上的这类病人血清抗线粒体抗体的滴度(即血清稀释的倍数)可达到1：200～1：3200。
此外，自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、进行性系统性硬化症、干燥综合征也可见阳性。
由于抗M1抗体即抗心磷脂抗体，目前不列入抗线粒抗体中。
抗M2见于9 0％的PBC患者，常用作该病的重要实验室诊断指标，但AMA与PBC的病期、疾病严重程度、治疗效果均无相关性。
除PBC外，抗M2也见于慢性活动性肝炎（CAH）、HBsAg阴性的肝病。
抗M3 AMA见于吡唑酮（pyrazolone）系列药物诱发的药物性红斑狼疮（PLE）综合征患者；抗M4 AMA也见于PBC；抗M9见于PBC早期；抗M5见于SLE、自身免疫性溶血性贫血；抗M6见于异丙烟肼（iproniazid，一种单胺氧化酶抑制药）诱导的肝炎；抗M7出现于一些原因不明的心肌病患者，它的靶抗原有器官特异性，存在于心肌细胞的线粒体中。
线粒体抗体M2亚型阳性患者中检测血清“两对半”的结果分析
１ ． ３ 统 计学 处 理 ： 采用 Ｓ Ｐ Ｓ Ｓ １ ９ ． ０统 计 学 软件 进 行 统计 ， 计 量资 料用 ±Ｓ 表示， 采用 ｔ 检验 ； 以 Ｐ＜ ０ ． ０ ５为差 异有 统计 学意 义 。
２ 结 果
床 研 究亦 证实 ， 免 疫功 能紊 乱 在慢 性 乙型肝 炎 的 发
山西医药杂志 ２ ０ １ ７年 ５月 第 ４ ６卷 第 １ ｏ期 Ｓ ｈ ａ ｎ ｘ ｉ Ｍｅ ｄ Ｊ ， Ｍａｙ ２ ０ １ １ １ ： ！ ． ！
— —
・
医学检 验 ・
线 粒 体 抗 体 Ｍ２亚 型 阳性 患 者 中 检测血清 “ 两对半 ＂ 的结 果 分 析
（ ＡＬ Ｐ ） 升高； ② ＡＭＡ 阳性 ， 主 要 是 Ｍ２型 阳 性 ； ③ 组 织学 上存 在 非 化 脓 性 破 坏 性 胆 管 炎 以 及 小 叶 问 胆 管破 坏 的 表 现 。 以 上 任 意 ２项 阳 性 即 可 诊 断 Ｐ Ｂ Ｃ， Ｐ Ｂ Ｃ活检 出现 特征性 胆 管组 织 学病 变 可 明 确
ＡＭＡ— Ｍ２呈 阳 性 ［ １ ］ 。ＡＭＡ — Ｍ２除 了 常 出 现 在 自
析仪 完成 。③Ｐ Ｂ Ｃ 的诊 断 主要参 照 的是 ２ ０ ０ ９年 美 国肝病 学会 （ ＡＡｓ Ｌ Ｄ） 推荐 的 Ｐ Ｂ Ｃ诊 断指 南 ＿ ５ ］ ： ①
存 在胆 汁 淤 积 的 生 化 学 证 据 ， 主 要 是 碱 性 磷 酸 酶
采 用 ＨＩ Ｔ ＡＣ ＨＩ Ｌ ａ ｂ ｏ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ０ ０ ８ Ａ Ｓ全 自动 生 化 分
和早 期 干预 提供 了基 础 。其 中 ， 线 粒 体抗 体 Ｍ２亚
型（ ＡＭＡ— Ｍ２ ） 作为原发性胆汁性胆管炎 （ Ｐ Ｂ Ｃ ） 的 检测 指标 被人 们熟 知 ， 有研究报道， 在Ｐ Ｂ Ｃ无 相 关 临床 症 状 和生 化 指 标 异 常 的隐 匿 期 ， 可 检 测 到
抗M2型线粒体抗体(IgG)测定试剂盒(酶联免疫吸附法)产品技术要求万泰
抗M2型线粒体抗体（IgG）测定试剂盒（酶联免疫吸附法）适用范围：本试剂盒用于体外定量检测人血清样品中的抗M2型线粒体IgG抗体。
1.1 产品规格包装规格：48人份/盒，96人份/盒。
1.2 主要组成成分表1 试剂盒主要组成成分各组份主要组成：酶标板：包被有M2抗原；酶标试剂：辣根过氧化物酶标记的抗人IgG抗体；样品稀释液：含PBS的缓冲液；M2-IgG校准品：含4水平的M2-IgG；浓缩洗涤液：含表面活性剂的缓冲液；显色剂A液：含浓度不低于0.3g/L的过氧化物溶液；显色剂B液：含浓度不低于0.2g/L的TMB溶液；终止液：含浓度不高于2mol/L的硫酸溶液。
2.1 外观试剂（盒）各组份应齐全、完整，液体无渗漏；标签应清晰，易识别。
2.2 准确度回收实验：回收率应在100%±20%范围内。
2.3 空白限应不高于5.0 RU/mL。
2.4 测量系统的线性本检测系统的线性范围为[10，159]RU/mL，在[10，159]RU/mL范围内，线性相关系数r应不低于0.9900。
2.5 重复性检测低、高两个浓度重复性参考品CV1和CV2，变异系数CV（%）应均不超过15%。
2.6 批间差用3个批号试剂盒检测重复性参考品CV2，变异系数CV（%）应不超过20%。
2.7 稳定性效期稳定性：将2℃～8℃放置6个月的试剂盒检测2.1～2.5各项，应符合各项目规定的要求。
2.8 溯源性校准品溯源性应符合GB/T 21415-2008有关规定，可溯源至企业的工作校准品，并经与已上市产品比对赋值。
抗M2型线粒体抗体检查很重要
抗M2型线粒体抗体检查很重要作者：姜树强来源：《家庭医药》2019年第03期在健康体检时，许多人对体检套餐血液检查项目中“抗M2型线粒体抗体”一项感到十分陌生，充满疑问。
因其不像血糖、血脂、肝功、肾功检查那么一目了然。
认为这么拗口的检查项目应该与自己没什么关系，有的人甚至都不问清楚是針对哪个部位的检查，就直接拒绝。
那么，何为抗M2型线粒体抗体（AMA-M2），它的作用又有哪些呢？哪类人群需要做此项检查，健康体检筛查AMA-M2又有什么意义呢？简单来说，线粒体抗体就是自身免疫性抗体，是存在于肝脏、肾脏、心脏、胃等多种组织细胞内含有线粒体的膜蛋白，共有9个亚型，M2是其中一种亚型，也是原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者血清中与抗线粒体反应的主要成分。
PBC是一种慢性进行性胆汁淤积性肝脏疾病，以肝内中小胆管非化脓性炎症为特征，进一步可发展为肝纤维化和肝硬化，为器官特异性自身免疫性肝病，中老年女性多见，男女发病比例约为1：8～10。
因其具有隐匿性，极易误诊。
全球肝硬化死亡人群中2%源于PBC，其三期和四期肝癌发病率高达11.1%，30%以上的PBC患者就医时已发展为肝硬化。
PBC患者第一代亲属中发生PBC的流行率为4%～6%，比一般人群高100倍。
PBC患病早期，无任何临床症状且肝功能正常时，即可通过血清检测到AMA-M2，有报道称AMA-M2可早于PBC出现临床症状前10年检出。
严格地说，常规肝功能检查有时并不能正确反映疾病的真实情况。
慢性病毒性肝炎免疫耐受患者，尽管转氨酶不高，却无法阻挡肝损害进行的脚步。
各种原因的肝硬化患者，甚至已经发展至失代偿期，转氨酶水平亦可正常。
尤其肝衰竭后期，肝脏实质已不可遏制地严重受损，因产生转氨酶的肝细胞死亡殆尽，检测血清转氨酶仍显示正常。
显而易见，肝组织炎症活动度和纤维化程度与转氨酶浓度之间无明显的相关性，故外周血转氨酶浓度不能真实反映肝脏组织的炎症及纤维化程度。
另一方面，AMA-M2在药物性肝炎、慢性乙肝、丙肝、戊肝、酒精性肝炎、非酒精性脂肪肝、原发性肝癌中都有较高的阳性率，所以，AMA-M2与肝功能联合检测，可鉴别诊断自身免疫性肝病和非自身免疫性肝病，还可以用于监测非自身免疫性肝病在治疗过程中是否伴发原发性胆汁性肝硬化及用药情况。
抗M2型线粒体抗体阳性患者46例实验室指标分析及确诊
中国药物与临床 ２０１２年 ９月第 ｌ２卷第 ９期 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｒｅｍｅｄｉｅｓ＆ Ｃｌｉｎｉｃｓ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１２，ＶｏＩ．１２．Ｎｏ．９
抗 Ｍ２型线粒体抗体阳性患者 ４６例 实验室指标分析及确诊
张凤 兰 齐 国海 冯 巧 荣
抗线粒体抗 体 （ａｎｔｉ．ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ，ＡＭＡ）是原发 性胆汁性肝硬化 （ｐｒｉｍａｒｙ ｂｉｌｉａｒｙ ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ。ＰＢＣ）的血清标记性 抗体 Ⅲ．尤 其是 Ｍ２型线 粒体抗 体 （ＡＭＡ．Ｍ２）对 ＰＢＣ诊 断的 的敏感性和特异性 分别可达 ９０％和 ９５％，已成为 ＰＢＣ最重 要 的诊断手段之一 ＿２］。我们 收集 了本院 ４７例 ＡＭＡ—Ｍ２阳性 患者 ，对其各项 相关 的实 验室 指标 进行 分析并作 临床 确诊 ， 以探讨 ＡＭＡ．Ｍ２阳性 的临床提示意义。 １ 资料与方 法 １．１ 一般 资料 ：收集我院检验科从 ２０１１年 ４月至 ２０１２年 ４ 月抗 Ｍ２型线粒体抗体 阳性患者 ４６例 ，其中女性 ４０例 ，男性 ６例 ；年龄 ２４～７５岁 ，平 均 （５１￣１３）岁。收集患者丙氨酸 氨基 转移 酶（ＡＬＴ）、天冬氨酸 氨基 转移酶 （ＡＳＴ）、＾ｙ．谷 氨酰转移酶 （ＧＧＴ）和 碱性 磷 酸 酶 （ＡＬＰ）等 生化 数 据 以及 抗 核抗 体 （ＡＮＡ）、抗干燥 综合 征 Ａ（ＳＳＡ）、抗干燥 综合 征 Ｂ（ＳＳＢ）和类 风湿 因子 （ＲＦ）等血清免疫性指标检测结果。ＰＢＣ的诊断符合 ２０００年美 国肝病学会 （ＡＡＳＬＤ）推荐 的 ＰＢＣ诊 断指南 ：其 他 疾病 的诊断符合各 自的疾病分类 与诊断标准 。 １．２ 检测方法 ：ＡＭＡ．Ｍ２的检测试剂采用上海科新 生物技术 股 份有 限公 司提供 的 Ｍ２型抗线 粒体抗体 酶联免 疫吸 附法 （ＥＬＩＳＡ）试剂盒 。将待测血清按 １：２００的比例稀释 ，用 四参数 回归计算 出待测样本浓度值 ；浓度值大于 （包 含）２５ ＲＵ／ｍｌ为 阳 性 ．Ｉ＞７５ ＲＵ／ｍｌ为 强 阳性 。
M2型抗线粒体抗体的靶抗原三联体克隆表达技术改良
M2型抗线粒体抗体的靶抗原三联体克隆表达技术改良张婕婕;杨自华【期刊名称】《国际检验医学杂志》【年(卷),期】2018(039)010【摘要】目的改良构建M2型抗线粒体抗体(AMA-M2)靶基因三联体重组表达载体技术,建立检测AM A-M2的酶联免疫吸附法(ELISA)并进行评价.方法通过聚合酶链反应(PCR)扩增基因三联体BPO,构建表达载体pGEX-4T-1-BPO,转入大肠杆菌BL21表达,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导得到重组蛋白,并通过亲和层析纯化得到目的蛋白,建立ELISA 检测AM A-M2.结果获得纯度大于95% 的重组蛋白;检测326例临床样本,43例原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者中有41例呈AM A-M2阳性,灵敏度为95.3%(41/43),特异度为98.2%(278/283),PBC组与非PBC组的AMA-M2检出率差异有统计学意义(P<0.05).结论该改良技术获取的目的蛋白可以用于 AMA-M2检测,AMA-M2对PBC的临床诊断具有较高的灵敏度和特异度.【总页数】4页(P1176-1179)【作者】张婕婕;杨自华【作者单位】深圳市人民医院医务科,广东深圳518000;深圳市人民医院检验科,广东深圳518000【正文语种】中文【中图分类】R575.2+2【相关文献】1.人源M2二联体靶抗原BP-E2融合蛋白的克隆表达与鉴定 [J], 周晔;姚定康;陈燕;蒋天舒;蒋廷旺;吴传勇;陈波;仲人前;邓安梅2.M2抗体人源靶抗原三联体的克隆表达及其在原发性胆汁性肝硬化中的应用 [J], 姜小华;方晓云;仲人前;汪修平;胡寅;孔宪涛3.人源M2二联体靶抗原PO-E2融合蛋白的克隆表达与鉴定 [J], 周晔;姚定康;陈燕;蒋天舒;蒋廷旺;吴传勇;陈波;仲人前;邓安梅4.联合抗线粒体抗体M2型检测在原发性胆汁性肝硬化中的临床意义 [J], 王晓晰;祁兴顺;郭晓钟5.人源M2二联体靶抗原BO-E2融合蛋白的克隆表达与鉴定 [J], 周晔;姚定康;陈燕;蒋天舒;陈波;仲人前;邓安梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
血清抗线粒体抗体监测风湿
血清抗线粒体抗体监测风湿血清抗线粒体抗体监测是一种常用的检测方法，用于风湿性疾病的诊断和治疗监测。
本文将介绍血清抗线粒体抗体的概念、检测方法及临床应用。
一、概念血清抗线粒体抗体（AMA）是一种免疫球蛋白G（IgG）抗体，主要针对线粒体内的结构蛋白。
正常情况下，人体的免疫系统并不产生针对自身组织的抗体，而AMA的出现可能与自身免疫疾病相关。
二、检测方法常用的检测方法是间接免疫荧光法（IFA）。
该方法将患者的血清与特定的基质结合，然后加入荧光标记的抗人IgG抗体，通过荧光显微镜观察是否有荧光信号出现。
若血清中存在AMA，则在线粒体结构上可见荧光标记。
三、临床应用1. 诊断自身免疫性肝病AMA主要与原发性胆汁性肝硬化（PBC）相关，PBC是一种慢性肝病，主要特征是肝小叶的破坏和胆汁淤积。
AMA呈现为PBC的特异性标记，其敏感性和特异性较高，可以作为PBC的重要诊断指标之一。
2. 评估自身免疫性肝病预后在PBC治疗过程中，AMA的变化可以作为预测疾病进展和评估治疗效果的指标。
研究表明，AMA滴度与PBC患者的临床指标、肝功能相关，高滴度的AMA可能预示着疾病的进展和不良预后。
3. 狼疮性肝炎的诊断狼疮性肝炎是一种自身免疫性肝炎，血清中的AMA呈阳性可以帮助区分狼疮性肝炎与其他类型的肝炎，对于指导治疗具有重要价值。
4. 其他自身免疫疾病的辅助诊断除了PBC和狼疮性肝炎，AMA的检测在其他一些自身免疫疾病的辅助诊断中也具有一定的指导意义。
例如，AMA在自身免疫性胰腺炎、系统性硬化症、原发性胆囊炎等疾病中的检测也有一定的临床价值。
总结：血清抗线粒体抗体（AMA）监测在风湿性疾病的诊断和治疗监测中具有重要的应用价值。
通过间接免疫荧光法可以检测AMA的存在，从而帮助医生进行疾病的诊断和治疗决策。
同样，AMA的滴度变化也可以作为评估疾病预后的指标，对于预测疾病的进展和指导治疗具有重要意义。
但需要注意的是，AMA的检测结果应综合临床表现和其他实验室检查结果进行综合分析，避免误诊和漏诊。
抗线粒体抗体M2亚型检测的经济价值研究
抗线粒体抗体M2亚型检测的经济价值研究吴旭伶;邹欣;徐永玲;张玮【期刊名称】《中国卫生资源》【年(卷),期】2014(000)001【摘要】目的：通过在体检人群中筛查抗线粒体抗体M2亚型（anti-mitochondrial antibody-M2，AMA-M2）以期提高原发性胆汁性肝硬化（PBC）的检出率，并评估该指标普查的经济价值。
方法：运用卫生经济学中的成本效益法，测算区域性及全国性通过AMA-M2筛查PBC患者的经济效益。
结果：无论在直接的医疗成本还是生命年价值上，通过AMA-M2早期筛查PBC将对患者及社会带来巨大的经济效益。
结论：将AMA-M2检测作为我国常规健康体检筛查指标是提高PBC检出率并降低治疗成本的重要途径。
【总页数】2页(P51-52)【作者】吴旭伶;邹欣;徐永玲;张玮【作者单位】上海科新生物技术股份有限公司，上海 201203;上海科新生物技术股份有限公司，上海 201203;上海科新生物技术股份有限公司，上海 201203;上海中医药大学附属龙华医院，上海 200032【正文语种】中文【中图分类】R197.322【相关文献】1.新型的抗线粒体抗体M2亚型IgG和IgA抗体的检测方法在原发性胆汁性肝硬化诊断中的价值 [J], 卢建溪;钱师宇;舒欣;李刚2.抗线粒体抗体阳性患者的AMA-M2亚型检测及ANA核型分析 [J], 杨国香;李丽君;董小娟;胡朝军;张蜀澜3.抗线粒体抗体M2亚型抗体三种检测方法的比较及其对原发性胆汁性肝硬化的诊断价值研究 [J], 张洋;李永哲;冯雪;包书萌;胡朝军;佟大伟;张蜀澜4.58例抗线粒体抗体 M2亚型阳性患者检测结果分析 [J], 彭雪莲;史静;邹麟;董剑;王丹5.四种方法检测抗线粒体抗体M2亚型性能比较 [J], 岳燕;刘向祎;王玥文;白婕;杨本善;何小魁;张明珍;郑宇淼;李宜桐;金文因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
全自动 ELISA 系统检测抗线粒体M2抗体及临床意义
全自动 ELISA 系统检测抗线粒体M2抗体及临床意义张海萍;闫惠平;张欣;赵丹彤;马胤雪;孙丽梅;李卓敏【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2015(000)012【摘要】目的：使用全自动酶联免疫吸附试验（ELISA）系统检测抗线粒体M2抗体并探讨其临床意义。
方法收集267例血清样本，包括112例原发性胆汁性肝硬化患者（PBC）、77例乙型肝炎病毒（HBV）感染者和78名健康对照者血清样本，使用全自动 ELISA 系统检测抗线粒体 M2抗体，评估该系统检测抗线粒体M2抗体的精密度和抗线粒体 M2抗体的临床价值。
结果全自动 ELISA 系统的精密度较好，批内和天间的变异系数（CV）均＜5％。
PBC 患者抗线粒体 M2抗体的阳性率为89．3％（100／112），抗体浓度值以大于800 RU ／mL 为主（63％，71／112）。
HBV 感染者抗线粒体 M2抗体的阳性率为5．2％（4／77），3例抗体浓度值在25～100 RU ／mL之间，1例在100 RU ／mL 以上；健康对照组中抗线粒体 M2抗体阳性率为5．1％（4／78），4例抗体阳性者抗体浓度值均在25～50 RU ／mL 之间。
结论抗线粒体 M2抗体 ELISA 检测的系统化保证了检验结果的稳定性，可为 PBC 的诊断和与其他肝病的鉴别诊断提供更有价值的实验室依据。
【总页数】4页(P1234-1237)【作者】张海萍;闫惠平;张欣;赵丹彤;马胤雪;孙丽梅;李卓敏【作者单位】首都医科大学附属北京佑安医院，北京 100069;首都医科大学附属北京佑安医院，北京 100069;首都医科大学附属北京佑安医院，北京 100069;首都医科大学附属北京佑安医院，北京 100069;首都医科大学附属北京佑安医院，北京 100069;首都医科大学附属北京佑安医院，北京 100069;首都医科大学附属北京佑安医院，北京 100069【正文语种】中文【中图分类】R446.61【相关文献】1.抗线粒体Ⅱ型抗体与抗着丝点B蛋白抗体重叠阳性在CREST综合征中的临床意义 [J], 刘燕婕;袁戎;胡丽华;童晓荣2.ELISA(双抗体夹心法)共系统检测抗-HBe与HBeAg结果分析 [J], 李宏杰;方磊;程家坤;祖华3.ELISA（双抗体夹心法）共系统检测抗-HBe与HBeAg结果分析 [J], 李宏杰;方磊;程家坤;祖华4.31例抗线粒体M2亚型抗体表达阴性原发性胆汁性肝硬化患者的临床特点 [J], 张春来;冯慧;秦臻;张恒;郭绪晓5.新型ELISA系统检测大疱性类天疱疮患者抗-BP180 IgG和纯化自身抗体 [J], Mariotti F.;Grosso F.;Terracina M.;G. Zambruno;冯义国因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
大鼠(Rat)线粒体膜通道孔(MPTP)-NEWA
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断大鼠（Rat）线粒体膜通道孔（MPTP）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被线粒体膜通道孔（MPTP）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的线粒体膜通道孔（MPTP）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL 3mL 无检测抗体-HRP 10mL 5mL 无20×洗涤缓冲液25mL 15mL 按说明书进行稀释底物A 6mL 3mL 无底物B 6mL 3mL 无终止液6mL 3mL 无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、30、60、120、240、480 pg/mL试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
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谢谢！
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正常值： 间接免疫荧光法：小于1:10（阴性）。
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相关检查：
自身免疫性疾病14项、抗中性粒细胞胞浆 抗体、自身抗体定量四项、免疫球蛋白三 项、C反应蛋白（CRP）与降钙素原 （PCT）、抗核抗体(ANA)或抗核因子 (ANF)。
医学检验·各论 抗线粒体抗体（AMA）
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简介： 指一种抗线粒体内膜脂蛋白成分的抗
体，无器官和种属特异性。
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临床意义： 阳性：见于原发性胆汁性肝硬化、慢
性活动性肝炎、自身免疫性疾病（如系统 性红斑狼疮、类风湿关节炎等）。
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相关症状： 关节疼痛、腹水、恶心与呕吐、斑疹、结 节、发热。
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相关疾病：
系统性红斑狼疮性巩膜炎、系统性红斑狼 疮伴发的葡萄膜炎、系统性红斑狼疮伴发 的精神障碍、淋细胞性垂体炎、系统性 红斑狼疮所致脊髓病、妊娠合并系统性红 斑狼疮、幼年型类风湿性关节炎、小儿系 统性红斑狼疮、系统性红斑狼疮所致精神 病、系统性红斑狼疮性关节炎、类风湿性 关节炎、系统性红斑狼疮、原发性胆汁性 肝硬化。
间接免疫荧光法和酶联免疫吸附法检测抗线粒体抗体的分析与比较
间接免疫荧光法和酶联免疫吸附法检测抗线粒体抗体的分析与比较王艳;刘晓辉;张学智;彭清林;王国春【期刊名称】《中日友好医院学报》【年(卷),期】2015(029)003【摘要】目的:对临床上常用的2种抗线粒体抗体(AMA)的检测方法进行分析比较,探讨抗线粒体抗体M2亚型(AMA-M2)在原发性胆汁性肝硬化(PBC)和其他结缔组织病(CTD)中的抗体滴度特点.方法:回顾性分析2011年1月～2013年6月我科采用间接免疫荧光法(IIF)检测AMA和酶联免疫吸附法(ELISA)检测AMA-M2共726例患者的资料.结果:EHSA检测抗线粒体抗体阳性率(13.1％)略高于IIF(6.5％).IIF 诊断PBC的敏感度和特异度为78.1％和97.4％,ELISA分别为100％和91.6％.55例AMA-M2阳性而AMA阴性的患者,8例诊断为PBC,35例诊断为其他CTD.PBC组AMA-M2抗体滴度(中位数为64.8RU/ml)略高于其他CTD组(中位数为54.9R U/ml).结论:将IIF和ELISA同时应用于抗线粒体抗体的检测,有助于PBC的临床诊断.【总页数】4页(P154-157)【作者】王艳;刘晓辉;张学智;彭清林;王国春【作者单位】中日友好医院风湿免疫科,北京100029;中日友好医院风湿免疫科,北京100029;中日友好医院风湿免疫科,北京100029;中日友好医院风湿免疫科,北京100029;中日友好医院风湿免疫科,北京100029【正文语种】中文【中图分类】R575.22【相关文献】1.比较酶联免疫吸附法与间接免疫荧光法检测抗核抗体的价值 [J], 王广杰;陈洁;李士军2.酶联免疫吸附法和间接免疫荧光法检测抗dsDNA抗体方法的比较 [J], 张玲;李慧源;黄新;姜叶灵;陈伟锦;李碧波3.间接免疫荧光法和酶联免疫吸附法检测血清中抗双链DNA抗体在系统性红斑狼疮中的诊断价值 [J], 俞颖;范永升;温成平;王新苍4.酶联免疫吸附法和间接免疫荧光法检测天疱疮抗体的比较 [J], 李婷婷;赵娟;康晓静5.酶联免疫吸附法和间接免疫荧光法检测大疱性类天疱疮抗体的比较 [J], 冯萍萍;李婷婷;赵娟;康晓静因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断小鼠（Mouse）抗线粒体抗体II型（AMA-M2）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被抗原的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗原，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的抗线粒体抗体II型（AMA-M2）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗原-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、7.5、15、30、60、120ng/mL试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2.自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步骤1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3.样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗原100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
试剂盒性能1.准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
2.灵敏度：最低检测浓度小于1.0ng/mL。
3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4.重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
5.贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
6.有效期：6个月免责声明1.试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。
2.严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
FOR RESEARCH USE ONLY.NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES.Mouse Anti-mitochondria autoantibodies M2(AMA-M2)ELISA Kit instructionIntended useThis AMA-M2ELISA kit is intended Laboratory for Research use only and is not for use in diagnostic or therapeutic procedures.The Stop Solution changes the color from blue to yellow and the intensity of the color is measured at450nm using a spectrophotometer.In order to measure the concentration of AMA-M2in the sample,this AMA-M2ELISA Kit includes a set of calibration standards.The calibration standards are assayed at the same time as the samples and allow the operator to produce a standard curve of Optical Density versus AMA-M2 concentration.The concentration of AMA-M2in the samples is then determined by comparing the O.D.of the samples to the standard curve.Sample collection and storagesSerum-Use a serum separator tube and allow samples to clot for30minutes before centrifugation for10minutes at approximately3000×g.Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at-20℃or-80℃.Avoid repeated freeze-thaw cyclesPlasma-Collect plasma using EDTA or heparin as an anticoagulant.Centrifuge samples for30minutes at3000×g at2-8℃within30minutes of collection.Store samples at-20℃or-80℃.Avoid repeated freeze-thaw cycles.Cell culture supernates and other biological fluids-Remove particulates by centrifugation and assay immediately or aliquot and store samples at-20℃or -80℃.Avoid repeated freeze-thaw cycles.Note:The samples shoule be centrifugated dequately and no hemolysis or granule was allowed.Materials required but not supplied1.Standard microplate reader(450nm)2.Precision pipettes and Disposable pipette tips.3.37℃incubatorPrecautions1.Do not substitute reagents from one kit to another.Standard,conjugate and microplates are matched for optimal e only the reagents supplied by manufacturer.2.Do not remove microplate from the storage bag until needed.Unused strips should be stored at2-8°C in their pouch with the desiccant provided.3.Mix all reagents before using.Remove all kit reagents from refrigerator and allow them to reach room temperature (20-25°C)Materials suppliedName96determinations48determinations Microelisa stripplate12*8strips12*4stripsStandard0.3ml*6tubes0.3ml*6tubesSample Diluent 6.0ml 3.0mlHRP-Conjugate reagent10.0ml 5.0ml20X Wash solution25ml15mlChromogen Solution A 6.0ml 3.0mlChromogen Solution B 6.0ml 3.0mlStop Solution 6.0ml 3.0mlClosure plate membrane22User manual11Sealed bags11Note:Standard(S0→S5)concentration was followed by:0,7.5,15,30,60,120 ng/mLReagent preparation20×wash solution:Dilute with Distilled or deionized water1:20.Assay procedure1.Prepare all re a g e n t s before starting assay procedure.It is recommended that all Standards and Samples be added in duplicate to the Microelisa Stripplate.2.Add standard:Set Standard wells,testing sample wells.Add standard50μl to standard well.3.Add Sample:Add testing sample10μl then add Sample Diluent40μl to testing sample well;Blank well doesn’t add anyting.4.Add100μl of HRP-conjugate reagent to each well,c over with an adhesive strip and incubate for60minutes at37°C.5.Aspirate each well and wash,repeating the process four times for a total of five washes.Wash by filling each well with Wash Solution(400μl)using a squirt bottle, manifold dispenser or plete removal of liquid at each step is essential to good performance.After the last wash,remove any remaining Wash Solution by aspirating or decanting.Invert the plate and blot it against clean paper towels.6.Add chromogen solution A50μl and chromogen solution B50μl to each well. Gently mix and incubate for15minutes at37°C.Protect from light.7.Add50μl Stop Solution to each well.The color in the wells should change from blue to yellow.If the color in the wells is green or the color change does not appear uniform,gently tap the plate to ensure thorough mixing.8.Read the Optical Density(O.D.)at450nm using a microtiter plate reader within15minutes.Calculation of results1.This standard curve is used to determine the amount in an unknown sample.The standard curve is generated by plotting the average O.D.(450nm) obtained for each of the six standard concentrations on the vertical(Y)axisversus the corresponding concentration on the horizontal(X)axis.2.First,calculate the mean O.D.value for each standard and sample.All O.D.values,are subtracted by the mean value of the zero standard before result interpretation.Construct the standard curve using graph paper or statistical software.3.To determine the amount in each sample,first locate the O.D.value on theY-axis and extend a horizontal line to the standard curve.At the point of intersection,draw a vertical line to the X-axis and read the corresponding concentration.4.Any variation in operator,pipetting and washing technique,incubation time ortemperature,and kit age can cause variation in result.Each user should obtain their own standard curve.5.The sensitivity by this assay is1.0ng/mL6.Standard curve Storage：2-8℃.validity：six months.FOR RESEARCH USE ONLY;NOT FOR THERAPEUTIC OR DIAGNOSTIC APPLICATIONS!PLEASE READ THROUGH ENTIRE PROCEDURE BEFORE BEGINNING!。