滤膜法测定总大肠菌群讲解学习
滤膜法检测粪大肠菌群方法
滤膜法检测粪大肠菌群方法摘要：在水质分析中，采用粪大肠菌群滤膜法所需的仪器简单，操作简便快捷，适用于地表水、地下水等杂质较少水样。
对此实验方法易产生的问题及影响测定值的因素进行分析，提出了几个关键的问题及改进措施，以提高粪大肠菌群测定的效率及精度。
关键词：粪大肠菌群滤膜法注意事项C35 A大肠菌群是卫生防疫和环境保护监督执法的重要评价指标。
多年来大肠菌群作为卫生环境评价的指标，在传染病防治、食品卫生质量监测、污水综合排放控制评价、水资源生态环境变化等方面发挥了巨大作用。
目前国内的粪大肠菌群检测方法有多管发酵法、滤膜法、酶法、LTSE法和纸片法等。
其中，滤膜法检测粪大肠菌群，是利用微孔滤膜过滤一定量水样，将水样中含有的细菌截留在滤膜上，然后将滤膜贴在选择性培养基上，经培养和证实试验后，直接计数滤膜上生长的典型粪大肠菌群菌落，并计算出每升水样中含有的粪大肠菌群数。
本研究主要是针对滤膜法再实际监测工作中的可行性，利用实际水样对滤膜法与发酵法监测结果进行对比，并对滤膜法的重复性和准确性进行统计与评价。
一、概述粪大肠菌群是总大肠菌群的一个亚种，直接来自粪便，它除了耐热，在44~44.5℃的高温条件仍可生长繁殖并将色氨基酸代写成吲哚处，其他特性均与总大肠菌群相同。
总大肠菌群中的细菌除了生活在肠道中，在自然环境中的水与土壤也经常存在，但在这些自然环境中生活的大肠菌群培养的最适合温度为25℃，如在37℃培养则仍可生长，但如果将培养温度上升至44℃则不可生长，而直接来自粪便的大肠菌群，习惯于37℃左右生长，如将培养温度升高至44.5℃仍可继续生长。
因此，可用提高培养温度的方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分开。
在37℃培养生长的大肠菌群，包括粪便内生长的大肠菌群成为总大肠菌群 Total colifrom，在44.5℃仍能生长的大肠菌群称为粪大肠菌群 Fecal colifrom，粪大肠菌群细菌在卫生学上具有重要的意义。
过滤膜法测粪大肠菌群数-国标方法
滤膜法-粪大肠菌群的测定1、适用范围本标准适用于地表水、地下水、及水中粪大肠菌群的测定。
用于检验加氯消毒的水样时，在滤膜法之前，先做试验，证实它所得的数据资料与多管发酵试验所得的数据资料具有可比性。
2、原理滤膜是一种微孔性薄膜。
将水样注入已灭菌的放有滤膜（孔径0.45微米）的滤器中，经过抽滤，细菌即被截留在膜上，然后将滤膜贴于M-FC培养基上，44.5℃温度下进行培养，计数滤膜上生长的此特性的菌落数，计算出每1L水样中含有粪大肠菌群数。
3仪器：滤膜（孔径0.45微米）、滤器、接液瓶、垫圈、无菌镊子夹3、培养基和试剂本标准所用试剂除另有注明外，均为符合国家标准的分析纯化学试剂，实验室用水为新制备的去离子水。
M-FC培养基：胰胨10g蛋白胨5g酵母浸膏 3.0g氯化钠 5.0g乳糖12.5g胆盐三号 1.5g1%苯胺蓝水溶10ml1%玫瑰色酸溶液（溶于0.2mol/L氢氧化钠液中）10ml蒸馏水1000ml制法：将上述培养基中的成分（除苯胺蓝和玫瑰色酸外），置于蒸馏水中加热溶解，调节PH为7.4，分装于小烧瓶内，每瓶100ml，于115℃灭菌20min。
储存于冰箱中备用，临用前，按上述配比，用灭菌吸管分别加入已煮沸灭菌的1%苯胺蓝溶液1ml及新配制的1%玫瑰色酸溶液（溶于氢氧化钠溶液）1ml，混合均匀。
加热溶解前，加入1.2%～1.5%琼脂制成固体培养基。
如培养物中杂菌不多，则培养基中不加玫瑰色酸亦可。
4、步骤水样的选择：水样量的选择根据细菌受检验的特征和水样中预测的细菌密度而定。
理想的水样体积是一片滤膜上生长20～60个粪大肠群菌落，总菌落数不超过200个。
滤膜及滤膜灭菌：将滤膜放入高压蒸汽灭菌锅里在121℃灭菌10min，滤器、接液瓶、垫圈分别用纸包好，在使用前经121℃灭菌20min，滤器也可用点燃的酒精棉球火焰灭菌。
过滤：用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘，将粗糙面向上，贴放在已灭菌的滤床上，稳妥的固定好滤器。
实验水中总大肠菌群的测定(多管发酵法)
①伊红美蓝培养基上：深紫黑色，具有金属光泽的菌落；紫黑色，不带或略带 金属光泽的菌落；淡紫红色，中心色较深的菌落。 ②品红亚硫酸钠培养基上：紫红色，具有金属光泽的菌落；深红色，不带或略 带金属光泽的菌落；淡红色，中心色较深的菌落。(3)取有上述特征的群落进 行革兰氏染色 ③用已培养18—24h的培养物涂片，涂层要薄。 ④将涂片在火焰上加温固定，待冷却后滴加结晶紫溶液，1min后用水洗去。 ⑤滴加助染剂，1min后用水洗去。 ⑥滴加脱色剂，摇动玻片，直至无紫色脱落为止(约20—30s)，用水洗去。
三、仪器
1.高压蒸气灭菌器。 2.恒温培养箱、冰箱。 3.生物显微镜、载玻片。 4.酒精灯、镍铬丝接种棒。 5.培养皿(直径100mm)、试管(5×150mm)，吸管(1、5、10mL)、烧 杯(200、500、2000mL)、锥形瓶(500、1000mL)、采样瓶。
实验八 水中大肠杆菌的测定
（三）多管发酵法检测大肠菌群
1.取5支装有3倍浓乳糖蛋白胨培养基的初发酵管，每支分别 加入水样10mL。另取5支装有乳糖蛋白胨培养基的初发酵 管，每支分别加入水样1mL。再取5支装有乳糖蛋白胨培养 基的初发酵管，每支分别加入按1：10稀释的水样1mL，均 贴好标签。摇匀后在37℃恒温箱中培养24h。
三、实验材料和用具
1、培养基 复红亚硫酸钠培养基、乳 糖蛋白胨半固体培养基、乳糖蛋白胨 培养液、3倍浓乳糖蛋白胨培养液、伊 红美兰培养基。
2、仪器及用具 微孔滤膜（0.45um）、 滤器（500mL）、抽气设备、镊子、 发酵用试管、杜氏小管、培养皿、刻 度吸管或移液管、接种环、酒精灯。
四、操作步骤
（一）水样的采集
1.自来水 将自来水龙头用火焰灼烧3min灭菌， 在拧开水龙头流水5min，以排除管道内积存的死 水，随后用已灭菌的三角瓶接取水样。
2.池水、河水、或湖水 将无菌的带玻璃塞的小口 瓶侵入距水面10~15cm深的水层中，瓶口朝上， 除去瓶塞，待水流入瓶中装满后，盖好瓶塞，取 出后立即进行检测，或临时存于冰箱，但不能超 过24h。
（二）滤膜法检测大肠菌群
1.无菌滤膜 无菌镊子 滤器膜承受器，过滤杯——滤膜承 受器，旋紧。真空泵——抽气口
2.水100mL滤杯，启动抽真空系统，使水从下端流出。 3.有细胞的滤膜 无菌镊子 平贴于复红亚硫酸钠固体培养
基上（紧贴，无气泡），37℃培养16~18h。挑选红色或紫 红色、带有或不带有金属光泽的菌落，或淡红色、中心颜 色较深的菌落进行涂片和革兰氏染色观察。 4.经染色证实为革兰氏阴性无芽孢杆菌者，接种到乳糖蛋白 胨半固体培养基上， 37℃培养6~8h后观察，产气者为阳 性（观察要及时，以免气泡消失） 5.结果计算
滤膜法与酶底物法检测污水中粪大肠菌群的比较分析
滤膜法与酶底物法检测污水中粪大肠菌群的比较分析滤膜法与酶底物法检测污水中粪大肠菌群的比较分析一、引言随着城市化进程的加速和人口的不断增长，污水处理成为一项重要的环保任务。
污水中的粪大肠菌群是评估水质和卫生水平的重要指标之一。
为了准确快速地检测污水中的粪大肠菌群，科学家们发展了各种检测方法。
其中，滤膜法和酶底物法是常用的两种方法，本文将对这两种方法进行比较分析。
二、滤膜法滤膜法是通过将粪大肠菌群附着在滤膜上，再通过计数形状与颜色进行检测。
其操作包括取样、滤膜萃取、滤膜染色和计数四个步骤。
滤膜法具有简单、直观、操作便捷等优势，被广泛应用于实际工作中。
然而，滤膜法的检测结果容易受到环境因素的干扰，例如水质的浑浊度、背景物质的影响等，这可能导致结果的不准确。
三、酶底物法酶底物法是通过检测粪大肠菌群特有的酶活性来间接测定其存在。
常用的指示剂是3-indoxyl-β-D-glucuronide（X-Gluc），它能与酶β-D-葡萄糖苷酸酶反应产生可见的蓝色产物。
这种方法的优势在于结果的准确性较高，而且不受环境因素的影响。
但是，酶底物法需要较长的检测时间，操作较为复杂，并且对仪器设备要求较高。
四、比较分析（1）准确性方面：滤膜法和酶底物法在检测粪大肠菌群方面均有较高的准确性，但是酶底物法的结果更为精确。
滤膜法容易受到环境因素的影响，导致结果的偏差。
（2）操作方面：滤膜法操作简便，流程清晰，不需要特殊的仪器设备，适用于现场快速检测。
酶底物法的操作较为复杂，需要仪器设备支持，所需时间较长。
（3）受环境因素影响方面：滤膜法受环境因素影响较大，如水质浑浊度、背景物质等因素会干扰检测结果。
酶底物法不受环境因素的影响，结果更为稳定。
（4）适用范围方面：滤膜法适用于对大量样品进行快速筛查，特别是现场检测。
酶底物法适用于对粪大肠菌群的高灵敏度检测，尤其适合于研究或实验室内的检测。
五、结论综上所述，滤膜法和酶底物法是常用于检测污水中粪大肠菌群的两种方法。
总大肠菌群说明
滤膜上，然后将滤膜贴在选择性培养基上，经培养后，直接计数滤膜上生长的典型大肠菌群
菌落，算出每升水样中含有的总大肠菌群数。
3 仪器
3.1 滤器
3.2 滤膜，孔径 0.45~0.65μm。直径根据滤器规格，目前常用的有 3.5cm 和 4.7cm 两种。
3.3 抽滤设备。
3.4 无齿镊子。
3.5 高压蒸汽灭菌器。
4.2 三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液
按上述乳糖蛋白胨培养液浓缩三倍配制。
4.3 品红亚硫酸钠培养基（供多管发酵法用）
4.3.1 成分
蛋白胨
10g
乳糖
10g
磷酸氢二钾
3.5g
0ml
无水亚硫酸钠
5g 左右
5%碱性品红乙醇溶液
20ml
4.3.2 储备培养基的制备
先将琼脂加至 900 蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使之溶解，
每 100ml 水样中总大肠 菌群近似数
5 7 9 12 14 16 7 9 12 14 17 19 9 12 14 17 19 22 12 14 17 20 22 25 15 17 20 23 25 28 21 24 28 32 36 40 25 29 32 37 41 45
接种量，ml 10 1 0.1 2 50 2 51 2 52 2 53 2 54 2 55 3 00 3 01 3 02 3 03 3 04 3 05 3 10 3 11 3 12 3 13 3 14 3 15 3 20 3 21 3 22 3 23 3 24 3 25 3 30 3 31 3 32 3 33 3 34 3 35 4 30 4 31 4 32 4 33 4 34 4 35 4 40 4 41 4 42 4 43 4 44 4 45
滤膜法在测定水中大肠菌群中的应用
滤膜法在测定水中大肠菌群中的应用社会快速发展，各个行业也随之发展，加大了对水污染程度，特别是对生活饮用水的安全性及可靠性越来越重视，为了保证生活饮用水更加安全可靠，人们寻找更快速、更灵敏的饮用水监测方法。
而大肠菌群作为评价饮用水卫生质量重要评价指标，可将水污染程度予以反映，对人们饮用水安全做以支撑，滤膜法作为检测水中大肠菌群方法之一，其具有操作便捷、结果可靠等特点，被人们所普遍应用。
那么什么是滤膜法？测定水中大肠菌群有什么意义？滤膜法测定水中大肠菌群的原理是什么？滤膜法测定水中大肠菌群的过程及注意事项有哪些？滤膜法检测水中大肠菌群有哪些优势？下面将详细介绍。
1.什么是滤膜法？滤膜法作为检测水样中大肠菌群的常用方法，具体而言，将一定水量注入已经灭菌的微孔薄膜滤器中，通过对其进行抽滤，细菌被保留在滤膜之上，再将滤膜放置于贴满品红亚硫酸的培养基上，经过一定时间培养，对滤膜上的大肠菌群菌落数量予以计算及鉴定，以每升或每100毫克水样作为基础，计算其大肠菌群数量，此方法具有操作简单、速度快、结果可靠等特点，通常适用于杂质较少的水样。
1.测定水中大肠菌群的意义是什么？通过检查水中是否存在病原菌，从而可判断水质的安全性及可靠性，但是因为病原菌种具有种类繁多、培养困难等特点，使直接从水中进行对病原菌检测难以实现，因人类肠道病原菌主要来源为粪便污染水，与水体中病原菌相比较，其粪便中病原菌数量较少，所以通过检测水中是否存在肠道正常细菌种类，从而判定水质质量安全性及可靠性。
若检测水中存在大肠菌群，表明水样受到粪便污染，存在病原菌被污染的可能。
1.滤膜法测定水中大肠菌群原理？滤膜法检测水中大肠菌群原理，采取过滤器将水样予以过滤，使其中细菌存留在过滤膜上，然后将滤膜存放在特定培养基上予以培养，大肠菌群通过在滤膜上不断生长，从而直接对其数量予以计算，所用滤膜通常使用乙酸纤维膜。
1.滤膜法测定水中大肠菌群的过程及注意事项？滤膜法测定水中大肠菌群的过程重要为四个方面：4.1准备工作将滤膜放入烧杯中，在烧杯中注入一定量蒸馏水，将其放置于沸水中煮沸灭菌三次，每次保持在15分钟左右。
★水中大肠杆菌群检测方法-滤膜法
附件水中大腸桿菌群檢測方法－濾膜法NIEA E202.53B一、方法概要本方法係用濾膜檢測水中好氧或兼性厭氧、革蘭氏染色陰性、不產芽孢之大腸桿菌群（Coliform group）細菌。
該群細菌在含有乳糖的Endo培養基上，於35 ± 1℃ 培養24 ± 2小時會產生紅色色系具金屬光澤菌落。
所有缺乏金屬光澤的菌落，均判定為非大腸桿菌群。
二、適用範圍本方法適用於地面水體、地下水體、廢水、污水及海域水質及水源水質水樣中大腸桿菌群之檢測。
三、干擾(一) 水樣中含有抑制或促進大腸桿菌群細菌生長之物質。
(二) 檢測使用的玻璃器皿及設備含有抑制或促進大腸桿菌群細菌生長的物質。
(三) 濁度過高之水樣易造成濾膜孔隙阻塞，或造成細菌菌落瀰漫生長（spreading）而影響水樣檢驗的觀察及結果的判讀。
四、設備(一) 量筒：100至1000 mL之量筒。
(二) 吸管：有0.1 mL刻度之10 mL之無菌玻璃吸管或無菌塑膠製吸管，或無菌微量吸管（micropipet）。
(三) 稀釋瓶：100至1000 mL可滅菌、具螺旋蓋之硼矽玻璃製品。
(四) 錐形瓶：200至1000 mL可滅菌之硼矽玻璃製品。
(五) 採樣容器：容量100 mL以上無菌之硼矽玻璃或塑膠製有蓋容器，使用市售無菌袋亦可。
(六) 培養皿：硼矽玻璃製或可拋棄式塑膠製培養皿，大小為60 × 15 mm、50 × 12 mm 或其他適當大小。
(七) 過濾裝置：能耐高溫高壓滅菌的玻璃、塑膠、陶瓷或不鏽鋼等材質構成之無縫隙漏斗，以鎖定裝置、磁力或重力固定於底部。
(八) 抽氣幫浦：水壓式或吸氣式，壓力差最好在138至207 kPa者。
(九) 濾膜：使用材質為混合纖維素酯（mixed cellulose esters），直徑47 mm、孔徑0.45 μm且有格子記號的無菌濾膜。
(十) 鑷子：前端平滑、內側無波紋，使用前浸泡於95% 酒精再以火燄燃燒滅菌。
食品中大肠菌群的检测及分离纯化
实验8: 食品（饮用水）中大肠菌群的检测（滤膜法）及分离纯化（6学时）一、目的要求1.利用滤膜法测定食品中大肠菌群。
2.掌握分离微生物的基本操作。
二、基本原理1.滤膜法是采用过滤器过滤水样，使其中的细菌截留在滤膜上，然后将滤膜放在适当的培养基上进行培养，大肠菌群可直接在膜上生长，从而可直接计数。
所用滤膜是一种多孔硝化纤维膜或乙酸纤维膜，用水系过滤膜即可，其孔径约0.45μm。
2.在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。
得到纯培养的过程称为分离纯化。
三、试验原料及器材实验原料：伊红美蓝琼脂平板或远藤氏琼脂平板，乳糖蛋，蛋白胨，灭菌水，饮用水等；器材：镊子；夹钳；烧杯；真空泵；滤膜；过滤器等。
四、操作步骤1.大肠菌群的检测（1）滤膜灭菌将滤膜放入装有蒸馏水的烧杯中，加热煮沸15分钟，共煮沸三次，前两次煮沸后换水洗涤2—3次再煮，以洗去滤膜上残留的溶剂。
（2）过滤器装置用无菌手续将已灭菌的过滤器基座、滤膜、漏斗和抽滤瓶安装好，其中滤膜用灭菌镊子(浸在95%酒精内，用时通过火焰灭菌)移至过滤器的基座上。
其他可直接用手或夹钳操作，但不要碰到伸入抽滤瓶的橡皮塞部分，以免染菌。
（3）将抽滤瓶接上真空泵。
（4）加水样过滤直径50mm的滤膜，所过滤的水量以培养后长出的菌落数一般需要较多过滤器装置，多于50个为适宜，所以采用多联过滤器最好，可以减少误差。
一般清洁的深井水或经处理过的河水与湖水等可取样 300—500 ml；对比较清洁的河水或湖水，可取样1-100ml；严重污染的水样可先进行稀释；未知的水样可做三个稀释度，选择菌落数合适的稀释度进行计算。
本次实验于过滤器漏斗内加入比较河水或湖水100ml，加盖。
（5）开动真空泵进行油滤。
（6）抽完后，加入等量的灭菌水继续抽滤，目的是冲洗漏斗壁。
（7）滤毕，关上真空泵，用灭菌镊子取滤膜边缘，将没有细菌的一面紧贴在伊红美蓝琼脂平板上。
滤膜与培养基之间不得有气泡。
滤膜法检验水中总大肠菌群方法有关问题
浅议滤膜法检验水中总大肠菌群方法有关问题[摘要]水质细菌学检测是水质分析中的重要指标，其对于保障居民饮用水安全具有关键指导意义。
本文作者基于多年水质检验的实践工作经验，从理论依据、操作步骤及注意事项等方面对滤膜法检验水中总大肠菌群方法有关问题进行探讨，以期在实践工作中具有借鉴作用。
[关键词]滤膜法水质检验总大肠菌群中图分类号：r123.1 文献标识码：a 文章编号：1009-914x（2013）13-0210-01前言总大肠菌群作为环境水质日常检测的指标之一，对于反映水污染程度、保障居民饮用水安全具有重要指导意义。
滤膜法作为水中总大肠菌群传统的检测方法，因操作简单、检测快速、结果可靠而得到广泛应用。
随着生物科学技术的不断发展，一些诸如pcr分子生物学方法、试剂盒法、免疫学方法、酶活性检测法等新兴检测方法也逐渐发展起来，虽然新的检测体系在特异性、敏感性、准确性上均有不用程度的提高，但因其技术复杂性、操作专业性、成本昂贵等条件制约了它们广泛应用。
作为检验水中总大肠菌群经典的检测方法，滤膜法也在技术上不断改进，本文就滤膜法在实践应用中的相关问题进行探讨。
1.总大肠菌群检测的意义1.1 总大肠菌群大肠菌群指一群需氧、兼性厌氧的革兰氏阴性无芽抱杆菌，其特征为在37±1℃条件下，反应24h能分解乳糖，产酸、产气，包括大肠杆菌、肠杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯菌属等，其中大肠杆菌为主要菌种，其余各菌为次要菌种，也称为非典型大肠杆菌。
总大肠菌群主要来源于人畜粪便，作为环境水质被粪便污染的标志，因其检测应用面广，使用频率高而成为一项卫生细菌学检验的必检项目。
1.2 总大肠菌群检测的意义检查水中有无病原菌是判断水质安全性的最直接、有效的标准，然而，由于病原菌种类众多及水体环境相对复杂，要针对某一种细菌进行分离、培养是比较困难的，所以目前直接从水中进行病原菌的检测是无法普及实现的。
由于人类肠道传染病病原菌主要来自于粪便污水，相对水体中病原菌种类繁多，粪便中病原菌数量较少。
水质粪大肠菌群的测定（多管发酵法和滤膜法）HJ347-2017.pdf
水质 粪大肠菌群的测定粪大肠菌群是总大肠菌群中的一部分，主要来自粪便。
在44.5℃温度下能生长并发酵乳糖产酸产气的大肠菌群称为粪大肠菌群。
用提高培养温度的方法，造成不利于来自自然环境的大肠菌群生长的条件，使培养出来的菌主要为来自粪便中的大肠菌群，从而更准确地反映出水质受粪便污染的情况。
粪大肠菌群的测定可以用多管发酵法和滤膜法。
第一篇 多管发酵法1 适用范围本标准适用于地表水、地下水及废水中粪大肠菌群的测定。
2原理多管发酵法是以最可能数（most probable number）简称MPN来表示试验结果的。
实际上它是根据统计学理论，估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。
如果从理论上考虑，并且进行大量的重复检定，可以发现这种估计有大于实际数字的倾向。
不过只要每一稀释度试管重复数目增加，这种差异便会减少，对于细菌含量的估计值，大部分取决于那些既显示阳性又显示阴性的稀释度。
因此在实验设计上，水样检验所要求重复的数目，要根据所要求数据的准确度而定。
3 培养基和试剂本标准所用试剂除另有注明外，均为符合国家标准的分析纯化学试剂；实验用水为新制备的去离子水。
3.1单倍乳糖蛋白胨培养液：成分：蛋白胨10g牛肉浸膏3g乳糖5g氯化钠5g1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL蒸馏水1000mL制法：将蛋白胨、牛肉浸膏、乳糖、氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中，调节pH为7.2～7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于含有倒置的小玻璃管的试管中，于高压蒸汽灭菌器中，在115℃灭菌20min，贮存于暗处备用。
3.2 三倍乳糖蛋白胨培养液：按上述配方比例三倍（除蒸馏水外），配成三倍浓缩的乳糖蛋白胨培养液，制法同上。
3.3 EC培养液：成分：胰胨20g乳糖5g胆盐三号 1.5g磷酸氢二钾（K2HPO4）4g磷酸二氢钾（KH2PO4） 1.5g氯化钠5g蒸馏水1000mL制法：将上述成分加热溶解，然后分装于含有玻璃倒管的试管中。
滤膜法测定水中粪大肠菌群_张正兴
样 （如 水 样 含 菌 数 较 多 ，可 减 少 过 滤 水 样 量 ，或 将 水 样 稀 释 ）
注入滤器中，打开滤器阀门，在负 "0# 大气压下抽滤。
;0D08 培 养 水 样 滤 完 后 ，再 抽 气 约 #N，关 上 滤 器 阀 门 ，取
下 滤 器 ，用 灭 菌 镊 子 夹 取 滤 膜 边 缘 部 分 ，移 放 在 *<= 培 养
塑料袋内，浸 到 880#9恒 温 水 浴 里 ，培 养 !!H!8.。 粪 大 肠 菌
群在此培养基上菌落为蓝色，非粪大肠菌群菌落为灰色至
奶油色。
;0D0# 菌 落 计 数 对 可 疑 菌 落 转 种 J= 培 养 基 ，880#9培 养
!!H!8.，如 产 气 则 证 实 为 粪 大 肠 菌 群 。 计 数 被 证 实 的 粪 大 肠
实用医药杂志 !""# 年 "$ 月第 !! 卷第 "$ 期 %&’( ) *+, - %.’&/0123 !!4!""#5"$ 620"$
输血杂志，!"""4 ;D（;）：#" 8 曹 凤4季 阳4黄如欣4等0 四川和福建两省部分地区献血者和危
险人群中 BX@15# ? $感染状况调查0 中国输血杂志4 ;II$4 ;;Y!Z[
基 上 ，滤 膜 截 留 细 菌 面 向 上 ，滤 膜 应 与 培 养 基 完 全 贴 紧 ，两
者 间 不 得 留 有 气 泡 ，然 后 将 平 皿 倒 置 ，放 入 880#9隔 水 式 培
养箱内培养 !!H!8.。如使用恒温水浴，则需用 塑 料 平 皿 ，将
平 皿 盖 紧 ，或 用 防 水 胶 带 贴 封 每 个 平 皿 ，将 培 养 皿 成 叠 封 入
大肠菌群的检测原理和方法
大肠菌群的检测原理和方法宝子们，今天咱们来唠唠大肠菌群的检测呀。
先说说检测原理哈。
大肠菌群呢，它是一群在一定条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。
这就像是给它们定了个小特征标签。
咱们利用这个特性来检测它们呢。
比如说在含有乳糖的培养基里，如果有大肠菌群，它们就会分解乳糖，让培养基的酸碱度发生变化，还可能产生气体。
就好像大肠菌群是一群小馋猫，看到乳糖这个美食就忍不住动手脚啦，然后我们就可以通过观察这些变化来判断有没有大肠菌群存在。
那检测方法呢？有好几种哦。
一种是多管发酵法。
咱先把样品接种到乳糖胆盐发酵管里，这就像是给大肠菌群安排了个小房间，看看它们会不会在这个房间里搞出动静来。
如果发酵管里有气体产生，而且培养液变浑浊了，那可能就有大肠菌群在里面嗨呢。
然后再把这些有反应的发酵管里的菌液接种到伊红美蓝琼脂平板上。
在这个平板上，大肠菌群会长出有特征的菌落哦，比如是紫黑色、有金属光泽的菌落。
这就像大肠菌群在平板上给自己盖了个独特的小房子，咱们一眼就能把它们认出来啦。
还有一种是滤膜法。
这个方法就像是给样品里的菌来个大筛选。
把样品通过滤膜过滤，大肠菌群就被截留在滤膜上啦。
然后把滤膜放到含有特定培养基的平皿里培养。
如果有大肠菌群，它们就在滤膜上慢慢长大，形成菌落。
这种方法就像是从一群小伙伴里把大肠菌群这个小群体给挑出来一样。
另外呢，还有平板计数法。
就是把样品直接接种到平板培养基上，然后数长出来的符合大肠菌群特征的菌落个数。
就像数星星一样，一个一个把大肠菌群的菌落数清楚。
检测大肠菌群可重要啦，因为它能反映出环境或者食品的卫生状况呢。
要是大肠菌群超标，那可就说明这个东西不太干净啦，可能会影响咱们的健康。
所以这些检测方法就像是一个个小卫士，帮我们把好健康的关哦。
实验大肠菌群的检验
预测模型构建
比较不同样品之间大肠菌群数量的差异，如独立样本t检验、配对t检验等。
分析大肠菌群数量与其他因素（如环境因素、水质指标等）之间的相关性。
利用已知数据建立预测模型，预测未知样品的大肠菌群数量。
05
实验结论和讨论
大肠菌群数量与污染程度正相关
温度对大肠菌群生长有较大影响
时间的延长有助于提高检出率
大肠菌群广泛分布于粪便、水源、食品等环境中，因此成为水质和环境监测的重要指标。
本实验主要采用多管发酵法和滤膜法进行大肠菌群检测。
大肠菌群是指一群革兰氏阴性杆菌，主要包括肠杆菌、枸橼酸杆菌、沙门菌等。
将待测水样接种到含有选择性培养基的发酵管中，培养后观察是否产气，以判定是否存在大肠菌群。通过比较不同稀释度的水样，可以得到水样中大肠菌群的近似数量。
根据检验结果，对大肠菌群的数量和分布进行分析，以便于评估食品的质量和安全性。
根据相关标准和规定，对检验结果进行判定，判断食品是否符合卫生标准和要求。
03
结果判定
02
01
04
实验数据分析和处理
原始数据的记录
在实验过程中，需要实时记录每个样品中大肠菌群的数量、颜色、大小等特征。
重复实验数据的记录
为了保证实验结果的可靠性，需要对每个样品进行多次实验，每次实验的数据都需要详细记录。
结果讨论
样品采集和处理方式的不同对大肠菌群检验结果产生一定影响。例如，采集的样品不均一、样品处理不当等可能会导致结果的不准确。
影响因素分析
实验条件如温度、湿度、pH值等的变化也会对大肠菌群的生长和检出率产生影响。因此，实验过程中需要严格控制这些条件，以保证结果的准确性。
不同的检测方法在检出率和准确性方面存在差异，因此选择适合的检测方法对大肠菌群检验结果也有影响。
水中总大肠菌群的测定
微生物综合实验：水中细菌总数和大肠菌群的测定一实验目的1、学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。
2、了解水源水的平板菌落计数的原则。
3、学习检测水中大肠菌群的方法，了解大肠菌群数量与水质状况的关系。
二、实验原理水中细菌总数可作为判定被检水样被有机物污染程度的标志。
本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。
由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。
目前一般是采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。
我国规定1ml自来水中细菌总数不得超过100个。
大肠菌群是一群需氧或兼性厌氧的、在37℃培养24~28h能发酵乳糖产酸与产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌，它们普遍存在于肠道中，且具有数量多，与多数肠道病原菌存活期相近，易于培养和观察等特点。
大肠菌群数是指每升水中含有的大肠菌群的近似值。
大肠菌群的检测方法有多管发酵法和滤膜法两种。
本实验采用多管发酵法，它被称为水的标准分析法，即将一定量的样品接种乳糖发酵管，根据发酵反应的结果，确证大肠菌群的阳性管数后在检索表中查出大肠菌群的近似值。
我国规定：每升自来水中大肠菌群数不得超过3个。
三、实验材料和用具：1、培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，乳糖蛋白胨培养基，三倍浓度浓缩乳糖蛋白胨培养基，伊红美兰培养基（EMB培养基）。
2、试剂：无菌水、结晶紫染液、卢氏碘液、95%乙醇、番红染色液。
3、器皿：灭菌三角烧瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养皿，灭菌吸管，灭菌试管，德汉氏小管，载玻片，无菌空瓶，移液管，接种环，酒精灯，注射器，显微镜等。
四、实验步骤第一周（2008-11-11）1、制备无菌水：取4支试管，向每支试管中加入9ml自来水。
2、配制：牛肉膏蛋白胨培养基（牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂15~20g，蒸馏水1000ml，pH 7.2~7.4）乳糖蛋白胨培养基（蛋白胨10g，牛肉膏3g，乳糖5g，NaCl 5g，1．6%溴甲酚紫乙醇溶液1ml，蒸馏水1000ml，pH 7.2~7.4）三倍浓度浓缩乳糖蛋白胨培养基（将上述乳糖蛋白胨培养基浓缩3倍配制）3、将以上配制的无菌水和培养基全部进行灭菌处理。
滤膜法检验水中总大肠菌群方法中一些问题的探讨
滤膜法检验水中总大肠菌群方法中一些问题的探讨作者：王淑梅来源：《硅谷》2011年第16期摘要：建立滤膜法在检测总大肠菌群的关键步骤。
要使大肠杆菌的检验结果比较能正确反映被检水中的大肠杆菌群得数量，应选取适量水量，并应作两份平行检验关键词：滤膜法；总大肠菌群；菌落数中图分类号：R117 文献标识码：A 文章编号：1671－7597（2011）0820172－01我国制定的生活饮用水细菌总数和总大肠菌群的检验方法中，把总大肠菌群定义为：系一群需氧及兼性厌氧，在37℃生长时能使乳糖发酵，在24小时内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
滤膜法的检验步骤分为三步，第一步将水中所含细菌过滤截留在滤膜上，在37℃的恒温箱中进行24小时鉴别培养；第二步，挑选鉴别培养基上所生成的各种色泽的菌落进行涂片革兰氏染色，观察形态及染色反应；第三步再挑取革兰氏染色阴性无芽胞的杆菌菌落进行发酵试验观察对乳糖的发酵情况。
通过这三种步骤来确定滤膜上所生长的各种色泽菌落是否是总大肠菌群。
对于这一检验操作步骤能否简化，进行一步操作或二步操作就可确定和计算水中总大肠菌群数。
即单作第一步；或作第一步和第二步；或作第一步和第三步，不作第二步。
针对这一问题，我们进行了一些试验，现将结果整理如下。
试验中所用的培养基品红亚硫酸钠培养基。
发酵是用液体乳糖发酵培养基。
1 试验结果从表1看出：在品红亚硫酸钠鉴别培养基上所生长的各种不同色泽的菌落中，紫红色有金属光泽的菌落中，有94%是典型大肠杆菌形态及革兰氏染色反应阴性的菌种，只有6%是非典型大肠杆菌形态（即短小杆菌）及革兰氏染色反应阴性（色介于红与紫之间的）菌种。
在深红色的菌种中，典型大肠杆菌形态及革兰氏染色反应阴性的菌种所占百分比就比紫红色有金属光泽菌落的低，只有33.4%。
而非典型大肠杆菌形态及革兰氏染色反应阴性的菌种所占百分数增加，高达66.6%。
在淡红色的菌落中典型和非典型大肠杆菌形态及革兰氏染色反应阴性菌种所占百分比不但低于深红色菌落，而且还有球菌菌种。
滤膜法测定水质中粪大肠菌群方法验证10
检测分析方法验证报告报告编号:xxxxxxx方法名称：水质粪大肠菌群测定滤膜法验证人员：xxx xxx审核人员：xxx验证日期：xxxx年xx月xx日xxxxxx有限公司水质粪大肠菌群测定滤膜法一、方法依据本方法依据《水质粪大肠菌群的测定滤膜法》（HJ 347.1-2018）用滤膜法测定水中粪大肠菌群，适用于地表水、地下水、生活污水以及工业废水的粪大肠菌群测定。
本方法的检出限为，当接种量为100mL时，检出限为10CFU/L；当接种量为500mL时，检出限为2CFU/L。
二、方法原理将待测样品通过孔径为0.45μm的滤膜过滤，然后将滤膜置于MFC选择性培养基上，在44.5℃条件下培养24h，粪大肠菌群生长并发酵乳糖使指示剂变色，通过颜色判断是否产酸，并通过呈蓝色或蓝绿色菌落计数，测定样品中粪大肠菌群浓度。
样品采集时可加入硫代硫酸钠溶液消除活性氯对样品的干扰，或加入乙二胺四乙酸二钠溶液消除重金属离子对样品的干扰。
参加验证的人员情况登记表使用仪器情况登记表使用试剂及溶剂登记表三、分析步骤3.1样品过滤3.1.1待检样品组本次选用的待检样品为xx水源水，其接种量为100mL、10mL,最小过滤体积为10mL，接种量小于10mL时，应逐级稀释。
在无菌操作下用灭菌镊子夹取无菌滤膜贴放在已灭菌的过滤装置上，固定好过滤装置，将样品充分混匀后抽滤，以无菌水冲洗器壁2次。
样品过滤完后在抽气3s。
3.1.2阳性对照：取一粒大肠埃希氏菌（ATCC 25922）磁珠置于BHI液体培养液中，24h培养，使之菌悬液浓度在109CFU/mL，用无菌生理盐水按照10倍系列稀释法，稀释至10-7至10-8。
取10-7大肠埃希氏菌菌悬液进行接种，其接种量为100mL、10mL，最小过滤体积为10mL，接种量小于10mL时，应逐级稀释。
在无菌操作下用灭菌镊子夹取无菌滤膜贴放在已灭菌的过滤装置上，固定好过滤装置，将样品充分混匀后抽滤，以无菌水冲洗器壁2次。
水中总大肠菌群检测方法
水中总大肠菌群检测方法水中总大肠菌群检测方法【摘要】俗话说：人可以七天不吃饭，但绝不可以三天不喝水。
这虽然是个俗语，但其意在说明水的珍贵。
水是人类赖以生存和发展的重要自然资源，它与人们的生活息息相关。
然而，在人们的日常用水中，饮用水的卫生质量是否达标，以及如何消除人们生活用水中存在的安全隐患等一系列问题已经成为我国社会民众广泛关注的话题。
【关键词】总大肠菌群；检测；检测方法随着社会经济的高速发展以及工业化、城市化进程的推进，水资源污染问题越来越严重，与此同时，人们对于生活饮用水的水质要求也越来越高。
目前，我国的饮用水中存在大量的微生物，其中，部分微生物对人们的身体健康有一定的威胁，因此，饮用水必须严格地进行消毒杀菌处理，并应经过严格的微生物检测，检测达标后方可输配给终端用户。
目前常采用的微生物检测方法主要有多管发酵法、滤膜法等。
笔者结合实际工作经验分析了相关的检验方法及步骤。
一、总大肠菌群饮用水中的总大肠菌群主要是指大肠杆菌、大肠菌群和粪大肠菌群三大类型细菌共同组成的大肠菌群。
总大肠菌群是指在37℃条件下培养时，能够使乳糖进行发酵，并且在全天24小时之内都产酸、产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
主要包括埃希氏菌属、柠檬酸细菌属肠杆菌属及克雷伯氏菌属四种细菌。
由于其数量大，在体外存活时间与肠道致病菌相近，且检验方法比较简便，故被作为检验肠道致病菌的指示菌。
水中大肠菌群数的多少，表明水体被粪便污染的程度，并间接地表明有肠道致病菌存在的可能性。
因此，总大肠菌群是评价饮用水水质的重要指标，具有广泛的卫生学意义。
目前，检测总大肠菌群的方法主要有两种，分别是多管发酵法和滤膜法。
二、多管发酵法多管发酵法是做早被用作水质检测的技术，至今应用已超过80年，在水样大肠菌群的检测中一直在应用。
其核心是将水样进行10倍系列稀释，分别接种到乳糖蛋白胨培养液中，在35℃培养48小时，观察细菌生长情况。
将产酸产气的发酵管分别转种在伊红美篮琼脂平板上进行分离培养，并通过革兰染色、镜检和进行证实试验。
滤膜法测定总大肠菌群讲解学习
滤膜法测定总大肠菌群滤膜法测定总大肠菌群1 主题内容与适用范围本方法规定了生活饮用水中总大肠菌群的滤膜测定方法。
本方法适用于生活饮用水和低浊度的水源水中总大肠菌群数的测定。
2 方法提要用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤水样，细菌被截留在滤膜上，将滤膜贴在选择性培养基上，经培养后，计数生长在滤膜上的典型大肠菌群菌落数。
3 培养基与试剂3.1 品红亚硫酸钠培养基3.1.1 成份A 蛋白胨 10gB 酵母浸膏 5gC 牛肉膏 5gD 乳糖 10gE 琼脂 15~20gF 硫酸氢二钾 3.5gG 无水亚硫酸钠 5g左右H 碱性品红乙醇溶液(50g/L) 20mLI 蒸馏水 1000mL3.1.2 储存培养基的制备先将琼脂加到500mL蒸馏水中，煮沸溶解，于另500mL蒸馏水中加入硫酸氢二钾、蛋白胨、酵母浸膏和牛肉膏，加热溶解，倒入已溶解的琼脂，补充蒸馏水至1000mL，混匀后调pH为7.2~7.4，再加入乳糖，分装，115℃高压灭菌20min，储存于冷暗处备用。
3.1.3 平皿培养基的配制将上法制备的储存培养基加热融化，用灭菌吸管按比例吸取一定量的5％碱性品红乙醇溶液置于灭菌空试管中，再按比例称取所需的无水硫酸钠置于另一灭菌试管中，加灭菌水少许，使其溶解后，置沸水浴中煮沸10min以灭菌。
用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液，滴加于碱性品红乙醇溶液至深红色退成淡粉色为止，将此亚硫酸钠与碱性品红的混合液全部加到已融化的储存培养基内，并充分混匀(防止产生气泡)，立即将此种培养基15mL倾入已灭菌的空平皿中。
待冷却凝固后置冰箱内备用。
此种以制成的培养基于冰箱内保存不宜超过二周。
如培养基已由淡粉色变为深红色，则不能再用。
3.2 乳糖蛋白胨培养基3.2.1 成份A 蛋白胨 10gB 牛肉膏 3gC 乳糖 5gD 氯化钠 5gE 溴甲酚紫乙醇溶液(16g/L) 1mLF 蒸馏水 1000mL3.2.2 制法将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠溶于蒸馏水中，调整pH为7.2~7.4，再加入1mL1.6％溴甲酚紫乙醇溶液，充分混匀，分装于装有倒管的试管中，115℃高压灭菌20min，贮存于冷暗处备用。
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滤膜法测定总大肠菌
群
滤膜法测定总大肠菌群
1 主题内容与适用范围
本方法规定了生活饮用水中总大肠菌群的滤膜测定方法。
本方法适用于生活饮用水和低浊度的水源水中总大肠菌群数的测定。
2 方法提要
用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤水样，细菌被截留在滤膜上，将滤膜贴在选择性培养基上，经培养后，计数生长在滤膜上的典型大肠菌群菌落数。
3 培养基与试剂
3.1 品红亚硫酸钠培养基
3.1.1 成份
A 蛋白胨 10g
B 酵母浸膏 5g
C 牛肉膏 5g
D 乳糖 10g
E 琼脂 15~20g
F 硫酸氢二钾 3.5g
G 无水亚硫酸钠 5g左右
H 碱性品红乙醇溶液(50g/L) 20mL
I 蒸馏水 1000mL
3.1.2 储存培养基的制备
先将琼脂加到500mL蒸馏水中，煮沸溶解，于另500mL蒸馏水中加入硫酸氢二钾、蛋白胨、酵母浸膏和牛肉膏，加热溶解，倒入已溶解的琼脂，补充蒸
馏水至1000mL，混匀后调pH为7.2~7.4，再加入乳糖，分装，115℃高压灭菌20min，储存于冷暗处备用。
3.1.3 平皿培养基的配制
将上法制备的储存培养基加热融化，用灭菌吸管按比例吸取一定量的5％碱性品红乙醇溶液置于灭菌空试管中，再按比例称取所需的无水硫酸钠置于另一灭菌试管中，加灭菌水少许，使其溶解后，置沸水浴中煮沸10min以灭菌。
用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液，滴加于碱性品红乙醇溶液至深红色退成淡粉色为止，将此亚硫酸钠与碱性品红的混合液全部加到已融化的储存培养基内，并充分混匀(防止产生气泡)，立即将此种培养基15mL倾入已灭菌的空平皿中。
待冷却凝固后置冰箱内备用。
此种以制成的培养基于冰箱内保存不宜超过二周。
如培养基已由淡粉色变为深红色，则不能再用。
3.2 乳糖蛋白胨培养基
3.2.1 成份
A 蛋白胨 10g
B 牛肉膏 3g
C 乳糖 5g
D 氯化钠 5g
E 溴甲酚紫乙醇溶液(16g/L) 1mL
F 蒸馏水 1000mL
3.2.2 制法
将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠溶于蒸馏水中，调整pH为7.2~7.4，再加入1mL1.6％溴甲酚紫乙醇溶液，充分混匀，分装于装有倒管的试管中，115℃高压灭菌20min，贮存于冷暗处备用。
4 仪器
4.1 滤器。
4.2 滤膜，孔径0.45~0.65μm。
直经根据滤器规格，目前常用的有3.5cm和4.7cm两种。
4.3 抽滤设备。
4.4 无齿镊子。
4.5 培养箱: 36±1℃。
4.6 冰箱: 0~4℃。
4.7 天平。
4.8 显微镜。
4.9 平皿: 直径为9cm。
4.10 灭菌刻度吸管: 1mL,10mL。
5 检验步骤
5.1 准备工作
5.1.1 滤膜灭菌:
将滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水，置于沸水浴中煮沸灭菌三次，每次
15min。
前两次煮沸后需更换水洗涤2~3次，以除去残留溶剂。
5.1.2 滤器灭菌: 用点燃的酒精棉球，火焰灭菌。
也可用121℃高压灭菌
20min。
5.2 过滤水样
用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上，帖放在已灭菌的滤床上、，固定好滤器，将100mL水浴(如水样含菌数较多，可减少过滤水样量，或将水样稀释)注入滤器中，打开滤器阀门，在负0.5大气压下抽滤。
5.3 培养
水样滤完后，再抽气约5s，关上滤器阀门，取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在品红亚硫酸钠培养基(36.1.3.1)上，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后将平皿倒置，放入37℃恒温箱内培养22~24h。
6 观察结果
6.1 挑出符合下列特征菌落进行革兰氏染色、镜检。
紫红色，具有金属光泽的菌落。
深红色，不带或略带金属光泽的菌落。
淡红色，中心色较深的菌落。
6.1.1凡革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，再接种乳糖蛋白胨培养基液，于37℃培养24h，有产酸产气者，则判定为总大肠菌群阳性。
6.1.2 计算滤膜上生长的总大肠菌群数，以每100mL 水样中的总大肠菌群数报告之(CFU/100mL)
总大肠菌群菌落数(CFU/100mL)＝
───────────────────────………(36－1)。