鸡抗大肠杆菌血清抗体和卵黄抗体变化规律研究
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
由图１、２可见卵黄抗体的消长趋势与血清抗 体的基本一致。整个免疫试验期，血清抗体与卵 黄抗体效价滴度差别只在免疫初期比较明显。二 免后７ ｄ血清抗体与卵黄抗体走向基本一致，只是 血清中各抗体水平均比卵黄中相应抗体水平高。 差别为１～２个滴度。 ３讨论
试验表明，将引起仔畜腹泻的主要致病菌（大
－ １５ －
高免卵黄抗体是产蛋母鸡受免疫原刺激后 产生的特异性免疫球蛋白，并被转移和贮存在卵 黄中。抗大肠杆菌高免卵黄抗体可直接与该病原 微生物的菌毛作用，使之不能黏附于肠道黏膜细 胞，从而达到防治疾病的目的。用鸡抗大肠杆菌 卵黄抗体防治仔畜大肠杆菌性腹泻，不影响肠道 正常菌群，不存在抗药性和药物残留问题，也避 免了怀孕母畜因注射疫苗引起应激或仔畜母源 抗体水平不足而导致免疫失败等问题，因此用鸡
抗大肠杆菌卵黄抗体预防和治疗仔畜腹泻具有 广阔的前景［６］。
参考文献：
１ 房海． 大肠埃希氏菌［Ｍ］． 石家庄：河北科学技术出版社，１９９７： ９２－ １０５，１７２－ １７９，２２０－ ２２２． ２ 吴文福，巫月生，李嘉爱 等． 应用微量凝集试验检测鸡抗猪大肠 杆菌卵黄抗体的探索［Ｊ］． 广东畜牧兽医科技，２００２，２（７ １）：３３－ ３５． ３ Ｂａｒｔｚ Ｃ Ｒ ，Ｃｏｎｋｉｎ Ｒ Ｈ，Ｔｕｎｓｔａｌｌ Ｃ Ｂ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕｒｉｎｅ ｒｏｔａｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｃｈｉｃｋｅｎ ｅｇｇ ｙｏｌｋ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕ－ ｌｉｎ［ｓ Ｊ］． Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ，１９８０，１４２：４３９－ ４４１． ４ Ａｋｉｔａ Ｅ Ｍ，Ｎａｋａｉ Ｓ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｆｏｕｒ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ ｆｒｏｍ ｅｇｇｓ ｌａｉｄ ｂｙ ｈｅｎｓ ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ ｗｉｔｈ ａｎ ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃ ＥＴＥＣ ｓｔｒａｉ［ｎ Ｊ］． Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，１９９３，１６０－ ２０７． ５ 刘玉芬，刘洪雨，孙刚 等． 大肠杆菌Ｏ １２６免疫产蛋鸡后血清抗 体与卵黄抗体效价动态变化规律比较［Ｊ］． 黑龙江畜牧兽医， ２０００，（６）：２６－ ２７． ６ 华荣虹，张书霞． 鸡卵黄抗体在防治仔猪大肠杆菌性腹泻中的 应用［Ｊ］． 动物医学进展，２００２，２（３ １）：１３－ １５．
将上述四种菌液（１．３）分别稀释成含菌浓度 为３×１０９ ／ｍＬ，即为凝集抗原。 １．８ 血清抗体与卵黄抗体效价测定
采用微量凝集试验方法［２］，分别检测血清抗 体和卵黄抗体，以出现“＋ ＋ ”或以上的最高稀释倍 数为抗体的效价，以２Ｘ表示。 ２ 结果与分析 ２．１ 四价灭活疫苗免疫蛋鸡血清抗体的变化规 律及其相互关系（见图１）
－ １４ －
中国家禽 !２"００"#６ 年第 !２８$ 卷第 １８ 期
实验研究
Ｃｈｉｎａ Ｐｏｕｌｔｒｙ Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ．１８．２００６
按体积比例取司本８０和白油（４∶９６），加入２％的 硬脂酸铝（ｍ ／ｖ），混匀，高压灭菌，制成油相。将上 述四种菌液等量混合，并加入灭菌的吐温－ ８０至 ５％，充分混合后与上述油相按１∶３的比例充分乳化 即成油苗［１］。经检验验合格后贮于４ ℃备用。 １．４ 免疫程序
Ａｂｓｔｒ ａｃｔ：Ｌａｙｅｒｓ ｗｅｒｅ ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ ｗｉｔｈ ｉｎａｃｔｉｖｅｄ ｖａｃｃｉｎｅｓ，ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｐｒｅｐａｒａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｆｏｕｒ ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ （ＥＴＥＣ）ｓｔｒａｉｎｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｐｉｇｌｅｔｓ：Ｋ８８，Ｋ９９，９８７Ｐ ａｎｄ Ｆ４１． Ｔｈｅ ｓｅｒｕｍ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｎｄ ｙｏｌｋ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｔｅｒｍｌｙ ｗｉｔｈ
由图２可见，与血清抗体相比，卵黄抗体的出 现有滞后现象。一免后３ ｄ尚无卵黄抗体出现，７ ｄ 后只有个别鸡出现低滴度抗体（２０，２１）。但其上升 幅度快，下降也较缓慢，高峰期可持续３个月左 右。最后一次加强免疫后抗体水平也有所回升。４ 种抗体水平之间的差异与血清抗体一致。同时也 表明采用油佐剂效果较好，抗体水平上升快而 高，且维持时间较长。 ２．３ 四价灭活疫苗免疫蛋鸡血清抗体和卵黄抗 体的相关性
隐性白鸡在高海拔饲养情况下，性别间也表现 差异，但这种差异要迟于在低海拔正常生长情况。 体重在 １２ 周龄，胫长在 １０ 周龄开始表现明显差 别。但公鸡体重和胫长的生长拐点要迟于母鸡，生
长潜力大。公鸡绝对和相对生长速度都高于母鸡， 但相对生长速度性别间差别小于绝对生长速度。
参考文献：
１ 吾豪华，黄峰岩，谢金防 等． 隐性白羽祖代肉鸡的引种饲养观 察［Ｊ］． 江西畜牧兽医杂志，１９９９，（１）：９－ １０． ２ 张德祥，杨山． 不同性别肉仔鸡生长模式差异的研究［Ｊ］． 黑龙 江畜牧兽医，１９９８，（３）：１１－ １２． ３ Ｚｈａｎｇ Ｙ Ｓ，Ｄｕ Ｊ Ｚ． Ｔｈｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅ ａｎｄ ｐｒｏｌａｃｔｉｎ ｏｆ ｒａｔｓ ｔｏ ｈｙｐｏｘｉ［ａ Ｊ］． Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２０００，２７９：１３７－ １４０． ４ Ｇｕｉｌｌａｒｄ Ｊ Ｃ，Ｋｌｅｐｐｉｎｇ Ｊ．Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ａｔ ｈｉｇｈ ａｌｔｉｔｕｄｅ ｉｎ ｍｅｎ［Ｊ］． Ｅｕｒ Ｊ Ａｐｐｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ，１９８５，５４：５１７－ ５２３．
关键词：大肠杆菌；血清抗体；卵黄抗体
Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ Ｃｈａｎｇｅ Ｌａｗｓ ｏｆ Ｓｅｒ ｕｍ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｎｄ Ｙｏｌｋ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｇａｉｎｓｔ Ｅｎｔｅｒ ｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ Ｌａｙｅｒ ｓ
Ｄｉｎｇ Ｙａｈｏｎｇ，Ｗａｎｇ Ｑｉｕｊｕａｎ，Ｄｉｎｇ Ａｉｙｕｎ，Ｘｕ Ｊｉａｎｓｈｅｎｇ＊ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｙａｎｇｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｚｈｏｕ，Ｊｉａｎｇｓｕ ２２５００９）
由图１可见虽然血清中四种抗体的效价差异极 显著（Ｐ＜０．０１），但变化趋势趋向于一致。首免后血清 抗体均逐渐上升，三免、四免后均出现短暂时间内 的小幅度下降，三免后２０ ｄ血清抗体已达到较高水 平，四免后２０ ｄ达到峰值，维持３个月后缓慢下降。最 后一次加强免疫后抗体水平虽然有所回升但达不 到最高水平。这与吴文福等用三价大肠杆菌灭活苗 免疫蛋鸡的血清抗体的消长规律基本相似［２］。血清 中９８７Ｐ抗体的效价明显高于其它三者，它们的顺序 依次为９８７Ｐ＞Ｋ９９＞Ｆ４１＞Ｋ８８。与华荣虹等的用Ｋ８８、 Ｋ９９、９８７Ｐ和Ｆ４１的四价菌毛疫苗免疫蛋鸡后的抗体 的效价不尽相同（Ｋ８８的效价明显高于其它三者［） ３～６］。 这可能是不同菌株的免疫原性不同所导致的结果。 ２．２ 四价灭活疫苗免疫蛋鸡卵黄抗体的变化规 律及其相互关系（见图２）
首次免疫１ ｍＬ ／只；一次加强免疫１．５ ｍＬ ／只 （基础免疫后１４天）；二次加强免疫２ ｍＬ ／只（基础 免疫后２８天）；三次加强免疫２ ｍＬ ／只（基础免疫后
５０天）；四次加强免疫２ ｍＬ ／只（基础免疫后１８０天）。 免疫途径均为胸肌多点注射加颈部皮下注射。 １．５ 血清采集
首 免 后 ０、３、７、１０、１４、１７、２０、２４、２８、３５、４２、４９、 ５６、６３、７０、８５、１００、１１５、１３０、１４５、１６０、１７５、１９０、２０５、 ２２０天，逐只翅静脉采血１ ｍＬ，编号并分离血清。 － ２０ ℃贮存。 １．６ 卵黄抗体提取
Ｎ ＡＤＣ１５９（２ Ｏ ９∶Ｋ１０３，９８７Ｐ ∶Ｈ － ）、Ｃ８３５３（９ Ｏ １０１∶Ｆ４１）菌 株 为本实验室保存菌种，以下分别简称Ｋ８８、Ｋ９９、 ９８７Ｐ和Ｆ４１。 １．３ 免疫原制备
制备大肠杆菌四价油佐剂灭活苗，将大肠杆
的效价，了解其消长规律及其相互关系，为鸡抗大肠
杆菌卵黄抗体的研究、开发与应用提供科学依据。
中国家禽 ２!"００"#６ 年第 !２８$ 卷第 １８ 期
实验研究
Ｃｈｉｎａ Ｐｏｕｌｔｒｙ Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ．１８．２００６
鸡抗大肠杆菌血清抗体和 卵黄抗体变化规律研究
丁亚红，王秋娟，丁爱云，徐建生＊（扬州大学兽医学院，江苏扬州 ２２５００９）
摘 要：用猪源大肠杆菌四价（Ｋ８８、Ｋ９９、９８７Ｐ、Ｆ４１）灭活疫苗免疫蛋鸡，微量凝集法定 期检测蛋鸡血清抗体和卵黄抗体的效价。结果表明，血清抗体比卵黄抗体出现早，免疫蛋鸡 血清中和卵黄中４种抗体的消长规律基本相似，但不同抗体水平之间存在明显的差异，整个 试验期间血清抗体水平均比卵黄抗体水平高。
１ 材料与方法 １．１ 试验鸡
２８周龄罗曼蛋鸡，购自蛋鸡养殖场。 １．２ 菌种
Ｓｃｃ５８６为地方分离Ｋ８８＋菌株，Ｃ ８３５３９（Ｏ １４１∶Ｋ９９）、
收稿日期：２００６－ ０２－ １０ 修回日期：２００６－ ０３－ ２７ ＊ 通讯作者
菌Ｋ８８、９８７Ｐ、Ｋ９９和Ｆ４１冻干菌种，分别用ＴＳＢ（Ｋ８８）、 Ｓｌａｎｅｔｚ（９８７Ｐ）、Ｍｉｎｃ（ａ Ｋ９９和 Ｆ４１）液 体 培 养 基 复 活，传数代经单克隆抗体（本实验室自行制备）鉴 定菌毛表达良好后，再分别接种于ＴＳＡ，Ｓｌａｎｅｔｚ和 Ｍｉｎｃａ琼脂培养基，３７ ℃培养１８～２４ ｈ，用无菌生理 盐水洗下，加入终浓度为０．５％的甲醛灭活４８ ｈ，期间 摇动数次。经检验无菌生长后离心去除甲醛，并用 生理盐水洗涤三次。最后用生理盐水稀释菌泥，使 其浓度为２．４×１０１０ ｃｆｕ ／ｍＬ，贮存于４ ℃备用。
首免前三天开始收集鸡蛋，按对应蛋鸡编号并 注明日期，贮于４ ℃。需检测的鸡蛋，用清水刷拭干 净后浸于０．５％新洁尔灭中消毒、晾干，于无菌条件下 分离卵黄与卵白，取１ ｍＬ卵黄，加等量ＰＢＳ，振荡均 匀，再加２倍体积的氯仿，强力振荡均匀，室温静置 ２ ｈ，３ ０００ ｒ ／ｍｉｎ离心２０ ｍｉｎ，取上清－ ２０ ℃贮存备用。 １．７ 凝集抗原制备
（上接第 １３ 页）
图 ３ 隐性白体重 ｌｏｇｉｓｔｉ（ｃ Ａ）和 Ｇｏｍｐｅｒｔｚ 模型（Ｂ）相对生长曲线
出现较早，因此更适合于早期生长较快增长过 程。多数研究认为 Ｇｏｍｐｅｒｔｚ 模型更适宜家禽生 长过程的拟合，但本试验中却发现，ｌｏｇｉｓｉｔｉｃ 模型 优于 Ｇｏｍｐｅｒｔｚ 模型。这是因为，本试验的隐性白 鸡饲养在高海拔环境中原来早期生长较快的性 能受到抑制，生长拐点推后，因此更符合 ｌｏｇｉｓｉｔｉｃ 模型。
Ｋｅｙ ｗｏｒ ｄｓ：Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ；ｓｅｒｕｍ ａｎｔｉｂｏｄｙ；ｙｏｌｋ ａｎｔｉｂｏｄｙ
鸡卵黄抗体（ＩｇＹ）作为一种免疫球蛋白，和血 清抗体（ＩｇＧ）的功能相似，且生产成本较低，易于大 量生产。为探讨用鸡抗大肠杆菌卵黄抗体防治仔畜 大肠杆菌性腹泻的可能性，本研究用大肠杆菌灭活 疫苗免疫蛋鸡，定期检测蛋鸡血清抗体和卵黄抗体
ｍｉｃｒｏ－ ａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ａｐｐｅａｒａｎｃｅ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｗａｓ ｅａｒｌｉｅｒ ｔｈａｎ ｙｏｌｋ ａｎｔｉｂｏｄｙ． Ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ－ ｄｅｃｌｉｎｅ ｒｅｇｕｌａｒｉｔｙ ｏｆ ｆｏｕｒ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｙｏｌｋ ｏｆ ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ ｌａｙｅｒｓ ｗｅｒｅ ｓｉｍｉｌａｒ，ｂｕｔ ｔｈｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｌｅｖｅｌｓ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆｒｏｍ ｅａｃｈ ｏｔｈｅｒ． Ｄｕｒｉｎｇ ａｌｌ ｔｈｅ ｔｉｍｅ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ｔｈｅ ｓｅｒｕｍ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｌｅｖｅｌｓ ｗｅｒｅ ｈｉｇｈｅｒ．
中国家禽 ２!"００"#６ 年第 ຫໍສະໝຸດ Baidu２８$ 卷第 １８ 期
实验研究
Ｃｈｉｎａ Ｐｏｕｌｔｒｙ Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ．１８．２００６
肠杆菌Ｋ８８、Ｋ９９、９８７Ｐ、Ｆ４１）制成油乳剂抗原后免 疫产蛋鸡，可使禽类产生正常的免疫应答。首次 免疫后血清抗体比卵黄抗体大约早出现１周，表 明抗体从血液转移到卵黄需要一个过程。血清抗 体与卵黄抗体首次检测出现时间晚，与油佐剂抗 原液吸收缓慢有关。加强免疫及维持免疫后血清 抗体与卵黄抗体的动态变化曲线基本一致，高峰 期相应延长，表明卵黄抗体的变化规律是与血清 抗体的变化规律是一致的。
试验表明，将引起仔畜腹泻的主要致病菌（大
－ １５ －
高免卵黄抗体是产蛋母鸡受免疫原刺激后 产生的特异性免疫球蛋白，并被转移和贮存在卵 黄中。抗大肠杆菌高免卵黄抗体可直接与该病原 微生物的菌毛作用，使之不能黏附于肠道黏膜细 胞，从而达到防治疾病的目的。用鸡抗大肠杆菌 卵黄抗体防治仔畜大肠杆菌性腹泻，不影响肠道 正常菌群，不存在抗药性和药物残留问题，也避 免了怀孕母畜因注射疫苗引起应激或仔畜母源 抗体水平不足而导致免疫失败等问题，因此用鸡
抗大肠杆菌卵黄抗体预防和治疗仔畜腹泻具有 广阔的前景［６］。
参考文献：
１ 房海． 大肠埃希氏菌［Ｍ］． 石家庄：河北科学技术出版社，１９９７： ９２－ １０５，１７２－ １７９，２２０－ ２２２． ２ 吴文福，巫月生，李嘉爱 等． 应用微量凝集试验检测鸡抗猪大肠 杆菌卵黄抗体的探索［Ｊ］． 广东畜牧兽医科技，２００２，２（７ １）：３３－ ３５． ３ Ｂａｒｔｚ Ｃ Ｒ ，Ｃｏｎｋｉｎ Ｒ Ｈ，Ｔｕｎｓｔａｌｌ Ｃ Ｂ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕｒｉｎｅ ｒｏｔａｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｃｈｉｃｋｅｎ ｅｇｇ ｙｏｌｋ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕ－ ｌｉｎ［ｓ Ｊ］． Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ，１９８０，１４２：４３９－ ４４１． ４ Ａｋｉｔａ Ｅ Ｍ，Ｎａｋａｉ Ｓ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｆｏｕｒ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ ｆｒｏｍ ｅｇｇｓ ｌａｉｄ ｂｙ ｈｅｎｓ ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ ｗｉｔｈ ａｎ ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃ ＥＴＥＣ ｓｔｒａｉ［ｎ Ｊ］． Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，１９９３，１６０－ ２０７． ５ 刘玉芬，刘洪雨，孙刚 等． 大肠杆菌Ｏ １２６免疫产蛋鸡后血清抗 体与卵黄抗体效价动态变化规律比较［Ｊ］． 黑龙江畜牧兽医， ２０００，（６）：２６－ ２７． ６ 华荣虹，张书霞． 鸡卵黄抗体在防治仔猪大肠杆菌性腹泻中的 应用［Ｊ］． 动物医学进展，２００２，２（３ １）：１３－ １５．
将上述四种菌液（１．３）分别稀释成含菌浓度 为３×１０９ ／ｍＬ，即为凝集抗原。 １．８ 血清抗体与卵黄抗体效价测定
采用微量凝集试验方法［２］，分别检测血清抗 体和卵黄抗体，以出现“＋ ＋ ”或以上的最高稀释倍 数为抗体的效价，以２Ｘ表示。 ２ 结果与分析 ２．１ 四价灭活疫苗免疫蛋鸡血清抗体的变化规 律及其相互关系（见图１）
－ １４ －
中国家禽 !２"００"#６ 年第 !２８$ 卷第 １８ 期
实验研究
Ｃｈｉｎａ Ｐｏｕｌｔｒｙ Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ．１８．２００６
按体积比例取司本８０和白油（４∶９６），加入２％的 硬脂酸铝（ｍ ／ｖ），混匀，高压灭菌，制成油相。将上 述四种菌液等量混合，并加入灭菌的吐温－ ８０至 ５％，充分混合后与上述油相按１∶３的比例充分乳化 即成油苗［１］。经检验验合格后贮于４ ℃备用。 １．４ 免疫程序
Ａｂｓｔｒ ａｃｔ：Ｌａｙｅｒｓ ｗｅｒｅ ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ ｗｉｔｈ ｉｎａｃｔｉｖｅｄ ｖａｃｃｉｎｅｓ，ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｐｒｅｐａｒａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｆｏｕｒ ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ （ＥＴＥＣ）ｓｔｒａｉｎｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｐｉｇｌｅｔｓ：Ｋ８８，Ｋ９９，９８７Ｐ ａｎｄ Ｆ４１． Ｔｈｅ ｓｅｒｕｍ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｎｄ ｙｏｌｋ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｔｅｒｍｌｙ ｗｉｔｈ
由图２可见，与血清抗体相比，卵黄抗体的出 现有滞后现象。一免后３ ｄ尚无卵黄抗体出现，７ ｄ 后只有个别鸡出现低滴度抗体（２０，２１）。但其上升 幅度快，下降也较缓慢，高峰期可持续３个月左 右。最后一次加强免疫后抗体水平也有所回升。４ 种抗体水平之间的差异与血清抗体一致。同时也 表明采用油佐剂效果较好，抗体水平上升快而 高，且维持时间较长。 ２．３ 四价灭活疫苗免疫蛋鸡血清抗体和卵黄抗 体的相关性
隐性白鸡在高海拔饲养情况下，性别间也表现 差异，但这种差异要迟于在低海拔正常生长情况。 体重在 １２ 周龄，胫长在 １０ 周龄开始表现明显差 别。但公鸡体重和胫长的生长拐点要迟于母鸡，生
长潜力大。公鸡绝对和相对生长速度都高于母鸡， 但相对生长速度性别间差别小于绝对生长速度。
参考文献：
１ 吾豪华，黄峰岩，谢金防 等． 隐性白羽祖代肉鸡的引种饲养观 察［Ｊ］． 江西畜牧兽医杂志，１９９９，（１）：９－ １０． ２ 张德祥，杨山． 不同性别肉仔鸡生长模式差异的研究［Ｊ］． 黑龙 江畜牧兽医，１９９８，（３）：１１－ １２． ３ Ｚｈａｎｇ Ｙ Ｓ，Ｄｕ Ｊ Ｚ． Ｔｈｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅ ａｎｄ ｐｒｏｌａｃｔｉｎ ｏｆ ｒａｔｓ ｔｏ ｈｙｐｏｘｉ［ａ Ｊ］． Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２０００，２７９：１３７－ １４０． ４ Ｇｕｉｌｌａｒｄ Ｊ Ｃ，Ｋｌｅｐｐｉｎｇ Ｊ．Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ａｔ ｈｉｇｈ ａｌｔｉｔｕｄｅ ｉｎ ｍｅｎ［Ｊ］． Ｅｕｒ Ｊ Ａｐｐｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ，１９８５，５４：５１７－ ５２３．
关键词：大肠杆菌；血清抗体；卵黄抗体
Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ Ｃｈａｎｇｅ Ｌａｗｓ ｏｆ Ｓｅｒ ｕｍ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｎｄ Ｙｏｌｋ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｇａｉｎｓｔ Ｅｎｔｅｒ ｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ Ｌａｙｅｒ ｓ
Ｄｉｎｇ Ｙａｈｏｎｇ，Ｗａｎｇ Ｑｉｕｊｕａｎ，Ｄｉｎｇ Ａｉｙｕｎ，Ｘｕ Ｊｉａｎｓｈｅｎｇ＊ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｙａｎｇｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｚｈｏｕ，Ｊｉａｎｇｓｕ ２２５００９）
由图１可见虽然血清中四种抗体的效价差异极 显著（Ｐ＜０．０１），但变化趋势趋向于一致。首免后血清 抗体均逐渐上升，三免、四免后均出现短暂时间内 的小幅度下降，三免后２０ ｄ血清抗体已达到较高水 平，四免后２０ ｄ达到峰值，维持３个月后缓慢下降。最 后一次加强免疫后抗体水平虽然有所回升但达不 到最高水平。这与吴文福等用三价大肠杆菌灭活苗 免疫蛋鸡的血清抗体的消长规律基本相似［２］。血清 中９８７Ｐ抗体的效价明显高于其它三者，它们的顺序 依次为９８７Ｐ＞Ｋ９９＞Ｆ４１＞Ｋ８８。与华荣虹等的用Ｋ８８、 Ｋ９９、９８７Ｐ和Ｆ４１的四价菌毛疫苗免疫蛋鸡后的抗体 的效价不尽相同（Ｋ８８的效价明显高于其它三者［） ３～６］。 这可能是不同菌株的免疫原性不同所导致的结果。 ２．２ 四价灭活疫苗免疫蛋鸡卵黄抗体的变化规 律及其相互关系（见图２）
首次免疫１ ｍＬ ／只；一次加强免疫１．５ ｍＬ ／只 （基础免疫后１４天）；二次加强免疫２ ｍＬ ／只（基础 免疫后２８天）；三次加强免疫２ ｍＬ ／只（基础免疫后
５０天）；四次加强免疫２ ｍＬ ／只（基础免疫后１８０天）。 免疫途径均为胸肌多点注射加颈部皮下注射。 １．５ 血清采集
首 免 后 ０、３、７、１０、１４、１７、２０、２４、２８、３５、４２、４９、 ５６、６３、７０、８５、１００、１１５、１３０、１４５、１６０、１７５、１９０、２０５、 ２２０天，逐只翅静脉采血１ ｍＬ，编号并分离血清。 － ２０ ℃贮存。 １．６ 卵黄抗体提取
Ｎ ＡＤＣ１５９（２ Ｏ ９∶Ｋ１０３，９８７Ｐ ∶Ｈ － ）、Ｃ８３５３（９ Ｏ １０１∶Ｆ４１）菌 株 为本实验室保存菌种，以下分别简称Ｋ８８、Ｋ９９、 ９８７Ｐ和Ｆ４１。 １．３ 免疫原制备
制备大肠杆菌四价油佐剂灭活苗，将大肠杆
的效价，了解其消长规律及其相互关系，为鸡抗大肠
杆菌卵黄抗体的研究、开发与应用提供科学依据。
中国家禽 ２!"００"#６ 年第 !２８$ 卷第 １８ 期
实验研究
Ｃｈｉｎａ Ｐｏｕｌｔｒｙ Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ．１８．２００６
鸡抗大肠杆菌血清抗体和 卵黄抗体变化规律研究
丁亚红，王秋娟，丁爱云，徐建生＊（扬州大学兽医学院，江苏扬州 ２２５００９）
摘 要：用猪源大肠杆菌四价（Ｋ８８、Ｋ９９、９８７Ｐ、Ｆ４１）灭活疫苗免疫蛋鸡，微量凝集法定 期检测蛋鸡血清抗体和卵黄抗体的效价。结果表明，血清抗体比卵黄抗体出现早，免疫蛋鸡 血清中和卵黄中４种抗体的消长规律基本相似，但不同抗体水平之间存在明显的差异，整个 试验期间血清抗体水平均比卵黄抗体水平高。
１ 材料与方法 １．１ 试验鸡
２８周龄罗曼蛋鸡，购自蛋鸡养殖场。 １．２ 菌种
Ｓｃｃ５８６为地方分离Ｋ８８＋菌株，Ｃ ８３５３９（Ｏ １４１∶Ｋ９９）、
收稿日期：２００６－ ０２－ １０ 修回日期：２００６－ ０３－ ２７ ＊ 通讯作者
菌Ｋ８８、９８７Ｐ、Ｋ９９和Ｆ４１冻干菌种，分别用ＴＳＢ（Ｋ８８）、 Ｓｌａｎｅｔｚ（９８７Ｐ）、Ｍｉｎｃ（ａ Ｋ９９和 Ｆ４１）液 体 培 养 基 复 活，传数代经单克隆抗体（本实验室自行制备）鉴 定菌毛表达良好后，再分别接种于ＴＳＡ，Ｓｌａｎｅｔｚ和 Ｍｉｎｃａ琼脂培养基，３７ ℃培养１８～２４ ｈ，用无菌生理 盐水洗下，加入终浓度为０．５％的甲醛灭活４８ ｈ，期间 摇动数次。经检验无菌生长后离心去除甲醛，并用 生理盐水洗涤三次。最后用生理盐水稀释菌泥，使 其浓度为２．４×１０１０ ｃｆｕ ／ｍＬ，贮存于４ ℃备用。
首免前三天开始收集鸡蛋，按对应蛋鸡编号并 注明日期，贮于４ ℃。需检测的鸡蛋，用清水刷拭干 净后浸于０．５％新洁尔灭中消毒、晾干，于无菌条件下 分离卵黄与卵白，取１ ｍＬ卵黄，加等量ＰＢＳ，振荡均 匀，再加２倍体积的氯仿，强力振荡均匀，室温静置 ２ ｈ，３ ０００ ｒ ／ｍｉｎ离心２０ ｍｉｎ，取上清－ ２０ ℃贮存备用。 １．７ 凝集抗原制备
（上接第 １３ 页）
图 ３ 隐性白体重 ｌｏｇｉｓｔｉ（ｃ Ａ）和 Ｇｏｍｐｅｒｔｚ 模型（Ｂ）相对生长曲线
出现较早，因此更适合于早期生长较快增长过 程。多数研究认为 Ｇｏｍｐｅｒｔｚ 模型更适宜家禽生 长过程的拟合，但本试验中却发现，ｌｏｇｉｓｉｔｉｃ 模型 优于 Ｇｏｍｐｅｒｔｚ 模型。这是因为，本试验的隐性白 鸡饲养在高海拔环境中原来早期生长较快的性 能受到抑制，生长拐点推后，因此更符合 ｌｏｇｉｓｉｔｉｃ 模型。
Ｋｅｙ ｗｏｒ ｄｓ：Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ；ｓｅｒｕｍ ａｎｔｉｂｏｄｙ；ｙｏｌｋ ａｎｔｉｂｏｄｙ
鸡卵黄抗体（ＩｇＹ）作为一种免疫球蛋白，和血 清抗体（ＩｇＧ）的功能相似，且生产成本较低，易于大 量生产。为探讨用鸡抗大肠杆菌卵黄抗体防治仔畜 大肠杆菌性腹泻的可能性，本研究用大肠杆菌灭活 疫苗免疫蛋鸡，定期检测蛋鸡血清抗体和卵黄抗体
ｍｉｃｒｏ－ ａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ａｐｐｅａｒａｎｃｅ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｗａｓ ｅａｒｌｉｅｒ ｔｈａｎ ｙｏｌｋ ａｎｔｉｂｏｄｙ． Ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ－ ｄｅｃｌｉｎｅ ｒｅｇｕｌａｒｉｔｙ ｏｆ ｆｏｕｒ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｙｏｌｋ ｏｆ ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ ｌａｙｅｒｓ ｗｅｒｅ ｓｉｍｉｌａｒ，ｂｕｔ ｔｈｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｌｅｖｅｌｓ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆｒｏｍ ｅａｃｈ ｏｔｈｅｒ． Ｄｕｒｉｎｇ ａｌｌ ｔｈｅ ｔｉｍｅ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ｔｈｅ ｓｅｒｕｍ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｌｅｖｅｌｓ ｗｅｒｅ ｈｉｇｈｅｒ．
中国家禽 ２!"００"#６ 年第 ຫໍສະໝຸດ Baidu２８$ 卷第 １８ 期
实验研究
Ｃｈｉｎａ Ｐｏｕｌｔｒｙ Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ．１８．２００６
肠杆菌Ｋ８８、Ｋ９９、９８７Ｐ、Ｆ４１）制成油乳剂抗原后免 疫产蛋鸡，可使禽类产生正常的免疫应答。首次 免疫后血清抗体比卵黄抗体大约早出现１周，表 明抗体从血液转移到卵黄需要一个过程。血清抗 体与卵黄抗体首次检测出现时间晚，与油佐剂抗 原液吸收缓慢有关。加强免疫及维持免疫后血清 抗体与卵黄抗体的动态变化曲线基本一致，高峰 期相应延长，表明卵黄抗体的变化规律是与血清 抗体的变化规律是一致的。