医学微生物学实验三胡共33页
医学微生物学实验三
用于分离培养细菌,如 血平板、巧克力平板等。
显微镜
用于观察细菌的形态和 结构,以及细菌的染色
结果。
实验试剂
01
02
03
04
生理盐水
用于细菌的洗涤和稀释,也可 用于细菌的注射。
酒精
用于实验前的消毒和灭菌,也 可用于实验后的清洁工作。
抗菌药物
用于抗菌试验,如青霉素、链 霉素等。
抗体
用于免疫试验,如间接免疫荧 光抗体、酶联免疫吸附试验等
5. 结果观察与记录
实验总结
实验结果
成功分离出目标微生物,并对其进行初步鉴定。
实验结论
通过本实验,掌握了微生物培养、分离、纯化的基本实验技术,为后续的微生物学研究奠定了基础。
实验讨论
实验难点分析
在微生物接种过程中,如何保证无菌操 作是关键,否则可能导致实验失败。
实验优化建议
可以尝试使用不同的培养基或改变培 养条件,以获得更纯的微生物样品。
。
04 实验步骤与方法
CHAPTER
微生物分离纯化
01
微生物分离纯化是从混 合的微生物群体中获得 单一纯种微生物的过程。
02
选择适当的培养基和培 养条件,将混合菌分离 到不同的培养皿或试管 中。
03
通过菌落形态、颜色和 大小等特征,初步判断 是否为单一纯种微生物。
04
进行革兰氏染色、抗酸 染色等特殊染色,进一 步确定微生物的种类。
微生物的染色与形态观察
染色
通过染色技术,使微生物细胞着色, 以便在显微镜下观察其形态结构。常 用的染色方法有革兰氏染色、抗酸染 色等。
形态观察
在显微镜下观察染色后的微生物细胞 形态,如形状、大小、排列方式等, 以鉴别不同的微生物种类。
医学微生物学微生物实验PPT免疫试验3
转化率﹦
转化的淋巴细胞数(过渡型、淋巴母细胞、有丝分裂相)
×100%
转化的+未转化的淋巴细胞数
正常成人转化率为:60%~80%,﹤50%视为降低
淋巴细胞转化实验
T细胞
PHA
刀豆素A (ConA) 美洲商陆(PWM)
淋巴母细胞
(体积增大,形态不整齐,核 大,松散,有核仁,胞浆变宽,
出现空泡)
Ag刺激T淋巴细胞转化各期形态
常用的丝裂原:
植物血凝素(PHA) 刀豆素A(ConA) 美洲商陆(PWM)
方法: 1.分离外周血淋巴细胞
方法:
2.将分离的血淋巴细胞+PHA→混匀,37℃孵育72
小时→低速离心取培养液涂片染色、镜检,分别
计数转化淋巴细胞(淋巴母细胞、过渡型母细胞
和核有丝分裂相细胞)和成熟的淋巴细胞,共计
数200个细胞。并计算转化率。
Ab 载 体
反应结果
有 不需要
无
凝 集 素
需要 (致敏颗粒)
肉眼可见 凝集块
有 无
需要
无
(致敏颗粒)
有
报告方 式
阳性 阴性 阳性 阴性 阳性 阴性
反应名称
支撑物的 特点
观察现象
意 义
双扩
琼脂凝胶
中不含抗 沉淀线
沉 对流电泳
体
定 性
淀
反
应
单扩
沉淀圈
琼脂凝胶
定
中含抗体
量
火箭电泳
沉淀峰
扩散条件 37℃~36h
2、毒素中和试验
细菌毒素与抗毒素中和试验。 常见用于诊断风湿病抗“O”试验。
原理:
乙型溶血性链球菌产生的溶血毒素“O” (SLO )能 刺激机体产生抗O抗体(ASO),于感染后2~3周至病愈 后数月到一年可检出高于正常值的SLO抗体(1:400以 上)。SLO与相应抗体作用时会因毒性被中和而失去溶血 活性。因此,可通过该方法测定ASO。
医学微生物学实验三
• 盖上平板的盖子,做好标记,放置培养箱内孵育16~18h。
• 下次实验课找到自己的药敏结果,量取抑菌环直径,根据 CLSI(clinical and laboratory standards institute )标准, 报告细菌对该抗生素敏感(susceptible,S)、耐药(resistant,R) 、中介(intermediate,I)。
MIC:在与微生物生长速率有关的特定时间 间隔内,通常是18-24小时,能够抑制被测菌生 长的最低药物浓度。
抑菌环
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ药物效果越好,抑菌环直径越大;效果越差,抑菌环直径越小。
操作方法
• 无菌挑取孵育16~24h的血平板上4个菌落,沿4个方向均匀抹 无菌M-H琼脂表面,使菌液均匀分布,最后再取一个菌落沿 平板内缘环形涂抹均匀。
直接
涂片镜检 (革兰染色)
接种 血琼脂平板
菌落观察
血浆凝固酶试验
革兰染色
药敏试验 诊断报告
一、脓汁标本中化脓性球菌的鉴定
直接涂片镜检
• 取标本直接涂片,均匀涂成菌膜,自然干 燥,固定后革兰染色,油镜观察。
金黄色葡萄球菌
革兰染色镜检
─────────
形态
排列 染色性
乙型溶血性链球菌
细菌分离培养
• 取一号和二号脓标本,分别接种于血琼脂 平板上,划线分离,37℃培养18~24h后, 观察菌落特征,取单个菌落进行再次革兰 染色镜检。
– 保护病菌不受血清中杀菌物质的破坏 – 抵抗吞噬细胞的吞噬和消化 – 使感染局限化和形成血栓
游离血浆凝固酶
医学微生物学实验ppt课件
荚膜大小与菌体的 关系 芽胞在菌体上的位 置、大小 鞭毛的形态、数量、 位置
芽胞
鞭毛
变形杆菌
谢 谢 大 家
湿热灭菌效果好于干热灭菌,原因如下: ①湿热情况下菌体蛋白容易凝固变性; ②湿热穿透力比干热大; ③湿热的蒸汽具有潜热。
2)辐射灭菌法
紫外线(ultraviolet ray, UV):波长240~300nm
原理 作用于DNA,使一条DNA链上相邻的两个胸腺嘧啶(T) 共价结合形成二聚体,干扰 DNA 的复制和转录,导致细菌 的变异和死亡。 特点
1.物理消毒灭菌法
2.化学消毒灭菌法
3.生物学消毒灭菌法
1.物理消毒灭菌法
1)热力灭菌法
① 干热灭菌法
焚烧:直接点燃或用焚 烧炉焚烧 烧灼:直接用火焰灭菌 干烤:用干烤箱灭菌 红外线:1~10μm波长
② 湿热灭菌法
巴氏消毒法:61.1~62.8℃ 30min或71.7℃ 15~30s 煮沸法:100℃水煮沸 高压蒸气灭菌法:103.4kPa, 121.3℃,15~20min
医学Байду номын сангаас生物学实验
《医学微生物学》课程设置
1. 学时:
总学时(36):大班理论课(28),小班实验课(8),
2. 授课方式: 大班讲课、小班讲课+实验、自学 3. 教学效果检查: 提问、实验操作及写报告、期末测验
4. 成绩计算:
平时(实验操作及实验报告)30%,期末考试70%
医学微生物实验目的
巩固基础理论、基本概念
内容
一、概念:灭菌、消毒、抑菌、防腐、清洁、无
菌、无菌操作
二、消毒灭菌的方法
三、影响消毒灭菌效果的因素
医学微生物学实验课件
医学微生物学实验课件xx年xx月xx日contents •实验准备•细菌的分离与培养•细菌的鉴定•病毒的分离与鉴定•医学寄生虫实验•医学微生物学实验总结目录01实验准备1 2 3通过本次实验,学生将学习到微生物学实验的基本技能,包括实验操作、显微观察、分离培养等。
掌握微生物学实验基本技能通过实验过程中的生理生化反应,学生将了解微生物的生理生化特性,初步掌握微生物分类鉴定的基本方法。
了解微生物的生理生化特性通过本次实验,学生将了解微生物在医学中的应用,包括致病微生物的检测、防治和免疫等方面的应用。
认识微生物在医学中的应用微生物学实验基本原理微生物学实验的基本原理包括显微镜技术、无菌技术、分离培养技术、生理生化反应等。
这些技术的基本原理是进行微生物学实验的基础。
微生物的生理生化反应微生物的生理生化反应是微生物学实验中的重要内容。
通过观察和测定微生物的生理生化反应,可以初步鉴定微生物的种类和特性。
微生物在医学中的应用微生物在医学中有着广泛的应用,例如致病微生物的检测、防治和免疫等。
通过本次实验,学生将了解这些应用的基本原理和方法。
实验前的准备包括实验器材和试剂的准备、实验室环境的消毒等。
分离培养将样品接种在适宜的培养基上,分离培养出特定的微生物。
样品采集和预处理根据实验目的和要求采集样品,并对样品进行预处理,以备后续实验使用。
生理生化反应将分离培养出的微生物接种在适宜的生理生化反应管中,观察和记录微生物的生理生化反应结果。
显微观察将样品制成涂片或压片,在显微镜下观察微生物的形态和结构。
数据分析和总结对实验数据进行整理和分析,得出结论,并撰写实验报告。
实验步骤02细菌的分离与培养选择适合细菌生长的培养基,通常包含碳源、氮源、无机盐、水等。
培养基成分按照规定的步骤,将所需成分按比例混合、溶化、调PH值、过滤、分装等步骤制备成培养基。
制备流程确保培养基的质量和无菌,需要进行灭菌处理和细菌学检测。
质量控制培养基制备根据不同的分离要求,可采用划线分离法、稀释分离法、组织研磨法等。
医学微生物学实验三
03
实验三:细菌药敏试验
实验目的
掌握细菌药敏试验的基本原理和方法 了解细菌对不同抗菌药物的敏感性
指导临床合理选用抗菌药物
实验原理
药敏试验是通过测定细菌对不同抗菌药物的敏感性 ,为临床选用抗菌药物提供依据
常用的药敏试验方法有纸片扩散法、稀释法、E试验 等
本实验采用纸片扩散法,通过测量抑菌圈的大小 ,判断细菌对不同抗菌药物的敏感性
抗体是指能够与抗原特异性结合的免疫球蛋白, 主要分为IgM、IgG、IgA、IgE等类型。
抗原是指能够与抗体结合并发生特异性反应的物 质,可以是蛋白质、多糖、脂质、核酸等。
不同细菌具有不同的抗原成分,因此可以通过检 测抗体来鉴别细菌的种类。
实验步骤
• 准备实验材料:细菌培养物、生理盐水、特异性抗体、琼脂平板、滴定管等。 • 将细菌培养物进行离心处理,收集菌体。 • 用生理盐水洗涤菌体,去除培养基成分。 • 将菌体与特异性抗体混合,加入琼脂平板中制备凝集反应板。 • 用滴定管加适量生理盐水,将凝集反应板上的菌体和抗体混合物稀释至适当浓度。 • 将稀释液滴加到凝集反应板上,观察结果。 • 根据凝集反应结果判断是否存在相应细菌。
06
实验六:病毒的分离与鉴定
实验目的
掌握病毒的分离、 培养和鉴定的基本 方法。
学习如何预防和控 制病毒感染。
了解病毒在人体内 的传播途径和感染 机制。
实验原理
病毒是一种微生物,它只能在宿主细胞内繁殖和生存。因此, 病毒的分离和培养需要在特定的细胞系中进行。
病毒感染细胞后,会引起细胞病变,如细胞融合、细胞溶解等 。这些病变可以作为病毒鉴定的依据之一。
实验步骤
1. 样品制备
将待测细菌接种于固体或液体培养基中,培养一定时间后,用无菌棉签或刮勺将细菌收集 到无菌试管中,加入适量生理盐水制成细菌悬液。
病毒学-微生物学-医学微生物学实验三
Antigen (ml) 0.5 (O/H/A/B)
Dilution
1:40
0.5 0.5 0.5 0.5
0.5 0.5 0.5
1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 -
摇匀,37℃ 恒温箱过夜
结果观察
衡量操作的可靠性:先看对照管,再从第1管至7管 判断每管的凝集程度:看管底凝集物和上清清亮度 O、H凝集现象的区别:
O菌液凝集物:致密颗粒状,不易摇起; H菌液凝集物:疏松棉絮状,轻摇易浮起。 判断每种抗体的效价: 产生明显可见凝集现象(++)时血清的最高稀释度。
结果记录:
1
2
3
4
5
6
7
8
抗O
++++ +++ +++ ++
----来自抗H++++ +++ +++ ++
++
-
-
-
抗A
++
+
-
-
-
-
--
抗B
-
-
-
-
-
五、细菌的形态观察
1.自阅片:破伤风梭菌、甲型链球菌、肉毒梭菌、 白喉棒状杆菌
2.示教片:淋病奈瑟菌、产气荚膜梭菌
自阅片一
破伤风梭菌 取材:纯培养物 染色法:革兰染色 放大倍数:10X100
芽胞 菌体
自阅片二
甲型溶血性链球菌
取材:纯培养物 染色法:革兰染色 放大倍数:10X100
医学微生物学实验综合性实验三
匀。琼脂完全凝固以后,37℃培养48小时。 ❖ 选择菌落数在30~300之间的平板作为菌落总
数测定标准。 ❖ 将计数得到的菌落数乘以稀释倍数得出
cfu/g(ml)。
医学微生物学实验 综合性实验三
❖ 空气细菌学检查结果分析
❖ 手指皮肤细菌学检查结果分析
空气的细菌学检查
组号
时间(min)
地点
菌落形成单位(CFU)
1
15
2
15
3
15
4
15
5
15
6
15
7
15
8
15
9
15
10
15
CFU /m3 = 50,000N÷AT ≈86N(直径7cm平板)
N:平板上的菌落数
A:平板面积(38.5cm2)
Ⅲ级区
200~ 500
一般病房、治疗室、放射室、衣帽室、 按摩室、盥洗室、手术室浴室
我国公共场所空气卫生细菌学标准 (GB9663~9673-1996,GB16153-1996,平皿直径9cm)
撞击法 沉降法 cfu/m3 个/皿
适用范围
≤1000 ≤10 3~5星级宾馆、饭店
≤1500 ≤20 ≤2500 ≤30 ≤4000 ≤40 ≤7000 ≤75
❖ 形状:圆形,卵圆形、假根形、丝状、不规则等。
❖ 边缘:整齐,锯齿状,波浪状,羽毛状。
❖ 表面:隆起、平坦、中心凸起、脐形凹陷;光滑或粗糙、 湿润或干燥。
❖ 溶血性:不溶血,不完全溶血(菌落周围呈草绿色、不 透明),溶血(菌落周围出现透明环)。
医学微生物学与免疫学实验0 实验3 淋转、花环、HCG
2、观察免疫抑制剂的效果,协助进行恶性 肿瘤疗效的观察及预后判断等
操作:胶体金法检测人尿液中绒毛膜促性腺 激素(HCG)
HCG(绒毛膜促性腺激素)是妇产科医生们所熟 悉和最常使用的“妊娠试验”激素。 它是由α和β二聚体的糖蛋白组成。 但α-亚单位为垂体前叶激素所共有。β-亚单位是 HCG所特异的。
淋巴细胞转化实验
T细胞
PHA
刀豆素A (ConA) 美洲商陆(PWM)
淋巴母细胞
(体积增大,形态不整齐,核 大,松散,有核仁,胞浆变宽,
出现空泡)
分型:小淋巴细胞:核质密、胞浆小、无核仁
过渡型:比小淋巴细胞略大、核质略疏
松,出现核仁
淋巴母细胞:体积大4-5倍,核膜清楚, 染色质疏松呈细网状可见空泡,核/细胞比例变小, 出现核仁。
医学微生物学与免疫学实验 (三)
实验内容
1、淋巴细胞转化试验、E花环形成试验 2、补体结合、中和反应、免疫标记技术 3、录像:淋转、E花环、免疫学标记技术 4、操作:胶体金法检测HCG
淋巴细胞转化实验
是检测人外周血T淋巴细胞功能的体外试验。 其原理是利用人外周血T淋巴细胞表面的有丝 分裂原受体与相应丝裂原在体外结合后,可使 细胞转化为淋巴母细胞,表现为体积增大、胞 浆丰富、并能进行有丝分裂。根据其转化的程 度和转化率,可测定机体的细胞免疫功能状态。 常用的丝裂原为植物血凝素(PHA)。正常人 淋巴细胞转化率约为70%
实验报告
作图:淋转(3个图),花环 胶体金法检测HCG结果、作图(原理)、结论。
早早孕测试怀知道自己怀孕了,可以尽早采用药 物流产或人工流产的方法终止妊娠。早早孕终止妊娠痛苦小,出血少。 2.对希望优生的妇女来说,在早早孕时就可以注意避免接触有害物质,避免 患传染病。假如患了一些常见病,在用药时,就能选择对胎儿影响最小的药 物治疗,而不滥用药物。 3.对宫外孕的早期诊断,早早孕测试板起了非常重要的辅助诊断作用。可以 在没有破裂大出血前采用中西药治疗,对那些还需要保持生育能力的妇女来 说实在太重要了。 4.对治疗不孕症的妇女,早早孕测试板也显得十分重要。这些妇女要在医生 的指导下准确计算排卵时间,采用人工授精或体外授精。在授精后14天就可 用早早孕测试板来测定她们这次治疗是否成功。如果发现尿妊娠试验阳性, 她们还将接受一系列的保胎治疗。早孕测试板在国内有不少厂家在生产,总 体来说敏感度都可达到94%以上,但有时也可能出现假阳性或假阴性。所以 仅凭一次尿妊娠试验来判断是否怀孕还不一定十分准确,可能还要再测试一 次或抽血测HCG。
南医微生物实验课件三
实验报告
记录药敏实验结果(表格) 通知:下两次实验课需带学生证借显微镜
边缘整齐。 R型菌落 (Rough) 粗糙菌落 — 表面粗糙而暗淡,
边缘不整齐。 菌落变异是由于菌体本身起变化。一般光滑的细
菌有毒力;粗糙的细菌没有毒力或毒力减退。
smooth clone
Rough clone
二、鞭毛变异(H→O变异)
细菌的鞭毛在某些情况下可以消失而变成没有 鞭毛的细菌。
有鞭毛的细菌点种在琼脂平板上,由于鞭毛的 动力使细菌在平板上弥散生长,称迁徙现象, 菌落形似薄膜(德语hauch意为薄膜),故称 H菌落。若细菌失去鞭毛,只能在点种处形成 不向外扩展的单个菌落,称为O菌落(德语 Ohne hauch意为无薄膜)
液体培养基
沉
混
表
淀
浊
面
生
生
生
长பைடு நூலகம்
长
长
细菌的变异
遗传性变异 非遗传性变异
遗传性变异(基因型变异)
非遗传性变异(表型变异)
基因改变 遗传 可逆性 外界环境 变异幅度
遗传性变异 + + -
个别细胞
非遗传性变异 + +
群体
一、菌落变异(S→R变异) S型菌落(Smooth)光滑菌落 — 表面光滑有光泽,
一、同组人需分别接种G+、G—细菌 二、连续划线、细菌密布平板 三、镊子用前、用后必须灭菌并注意防火 四、贴纸片距离、纸片标记(与瓶上标记
吻合);贴标签位置
青霉素— 为β内酰胺类抗生素。 繁殖 期杀菌,作用机制为抑制敏 感菌细胞壁的形成。
氯霉素— 对G+、G-菌均有抗菌活性。 氟哌酸— 抗菌谱广,对G-菌和部分G+