土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化
土壤微生物的分离纯化 实验：微生物的分离、培养和菌种保藏
思考题
❖ 什么叫无菌操作？分离放线菌和真菌为什么 需要分别加重铬酸钾和链霉素？
❖ 平板培养时为什么要把培养皿倒置？ ❖ 如何确定平板上某单个菌落是否为纯培养？
Байду номын сангаас
实验七
结束
下周实验
理化因素对微生物的影响
（实验三十二、实验三十四、实验三十八）
每毫升样品中微生物细胞数=
每皿菌落平均数 × 稀释倍数 × 1/取样体积数
混匀 凝固
28～30℃ 培养
图7－4 混合法流程图
实验程序 Ⅳ——平板涂抹法（涂布法）
❖ 每人取无菌培养皿1付（每个同学做一只）。在皿底贴上标签，注明 分离菌名、稀释度、组别、班级。
❖ 取已熔化的高氏培养基，分别倒15－20ml入培养皿中，铺平，制成 平板。
养皿里。 ❖ 3.取已熔化的在水浴锅中保温500C左右的马铃薯培养基（PDA培养基），
分别倒约15－20ml入上述培养皿中，轻轻转动培养皿，使菌液、培养基 充分混匀铺平，放在平坦的桌面上，凝固后，倒置于28～300C恒温培养 5～6d。观察真菌菌落形态以及计数 菌落。并计算出每g土壤中真菌的数 量。即用某一培养皿内真菌的菌落数乘以该培养皿接种液的稀释倍数即 得。 （见图7－4）
挑取单个菌落接种于斜面培养基 上，如果不纯，再移植纯化，最 后得到纯培养。
实验程序Ⅵ——四大类微生物菌落形态的比较和
识别
❖ 区分和识别各大类微生物通常包括菌落形态（群体形态） 和细胞形态（个体形态）两方面的观察。
❖ 菌落形态： 菌落表面湿润：细菌——薄而小，酵母菌——厚而大。 菌落表面干燥：放线菌——密而小，霉菌——松而大。
淀粉琼脂培养基 马铃薯蔗糖培养基
❖ 无菌水：带有玻璃珠装有99mL无菌水三角瓶
实验三霉菌、放线菌及土壤中微生物的分离纯化
． 黑 曲 霉 培 养 物 ．
一
插 片 培 养 物 ．
放 线 菌 培 养 物 ： 链 霉 菌
． 放 线 菌 和 真 菌 培 养 物
三 、 实 验 材 料
碘
灯环
四
液
、、
天
、
四、实验步骤
观察放线菌气生菌丝和基内 菌丝的区别 取插片一片，直接在显微镜 下进行观察，注意分界面两 侧菌丝形态的差异 插片法培养放线菌
分离真菌的同学取一瓶马丁-孟加拉红培养基 （200ml／瓶）熔化后冷至50℃后加链霉素 2ml倒平板。
四．悬液涂布(演示): 无菌操作(从稀至浓将菌液涂布均匀)采用10 －2，10－3，10 －4稀释液涂布马丁－孟加拉红平板；采用 10－3，10－4，10－5稀释液涂布牛肉膏蛋白胨平板,每人用 剩下的1个平板做划线分离，从三角瓶中取土壤悬液作划线分 离（演示）
2、霉菌：
霉菌是一些“丝状真菌”的统称，不是分类学上的名词。凡是在基质上长成毛状、棉絮 状或蜘蛛网状的丝状真菌统称霉菌。
霉菌形态比细菌、放线菌复杂，个体比较大，具有分枝的菌丝体和分化的繁殖器官。因 此，在观察是要注意菌丝的直径大小，菌丝体有无隔膜，营养菌丝有无假根，无性繁殖 或有性繁殖时形成的孢子是哪一种，孢子是怎样着生的。
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实验三 放线菌、霉 菌的形态观察 及微生物的分离纯 化
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一、实验 目的
实验（一）放线菌、霉菌的形态 观察
观察放线菌、霉菌的形态结构特征
学习掌握霉菌染色的基本方法 基本掌握细菌、放线菌、酵母菌、霉 菌菌落形态特征
二、实验原理
放线菌：放线菌是介于细菌与丝状真菌之间而又接近于细菌的一类丝状原核生物，因菌落呈放射状 而得名。 放线菌的菌落在培养基上着生牢固，不易被接种针挑取，由于孢子的存在，常使菌落表面呈粉末状。 它和细菌单染色一样，可用石炭酸复红和吕氏美蓝等染料着色后，在显微镜下观察它们的形态。放 线菌是由不同长短的纤细的菌丝所组成的单细胞菌丝体，菌丝内无隔膜，菌丝体分为两部分，即潜 入培养基中的营养菌丝（基内菌丝）和有营养菌丝向上生长的气生菌丝，有些气生菌丝分化成各种 孢子丝，呈螺旋状、波浪形或分枝状等，着生形式有丛生、互生和轮生三种。孢子的表面光滑或粗 糙，圆或椭圆和干形。孢子有各种颜色。这些形态特点都是鉴别放线菌的重要依据。
土壤中的微生物分离纯化和菌相分析
（二）平板划线分离法
1.倒平板 2.划线：在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环， 挑取待测菌悬液一环在平板上划线。划线的方法很 多，但无论采用哪种方法，其目的都是通过划线将 样品在平板上进行稀释，培养后能形成单个菌落。
划线方法 方法一：用接种环按无菌操作挑取土壤悬液一环， 先在平板培养基的一边作第一次平行线3-4次，再 转动平板约70°角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷 却后挑取悬液穿过第一次划线部分进行第二次划线， 再用同样的方法穿过第二次划线部分进行第三次划线 或再穿过第三次划线部分进行第四次划线。划线完毕 后，盖上培养皿盖，倒置于温室培养。 方法二：将挑取有样品的接种环在平板培养基上作连 续划线，完毕后，盖上培养皿盖，温室培 养。
二、实验原理
三、实验器材
1.土壤 2.培养基： 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（营养琼脂）（50μg/mL制霉菌素 乙醇溶液） 高氏一号琼脂培养基（10滴100g/L石碳酸和50μg/mL制霉菌 素乙醇溶液） 马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）（1000mL培养基中加入2mL氯霉素） 3.溶液与试剂： 9mL或4.5mL无菌水的试管，90mL无菌水并带有玻璃珠的三角 烧瓶
这种计数法的优点是能测出样品中的活菌数。 但平板菌落计数法的手续较繁，而且测定值常受各 种因素的影响。
二、实验步骤（方法一）
1.编号：取无菌培养皿6套，分别用记号笔表明 10-4、10-5、10-6各2套。另取6支4.5mL无菌水 的试管，依次表明10-1、10-2、10-3、10-4、10-5和10-6。 2.稀释：用1mL无菌吸管准确吸取0.5mL已充分混匀 的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的混合培养液，加入标 有10-1字样的试管中，此为10倍稀释，吸管中多余的菌 液放回试管中。将10-1试管在手掌中或置于振荡器上振 荡，使菌液充分混匀。另取一支1mL吸管插入10-1试管 菌液中吸取1mL，精确的放0.5mL菌液于10-2试管中， 此为100倍稀释……其余依次类推直至所需倍 数。
实验二：土壤中微生物分离与纯化
了解并掌握微生物的生理生化特征， 如营养需求、代谢途径、酶活性等。
微生物纯化
在分离的基础上，进一步通过反复划 线培养或平板克隆培养，获得纯培养 的微生物。
熟悉微生物分离与纯化的实验操作流程
土壤样本采集
选择具有代表性的土壤样本， 采集时要避免污染，并记录采
样点的环境信息。
微生物的纯化
对分离得到的菌落进行纯化， 通过反复划线或平板克隆培养 ，获得纯培养的微生物。
菌落形态观察
观察纯化后的菌落形态，记录菌落 特征。
微生物的保存与鉴定
菌种保存
将纯化的菌株进行冷冻干燥或甘油保 藏，以备后续实验使用。
微生物鉴定
采用形态学、生理生化实验或分子生 物学方法对分离得到的菌株进行鉴定 。
04
CATALOGUE
实验结果与分析
微生物分离与纯化的结果观察
微生物分离
通过划线分离法，成功将土壤中的微生物分离到了培养基上，观察到菌落形态 各养基
根据目标微生物的特性， 选择适合的培养基。
培养
将土壤稀释液涂布或滴加 在培养基上，放入恒温培 养箱中培养。
观察与记录
观察微生物的生长情况， 记录菌落形态、颜色、大 小等特征。
微生物的纯化
挑选单菌落
从培养基上挑选单菌落，采用划 线法或稀释涂布法进行纯化。
纯化培养
将纯化的菌株进行多次划线培养或 传代培养，确保获得纯培养物。
01
微生物纯化的原理是利用微生物的单一特性进行分离，使同一种微生物在培养 基上形成单一菌落。
02
常用的微生物纯化方法包括划线分离法、稀释涂布平板法、显微操作法等。这 些方法可以根据不同微生物的特性选择使用，以获得纯培养。
03
土壤中微生物的分离纯化(电子版实验报告)
微生物实验报告土壤中微生物的分离与纯化指导教师：李海花周四晚第四组实验成员: 杜玉琪180112010009董天涵180112010008蒋怡菲180112010018逄颖180112010035【摘要】利用分离纯化微生物的基本操作技术对土壤中的微生物进行分离和纯化，通过观察微生物的菌落形态特征判断菌的类型并通过平板划线进行分离纯化【关键词】土壤、微生物、菌落观察、分离纯化1.实验目的（1）通过对几种培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。
（2）掌握倒平板的方法、接种和无菌操作技术。
（3）初步观察来自土壤中的几类微生物的菌落形态特征，并能判断菌的类型。
（4）学习平板菌落计数的基本原理和方法，并掌握其基本技能。
2.实验原理（1）培养基的配制与灭菌培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴别、保存各种微生物或积累代谢产物。
一般的培养基应包含适合微生物生长的6大营养素即水分、碳源、氮源、能源、无机盐和生长因子。
不同微生物对pH要求不一样，霉菌和酵母菌的培养基的pH一般是偏酸的，而细菌和放线菌培养基的pH一般为中性或微碱性。
所以配制培养基时还要根据不同微生物的要求将培养基的pH调到合适的范围。
已配制好的培养基必须立即灭菌，如来不及灭菌，应暂存冰箱，以防止其中微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养基酸碱度所带来不利影响。
（2）微生物的培养及鉴定接种：将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。
接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。
接种的关键是要严格的进行无菌操作。
鉴定：常见与常用的微生物中,根据它们的主要形态可分为细菌、放线菌、酵母菌和霉菌四大类。
细菌菌落光滑，易于基质脱离；放线菌菌落质地致密，菌落较小，广泛延伸；酵母菌菌落较细菌菌落大而厚；霉菌形成的菌落较稀松，多成绒毛状，絮状。
（3）平板分离与活菌计数倒平板：按稀释涂布平板法倒平板，并用记号笔标明培养基名称、土样编号和实验日期等。
土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化
土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化一、实验目的1. 学习、掌握从土壤稀释分离、划线分离各类微生物的技术。
2. 学习从样品中分离、纯化出所需菌株。
3. 学习并掌握平板倾注法和斜面接种技术，了解培养细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物的培养条件和培养时间。
4. 学习平板菌落计数法。
二、实验原理将待分离的样品进行一定的稀释，使微生物的细胞（或孢子）尽量呈分散状态，选用有针对性的培养基，在不同温度、通风等条件下培养，让其长成一个纯种单个菌落。
要想获得某种微生物的纯培养，还需提供有利于该微生物生长繁殖的最适培养基及培养条件。
微生物四大类菌的分离培养基、培养温度、培养时间见表2-1所示。
表2-1 微生物四大类菌的分离和培养要求样品来源分离对象分离方法稀释度培养基名称培养温度/℃培养时间/d土样细菌稀释分离10-5，10-6，10-7牛肉膏蛋白胨30～37 1～2土样放线菌稀释分离10-3，10-4，10-5高氏1号28 5～7 土样霉菌稀释分离10-2，10-3，10-4马丁氏琼脂28～30 3～5面肥或土样酵母菌稀释分离10-4，10-5，10-6马铃薯葡萄糖28～30 2～3细菌分离平板细菌单菌落划线分离10-2 牛肉膏蛋白胨30～37 1～2三、实验材料1. 菌源土样2. 培养基牛肉膏蛋白胨培养基，马丁氏培养基，高氏合成1号培养基，马铃薯葡萄糖培养基(制平板和斜面)，见附录Ⅲ。
3. 无菌水 250 mL锥形瓶，每瓶装99 mL无菌水(或95mL为分离霉菌用)，内装10粒玻璃珠。
4.5 mL无菌水试管(每人5～7支)。
4. 其他物品无菌培养皿，无菌移液管，无菌玻璃涂棒(刮刀)，称量纸，药勺，橡皮头，10%酚溶液。
（一）系列稀释平板法1. 取土样选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。
先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。
盛土的容器应是无菌的。
将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等杂物，装入已灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口，并记录取样地点、环境及日期。
实验八、土壤微生物的分离和 纯化
实验八、土壤微生物的分离和纯化土壤微生物是指生长在土壤中的微弱的、微小的生物体，包括细菌、真菌、放线菌、原生动物等。
土壤微生物是土壤的重要组成部分，对维持土壤生态系统的平衡和功能发挥起着关键作用。
因此，对土壤微生物的分离和纯化具有重要意义。
本实验就是针对土壤微生物的分离和纯化进行研究。
一、实验原理由于土壤微生物数量繁多而多样，分离出单一的菌落对于此实验来说非常的困难。
但是采用适宜的富培养基后能够轻松的促进土壤微生物菌群的生长。
富培养基包括有机和无机元素、维生素、氨基酸、碳源和氮源。
地衣素琼脂（ISP）是一种富含多种碳源和氮源的优质菌落培养基，是常用的微生物培养基。
本实验的基本原理就是在能够生长的环境中分离出单一的菌落，通过多次分离和鉴定获得纯种菌株。
二、实验器材和试剂1.地衣素琼脂培养基2.试管、移液器、移菌环、烧灼器、电热蚊子香、灭菌器3.已经壳霉菌疫苗接种的贵州悬钩子种子和土壤三、实验步骤1.准备工作。
用移液器将壳霉菌疫苗接种在新的地衣素琼脂培养基板上，将其灭菌，以备之后的使用。
2.准备土壤基质。
将土壤样品剪碎成非常小的颗粒，并放入烧灼的试管中，加入恰当的地衣素酵母素琼脂，变形后形成一个接种板。
在较大的容器中放置电热器设备，以保持环境的湿度和温度适宜。
接下来，将接种板和采样站放在单独的区域以免混淆。
3.接种。
从土壤中取一小部分，倒入试管中，并加入适量的地衣素琼脂培养基，并将其摇动均匀，使菌群溢出。
等到土壤均匀地分散在地衣素琼脂培养基中之后，用移菌环扭曲并切出一个菌落，并将其置于新的地衣素琼脂培养基板中。
重复此步骤至少三次，每次都要将新的分离土壤菌落剪出来。
4.孵育。
将地衣素琼脂培养基板置于电热器设备中，以使温度保持在合适的范围内，并等待菌落的生长。
当新的菌落形成后，即可重复上述步骤以获得更多的菌株。
5.纯化。
检查菌落后，需要进行纯化。
鉴定每个菌落，把每个菌落分别悬浮在新的地衣素琼脂培养基板中，并等待菌落的生长。
土壤微生物的分离和纯化
土壤微生物的分离和纯化土壤微生物的分离和纯化一、实验目的1、掌握从土壤中分离、纯化微生物的原理与方法。
2、学会根据微生物培养特征初步判断未知菌的类别。
3、练习微生物接种、移植和培养的基本技术，掌握无菌操作技术。
二、实验原理土壤是微生物生长和栖息的良好基地。
土壤具有绝大多数微生物生活所需的各种条件，是自然界微生物生长繁殖的良好基地。
因此，土壤是微生物资源的巨大宝库。
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，可用于培养细菌。
链霉素可以抑制细菌和放线菌的生长，对酵母菌和霉菌不起作用。
加入一定量链霉素的培养基可以从混杂的微生物群体中分离出酵母菌和霉菌。
重铬酸钾或苯酚对土壤真菌、细菌有明显的抑制作用，可用于选择分离放线菌。
三、实验器材1、材料：10cm左右深层土壤。
2、培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、马丁氏培养基、高氏Ⅰ号培养基3、其他物品：试管、三角瓶、烧杯、量筒、电子天平、精密pH 试纸、培养皿、高压蒸汽灭菌锅、移液枪、枪头、接种环、酒精灯、链霉素(1万单位/ml) 、10%苯酚、无菌水。
四、实验步骤1、土样采集：取10cm左右深层土壤10g备用。
2、制备土壤稀释液：称取土壤1g，放入有99mL无菌水的三角瓶中，振荡均匀，即为稀释10－2的土壤悬液。
然后进行十倍梯度稀释，依次制备10－3、10－4、10－5、10－6、10－7 稀释度的土壤稀释液。
3、培养基平板制备：按培养基配方各配置牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、马丁氏培养基、高氏Ⅰ号培养基各100ml。
灭菌后分别倒3个平板。
（高氏Ⅰ号培养基灭菌前加入10滴10%苯酚；马丁氏培养基倒平板前加入2ml去氧胆酸钠(2%)和0.4ml 1万单位/ml链霉素）4、接种：用无菌吸管吸取0.1ml相应浓度土壤稀释液，以无菌操作技术接种在平板上，涂布均匀。
细菌选用10－4、10－5、10－6 三个稀释度接种于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，放线菌与霉菌选用10－2 、10－3、10－4三个稀释度，分别接种于高氏Ⅰ号培养基、马丁氏培养基。
土壤、水质检测——放线菌、霉菌、大肠杆菌的分离方法
土壤、水质检测——放线菌、霉菌、大肠杆菌的分离方法微生物因为体积小、质量轻、适应性强、繁殖能力强等特点，广泛分布于自然界中。
它们存在于食品、化妆品、饲料、环境等人们能触及的各个角落中。
某些微生物对产品的污染，不仅影响到产品本身的质量，更严重的是它危及消费者的健康和安全。
科标检测研究院凭借多年的微生物检测经验，可提供快速、高效、权威的第三方微生物检测服务，赢得社会业内广泛认可。
主要针对食品、医药、化妆品、农产品、一次性产品以及工业产品等进行微生物检测以及产品微生物污染分析。
以下介绍几种菌的分离方法：一、从土壤中分离放线菌1.制作高氏一号培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。
2.称取土壤10克，放入装有100毫升无菌水的锥形瓶中，并加入10%酚10滴，以抑制细菌生长。
振荡10分钟，制成10-1菌悬液。
按照连续稀释分离法，进一步制成10-3菌悬液。
3.用移液管吸取0.1毫升10-3菌悬液，注入平板培养基上，用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀涂抹在整个培养基上。
然后将培养皿倒置于25-30℃温箱中，培养7-10天，培养基上会出现微生物菌落。
如果菌落的硬度较大，干燥致密，且与基质紧密结合，不易被针挑起，这就是放线菌菌落。
4.挑取放线菌菌落，接种于斜面培养基上。
二、从土壤中分离霉菌1.制作豆芽汗葡萄糖培养基，并添加80%乳酸数滴，以抑制细菌生长。
将培养皿中，凝成平板，待用。
2.称取10克土壤，按上述分离放线菌的方法制成10-4或10-5的菌悬液。
3.取0.1毫升菌悬液注入培养皿内培养基上，用玻璃刮刀涂抹均匀。
然后将培养皿倒置于2 5-30℃温箱内培养3-4天。
培养基上会出现微生物菌落。
霉菌菌落常长成绒状、棉絮状或蜘蛛网状，可根据这一特征寻找霉菌菌落。
4.挑取培养皿内的霉菌菌落接种于斜面培养基上三、从饮水中分离大肠杆菌1.制作伊红美蓝培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。
2.用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水，按1:10稀释。
实验二土壤中微生物的分离纯化及观察
实验结果
➢ 详细描述实验中各种微生物在斜面上、半固体和液体 培养基中的培养特征。
思考题
➢ 一个好氧的具周生鞭毛的菌株分别在斜面、半固体和 液体培养基中的培养特征。
➢ 用斜面检测微生物的培养特征接种时，为什么不要划 多条线或蛇形，而只要划一条直线？
➢ 接种环（针）接种前后灼烧的目的是什么？为什么在 接种前一定要将其冷却？如何判断灼烧过的接种环已 冷却？
法和步骤； ➢ 掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方
法。
培养基的种类
➢ 按成分不同分 天然培养基 合成培养基 半合成培养基
➢ 按培养基的物理状态分 固体培养基 半固体培养基 液体培养基
➢ 按培养基的用途分 基础培养基 营养培养基 鉴别培养基 选择培养基
培养基的配制方法和步骤
➢ 称量：按照配方正确称取各种原料置于搪瓷杯中； ➢ 溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解，补足水
（使样品中的微生物细胞充分分散，成单个细胞存 在），再取一定量的稀释液接种，使其均匀分布于培 养皿中特定的选择性培养基内，最后根据在平板上长 出的菌落数计算出每克或每毫升样品中的微生物数量。
实验器材 ➢ 土壤稀释液的三种不同培养基的培养平板 ➢ 菌种：大肠杆菌菌悬液 ➢ 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基 ➢ 仪器或其他用具：1mL无菌吸管，无菌平皿，盛有
灭菌
干热灭菌 ➢ 火焰灼烧法 ➢ 干热灭菌法（烘箱内热空气灭菌法） 湿热灭菌法 ➢ 加压蒸汽灭菌法 紫外线灭菌法 微孔滤膜过滤除菌
火焰灼烧法
直接在火焰上灼烧灭菌 主要用于实验室接种针(环)、试管口、三角瓶口和金属小 工具等的灭菌。
干热灭菌法
设备：电热烘箱 适用于耐高温器皿，160-170℃，维持2小时 注意事项：
【全面版】实验八土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化PPT文档
1、在你所制备的培养基的平板上长出的菌落分别属于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。 捷辂诖渠氲鳘前咐赂断蝶孑揶孤龈油超碗庥捣惩濠论瓜颍蓑晾埠引兰唐骏沟刘处氤馇白烙鄙膪美嫖学苠策杯碇挨枢税烬夹麈訾江汇绨 星酃恍庇骤紫末嗑倘
3、无菌生理盐水。 1、在你所制备的培养基的平板上长出的菌落分别属于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。
2、在分区平板划线法中，为什么每次都需将接种环 上剩物烧掉？
3、为什么要把培养皿倒置培养？
谢谢观看
棒、称量纸、药勺、橡皮头、10％酚溶液。 1、在你所制备的培养基的平板上长出的菌落分别属于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。
四、实验步骤
1、制备土壤稀释液 2、涂布法进行分离 3、培养 4、菌落计数 5、划线分离
五、实验报告
1、在你所制备的培养基的平板上长出的菌落分别属 于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。
酵母菌及霉菌的分离与纯化 1、熟悉从自然界中分离微生物的原理； 3、为什么要把培养皿倒置培养？
4、其它物品 无菌培养皿、无菌移液管、无菌玻璃涂 酵母菌及霉菌的分离与纯化
捷辂诖渠氲鳘前咐赂断蝶孑揶孤龈油超碗庥捣惩濠论瓜颍蓑晾埠引兰唐骏沟刘处氤馇白烙鄙膪美嫖学苠策杯碇挨枢税烬夹麈訾江汇绨 星酃恍庇骤紫末嗑倘
四实验步骤四实验步骤1制备土壤稀释液2涂布法进行分离3培养4菌落计数5划线分离五实验报告五实验报告1在你所制备的培养基的平板上长出的菌落分别属于哪个类群
实验八 土壤中细菌、放线菌、 酵母菌及霉菌的分离与纯化
一、实验目的 1、熟悉从自然界中分离微生物的原理； 2、掌握细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的分离纯化
பைடு நூலகம் 三、实验材料
土壤中放线菌的分离和纯化实验(精选5篇)精选全文完整版
可编辑修改精选全文完整版土壤中放线菌的分离和纯化实验（精选5篇）第一篇：土壤中放线菌的分离和纯化实验土壤中放线菌的分离和纯化实验一、实验目的1、制作MS培养基的方法，掌握母液的保存方法。
2、掌握培养基的灭菌方法。
掌握外植体的消毒和超净工作台的使用。
4、掌握放线菌的分离纯化及染色的基本流程；5、掌握高氏一号培养基的配制方法；6、复习分离纯化放线菌的基本操作技术、培养方学会使用高压蒸汽灭菌锅。
7、培养微生物实验的设计思路和动手能力。
二、实验材料高压蒸汽锅、培养瓶、石斛的愈伤组织、超净工作台，酒精灯、酒精棉球、镊子、电子天平、称量纸、烧杯、量筒、显微镜、三角锥形瓶、无菌培养皿、接种环、酒精灯、分析天平；接种环、载玻片、盖玻片、玻璃珠、移液枪、剪刀三、实验原理植物组织培养即植物无菌培养技术，又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）、组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）第 1 页或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体,在无菌和适宜的人工培养基及温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科。
四、实验步骤1、配制MS培养基8L，称取马铃薯1600g、香蕉400g、蔗糖240g、活性炭8半勺、琼脂80g、配制母液。
2、配制培养液时应注意：①在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制；为防止母液被微生物污染，有机母液放在冰箱里4℃保存；②用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次；③量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以免出错。
溶化琼脂用粗天平分别称取琼脂9 g、蔗糖30 g，放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入蒸馏水750 mL，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。
土壤中放线菌的分离和纯化实验报告
土壤中放线菌的分离和纯化实验报告土壤中放线菌的分离和纯化实验报告土壤是一个很复杂，有许多层次的生态系统。
要想从事物体内分离得到目标产物，必须在特定条件下进行，而不能凭空臆断。
因此，实验室分离放线菌所需设备也应根据这些原则来选择和准备，如果单凭某种条件就妄加判断那么往往会导致实验失败或造成人力财力上的浪费。
一、样品制备与培养基配制1．取土称量，充分混匀；取干燥疏松的盆或缸或其它容器，将盛装样品的容器放入水中浸泡24小时以上并每天换水数次直至发出清香气味为止。
2．称取少量样品于蒸馏水中，混合均匀。
3．挑取含水量适当的样品接种于经灭菌消毒的马铃薯种子培养基平板上。
4．将经过灭菌消毒的培养皿置于恒温箱或酒精灯上加热使之软化。
5．软化后的样品立即倒入100毫升灭菌马铃薯琼脂培养基中。
6．迅速摇动平板混匀，冷却至45℃左右，用无菌操作法倒平板并贴签标记好。
二、增菌接种三、初代培养和测试计算平板上的菌落数，挑取相同的稀释度再按照步骤一继续培养。
然后检查各种参数及观察培养结果，对比最终的数值，以判断微生物对放线菌的敏感程度和产率。
四、菌种保藏采集长期保存的菌种可采用50℃的马铃薯培养基，将菌液接入0.7%-0.8%琼脂斜面中，斜面凝固后将斜面置冰箱中低温保存。
五、影响实验结果的主要因素环境条件和杂菌污染的因素都会严重地影响放线菌的分离纯化效果，如果只注意控制某个方面，忽视了另外两个条件都难以获得满意的结果，故要求分析工作者既要认真仔细又要灵活掌握，对那些关键性的技术环节和易受外界干扰因素影响的项目应给予足够的重视，这里只简略说明几点。
（1）温度是决定分离效果的主要因素之一。
通常情况下，分离放线菌要在25℃～28℃，湿度60%～70%的条件下进行，温度高达40℃，不但有碍于菌株的正常繁殖，还会导致菌种死亡。
2．采用多菌种混合分离的办法更能提高效率。
（3）琼脂浓度的影响在各种放线菌的分离中，无论是直接法还是间接法，均以琼脂培养基的营养丰富、无机盐和生长因子较多等优良特性著称，故为放线菌分离的常规方法，由于它在生长过程中氧化葡萄糖产酸，故利用这一特点来抑制微生物的呼吸，同时利用无机盐提供电子使酶钝化，因而提高了实验效果，并且减轻了劳动强度。
微生物的分离与纯化- 从土壤中分离纯化微生物
1)超净工作台、恒温培养箱、酒精灯 2）1000ul及100ul移液枪、1000ul及100ul枪头、无菌
1.5ml的离心管、离心管架 3）无菌平皿、涂布棒、接种环 实验试剂:无菌水;
实验内容
1、采土样:
选择肥沃土壤,去表层土,挖5－20cm深度的土壤数10g, 装入已灭菌的牛皮纸袋,封好袋口,带回实验室。
所有菌落数均不在30~300间 以最接近30或300的平均菌落数乘稀释倍数
6、挑菌划线分离
挑取单个菌落（细菌菌落），分别在平板上做分区和 连续划线。
370C培养48h检查菌落是否单纯。
划线方法：详见实验指导书P72、P237
无菌操作（ 近火焰处操作）： 接种环 Nhomakorabea烧灭菌、冷却
微生物的分离与纯化技术的应用：分离具有特殊功能的微生物、优良菌 种及纯化被污染的菌种等。
土壤是微生物的大本营，混杂着大量的微生物，从中分离可得到只含有 这一种微生物的纯培养。
稀释分离法有倾注法和涂布法两种；菌种被其他杂菌污染时或混合菌悬 液常用划线法进行纯种分离。
要获得某种微生物的纯培养，还需提供有利于该微生物生长繁殖的最适 培养基及培养条件。
微生物四大类菌的分离培养基、培养温度、培养时间详见实验指导书P67 表格。细菌常用牛肉膏蛋白胨培养基，在30-37℃ 温度下培养1-2天。
平板菌落计数——活菌计数
0.1ml
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分离纯化 基本流程
实验三 霉菌、放线菌及土壤中微生物的分离纯化27页PPT
71、既然我已经踏上这条道路，那么，任何东西都不应妨碍我沿着这条路走下去。——康德 72、家庭成为快乐的种子在外也不致成为障碍物但在旅行之际却是夜间的伴侣。——西塞罗 73、坚持意志伟大的事业需要始终不渝的精神。——伏尔泰 74、路漫漫其修道远，吾将上下而求索。——屈原 75、内外相应，言行相称。——韩非
实验三 霉菌、放线菌及土壤中微生物 的分离纯化
16、自己选择的路、跪着也要把它走 完。 17、一般情况下)不想三年以后的事， 只想现 在的事 。现在 有成就 ，以后 才能更 辉煌。
18、敢于向黑暗宣战的人，心里必须 充满光 明。 19、学习的关键--重复。
20、懦弱的人只会裹足不前，莽撞的 人只能 引为烧 身，只 有真正 勇敢的 人才能 所向披 靡。
土壤细菌的分离、纯化及微生物作画展开
土壤细菌的分离、纯化及微生物作画展开
土壤细菌的分离、纯化以及微生物作图展开是微生物学研究中的重要步骤。
下面是这一过程的详细展开：
1. 样品采集：从土壤中采集样品，可以根据需要选择不同的采样点和深度，以获取不同类型的土壤细菌。
2. 稀释平板涂布法：将采集的土壤样品按照适当的比例进行稀释，并将稀释液均匀涂布在富养基平板上。
使细菌能够在平板上生长并形成菌落。
3. 菌落分离：根据菌落形态的差异和颜色特征，通过放大菌落直接进行分离。
如果菌落数目较多，可以使用无菌鉗子将不同菌落分离到不同的富养基平板上。
4. 单菌落的纯化：从菌落分离得到的单个细菌落上刺取一小部分，并在无菌条件下移植到新的富养基平板上进行培养。
重复此过程直到获得纯种菌落。
5. 结构观察：对已纯化的细菌进行形态和结构观察，包括使用显微镜观察细菌的形态、大小、颜色等特征。
6. 细菌培养：为了获取足够的细菌菌体用于后续实验，可将已纯化的细菌进行大规模培养。
常见的培养方法包括液体培养和固体培养。
7. 抗生素敏感性测试：可以通过纸片扩散法或微量稀释法测试细菌对不同抗生素的敏感性，以了解细菌的抗生素耐药性。
8. 微生物作图：通过对已纯化的细菌进行染色、染色观察和图像采集，制作出微生物作图。
常见的染色方法包括革兰氏染色和荧光染色等。
以上步骤可以帮助研究者分离和纯化土壤细菌，并对其进行形态观察和抗生素敏感性测试，最终制作出微生物作图。
这些步骤在微生物学研究和应用中具有重要的意义，可以帮助科学家更好地了解土壤中的微生物多样性和功能。
芽孢杆菌、放线菌、酵母菌、曲霉、青霉的分离纯化
芽孢杆菌、放线菌、酵母菌、曲霉、青霉的分离纯化一：实验目的1、学习从土壤中分离、纯化微生物的原理与方法。
2、学习、掌握微生物的鉴定方法。
3、对提取的土样进行微生物的分离、纯化培养，并进行简单的形态鉴定4、对简单鉴定后的微生物进行生理生化鉴定。
二：参考文献微生物课本，微生物实验教程，老师课件三：实验原理从自然界筛选菌种的具体做法，大致可以分成以下四个步骤：采样、增殖培养、纯种分离和性能测定。
四：实验材料1、器材：小铁铲和无菌纸或袋（可省）、培养皿8个、载玻片、盖玻片、普通光学显微镜、量筒、滴管、吸水纸、无菌水试管5支（每支4.5mL水）、烧杯3个、三角瓶5个、电炉、玻璃棒、接种环、镊子、恒温培养箱、高温灭菌锅、天平、滤纸、pH试纸等。
2、试剂：配制牛肉膏蛋白胨培养基的原料（牛肉膏0.9g、NaCl1.5g、琼脂4.5g、蛋白胨3.0g）、Lugol氏碘液、可溶性淀粉0.6g、结晶紫染液、番红染液、95％乙醇、无菌水等。
3、土样：取自黄冈师范学院图书馆后，地下10cm左右。
五：实验方法步骤分离纯化1.菌体来源：土壤，发霉的橘子，发霉的花生。
2.培养基名称及配方：牛肉膏蛋白胨固体培养基（芽孢杆菌）牛肉膏1.2g，蛋白胨4g，NaCl2g，琼脂6~8g，自来水400ml，pH7.2~7.4查氏培养基（曲霉，青霉）蔗糖或葡萄糖24g,NaNO31.6g,K2HPO4·3H2O0.8g,KCl0.4g,MgSO4·7H2O0.4g,FeSO4·7H2O0.008g,琼脂12~16g,蒸馏水800ml，自然pH高氏1号培养基（放线菌）可溶性淀粉8g,KNO30.4g,NaCl0.2g,K2HPO4·3H2O0.2g,MgSO4·7H2O0.2gFeSO4·7H2O0.004g,琼脂6~8g,蒸馏水400ml,pH7.4~7.6制法：先用少量冷水把可溶性淀粉调成糊状，用文火加热，然后再加水及其他药品，待各成分溶解后再补足水至400ml.酵母菌富集培养基（酵母菌）葡萄糖20g，尿素0.4g，（NH4）2SO4·7H2O0.4g,KH2PO41g,Na2HPO40.2g,MgSO4·7H2O0.4g，FeSO4·7H2O0.04g，酵母膏0.2g，孟加拉红0.012g，pH4.53.实验条件：牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂，蔗糖或葡萄糖，可溶性淀粉，自来水，NaNO3K2HPO4·3H2OKCl MgSO4·7H2O FeSO4·7H2O KNO3尿素（NH4）2SO4·7H2O KH2PO4Na2HPO4酵母膏，孟加拉红平板15个，试管15个，试管塞15个，三角瓶4个，玻璃珠10颗，接种针1个，接种环1个，酒精灯1个，打火机1个，量筒1个，电子秤1台，标签纸，无菌操作台，高压灭菌锅，温箱4实验流程：平板灭菌——配制培养基——灌试管——培养基灭菌，水灭菌——倒平板，溶解土样——接种到平板——培养——接种到试管培养基——培养六：实验结果芽孢杆菌青霉芽孢杆菌：菌落较潮湿，部分小而有突起，菌落稍透明，菌落与培养基基本没结合，菌落正反两面颜色相同。
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土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化
一、实验目的
1. 学习、掌握从土壤稀释分离、划线分离各类微生物的技术。
2. 学习从样品中分离、纯化出所需菌株。
3. 学习并掌握平板倾注法和斜面接种技术，了解培养细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物的培养条件和培养时间。
4. 学习平板菌落计数法。
二、实验原理
将待分离的样品进行一定的稀释，使微生物的细胞（或孢子）尽量呈分散状态，选用有针对性的培养基，在不同温度、通风等条件下培养，让其长成一个纯种单个菌落。
要想获得某种微生物的纯培养，还需提供有利于该微生物生长繁殖的最适培养基及培养条件。
微生物四大类菌的分离培养基、培养温度、培养时间见表2-1所示。
表2-1 微生物四大类菌的分离和培养要求
样品来源分离对象分离方法稀释度培养基名称培养温度
/℃培养时间/d
土样细菌稀释分离10-5，10-6，
10-7
牛肉膏蛋白胨30～37 1～2
土样放线菌稀释分离10-3，10-4，
10-5
高氏1号28 5～7 土样霉菌稀释分离10-2，10-3，
10-4
马丁氏琼脂28～30 3～5
面肥或土样酵母菌稀释分离10-4，10-5，
10-6
马铃薯葡萄糖28～30 2～3
细菌分离平
板
细菌单菌落划线分离10-2 牛肉膏蛋白胨30～37 1～2
三、实验材料
1. 菌源土样
2. 培养基牛肉膏蛋白胨培养基，马丁氏培养基，高氏合成1号培养基，马铃薯葡萄糖培养基(制平板和斜面)，见附录Ⅲ。
3. 无菌水 250 mL锥形瓶，每瓶装99 mL无菌水(或95mL为分离霉菌用)，内装10粒玻璃珠。
4.5 mL无菌水试管(每人5～7支)。
4. 其他物品无菌培养皿，无菌移液管，无菌玻璃涂棒(刮刀)，称量纸，药勺，橡皮头，10%酚溶液。
（一）系列稀释平板法
1. 取土样
选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。
先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。
盛土的容器应是无菌的。
将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等杂物，装入已灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口，并记录取样地点、环境及日期。
同时取10～15g，称重后经105℃烘干8h，置干燥器中冷却后再次称重，计算含水量。
土样采集后应及时分离，凡不能立即分离的样品，应保存在低温、干燥条件下，尽量减少其中菌种的变化。
2. 制备土壤稀释液
称土样1g于盛有99mL无菌水的三角瓶中，充分振荡，此即为10-2浓度的菌悬液。
用无菌移液管吸取悬液0.5mL于4.5mL无菌水试管中，用移液管吹吸三次，摇匀，此即为10-3浓度。
同样方法，依次稀释到10-7。
稀释过程需在无菌室或无菌操作条件下进行。
3. 接种
分离不同的微生物类群采用不同的稀释度，参考表2-1进行选择。
从稀至浓分别吸取各浓度稀释液1mL于各平皿中（每个稀释度每种做2-3个培养皿，并注意做好浓度及培养基种类标记），同时做空白对照，倒入熔化后冷却至45℃～50℃左右的相应培养基，轻轻地摇动并旋转平皿，使菌悬液与培养基混合均匀，水平静置待凝，倒置于相应温度的培养箱中培养，2～5天后，观察菌落情况及计数。
1.包装纸套中取出无菌移液管；
2.安装橡皮头，勿用手指触摸移液管；
3.火焰旁取出土壤悬浮液；
4.灼烧试管口及移液管吸液口；
5.在火焰旁对试管中土壤悬浮液进行稀释；
6.用手掌敲打试管，混匀土壤稀释液；
7.从最小稀释度开始，将稀释液加入无菌培养皿中；8.将融化冷凉至45～50℃培养基倒入培养皿内；9.用毕的移液管装入废弃物缸中浸泡消毒后灭菌洗涤
4. 培养
冷凝后，将平板倒置于在各自适宜的温度下培养，培养一定时间后观察。
5. 计数
选菌落单个分散、菌落数适量且各平行皿数量接近的稀释度的平皿计数。
通常细菌和放线菌选取菌落数在30～300之间的平皿，霉菌选菌落数在10～100之间的平皿，最后换算成每克干土所含菌数，记录于表2-2。
表2-2 样品中四大类微生物的菌落数
采样日期
采样
地点
10-2 10-3 10-4 10-5 10-6
平均每克样品所含
微生物数
细菌
放线菌
酵母菌
霉菌
（二）涂布法分离（酵母菌定量分离用）
依前法向无菌培养皿中倾倒已融化并冷却至45～50℃的马铃薯葡萄糖培养基，待平板冷凝后，用无菌移液管分别吸取三个不同稀释度菌悬液0.1mL，依次滴加于相应编号已制备好的马铃薯葡萄糖培养基平板上，右手持无菌玻璃涂棒，左手拿培养皿，并用拇指将皿盖打开一缝，在火焰旁右手持玻璃涂棒于培养皿平板表面将菌液自平板中央均匀向四周涂布扩散，切忌用力过猛将菌液直接推向平板边缘或将培养基划破。
（三）平板划线法
取各平板一只做好标记，将接种环经火焰灭菌并冷却后，蘸一环10-2土壤稀释液，按图2-4和图2-5的方式在培养基表面轻轻划线，注意勿划破琼脂。
划线完毕，将培养基倒置培养，2～5天后，挑取单个菌落，并移植于斜面上培养。
如果只有一种菌生长，即得纯培养菌种。
如有杂菌，可取培养物少许，制成悬液，再做划线分离，有时要反复几次，才能得到纯种。
（四）平板菌落形态及个体形态观察
从不同平板上选择不同类型菌落观察，区分细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的菌落形态特征。
再用接种环挑取不同菌落，在显微镜下进行个体形态观察。
将所分离的各类菌株的主要菌落特征和细胞形态记录于表2-3。
（五）分离纯化菌株转接斜面（斜面接种）
在分离细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的不同平板上选择分离效果较好的菌落各挑选一个用接种环接种斜面。
表2-3 各类菌株的主要菌落特征和细胞形态
菌株编号分离培养基菌落特征细胞形态
细菌1 2
放线菌1 2
酵母菌1 2
霉菌1 2
将细菌接种于牛肉膏蛋白胨斜面，放线菌接种于高氏1号斜面，霉菌接种于马丁氏培养基，酵母菌接种于马铃薯葡萄糖斜面上。
贴好标签，在各自适宜的温度下培养，培养后观察是否为纯种，记录斜面培养条件及菌苔特征于表2-4。
置冰箱保藏。
表2-4 四大类微生物斜面培养条件及菌苔特征
微生物培养基名称培养温度培养时间菌苔特征纯化程度
细菌
放线菌
酵母菌
霉菌
五、实验报告
1. 简述分离微生物纯种的原则及列出分离操作过程的关键无菌操作技术。
2. 将所检测样品中四大类微生物的菌落数填入表2-2。
3. 将所检测样品中各类菌株的主要菌落特征和细胞形态填入表2-3。
4. 记录斜面培养条件及菌苔特征（包括纯化结果）于表2-4。