液相常见问题

液相的常见问题：

一、在实际工作中，我们经常能遇到基线的漂移的情况。关于基线漂移（或上下波动）的原因，可能有以下几种：

1、柱子的平衡时间长。一般来说，新柱子的平衡时间要短。有些老柱子的平衡是时间长。当然，柱子的平衡是时间也和它使用的流动相有关系。如果使用了离子对试剂，那么比普通的简单的流动相（例如二元流动相：甲醇：水，乙腈：水，，，，，，）

2、系统存在漏点。如果系统存在漏点，那么出现基线向下漂移。需要检漏

3、PUMP 头有气泡。 PUMP 头的气泡会导致基线的漂移和波动。如果怀疑是 PUPM 头有气泡导致基线不稳，只需要看仪器的压力是否稳定就好。

4、流动相脱气。如果流动相没有脱气，基线肯定是不稳的

5、柱后气泡。在柱子后有气泡产生，导致检测器中的读数有波动。

6、PUMP 密封不好。密封不好，也会导致 PUMP 头的气泡（好象不可能）和漏夜，基线当然不稳定了。

7、系统的环境。仪器的使用，如温度的变化，流速的变化，，，，，，，以及梯度洗脱，当然基线漂移

8、单向阀睹塞或污染。单向阀的睹塞和污染，能造成流量不准确，压力波动。

故也会波动，漂移

9、检测器污染或有杂质

10、如果是紫外或二极管阵列检测器（PDA ），排除以上原因还出现基线噪音大，就有可能是氘灯的能量不足了

二、主峰后面有很多杂质峰可能原因

1，仪器问题：最有可能的就是系统污染，尤其是管路，比如，入口单向阀或各接口处等有盐残留；

2，色谱柱问题：这个好办，换新的色谱柱，大部分能解决问题； 3，试剂试药问题：所用试剂、试药达不到色谱级别所需，或者不同批号不同厂家的东西都有可能影响，最直接影响的就是物质的纯度影响流动相的吸收； 4，梯度洗脱程序：梯度洗脱程序设置不合理，比如在某个时间段急剧变化； 5，其他：如配制方法不同，超声方法不同等。

如今，看似很简单的问题，在经过很长一段时间的摸索后发现，上述原因其实都是比较客观的，如果以上 4 点都解决不了，可以考虑以下原因：仪器本身功能上的区别导致。比如安捷伦低压梯度和高压梯度做的同样的东西，能重复出来，而且梯度峰都很小，甚至没有，而用岛津的低压和高压梯度仪器，所表现的就不一样了，具体原因，因只具有经验所得，所以目前只能作为讨论的一个话题，仅供各位参考。

三、冲洗液相管路

1、如果系统污染可以考虑用异丙醇冲洗，把过滤后的异丙醇当流动相，以

0.5ml/min 冲洗 30-60 分钟，一般杂质就可清除。如果不行可以考虑 12%的磷酸冲洗，它可以有效清洗不锈钢和其它材料的管路，清除有机杂质及污垢，比用有机溶剂更有效，也比用稀硝酸有效（用 5-15%硝酸清洗虽然有效，但是清洗后系统很难平衡，特别低紫外区域）。磷酸清洗方法如下：先用甲醇或者乙腈彻底清洗系统，然后是纯水，然后是 12%磷酸冲洗 60 分钟左右，冲洗过程中可以将进样器一并冲洗，然后换用水，甲醇或乙腈冲洗，这样就基本可以了。

2、用 5%硝酸洗脱管路 1h 后未知峰去无踪，效果不错，推荐大家有必要试

试「如果不是污染严重，还是别用硝酸洗脱管路，因硝酸对不锈钢管路损害较大

四、梯度洗脱

做梯度洗脱有时候是会这个样子的，基线会漂移的满厉害的。要用足够的时间来平

衡，如果有在线脱气装置会好一点。特别是走梯度洗脱时后面往往有一些杂峰而有机相在不

同的比例下吸光度也不一样，由于UV检测的是相对吸收度，

所以就造成了基线漂移。而且，如果柱子没有平衡好，这种漂移也不一样。如果走上两个小时后，这种漂移相对就稳定。在梯度分析时，流动相的选择和波长的选择是很重要的；在梯度洗脱时，一般波长不应再变，否则再高的水平也做不好，尤其在低波长时。

分析波长较高时，流动相相对容易些，如在 300nm以上，影响相对较小。但是，在大多数的情况下，流动相首选低紫外吸收的，如乙腈和水，少用甲醇和四氢呋喃，无机盐以磷酸盐等低紫外吸收的为好，少用醋酸盐、柠檬酸等有机盐，酸用磷酸和硫酸少用醋酸，同时梯度变化尽可能小和缓和，虽然分析时间将增加。另外，A，B（ C）相都采用混合流动相，以减少流动相变化对紫外的影响。还有一点，所用的试剂要求为色谱纯，国有的厂家所标的色谱纯连化学纯的都不如，有一些特定的添加试剂，如离子对试剂，只能使用进口的色谱纯级。注意以上几点，你的梯度色谱图必将大有改观。当然你的仪器也要好的了。

建议您使用一种方法：扣除本底法。此种方法由色谱工作站来完成，具体方法是：1、不进样，严格按梯度方法空跑出基线，得出不进样的梯度基线。2、进

样，做梯度洗脱，得到谱图。3、在工作站上用谱图相减的功能处理，用谱图减去梯度基线，

即可得到比较漂亮的谱图，而且不影响定量计算！

五、样品池污染

1、如果是流通池脏，可以把柱子去下来，用50 - 50 (v/V)的异丙醇、异丙醇纯

水、来冲洗流通池。如果还不行，用1N的硝酸冲流通池，再用纯水冲洗。

/bbs/thread/6935925?keywords= 样品池污染 #6935925

丙醇冲洗2小时，最后过度成甲醇。结果：基线平稳，峰行明显改善，样品池能量恢复

六、异丙醇的作用：

在安捷伦液相中会使用的10 %异丙醇，它的作用是柱塞清洗附件的清洗液，它主要是当流动相中含有盐类时，为了防止盐类在柱塞产生结晶，磨损宝石杆和柱塞密封圈，加入异丙醇10 %异丙醇一方面有防止长菌的作用，另一方面有增加清洗液的润湿性，减少泵气泡产生。在泵运行的时候一定不能干。异丙醇是一个很特殊的角色，是维护液相的专业溶剂，它的“露面”至少有以下几处：

1、10%的异丙醇是柱塞清洗附件的清洗液。

2、更换密封圈后用异丙醇磨合。

3、洗针用溶剂。

4、峰拖尾时，可尝试用异丙醇冲柱子。

5、泵的压缩性补偿值，是以异丙醇为基准：标准的100，而常用的流动相：甲醇120，乙腈115，而水则偏差较大，是46。

6正相和反相系统转换时的中间过度溶剂。

另外在其他厂家的液相中使用 30%甲醇，作用都是和异丙醇的一样，用于洗泵和洗针。

七、检测限与定量限

S/N=3时的浓度是检测限，也就是峰高约在基线噪音高的 3倍，注入液相色谱仪的对照品百分浓度％。S/N=10是定量限，也就是峰高约在基线噪音高的

10倍时，注入液相色谱仪的对照品量。首先，配制一个较低浓度的对照品溶液，注入液相色谱仪，观察其峰高比基线噪音高多少倍（假设X倍），将该溶液稀释