细菌的人工培养

2.显微镜检查
染色水洗后的涂片标本→吸水纸吸干(切勿 磨擦)或 在酒精灯火焰的远端烘干→滴加香柏油→用油 浸镜观 察细菌的形态结构和染色特性。 形态检查的意义
观察病料中有无细菌以及细菌的形态、数量、 分布、结构、种类等，进行初步判断
畜禽疫病防治 第1章 疫病的病原 第一节 细菌
（三）细菌的分离培养
OH二乙酰 + 含胍基 化合物
（—）
（ +）
红色（+）
3、甲基红(methyl
red)试验：
葡萄糖
丙酮酸 （pH值>5.4） 甲酸、乙酸（红色）
（pH<4.5）
（—）
（+）
（五）动物接种试验
意义

为了证实所分离 菌是否有致病性 本动物
脑内接种 皮下注射 灌口
接种对象
肌肉注射


试验动物
静脉注射 腹腔注射
（2）侵入
侵入：是指病原菌主动侵入吞噬细胞或非 吞噬细胞的过程 侵入方法：是通过侵袭蛋白来实现的
（3）繁殖与扩散能力
繁殖：细菌在宿主体内的增殖速度对致病性极为 重要 扩散：通过一些侵袭性酶类实现的 ，如透明质酸 酶、胶原酶等
（4）干扰或逃避宿主的防御机制
机制：是因为具有抵抗吞噬及杀菌物质作用的 表面结构荚膜等
不 同 种 沙 门 氏 菌 的 生 化 鉴 定
鸡伤寒沙门氏菌
鼠伤寒沙门氏菌
细菌的生化试验
1.糖分解试验 2.维-培试验 3.甲基红试验 4.枸橼酸盐利用试验 5.吲哚试验 6.硫化氢试验 7.触媒试验 8.氧化酶试验 9.脲酶试验
常见生化试验类型
糖类分解试验

糖发酵试验、甲基红试验、V-P试验 等
（一）在医学中的应用
1 疾病的诊断和治疗 2 细菌的鉴定和研究 3 生物制品的制备 4 细菌毒力分析及细菌学指标的 检测
（二）在其他方面的应用 1 在工农业生产中的应用 2 在基因工程中的应用
五、细菌病的一般诊断程序
（一）病料的采集、保存及运送 （二）细菌的形态检查 （三）细菌的分离培养 （四）细菌的生化试验 （五）动物接种试验
（三）细菌的分离培养
意义




看培养基中有无细菌生长推断是否为细菌病 依据菌落的特征判断细菌种类 用菌落中的细菌进一步作形态学鉴定 可进一步作生化鉴定、血清学鉴定及动物试 验 可进一步作药敏试验
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鸡白痢沙门氏菌
（四）细菌的生化试验
检验时，根据可疑 细菌的生化特性选 择特定的一组生化 试验，将结果与标 准进行对比，以确 定病原菌的种类
通常选用适合目标菌生 长的平板培养基对细菌 进行分离培养 细菌菌落的形状、大小、 色泽、气味、透明度、 黏稠度、边缘结构和有 无溶血现象等，均因细 菌的种类不同而异，根 据菌落的这些特征，即 可初步确定细菌的种类
不同细菌的菌落大小、形态、色泽、 表面特征、边缘状态、隆起度、透 明度等特征不同
有的细菌在鲜血培养基上有β-溶血现象
(三)按照培养基的成分来分
1. 合成培养基
2. 天然培养基
3. 半合成培养基
三、制备培养基的要求

含有丰富的营养物质
均质透明，易于观察。 具有适当的pH值和水分。 不含抑菌物质和杂菌

经过灭菌和无菌检验
四、细菌在液体培养基中生长
沉 淀 生 长
混 浊 生 长
表 面 生 长
细菌在半固体培养基中生长
细菌的人工培养
细菌的人工培养定义： 提供细菌生长繁殖所 需要的条件，可进行 细菌的人工培养
一、培养基的概念
把细菌生长繁殖所需要的各种营养 物质合理地配合在一起，制成的营 养基质称为培养基。
二、培养基的类型及用途
（一）按物理状态分：

液体培养基：用于扩增纯培养的细 菌 半固体培养基：检查细菌运动性, 0.3 % -0.5%琼脂 固体培养基：细菌分离、纯化、鉴 定、药敏试验等, 2%~3%琼脂


加入0.3%～0.5%琼脂
加入2%～3%琼脂
半固体培养基
液体培养基
固体培养基
（二）按营养基用途分
基础培养基
营养培养基 鉴别培养基 选择培养基

普通培养基
血液培养基
5、 厌氧培养基：
专供厌氧菌的分离、培养和鉴别用. 将普 通培养基放在无氧环境中培养，或者使 培养基本身成为无氧的环境。
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（一）病料的采集、保存及运送
采集原则
无菌采病料 适时采病料 病料中病原含量多 采集适量病料：至少 检测量的4倍 低温保存 尽快送检 做好记录
（二）细菌的形态检查
1.病料处理
将病料涂成薄而均匀的涂片→室温下自然干
燥→若为细菌培养物涂片火焰固定 常用的染色方法有：革兰染色法、美蓝染色 法、瑞氏染色法和姬姆萨染色法
2. 毒素
来源：细菌生长繁殖中产生和释放的毒性 成分
作用：可直接或间接损伤宿主细胞、组织
和器官，干扰其生理功能
种类：外毒素和内毒素
有鞭毛的细菌可 沿穿刺线呈羽毛状 或云雾状混浊生长
无鞭毛细菌则 只能沿穿刺线呈 明显的线状生长 半固体培养基
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2、细菌在半固体培养基 中的生长现象
有鞭毛的细菌，沿 穿剌线呈模糊羽毛 状生长。 无鞭毛的细菌，沿 穿剌线呈清晰的线 状生长。
细菌在固体培养基中的生长
于最适生长温度条件下培养和连续 通过非易感动物等方法可减弱微生 物毒力
二、细菌的致病性
病原菌致病力的强弱 毒力 侵袭力
毒素
1. 侵袭力： 是指病原细菌突破宿主皮肤、黏膜等防御
屏障，进入机体定居、繁殖和扩散的能力 黏附与定植
侵入
繁殖与扩散能力
干扰或逃避宿主的防御机制
（1）黏附与定植
黏附：是指病原微生物附着在敏感细胞 的表面，以利于其定植、繁殖。在黏附 的基础上，才能获得侵入的机会。 黏附结构：细菌的菌毛等
接种途径
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一、致病性与毒力
致病性与毒力的概念

致病性：是指病原微生物引 起动物机体发生疾病的能力 毒力：病原微生物致病力的 强弱程度称为毒力

改变毒力的方法

增强毒力的方法
连续通过易感动物可增强微生物毒
力

减弱毒力的方法
长时间在体外连续培养传代、在高
大肠杆菌在不同培 养基上形成的菌落
畜禽疫病防治 第1章 疫病的病原 第一节 细菌
细菌在固体培养基中的生长情况
菌落（R型）
固体培养基中 菌落（S型）
菌苔
细菌在固体培养基中的生长情况
光滑型菌落
粗糙型菌落
粘液型菌落
液体 培养基
斜面 培养基
纯培养 (pure culture)
菌落(colony)
三、人工培养细菌的意义
蛋白质类分解试验

硫化氢试验、靛基质试验等
其他类型试验

枸橼酸盐利用试验、触酶试验、尿素 酶试验等
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1、糖酵解试验：
气泡
— + +
不发酵
产酸不产气 产酸又产气
糖发酵试验
发酵 产酸 +
细菌
分解
糖Leabharlann Baidu
发酵 产酸产气
+
不发酵
2、VP试验：
葡萄糖
丙酮酸
乙酰甲基甲醇