组织化学染色

细胞组织化学染色

一：性质

组织化学是组织学与化学相结合而形成的一门边缘学科。它是在机体组织结构的原位上研究它的化学性质，利用已知的化学反应或物理方法，在细胞组织的原位上显示其结构的化学性质（如，蛋白质，糖类，脂类，酶等等）

二：要求

1：保持组织细胞的生前结构。

2：保持细胞生前的化学成分和酶的活性。

3：所有的方法是已知的化学反应或物理变化。

4：反应产物必须是一种有色物质，可以用显微镜观察。

5：反应产物在细胞内，并保持一定的稳定性。

三：对象

研究细胞或组织中的化学物质，包括：

1：蛋白质：可以显示其中某些氨基酸或功能基

2：核酸：核糖核酸和脱氧核糖核酸

3：糖类：糖原

4：酶类：磷酸酶，氧化酶

5：无机盐：铁，铜，钴等

四：方法：固定和显示

1：固定：将细胞的生前结构和化学物质保存下来

（1），物理法：冰冻，干燥法

（2），化学法：甲醇，乙醇，丙酮，甲醛等

2：显示：不同物质显示法分下面几种

（1），化学法：A：金属沉淀法，钙－钴法显示碱性磷酸酶

B：偶氮偶联法，蛋白质，脂酶，氨基酸

C：雪夫反应法，糖元

D：联苯胺反应，过氧化物酶

E：普鲁士蓝法，显示三价铁

（2），物理法：A：脂溶染色法

B：荧光显示法

C：放射自显影法

五：意义

1：研究血细胞的代谢与机能

2：血液病的诊断与鉴别

3：某些血液病的疗效与预后判断参考

六：常用的几种染色法及临床意义

(一) 糖原（高碘酸－雪夫（PAS）染色）

1：血片或骨髓片于95％乙醇中固定10分钟后，水洗待干。

2：在1％的高碘酸溶液中浸10－15分钟，水洗待。

3：放入雪夫溶液中30分钟，水洗待干。

4：2％的甲基绿复染15分钟。

5：水洗凉干，油镜下检查。

结果：PAS阳性反应物质呈红色颗粒或团块状定位于细胞质中，颜色因糖元的

量不同而呈粉红或深红。

淋巴细胞：PAS 阳性10－15%之间

↑：慢淋淋巴肉瘤及何杰金淋巴瘤

↓：急淋

粒细胞：原粒细胞阴性，早幼粒弱阳性，分叶呈阳性

↑：感染再障

↓：慢粒急性白血病

红细胞：有核红细胞阴性

↑↑：红血病红白血病重型地中海贫血

↑：溶贫

巨核细胞：阳性

(二) 碱性磷酸酶Gomori氏法

1：血片和骨髓片用95%乙醇固定10分钟，水洗。

2：入甘油磷酸37℃保温4－6小时，水洗。

3：2%硝酸钴染5分钟，水洗。

4：1％硫化氨染2分钟，水洗。

5：2％甲绿复染15分钟，水洗。

6：凉干镜检

结果：阳性反应为黑色的颗粒状或片状定位于细胞浆中。

－无

＋弥散的，偶见小颗粒1分

＋＋弥散的，中等数量颗粒2分

＋＋＋较多的颗粒，充满胞浆3分

＋＋＋＋粗大的颗粒，充满胞浆4分

正常值：阳性率22—44%,积分20－40分

↑：感染类白血病急性淋巴细胞白血病再障真性红细胞增多症

↓：粒细胞白血病急性非淋巴细胞白血病

（三）过氧化物酶POX

1：新鲜涂片用0.3％联苯胺酒精固定3分钟

2：加0.3％双氧水染7分钟，水洗

3：复染（瑞－吉氏），水洗

4：凉干镜捡

结果：阳性反应主要在粒细胞系统, 细小或粗大呈园型的蓝棕黑色颗粒，单核细胞为细小弥散分布。

原始细胞（－）

淋巴细胞（－）

(四) 非特异性脂酶

1：新鲜涂片10％福尔马林国定5分钟，水洗。

2：入1％醋酸奈脂溶液中30分中,水洗

3：2％甲绿复染，水洗。

4：凉干镜捡

结果：单核细胞巨核细胞（灰黑－深黑色反应）絮状沉淀在胞浆中，核膜处较强。

鉴别：急粒急淋急单

（五）铁粒幼染色（普鲁士兰反应）

1：骨髓涂片甲醇固定10分钟，水洗。

2：酸性20％亚铁氰化钾中60分钟，水洗。

3：0.1％番红花复染1分钟，水洗。

4：凉干镜捡

结果：蓝色的颗粒分布幼红细胞及网状吞噬细胞中。

标准：－无0分

＋ 1 个1分

＋＋2- 5个2分

＋＋＋ 6 –9个3分

＋＋＋＋9以上或＞3／4 4分

外铁：＋—＋＋↑：再障溶贫等

↓：缺铁贫血

内铁：正常值,27—54％积分30—80分

↑：再障铁粒幼溶贫

↓：缺铁贫血