细胞活力快速检测试剂盒(

细胞活力快速检测试剂盒细胞活力快速检测试剂盒（（Luminescent ）

说明书修订日期说明书修订日期：：2015.07.13

Cat number ：KGA369

Store at -20 for ℃ 6 months, protected from light

For Research Use Only （科研专用）

一、试剂盒说明

本试剂盒是通过对ATP 进行定量测定来检测培养物中活细胞数目的一种均质检测方法。ATP 是活细胞新陈代谢的一个指标。细胞活力快速检测试剂盒为多孔板而设计，是进行自动化高通量筛选(HTS)、细胞增殖和毒性分析的理想选择。均质检测步骤就是将单一试剂直接加入含有血清的培养细胞中，无需洗涤细胞、去除培养基或进行多步加样操作。在384孔板上，加入试剂并混合后，10 分钟内，该系统可检测到的每个孔内的细胞数最低为15个。

均质检测的" 加样-混合-检测" 的操作方案使得细胞裂解和产生的发光信号与存在ATP 量成正比，而ATP 量直接与培养物中的细胞数量成正比。细胞活力快速检测试剂盒产生一种"辉光型" 的发光信号，半衰期一般大于5小时，因细胞类型和培养基而异。由于信号半衰期长，不需要使用试剂自动进样器，就可灵活地进行连续的或批量的多孔板处理。独特的均质检测方案避免了那些需要多个步骤的ATP 检测方法可能会引入的误差。

二、试剂盒组份

组 份 Cat: KGA369

500 assays

储存储存条件条件

细胞活力快速检测液 13ml/瓶 避光，-20℃，半年有效 本试剂盒可以提供384孔板至少500T 的量的量。。

三、试剂盒以外自备仪器和试剂

低速离心机 、荧光闪烁计数仪、平板摇床、微量移液器、不透明壁多孔板，用于细胞培养物。

四、注意事项

1. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，如果待检测体系中存在较多的还原剂，例如一些抗氧化剂会干扰检测，需设法去除。

3. 用酶标仪检测前请确保孔内没有气泡，否则会干扰测定。

4. 为保证您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

五、操作方法

A. 细胞活性检测的操作步骤

1. 在一块壁不透明的多孔板上准备好带培养基的哺乳动物细胞，96孔板100µl/孔，384孔板25µl/孔。多孔板应与将使用的萤光发光计匹配。

2. 准备只含培养基不含细胞的对照孔，以得到背景发光值。

3. 在实验孔中加入待测化合物，按合适的条件进行孵育。

4. 将平板及其内容物平衡到室温，大约需要30分钟。

5. 向每孔中加入与细胞培养基体积相等的细胞活力快速检测液（如，向96 孔板内含100µl/孔的培养基中

加100µl试剂）。

6. 在一个定轨振荡器上混合内容物2分钟，诱导细胞裂解。

7．将平板室温孵育10分钟，使萤光信号值稳定。

注意：温度梯度，细胞分布不均匀和孔的边际效应可能导致不稳定的萤光信号值。

8．记录发光信号。（仪器设置取决于仪器制造商。每孔整合读数时间设为0.25-1秒可作为设置参考。）

非必须）

）

（非必须

B. ATP 标准曲线操作步骤

标准曲线操作步骤（

规范的操作是在样品检测的同一块平板上进行ATP标准曲线实验。

1. 在培养基中配制1µM ATP (100µl 的1µM ATP 含10-10mol ATP)。

2. 在培养基中对ATP 进行10 倍系列稀释（1µM 到10nM;100µl体积将含有10-10到10-12mol的ATP）。

3. 在多孔板的100µl 培养基内制备不同浓度的标准ATP溶液。

注意：由于血清中存在的ATP酶降解ATP水平，ATP标准品配好后应立即加入试剂。

4. 在每孔中加入与ATP 标准液等体积的细胞活力快速检测液（1:1 体积比）。

5. 在振荡器上混合内容物2分钟。

6. 室温孵育10分钟，稳定萤光信号值。

7. 记录发光值。