医院感染消毒灭菌效果监测取样指导

医院感染消毒灭菌效果监测取样指导根据《消毒技术规范》的要求，现将我院消毒灭菌效果监测、环境微生学监测的采样方法、结果判定、质控标准等规范如下：第一章环境卫生学监测

包括空气、物体表面、医务人员手的监测采样及检查原则：采样应具有一定数量和代表性，采样后必须尽快对样品按要求指标进行检测，送检时间不得﹥6小时，若样品保存在冰箱内送检时间不得﹥24小时。

一、空气监测：

1、采样时间：消毒处理后，操作前

2、采样方法：平板沉降法

（1）布点方法：室内面积≤30ｍ²，设内、中、外对角线3点，两端距墙1米；室内面积＞30ｍ²，设东、西、南、北4角及中央5点，其中东、西、南、北均距墙1米。

（2）采样方法：将直径为9cm普通营养琼脂平板在室内各采样点处，采样高度为距地面1.5米，采样时将平板盖打开，扣放于平板旁，暴露5分钟，盖好立即送检。

(3)计算公式：

空气细菌菌落总数（cfu/m³）=50000N/（A × T）式中A 为平板面积（cm2）；T为平板暴露时间（min）；N为平均菌落数（cfu）。

（4）注意事项：采样前，关好门、窗，在无人走动的情况下，静止

10min 进行采样。

(5)质控标准：

Ⅰ类区域：细菌总数≤10cfu/m3(或0.2cfu/平板)，未检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格；

Ⅱ类区域：细菌总数≤200cfu/m3(或4cfu/平板)，未检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格；

Ⅲ类区域：细菌总数≤500cfu/m3(或10cfu/平板)，未检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格。

二、医务人员手的监测：

1、采样时间：在接触病人和从事医疗活动前进行采样或消毒后立即采样。

2、采样面积及方法：手的采样:被检人五指并拢，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子在双手指屈面从指根到指端往返涂擦 2 次(一只手涂擦面积约 30cm2)，并随之转动采样棉拭子，剪去操作者手接触部位，将棉拭子投入 10ml 含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。

采样面积按平方厘米计算；

采样结果计算方法：

平板上菌落数×稀释倍数

细菌总数(cfu/cm2)＝────────────────采样面积(cm2)

3、质控标准：Ⅰ、Ⅱ类区域工作人员：细菌总数≤5cfu/cm2，并未检出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单孢菌为消毒合格。

Ⅲ类区域工作人员：细菌总数≤10cfu/cm2，并未检出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌为消毒合格。

Ⅳ类区域工作人员：细菌总数≤15cfu/cm2，并未检出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌为消毒合格。

母婴同室、婴儿室、新生儿室及儿科病房的工作人员手上，不得检出沙门氏菌、大肠杆菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌为消毒合格。

三、物体表面监测

1、采样时间:在消毒处理后进行采样。

2、采样面积：被采表面＜100/cm²，取全部表面；被采表面>100 cm²，取100 cm²。

3、采样方法：压印采样法：采用一直径为5.6cm（面积约为25 cm²）的消毒塑料专用平皿，倾注营养琼脂培养基，并使培养基搞出平皿边缘1-2mm,凝固后置4℃冰箱保存待用。采样时将平皿上的琼脂表面直接压贴在被检物体表面10-20秒后送检。

置37℃培养箱培养24-48小时，计算并鉴定细菌。

采样结果计算方法：

平板上菌落数×稀释倍数

细菌总数(cfu/cm2)＝────────────────采样面积(cm2)

4、质控标准：Ⅰ、Ⅱ类区域：细菌总数≤5cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。

Ⅲ类区域细菌：总数≤10cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。

Ⅳ类区域细菌：总数≤15cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。母婴同室、早产儿室、婴儿室、新生儿室及儿科病房的物体表面不得检出沙门氏菌。

第二章消毒灭菌效果监测

一、压力蒸汽灭菌效果监测方法：

压力蒸汽灭菌效果监测是一组综合措施，包括工艺监测、化学监测、生物监测，各个环节缺一不可。

1、工艺监测（又称程序监测）

每锅进行，并详细记录，包括灭菌设备故障检查，灭菌温度，灭菌时间和蒸汽质量，灭菌物品包装、大小摆放正确等。

2、化学监测法：是利用既能指示蒸汽温度，又能指示温度持续时间的化学指示管(卡)等在一定温度与作用时间条件下受热后根据颜色或性状的变化，来判断灭菌是否合格的方法。

（1）化学指示卡(管)监测：

1）化学指示卡(管)监测方法: 将既能指示蒸汽温度，又能指示温度持续时间的化学指示管(卡) 放入大包和难以消毒部位的物品包中央，经一个灭菌周期后，取出指示管(卡)，根据其颜色及性状的改变判断是否达到灭菌条件。

2）结果判定: 检测时，所放置的指示管(卡) 性状或颜色均变至规定的条件，判为灭菌合格；若其中之一未达到规定的条件，则灭菌过程不合格。

（2）化学指示胶带监测

1）监测方法: 将化学指示胶带粘贴于每一待灭菌物品包外，经一个灭菌周期后，观察其颜色的改变，以指示是否经过灭菌处理，而不能作为灭菌效果判定指标。

2）结果判定: 检测时，所放置的指示管(卡)、胶带的性状或颜色均变至规定的条件，判为灭菌合格；若其中之一未达到规定的条件，则灭菌过程不合格。

（3）B-D试验：用于预真空（包括脉动真空）压力蒸汽灭菌器冷空气排放效果的检测，冷空气是造成预真空（包括脉动真空）压力蒸汽灭菌失败的主要因素之一。对预真空和脉动真空压力蒸汽灭菌，每日进行一次B-D试验。

1）检测方法：B-D试验要求做前预热、空载监测每天一次，将B-D 试纸放入标准测试包，中间包好，水平放入灭菌柜内灭菌车的前底层，靠近柜门与排气口底前方（上方）灭菌柜内除测试包无任何物品。2）结果判定:经134℃，3.5—4分钟后，取出B-D测试纸观察颜色变化。若变色均匀一致，说明冷空气排放效果良好，灭菌器可以使用。（4）化学检测注意事项: 监测所用化学指示物须经卫生部批准，并在有效期内使用。

3、生物监测法

1）指示菌株: 指示菌株为耐热的嗜热脂肪杆菌芽胞(ATCC 7953 或 SSIK 31株)，在 121℃±0.5℃条件下，D值为 1.3 min～1.9min，杀灭时间(KT值)≤19min，存活时间(ST值)为≥3.9min。