第四章 高效液相色谱分析法
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第三节 液相色谱的固定相与流动相
一、固定相 二、流动相
仪器分析
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第三节 液相色谱的固定相与流动相
一、固定相 分配色谱固定相 液-固吸附色谱固定相 固吸附色谱固定相 固定相 离子交换色谱固定相 空间排阻色谱固定相 手性固定相
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第三节 液相色谱的固定相与流动相 ）、分配色谱固定相 （一）、分配色谱固定相 全多孔型固定相
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第二节 主要分离类型
二、液-液分配与化学键合相色谱 液分配与化学键合相色谱
）、液 （一）、液-液分配色谱
与气相色 谱中气--液 谱中气 液 色谱比较？ 色谱比较？
固定相与流动相均为液体（互不相溶）。 固定相与流动相均为液体（互不相溶）。 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配。 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配。 K不仅与固定相的种 不仅与固定相的种 类有关， 类有关，也与流动相 的种类有关。 的种类有关。
多孔球体(氧化铝 、 硅藻土等) 多孔球体 氧化铝、 硅藻土等 氧化铝 +固定液 固定液 早期固定相 已不多见
分类
表面多孔型固定相
微珠担体(玻璃微球 固定液 微珠担体 玻璃微球) +固定液 玻璃微球
化学键合固定相
硅胶表面键合有机分子
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第三节 液相色谱的固定相与流动相 化学键合固定相 利用硅胶表面存在的硅羟基， 利用硅胶表面存在的硅羟基 ， 通过化学反应将 有机分子键合到硅胶表面。 有机分子键合到硅胶表面。 A. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C 硅氧碳键型： B. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C 硅氧硅碳键型： C. 硅碳键型： 硅碳键型： D. 硅氮键型： 硅氮键型：
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第二节 主要分离类型
一、液-固吸附色谱 固吸附色谱 二、液-液分配与化学键合相色谱 液分配与化学键合相色谱 三、离子交换色谱 四、离子对色谱 五、空间排阻色谱 六、亲和色谱
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第二节 主要分离类型
一、液-固吸附色谱 固吸附色谱
颗粒度较小， 颗粒度较小， 5-10µm
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第一节 高效液相色谱仪
缺点： 缺点：
灵敏度低； 灵敏度低； 对温度敏感； 对温度敏感； 不能用于梯度洗脱。 不能用于梯度洗脱。
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第一节 高效液相色谱仪 ）、荧光检测器 专用型检测器 （三）、荧光检测器—专用型检测器 基本原理：在一定的条件下， 基本原理：在一定的条件下，荧光强度与流动 相中的组分的浓度成之比。 相中的组分的浓度成之比。
对多环芳烃 维生素B、黄曲霉素、 对多环芳烃，维生素 、黄曲霉素、卟啉类化合 农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应。 物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应。
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第一节 高效液相色谱仪
特点： 特点：
高灵敏度； 高灵敏度； 高选择性； 高选择性； 可用于梯度洗脱。 可用于梯度洗脱。
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第一节 高效液相色谱仪
一、 高效液相色谱仪结构流程
进样器 高压泵 色谱柱 检测器 储液瓶 废液 高压输液泵、高效分离住、 高压输液泵、高效分离住、高灵敏度检测器
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第一节 高效液相色谱仪
二、 高压输液系统（高压泵） 高压输液系统（高压泵）
要求： 要求： 输出压力高； 输出压力高； 平稳、脉冲小； 平稳、脉冲小； 流量稳定可调； 流量稳定可调； 耐腐蚀。 耐腐蚀。 机械往复柱塞泵结构图
没食子酸
3,4-二羟基苯甲酸 二羟基苯甲酸
固定相: 非极性; 流动相: 极性 固定相 非极性 流动相 组分极性: 二羟基苯甲酸<没食子酸 组分极性 3,4-二羟基苯甲酸 没食子酸 二羟基苯甲酸
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第二节 主要分离类型
三、离子交换色谱
固定相：阴离子交换树脂或阳离子交换树脂。 固定相：阴离子交换树脂或阳离子交换树脂。 键合基团 担 体 苯乙烯-二 苯乙烯 二 乙烯苯共 聚物微球 键合 阳离子： 阳离子： －SO3H(强) 强 －CO2H(弱) 弱 阴离子： 阴离子： －N+R3(强) 强 －NH2 (弱) 弱
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第二节 主要分离类型
X M + nS S = X S + nS M
c( X s )[c(S M )] K= n c( X M )[c(S s )]
n
下标M、 分别代表流动相和固定相 分别代表流动相和固定相， 代表被吸附的 下标 、 s分别代表流动相和固定相 ， n代表被吸附的 溶剂分子数；K代表吸附平衡常数。 代表吸附平衡常数。 溶剂分子数； 代表吸附平衡常数
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改变流动相的组成来 改善分离效果。 改善分离效果。
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第二节 主要分离类型 固定相极性>流动相极性 固定相极性 流动相极性 正相分配色谱 （正相柱） 正相柱） 固定相极性<流动相极性 固定相极性 流动相极性 反相分配色谱 反相柱） （反相柱）
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组分极性越大， 组分极性越大，保留 时间越长； 时间越长；使用极性 化合物的分离。 化合物的分离。
组分极性越小， 组分极性越小，保留 时间越长；适用非极 时间越长； 性化合物的分离。 性化合物的分离。
第二节 主要分离类型 ）、化学键合固定相色谱 （二）、化学键合固定相色谱 将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶 担体）表面的游离羟基上。 （担体）表面的游离羟基上。
特点
固定相非常稳定，在使用中不易流失。 固定相非常稳定，在使用中不易流失。由于 可将各种极性的官能团键合到载体表面， 可将各种极性的官能团键合到载体表面，因此它 适用于种类繁多样品的分离。 适用于种类繁多样品的分离。
吸附平衡常数K不等于分配系数。 吸附平衡常数 不等于分配系数。 不等于分配系数 K值越大，保留时间越长，分配系数大。 值越大，保留时间越长，分配系数大。 值越大 适用对象： 相对分子质量中等的油溶性试样， 适用对象 ： 相对分子质量中等的油溶性试样 ， 对 具有官能团的化合物和异构体有较高选择性。 具有官能团的化合物和异构体有较高选择性。
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第一节 高效液相色谱仪
四、 进样系统
六通阀进样 装置
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第一节 高效液相色谱仪
分离系统（色谱柱） 五、 分离系统（色谱柱）
内径： ～ 内径：1～6 mm，柱长：5～50 cm； ，柱长： ～ ； 柱填料粒径： 柱填料粒径：5 ～10µm 为保护色谱柱， 为保护色谱柱， 通常在柱前加一支填料与色谱柱相同的保护柱。 通常在柱前加一支填料与色谱柱相同的保护柱。
固定相：固体吸附剂，如硅胶、氧化铝等。 固定相 固体吸附剂，如硅胶、氧化铝等。 固体吸附剂 流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 流动相 各种不同极性的一元或多元溶剂。 各种不同极性的一元或多元溶剂 分离机理：流动相中的溶质分子(X)与溶剂分子 分离机理 ： 流动相中的溶质分子 与溶剂分子 (S)在固体吸附剂上竞争吸附的结果。 在固体吸附剂上竞争吸附的结果。 在固体吸附剂上竞争吸附的结果
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第二节 主要分离类型 流动相： 流动相 阳离子交换树脂固定相，采用酸性水溶液； 阳离子交换树脂固定相，采用酸性水溶液； 阴离子交换树脂固定相，采用碱性水溶液。 阴离子交换树脂固定相，采用碱性水溶液。
基本原理： 基本原理： 试样组分在固定相上发生的反复离子交换反 应 ， 依据组分与离子交换剂之间亲和力的不同而 分离。 分离。
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第二节 主要分离类型 1. 键合固定相制备 硅烷化反应
硅胶
十八烷基 氯硅烷
ODS(C18)键合相 键合相 非极性
使用pH范围： 使用 范围： 2-8 范围
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第二节 主要分离类型 2. 键合固定相类型
反相柱
类 型
正相柱
不同碳原子数的 烷烃（ 和 烷烃（C8和C18）、 ）、 苯基等疏水基团
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第一节 高效液相色谱仪
六、 液相色谱检测器
紫外检测器 示差折光检测器
类 型
荧光检测器 电化学检测器 电导检测器
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第一节 高效液相色谱仪 ）、紫外检测器 应用最广泛的检测器 （一）、紫外检测器—应用最广泛的检测器 基本原理： 基本原理：试样组分对特定波长的紫外光具有选择 性的吸收， 性的吸收，吸光度与试样组分浓度之间的定量关系 符合郎伯-比耳定律。 符合郎伯-比耳定律。 优点： 优点：
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第二节 主要分离类型 阳离子交换： 阳离子交换：R—SO3H + M+ = R—SO3 M + H+ 阴离子交换： 阴离子交换：R—NR4OH + X- = R—NR4 X + OH一般形式： 一般形式： R—A + B = R—B + A
KBA
仪器分析
c(R − B )c( A) = c(R − A)c(B )
试样组分与交换基 团间的作用力的大小决 定色谱的保留行为。 定色谱的保留行为。
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第二节 主要分离类型
阳离子交换： 阳离子交换：R—SO3H + M+ = R—SO3 M + H+ 阴离子交换： 阴离子交换：R—NR4OH + X- = R—NR4 X + OH组分与离子交换剂之间作用力的大小与离子半径、 组分与离子交换剂之间作用力的大小与离子半径、 离子半径 电荷、存在形式等有关。作用大，保留时间长。 电荷、存在形式等有关。作用大，保留时间长。 等有关 应用：离子及可离解的化合物， 应用：离子及可离解的化合物， 氨基酸、核酸、蛋白质等。 氨基酸、核酸、蛋白质等。
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第一节 高效液相色谱仪
三、 梯度淋洗装置
在液相色谱中,可以通过改变流动相的组成、 在液相色谱中,可以通过改变流动相的组成、 极性来改善分离和调节出峰时间。 极性来改善分离和调节出峰时间。
仪器分析
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第一节 高效液相色谱仪
高压梯度(外梯度 高压梯度 外梯度) 外梯度
第四章 高效液相色谱分析法 第一节 高效液相色谱仪 第二节 主要分离类型 第三节 液相色谱的固定相与流动相 第四节 影响分离的因素与分离类型的选择
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第一节 高效液相色谱仪
一、 高效液相色谱仪结构流程
二、 高压输液系统 三、 梯度淋洗装置 四、 进样系统 五、 分离系统 六、 液相色谱检测器
氨丙基 氰乙基、 氰乙基、醚和醇等 极性基团
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第二节 主要分离类型 键合色谱柱、 例：以ODS键合色谱柱、甲醇-水为流动相分离 键合色谱柱 甲醇以下两种苯甲酸，试判断出峰次序。 以下两种苯甲酸，试判断出峰次序。
保留时间： 保留时间：
HO
COOH
COOH
<
OH OH
OH OH
两台高压输液泵， 两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定 比例送入混合器，混合后进入色谱柱。 比例送入混合器，混合后进入色谱柱。
低压梯度(内梯度) 低压梯度(内梯度)
一台高压泵, 通过比例调节阀, 一台高压泵, 通过比例调节阀,将两种或多种不同 极性的溶剂按一定的比例抽入混合器中混合。 极性的溶剂按一定的比例抽入混合器中混合。
敏感； 对流速和温度变化不 敏感； 可用于梯度洗脱。 可用于梯度洗脱。
缺点： 缺点：
无紫外-可见吸收组分不响应； 无紫外 可见吸收组分不响应； 可见吸收组分不响应 流动相选择受一定限制。 流动相选择受一定限制。
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第一节 高效液相色谱仪 ）、示差折光检测器 通用型检测器 （二）、示差折光检测器—通用型检测器 每种物质具有不同的折光指数。 每种物质具有不同的折光指数。 基本原理： 基本原理：连续检测参比池和样品池中流动相之间 的折光系数差值， 的折光系数差值，该值与试样池流动相中的组分浓 度成正比。 度成正比。 生命科学中各类糖类化合物，没有紫外吸收， 生命科学中各类糖类化合物，没有紫外吸收， 一般要用示差折光检测器。 一般要用示差折光检测器。
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第一节 高效液相色谱仪 通过改变流动相的组成来调整组分 梯度洗脱 的 k值，改变分离因子α值，以达到 值 改变分离因子α 最短时间内得到最佳分离的目的。 最短时间内得到最佳分离的目的。 梯度洗脱 的特点 改善分离, 加快分析速度； 改善分离 加快分析速度； 改善峰形, 减少拖尾; 改善峰形 减少拖尾 可能引起基线漂移。 可能引起基线漂移。 基线漂移
第三节 液相色谱的固定相与流动相
一、固定相 二、流动相
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第三节 液相色谱的固定相与流动相
一、固定相 分配色谱固定相 液-固吸附色谱固定相 固吸附色谱固定相 固定相 离子交换色谱固定相 空间排阻色谱固定相 手性固定相
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第三节 液相色谱的固定相与流动相 ）、分配色谱固定相 （一）、分配色谱固定相 全多孔型固定相
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第二节 主要分离类型
二、液-液分配与化学键合相色谱 液分配与化学键合相色谱
）、液 （一）、液-液分配色谱
与气相色 谱中气--液 谱中气 液 色谱比较？ 色谱比较？
固定相与流动相均为液体（互不相溶）。 固定相与流动相均为液体（互不相溶）。 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配。 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配。 K不仅与固定相的种 不仅与固定相的种 类有关， 类有关，也与流动相 的种类有关。 的种类有关。
多孔球体(氧化铝 、 硅藻土等) 多孔球体 氧化铝、 硅藻土等 氧化铝 +固定液 固定液 早期固定相 已不多见
分类
表面多孔型固定相
微珠担体(玻璃微球 固定液 微珠担体 玻璃微球) +固定液 玻璃微球
化学键合固定相
硅胶表面键合有机分子
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第三节 液相色谱的固定相与流动相 化学键合固定相 利用硅胶表面存在的硅羟基， 利用硅胶表面存在的硅羟基 ， 通过化学反应将 有机分子键合到硅胶表面。 有机分子键合到硅胶表面。 A. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C 硅氧碳键型： B. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C 硅氧硅碳键型： C. 硅碳键型： 硅碳键型： D. 硅氮键型： 硅氮键型：
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第二节 主要分离类型
一、液-固吸附色谱 固吸附色谱 二、液-液分配与化学键合相色谱 液分配与化学键合相色谱 三、离子交换色谱 四、离子对色谱 五、空间排阻色谱 六、亲和色谱
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第二节 主要分离类型
一、液-固吸附色谱 固吸附色谱
颗粒度较小， 颗粒度较小， 5-10µm
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第一节 高效液相色谱仪
缺点： 缺点：
灵敏度低； 灵敏度低； 对温度敏感； 对温度敏感； 不能用于梯度洗脱。 不能用于梯度洗脱。
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第一节 高效液相色谱仪 ）、荧光检测器 专用型检测器 （三）、荧光检测器—专用型检测器 基本原理：在一定的条件下， 基本原理：在一定的条件下，荧光强度与流动 相中的组分的浓度成之比。 相中的组分的浓度成之比。
对多环芳烃 维生素B、黄曲霉素、 对多环芳烃，维生素 、黄曲霉素、卟啉类化合 农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应。 物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应。
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第一节 高效液相色谱仪
特点： 特点：
高灵敏度； 高灵敏度； 高选择性； 高选择性； 可用于梯度洗脱。 可用于梯度洗脱。
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第一节 高效液相色谱仪
一、 高效液相色谱仪结构流程
进样器 高压泵 色谱柱 检测器 储液瓶 废液 高压输液泵、高效分离住、 高压输液泵、高效分离住、高灵敏度检测器
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第一节 高效液相色谱仪
二、 高压输液系统（高压泵） 高压输液系统（高压泵）
要求： 要求： 输出压力高； 输出压力高； 平稳、脉冲小； 平稳、脉冲小； 流量稳定可调； 流量稳定可调； 耐腐蚀。 耐腐蚀。 机械往复柱塞泵结构图
没食子酸
3,4-二羟基苯甲酸 二羟基苯甲酸
固定相: 非极性; 流动相: 极性 固定相 非极性 流动相 组分极性: 二羟基苯甲酸<没食子酸 组分极性 3,4-二羟基苯甲酸 没食子酸 二羟基苯甲酸
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第二节 主要分离类型
三、离子交换色谱
固定相：阴离子交换树脂或阳离子交换树脂。 固定相：阴离子交换树脂或阳离子交换树脂。 键合基团 担 体 苯乙烯-二 苯乙烯 二 乙烯苯共 聚物微球 键合 阳离子： 阳离子： －SO3H(强) 强 －CO2H(弱) 弱 阴离子： 阴离子： －N+R3(强) 强 －NH2 (弱) 弱
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第二节 主要分离类型
X M + nS S = X S + nS M
c( X s )[c(S M )] K= n c( X M )[c(S s )]
n
下标M、 分别代表流动相和固定相 分别代表流动相和固定相， 代表被吸附的 下标 、 s分别代表流动相和固定相 ， n代表被吸附的 溶剂分子数；K代表吸附平衡常数。 代表吸附平衡常数。 溶剂分子数； 代表吸附平衡常数
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改变流动相的组成来 改善分离效果。 改善分离效果。
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第二节 主要分离类型 固定相极性>流动相极性 固定相极性 流动相极性 正相分配色谱 （正相柱） 正相柱） 固定相极性<流动相极性 固定相极性 流动相极性 反相分配色谱 反相柱） （反相柱）
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组分极性越大， 组分极性越大，保留 时间越长； 时间越长；使用极性 化合物的分离。 化合物的分离。
组分极性越小， 组分极性越小，保留 时间越长；适用非极 时间越长； 性化合物的分离。 性化合物的分离。
第二节 主要分离类型 ）、化学键合固定相色谱 （二）、化学键合固定相色谱 将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶 担体）表面的游离羟基上。 （担体）表面的游离羟基上。
特点
固定相非常稳定，在使用中不易流失。 固定相非常稳定，在使用中不易流失。由于 可将各种极性的官能团键合到载体表面， 可将各种极性的官能团键合到载体表面，因此它 适用于种类繁多样品的分离。 适用于种类繁多样品的分离。
吸附平衡常数K不等于分配系数。 吸附平衡常数 不等于分配系数。 不等于分配系数 K值越大，保留时间越长，分配系数大。 值越大，保留时间越长，分配系数大。 值越大 适用对象： 相对分子质量中等的油溶性试样， 适用对象 ： 相对分子质量中等的油溶性试样 ， 对 具有官能团的化合物和异构体有较高选择性。 具有官能团的化合物和异构体有较高选择性。
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四、 进样系统
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分离系统（色谱柱） 五、 分离系统（色谱柱）
内径： ～ 内径：1～6 mm，柱长：5～50 cm； ，柱长： ～ ； 柱填料粒径： 柱填料粒径：5 ～10µm 为保护色谱柱， 为保护色谱柱， 通常在柱前加一支填料与色谱柱相同的保护柱。 通常在柱前加一支填料与色谱柱相同的保护柱。
固定相：固体吸附剂，如硅胶、氧化铝等。 固定相 固体吸附剂，如硅胶、氧化铝等。 固体吸附剂 流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 流动相 各种不同极性的一元或多元溶剂。 各种不同极性的一元或多元溶剂 分离机理：流动相中的溶质分子(X)与溶剂分子 分离机理 ： 流动相中的溶质分子 与溶剂分子 (S)在固体吸附剂上竞争吸附的结果。 在固体吸附剂上竞争吸附的结果。 在固体吸附剂上竞争吸附的结果
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第二节 主要分离类型 流动相： 流动相 阳离子交换树脂固定相，采用酸性水溶液； 阳离子交换树脂固定相，采用酸性水溶液； 阴离子交换树脂固定相，采用碱性水溶液。 阴离子交换树脂固定相，采用碱性水溶液。
基本原理： 基本原理： 试样组分在固定相上发生的反复离子交换反 应 ， 依据组分与离子交换剂之间亲和力的不同而 分离。 分离。
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第二节 主要分离类型 1. 键合固定相制备 硅烷化反应
硅胶
十八烷基 氯硅烷
ODS(C18)键合相 键合相 非极性
使用pH范围： 使用 范围： 2-8 范围
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第二节 主要分离类型 2. 键合固定相类型
反相柱
类 型
正相柱
不同碳原子数的 烷烃（ 和 烷烃（C8和C18）、 ）、 苯基等疏水基团
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六、 液相色谱检测器
紫外检测器 示差折光检测器
类 型
荧光检测器 电化学检测器 电导检测器
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第一节 高效液相色谱仪 ）、紫外检测器 应用最广泛的检测器 （一）、紫外检测器—应用最广泛的检测器 基本原理： 基本原理：试样组分对特定波长的紫外光具有选择 性的吸收， 性的吸收，吸光度与试样组分浓度之间的定量关系 符合郎伯-比耳定律。 符合郎伯-比耳定律。 优点： 优点：
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第二节 主要分离类型 阳离子交换： 阳离子交换：R—SO3H + M+ = R—SO3 M + H+ 阴离子交换： 阴离子交换：R—NR4OH + X- = R—NR4 X + OH一般形式： 一般形式： R—A + B = R—B + A
KBA
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c(R − B )c( A) = c(R − A)c(B )
试样组分与交换基 团间的作用力的大小决 定色谱的保留行为。 定色谱的保留行为。
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第二节 主要分离类型
阳离子交换： 阳离子交换：R—SO3H + M+ = R—SO3 M + H+ 阴离子交换： 阴离子交换：R—NR4OH + X- = R—NR4 X + OH组分与离子交换剂之间作用力的大小与离子半径、 组分与离子交换剂之间作用力的大小与离子半径、 离子半径 电荷、存在形式等有关。作用大，保留时间长。 电荷、存在形式等有关。作用大，保留时间长。 等有关 应用：离子及可离解的化合物， 应用：离子及可离解的化合物， 氨基酸、核酸、蛋白质等。 氨基酸、核酸、蛋白质等。
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第一节 高效液相色谱仪
三、 梯度淋洗装置
在液相色谱中,可以通过改变流动相的组成、 在液相色谱中,可以通过改变流动相的组成、 极性来改善分离和调节出峰时间。 极性来改善分离和调节出峰时间。
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第一节 高效液相色谱仪
高压梯度(外梯度 高压梯度 外梯度) 外梯度
第四章 高效液相色谱分析法 第一节 高效液相色谱仪 第二节 主要分离类型 第三节 液相色谱的固定相与流动相 第四节 影响分离的因素与分离类型的选择
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第一节 高效液相色谱仪
一、 高效液相色谱仪结构流程
二、 高压输液系统 三、 梯度淋洗装置 四、 进样系统 五、 分离系统 六、 液相色谱检测器
氨丙基 氰乙基、 氰乙基、醚和醇等 极性基团
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第二节 主要分离类型 键合色谱柱、 例：以ODS键合色谱柱、甲醇-水为流动相分离 键合色谱柱 甲醇以下两种苯甲酸，试判断出峰次序。 以下两种苯甲酸，试判断出峰次序。
保留时间： 保留时间：
HO
COOH
COOH
<
OH OH
OH OH
两台高压输液泵， 两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定 比例送入混合器，混合后进入色谱柱。 比例送入混合器，混合后进入色谱柱。
低压梯度(内梯度) 低压梯度(内梯度)
一台高压泵, 通过比例调节阀, 一台高压泵, 通过比例调节阀,将两种或多种不同 极性的溶剂按一定的比例抽入混合器中混合。 极性的溶剂按一定的比例抽入混合器中混合。
敏感； 对流速和温度变化不 敏感； 可用于梯度洗脱。 可用于梯度洗脱。
缺点： 缺点：
无紫外-可见吸收组分不响应； 无紫外 可见吸收组分不响应； 可见吸收组分不响应 流动相选择受一定限制。 流动相选择受一定限制。
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第一节 高效液相色谱仪 ）、示差折光检测器 通用型检测器 （二）、示差折光检测器—通用型检测器 每种物质具有不同的折光指数。 每种物质具有不同的折光指数。 基本原理： 基本原理：连续检测参比池和样品池中流动相之间 的折光系数差值， 的折光系数差值，该值与试样池流动相中的组分浓 度成正比。 度成正比。 生命科学中各类糖类化合物，没有紫外吸收， 生命科学中各类糖类化合物，没有紫外吸收， 一般要用示差折光检测器。 一般要用示差折光检测器。
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第一节 高效液相色谱仪 通过改变流动相的组成来调整组分 梯度洗脱 的 k值，改变分离因子α值，以达到 值 改变分离因子α 最短时间内得到最佳分离的目的。 最短时间内得到最佳分离的目的。 梯度洗脱 的特点 改善分离, 加快分析速度； 改善分离 加快分析速度； 改善峰形, 减少拖尾; 改善峰形 减少拖尾 可能引起基线漂移。 可能引起基线漂移。 基线漂移