呼吸道病原体谱抗体检测
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呼吸道病原体IgM抗体检测
张惠杰
主要内容：
一、常见呼吸道病原体概述 二、实验室检测 三、抗体荧光模型的结果判读 四、结果解释
一、常见呼吸道病原体概述
1..呼吸道合胞病毒：主要侵犯上呼吸道的上皮组织，引起坏死性炎症，这可导致严重的支气管炎和肺炎，尤其在母乳喂养婴儿和低龄儿童中。传染性強， 感染率高(大约90％的成人感染过)。抗呼吸道合胞病毒特异性lgM抗体最早可在发病1周左右出现，可持续存在2－3个月。
（1）抗肺炎Fra Baidu bibliotek原体抗体
荧光模型：结果阳性时，整个生物薄片上的肺炎支原体 形成网络样荧光。对于阳性标本，肺炎支原体呈现均一 的荧光。由于肺炎支原体顶部聚集了许多具有免疫原性 的蛋白，因而顶部比其余部分的荧光更强。如果反应区 上只出现单一的荧光，或者肺炎支原体只有较弱的荧光， 结果应判为阴性。
（2）抗嗜肺军团菌抗体
• 5、冲洗：同第3步。
• 6、封片：滴加10μl封片基质至盖玻片反应区。将载片从PBS 吐温缓冲液中取出擦干水分，朝下盖在盖玻片上并调整盖玻片 位置，使其嵌入载片的凹槽中。
三、抗体荧光模型的结果判读
1.基质（菌体涂片）：
生物薄片上菌体都出现清晰可见的荧光才能判为阳性，尽量多观 察几个视野，如果只是部分菌体出现荧光，不应判为阳性。
• 2、加样、温育：在反应板的反应区上加离心后的上清标本30 微升(避免产生气泡)。将载片覆有生物薄片的一面朝下，盖在 加样板的凹槽里。室温温育30min。
• 3、冲洗：用配好的PBS吐温缓冲液流水冲洗载片，然后立即 浸入装有PBS吐温缓冲液的洗杯中浸泡8min。
• 4、加样、温育：在反应板的反应区上加25μl的FlTC标记的荧 光二抗)，将载片从PBS吐温缓冲液中取出（用吸水纸擦干边缘 和背面水分），盖板室温温育30min。
• 1.检测方法：间接免疫荧光法。
• 2. 实验原理：稀释的患者血清与包被有检测基质的载片温育。如果样本阳性，特异性IgM抗 体与相应抗原结合。在第二步温育时，结合的抗体与荧光素(FlTC)标记的抗人免疫球蛋白 抗体反应。然后在荧光显微镜下观察特异性的荧光模型。
3.实验工具 盖玻片
反应板
载片
标本稀 释液
谢谢聆听！
FITC标 记的荧 光二抗
PBS吐温 缓冲液
封片介质 （PBS甘
油）
4.实验步骤
• 1、标本前处理：用免疫吸附（标本稀释液）等方法去除患者 样本中的IgG类抗体。（这不仅可以防止样本中的IgM类类风湿 因子与特异性结合的IgG反应引起假阳性结果，还可以防止特 异性的IgG类抗体与IgM类抗体竞争性结合引起假IgM阴性结果。 用样本稀释液，同时还可以去除类风湿因子）。推荐的样本起 始稀释度为1:10 （嗜肺和肺炎支原体1:100）。（16.6μl血清 +150μl标本稀释液，2000rpm离心6min）
荧光模型：感染细胞胞浆内的包涵体产生荧光（串珠样或葡 萄样）。未感染细胞无特异性荧光。
（包涵体：是病毒在增殖的过程中，使寄主细胞内形成一种 蛋白质性质的结构。）
（2）抗腺病毒抗体 荧光模型：感染细胞浆中包涵体出现细颗粒状荧光， 或细胞核中出现细到粗的颗粒状荧光。
三、抗体荧光模型的结果判读
（3）抗呼吸道合胞病毒抗体
4.副流感病毒：分布于世界各地，约35％的儿童和婴幼儿急性呼吸道感染是由副流感病毒所引起的。感染后可引起上呼吸道感染，经常伴有发热。副流感 病毒感染可呈地方性流行，特别是在晚秋至第二年春天之间。主要通过气溶胶传播。抗副流感病毒特异的lgM抗体最早可在发病1周左右出现，可持续存在2 －3个月。
5.肺炎衣原体：主要通过气溶胶传播。约一半的肺炎衣原体感染无临床症状。感染最常见的临床症状为轨轻微的呼吸道感染。典型的症状为持续性干咳， 也可出现咽痛、头疼和发热。初次感染2－3周后出现lgM抗体，并可持续存在2－6个月。在出现IgM抗体后的3－5周患者体内的IgG抗体水平明显升高，这 意味着抗肺炎衣原体抗体检出时间要迟于许多其他感染。
荧光模型：在感染细胞的细胞核和细胞浆中产生特异性 荧光。从病毒抗原散发出的荧光，根据感染的程度不同， 在一些细胞中仅出现比较少的颗粒状和纤维状荧光。在 感染严重的细胞中，出现大的滴状和网状荧光。
（4）抗流感病毒（A型、B型）抗体 荧光模型：与感染细胞反应，在胞浆中产生平滑的荧光， 细胞核仅出现微弱的荧光。
6. 肺炎支原体:可引起非典型性肺炎和常见的上呼吸道感染。主要通过气溶胶引起。
7.嗜肺军团菌：是一种胞内兼性短杆菌。可攻击肥大细胞并在其内繁殖。免疫力低下或心肺功能障碍患者特别易感。主要通过气溶胶传播，公共场所及医 院中的冷热水系统、冷却塔和空调设备中的加湿器以及漩涡浴室均可成为传染源。
二、实验室检测
2.腺病毒：可引起多种临床疾病，世界上6％的呼吸道感染是由腺病毒所引起的。主要通过气溶胶或物在人与人之间传播。在感染后的最初几天中，排泄物 中的病毒含量最高。抗腺病毒特异IgM抗体最早出现在发病后1周左右，可持续存在2－3个月。
3.流感病毒：是最常见的感染性疾病之一，其典型的临床表现为咽炎、发热、重度不适和普通的急性呼吸道感染症状。在幼儿中还可出现胃痛和呕吐等胃 肠道症状。流感主要在寒冷的季节流行，潜伏期为1－5天。流感病毒属于正粘病毒，分成A、B和C三型。由于流感病毒的基因变异能力很强，因而一次流 感病毒感染不会产生终生免疫。对于高危人群(免疫力比较弱的人群或老人)，可在流感流行季节开始时用相关的病毒株进行免疫，但这也只对所使用的亚型 具有保护作用。抗流感特异的IgM抗体最早可在发病1周左右出现，可持续存在2－3个月。
荧光模型：生物薄片上菌体都应该出现清晰可见的荧光 或者菌体边缘荧光更强。（短小的杆状菌体，发出均匀 的荧光）
三、抗体荧光模型的结果判读
2.基质（感染细胞）：
视野中的部分细胞为非感染细胞，不会出现特异性荧光。如果所有细 胞的细胞核或细胞浆出现荧光，表明存在抗核抗体或抗线粒体抗体或 其他抗体。
（1）抗肺炎衣原体抗体
三、抗体荧光模型的结果判读
（5）抗副流感病毒抗体
荧光模型：与感染细胞反应，在胞浆中产生细到粗的
颗粒状荧光，细胞核仅出现微弱的荧光。
质控芯片：
确认是否使用了正确的二抗；确认标本和结合物温育 过程是否正确；容易找到显微镜对焦平面。不能用于 判断所包被的抗原是否失效。
四、结果解释
需注意： 1.检验结果必须结合患者的临床背景和血清学结果进行临床诊断。 2.感染初期，病原体特异性IgM抗体未产生或滴度很低会导致阴性结果，如仍怀疑有病原体感染， 应提示患者在7-14天内重新抽血复查。 3.二次感染和复发感染时也可能检测到特异性IgM抗体因而结果解释需结合临床症状。 4.免疫功能受损或接受免疫抑制治疗的患者，其血清学IgM抗体检测的参考价值有限。 5.近几个月内接受过输血或其他血液制品治疗的人群，对其阳性检测结果的分析应慎重。。 6.检测流感病毒时，若包被毒株和患者感染毒株之间的差异太大，可能存在漏检。 7.接种流感疫苗也可产生IgM抗体，结果解释应考虑疫苗接种史。
张惠杰
主要内容：
一、常见呼吸道病原体概述 二、实验室检测 三、抗体荧光模型的结果判读 四、结果解释
一、常见呼吸道病原体概述
1..呼吸道合胞病毒：主要侵犯上呼吸道的上皮组织，引起坏死性炎症，这可导致严重的支气管炎和肺炎，尤其在母乳喂养婴儿和低龄儿童中。传染性強， 感染率高(大约90％的成人感染过)。抗呼吸道合胞病毒特异性lgM抗体最早可在发病1周左右出现，可持续存在2－3个月。
（1）抗肺炎Fra Baidu bibliotek原体抗体
荧光模型：结果阳性时，整个生物薄片上的肺炎支原体 形成网络样荧光。对于阳性标本，肺炎支原体呈现均一 的荧光。由于肺炎支原体顶部聚集了许多具有免疫原性 的蛋白，因而顶部比其余部分的荧光更强。如果反应区 上只出现单一的荧光，或者肺炎支原体只有较弱的荧光， 结果应判为阴性。
（2）抗嗜肺军团菌抗体
• 5、冲洗：同第3步。
• 6、封片：滴加10μl封片基质至盖玻片反应区。将载片从PBS 吐温缓冲液中取出擦干水分，朝下盖在盖玻片上并调整盖玻片 位置，使其嵌入载片的凹槽中。
三、抗体荧光模型的结果判读
1.基质（菌体涂片）：
生物薄片上菌体都出现清晰可见的荧光才能判为阳性，尽量多观 察几个视野，如果只是部分菌体出现荧光，不应判为阳性。
• 2、加样、温育：在反应板的反应区上加离心后的上清标本30 微升(避免产生气泡)。将载片覆有生物薄片的一面朝下，盖在 加样板的凹槽里。室温温育30min。
• 3、冲洗：用配好的PBS吐温缓冲液流水冲洗载片，然后立即 浸入装有PBS吐温缓冲液的洗杯中浸泡8min。
• 4、加样、温育：在反应板的反应区上加25μl的FlTC标记的荧 光二抗)，将载片从PBS吐温缓冲液中取出（用吸水纸擦干边缘 和背面水分），盖板室温温育30min。
• 1.检测方法：间接免疫荧光法。
• 2. 实验原理：稀释的患者血清与包被有检测基质的载片温育。如果样本阳性，特异性IgM抗 体与相应抗原结合。在第二步温育时，结合的抗体与荧光素(FlTC)标记的抗人免疫球蛋白 抗体反应。然后在荧光显微镜下观察特异性的荧光模型。
3.实验工具 盖玻片
反应板
载片
标本稀 释液
谢谢聆听！
FITC标 记的荧 光二抗
PBS吐温 缓冲液
封片介质 （PBS甘
油）
4.实验步骤
• 1、标本前处理：用免疫吸附（标本稀释液）等方法去除患者 样本中的IgG类抗体。（这不仅可以防止样本中的IgM类类风湿 因子与特异性结合的IgG反应引起假阳性结果，还可以防止特 异性的IgG类抗体与IgM类抗体竞争性结合引起假IgM阴性结果。 用样本稀释液，同时还可以去除类风湿因子）。推荐的样本起 始稀释度为1:10 （嗜肺和肺炎支原体1:100）。（16.6μl血清 +150μl标本稀释液，2000rpm离心6min）
荧光模型：感染细胞胞浆内的包涵体产生荧光（串珠样或葡 萄样）。未感染细胞无特异性荧光。
（包涵体：是病毒在增殖的过程中，使寄主细胞内形成一种 蛋白质性质的结构。）
（2）抗腺病毒抗体 荧光模型：感染细胞浆中包涵体出现细颗粒状荧光， 或细胞核中出现细到粗的颗粒状荧光。
三、抗体荧光模型的结果判读
（3）抗呼吸道合胞病毒抗体
4.副流感病毒：分布于世界各地，约35％的儿童和婴幼儿急性呼吸道感染是由副流感病毒所引起的。感染后可引起上呼吸道感染，经常伴有发热。副流感 病毒感染可呈地方性流行，特别是在晚秋至第二年春天之间。主要通过气溶胶传播。抗副流感病毒特异的lgM抗体最早可在发病1周左右出现，可持续存在2 －3个月。
5.肺炎衣原体：主要通过气溶胶传播。约一半的肺炎衣原体感染无临床症状。感染最常见的临床症状为轨轻微的呼吸道感染。典型的症状为持续性干咳， 也可出现咽痛、头疼和发热。初次感染2－3周后出现lgM抗体，并可持续存在2－6个月。在出现IgM抗体后的3－5周患者体内的IgG抗体水平明显升高，这 意味着抗肺炎衣原体抗体检出时间要迟于许多其他感染。
荧光模型：在感染细胞的细胞核和细胞浆中产生特异性 荧光。从病毒抗原散发出的荧光，根据感染的程度不同， 在一些细胞中仅出现比较少的颗粒状和纤维状荧光。在 感染严重的细胞中，出现大的滴状和网状荧光。
（4）抗流感病毒（A型、B型）抗体 荧光模型：与感染细胞反应，在胞浆中产生平滑的荧光， 细胞核仅出现微弱的荧光。
6. 肺炎支原体:可引起非典型性肺炎和常见的上呼吸道感染。主要通过气溶胶引起。
7.嗜肺军团菌：是一种胞内兼性短杆菌。可攻击肥大细胞并在其内繁殖。免疫力低下或心肺功能障碍患者特别易感。主要通过气溶胶传播，公共场所及医 院中的冷热水系统、冷却塔和空调设备中的加湿器以及漩涡浴室均可成为传染源。
二、实验室检测
2.腺病毒：可引起多种临床疾病，世界上6％的呼吸道感染是由腺病毒所引起的。主要通过气溶胶或物在人与人之间传播。在感染后的最初几天中，排泄物 中的病毒含量最高。抗腺病毒特异IgM抗体最早出现在发病后1周左右，可持续存在2－3个月。
3.流感病毒：是最常见的感染性疾病之一，其典型的临床表现为咽炎、发热、重度不适和普通的急性呼吸道感染症状。在幼儿中还可出现胃痛和呕吐等胃 肠道症状。流感主要在寒冷的季节流行，潜伏期为1－5天。流感病毒属于正粘病毒，分成A、B和C三型。由于流感病毒的基因变异能力很强，因而一次流 感病毒感染不会产生终生免疫。对于高危人群(免疫力比较弱的人群或老人)，可在流感流行季节开始时用相关的病毒株进行免疫，但这也只对所使用的亚型 具有保护作用。抗流感特异的IgM抗体最早可在发病1周左右出现，可持续存在2－3个月。
荧光模型：生物薄片上菌体都应该出现清晰可见的荧光 或者菌体边缘荧光更强。（短小的杆状菌体，发出均匀 的荧光）
三、抗体荧光模型的结果判读
2.基质（感染细胞）：
视野中的部分细胞为非感染细胞，不会出现特异性荧光。如果所有细 胞的细胞核或细胞浆出现荧光，表明存在抗核抗体或抗线粒体抗体或 其他抗体。
（1）抗肺炎衣原体抗体
三、抗体荧光模型的结果判读
（5）抗副流感病毒抗体
荧光模型：与感染细胞反应，在胞浆中产生细到粗的
颗粒状荧光，细胞核仅出现微弱的荧光。
质控芯片：
确认是否使用了正确的二抗；确认标本和结合物温育 过程是否正确；容易找到显微镜对焦平面。不能用于 判断所包被的抗原是否失效。
四、结果解释
需注意： 1.检验结果必须结合患者的临床背景和血清学结果进行临床诊断。 2.感染初期，病原体特异性IgM抗体未产生或滴度很低会导致阴性结果，如仍怀疑有病原体感染， 应提示患者在7-14天内重新抽血复查。 3.二次感染和复发感染时也可能检测到特异性IgM抗体因而结果解释需结合临床症状。 4.免疫功能受损或接受免疫抑制治疗的患者，其血清学IgM抗体检测的参考价值有限。 5.近几个月内接受过输血或其他血液制品治疗的人群，对其阳性检测结果的分析应慎重。。 6.检测流感病毒时，若包被毒株和患者感染毒株之间的差异太大，可能存在漏检。 7.接种流感疫苗也可产生IgM抗体，结果解释应考虑疫苗接种史。