低分子量蛋白质Marker(14.4kD-97.4kD)使用说明
白灵菇蛋白质的理化及功能特性
白灵菇蛋白质的理化及功能特性薛媛;杨沫;魏君慧;陈怡萌;徐怀德【摘要】为充分开发利用白灵菇蛋白质(Pleurotus nebrodensis proteins,FPs),以残次级白灵菇为原料,采用碱浸提分段盐析法依次制备60％、80％、90％盐饱和度析出蛋白质(F60、F80、F90),统称为分段盐析蛋白质组分(FPs),测定FPs的析出率、理化性及FPs中F60的功能特性.结果表明:F60的析出率最高,达65.62％.FPs 间的二硫键含量无显著性差异(p ＞0.05);FPs的蛋白质条带中共同含有分子量约为31 kDa的蛋白质条带,蛋白质条带间存在差异.F60较F80、F90富含分子量为14.4 kDa的蛋白质条带,具有较高的表面疏水性与荧光发射光谱峰值,β-折叠结构出现频率更高.F60具有优良的溶解性、起泡性、易消化水解,具有潜在的应用价值.白灵菇蛋白质是一种优质的新型蛋白质资源.【期刊名称】《食品工业科技》【年(卷),期】2018(039)016【总页数】5页(P37-41)【关键词】白灵菇;蛋白质提取;盐析;理化性质;功能性【作者】薛媛;杨沫;魏君慧;陈怡萌;徐怀德【作者单位】西北农林科技大学食品科学与工程学院,陕西咸阳712100;西北农林科技大学食品科学与工程学院,陕西咸阳712100;西北农林科技大学食品科学与工程学院,陕西咸阳712100;西北农林科技大学食品科学与工程学院,陕西咸阳712100;西北农林科技大学食品科学与工程学院,陕西咸阳712100【正文语种】中文【中图分类】TS209白灵菇(Pleurotus nebrodensis)在我国广泛种植,年产量超过18万吨,人工栽培产地遍及南北诸省,其中以豫、津、冀省区生产规模较大[1]。
白灵菇子实体肥大洁白,脆嫩可口,香味浓郁,营养丰富[2]。
其中,蛋白质含量占干菇的27.14%,氨基酸含量约167.2 g/kg,其中必需氨基酸占氨基酸总量的40.07%[3]。
低分子量蛋白质 Marker II
的胶。胶浓度为 8-10% 时蛋白 Marker 中低分子量的蛋白易于同染料前沿跑在一条线上不易区 分，在 12-15%的胶上及梯度电泳中，所有的条带都能锐利清晰分开。
推荐上样量：
上样量 5µl 10µl 20µl
胶厚度大小
0.75mm thick mini
1.5mm thick mini 0.75mm thick large 1.5mm thick large
操作步骤：
1. 室温溶解或37- 40°C加热几分钟溶解，轻摇以确保溶液混合均匀。 2. 为避免污染最好分装保存以备使用，取所需体积的Marker置于一干净离心管中并封好口。 3. 沸水中煮5分钟。使蛋白完全变性。冷却并混合均匀以备上样进行SDS-PAGE电泳。 4. 上样并进行 SDS-PAGE电泳。 5. 该Marker适用于考马斯亮蓝, 银染或其他蛋白染色方法。
低分子量蛋白质 Maቤተ መጻሕፍቲ ባይዱker II
地 址：北京市海淀区彰化南路 18 号院 6-3-2 电 话：010 – 51286531/68232041/68232051/68235911（Fax） 市场部：info@ 合成部：oligo@ 测序部：seq@
制品说明：本产品是由 7 种蛋白质分别纯化后混合而成的蛋白质溶液，分子量范围为 14KD－116KD，经 SDS
－聚丙烯酰胺凝胶电泳后，用考马斯亮蓝 R－250（Coomassie Blue R-250）染色后可得清晰的 7 条蛋白带。建议使用分离浓度为 12%～15%。
适用胶浓度：最优适用于 12% (37.5:1 丙烯酰胺:双丙烯酰胺)的聚丙烯酰胺凝胶。该 Marker 也可用于 8-15%
包 装 量：
PH0302-超低分子量蛋白Marker II (3.4-100kD)使用手册
PH0302|超低分子量蛋白Marker II(3.4-100kD)Ultra Low Molecular Weight Protein Marker货号：PH0302规格：☐10T（50ul）保存：Store@-20℃◆产品简介本产品包含5种多肽和3种低分子量蛋白质组成，分子量范围为3.4kD-100kD。
可以用来判断SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。
◆使用说明第一次收到该产品，室温融化后，彻底混匀，离心快甩将溶液完全收集到管底，根据需要适量分装成小管，-20℃贮存，每次取一小管使用；本产品为即用型，融化后既能使用，不能95℃加热处理。
一.制胶：I配制分离胶1．按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA（19:1）、凝胶缓冲液和乙二醇加入到小烧杯中混合。
2．加入10%APS和TEMED，立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
3．在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3cm的水层，使凝胶表面保持平整。
4．静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
表一（一块0.75mm mini胶用量）分离胶浓缩胶18％T,5%C/6.0ml5％T,3.3%C/2ml 40%PAA（19:1） 2.7ml/40%PAA(29:1)/0.25ml4×凝胶缓冲液 1.5ml0.5ml乙二醇（电泳级） 1.8ml/ddH2O/ 1.25ml10％APS50-65μl20μlTEMED6μl2μl注：如非必须，不要使用1.0mm和1.5mm的凝胶，尽量使用厚度0.75mm的凝胶，这样会减少电泳后染色和脱色的时间。
II配制浓缩胶去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。
1．按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA（29:1）和凝胶缓冲液加入到小烧杯中混合。
2．加入10%过硫酸铵和TEMED，立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
3．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
蛋白Marker说明书
蛋⽩Marker说明书PageRuler Prestained Protein LadderSM0671A prestained SDS-PAGE MW marker with contrasting colored reference bands at10 and 70kDa.The Thermo Scientific PageRuler Prestained Proteis a mixture of ten (10) blue-, orange- and green-srecombinant proteins (10 to 170kDa) for use as sizstandards in protein electrophoresis (SDS-PAGE)Western blotting.This prestained protein MW marker is designed fomonitoring the progress of SDS-polyacrylamide geelectrophoresis, for assessing transfer efficiency onylon and nitrocellulose membranes, and for estimapproximate size of separated proteins that have b visible with gel stains or Western blot detection reagents. The ladder contains one orange refer at 70kDa and one green band at 10kDa.Highlights:Size range– 10 proteins spanning 10 to 170kDaReady-to-use– supplied in a loading buffer for direct loading on gels; no need to boil Sharp bands– color-coded bands of similar intensity for easy visualizationQuality tested – each lot evaluated by SDS-PAGE and Western blottingTwo reference bands– orange at 70kDa and green at 10kDaMembrane-compatible– colored bands transfer to membranes for Western blotting Includes:Dye-stained proteins in 62.5mM Tris-H3PO4 (pH 7.5 at 25°C), 1mM EDTA, 2% SDS, 1 1mM NaN3 and 33% glycerol. Applications:Monitoring protein migration during SDS-polyacrylamide gel electrophoresisMonitoring protein transfer onto membranes after Western blottingSm1841The Thermo Scientific Spectra Multicolor Broad RangeProtein Ladder is a 4-color protein standard containing 10prestained recombinant prokaryotic proteins (10 to 260kDa)for use as size standards in gel electrophoresis and Westernblotting.This prestained protein MW marker is designed formonitoring the progress of SDS-polyacrylamide gelelectrophoresis, for assessing transfer efficiency onto PVDF,nylon and nitrocellulose membranes, and for estimating theapproximate size of separated proteins that have been made visible with gel stains or Western blot detection reagents. Four different chromophores (blue, orange, green, pink) are bound to the different component proteins, producing a brightly colored ladder with an easy-to-remember pattern.Highlights:Size range– 10 proteins spanning 10 to 260kDaMulticolor– four different colors for unambiguous band-size assignmentReady-to-use– supplied in a loading buffer for direct loading on gels; no need to boilSharp bands– color-coded bands of similar intensity for easy visualizationQuality tested – each lot evaluated by SDS-PAGE and Western blottingMembrane-compatible– colored bands transfer to membranes for Western blotting Includes:Dye-stained proteins in 62.5mM Tris-H3PO4 (pH 7.5 at 25°C), 1mM EDTA, 2% SDS, 10mM DTT, 1mM NaN3 and 33% glycerol.Applications:Monitoring protein migration during SDS-polyacrylamide gel electrophoresisMonitoring protein transfer onto membranes after Western blottingSizing of proteins on SDS-polyacrylamide gels and Western blotsProduct Details:Sm1811The Thermo Scientific PageRuler Plus Prestained ProteinLadder is a mixture of nine (9) blue-, orange- andgreen-stained recombinant proteins (10 to 250kDa) for useas size standards in protein electrophoresis (SDS-PAGE)and Western blotting.This prestained protein MW marker is designed formonitoring the progress of SDS-polyacrylamide gelelectrophoresis, for assessing transfer efficiency onto PVDF,nylon and nitrocellulose membranes, and for estimating theapproximate size of separated proteins that have been made visible with gel stains or Western blot detection reagents. A blue chromophore is bound to all proteins, except proteins of two reference bands of 70kDa and 25kDa that are colored with an orange dye and one green reference band of 10kDa. PageRuler Plus Prestained Protein Ladder is ready to use: no heating, further dilution or addition of a reducing agent is required before loading onto a gel.Highlights:Size range– nine proteins spanning 10 to 250kDaReady-to-use– supplied in a loading buffer for direct loading on gels; no need to boilSharp bands– color-coded bands of similar intesity for easy visualizationQuality tested – each lot evaluated by SDS-PAGE and Western blottingBright reference bands– orange at 70 and 25kDa, and green at 10kDaMembrane-compatible– colored bands transfer to membranes for Western blotting Includes:Dye-stained proteins in 62.5mM Tris-H3PO4 (pH 7.5 at 25°C), 1mM EDTA, 2% SDS, 10mM DTT, 1mM NaN3 and 33% glycerol.Applications:Monitoring protein migration during SDS-polyacrylamide gel electrophoresisMonitoring protein transfer onto membranes after Western blottingSizing of proteins on SDS-polyacrylamide gels and Western blotsProduct Details:。
超低分子量蛋白质Marker(3.3kD-20. 1kD)使用说明
超低分子量蛋白质Marker（3.3kD-20.1kD)使用说明货号：PR1300规格：15T(150µ1)保存：-20℃保存，有效期为一年。
产品简介::超低分子量蛋白质Marker（3.3kD-20.1kD)3种多肽和2种低分子量蛋白质组成，分子量范围为3.3kD-20.1kD。
可以用来判断SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。
本品为蛋白质和多肽混合物的冻干粉，每种蛋白含量约为15-22.5ug，配有一支1×上样缓冲液。
使用说明::1.开封后，溶于150µ11×上样缓冲液，于95℃水浴5分钟，可根据需要进行小量分装，每管10µl，-20℃贮存，每次取一管使用，避免反复冻融。
2.使用前取分装后的小管室温融化后，95℃预热5分钟即可上样电泳，用考马斯亮蓝G-250染色后可见5条蛋白带(见下示意图)。
凝胶的配置方法:分离胶夹层胶浓缩胶20%/4.5ml16.5%/4.5ml15.5%/4.5ml10%/2ml4%/2ml 49.5%T3%C///0.407ml0.160ml 49.5%T6%C 1.82ml 1.50ml 1.395ml//凝胶缓冲液 1.50ml 1.50ml 1.50ml0.667ml0.496ml 甘油0.48ml0.48ml0.48ml//ddHO0.70ml 1.02ml 1.125ml0.926ml 1.344ml210%APS40µl40µl40µl20µ|20µ| TEMED5µl5µl5µl3µl3µl凝胶制备及染色注意事项:1.先配制分离胶，聚合后再配制夹层胶，最后配制浓缩胶，3种胶的制胶体积比为4:1.5:1。
电泳时，30v跑1-2小时后，待指示前沿到达分离胶上沿时，把电压调至100v，至电泳结束，整个电泳过程大约需要6-8小时。
免疫印迹
免疫印迹免疫印迹又常称Western blot，是一综合性的免疫学检测技术。
它利用SDS-PAGE技术将生物样品中的蛋白质分子按分子量的大小在凝胶上分离开，然后用电转移的方法将蛋白转移到固相膜上（NC、尼龙或PVDF膜），最后进行免疫学检测。
由于免疫学检测敏感性高，并且通过SDS-PAGE样品中的待检蛋白得到了浓缩，因此，Western blot的灵敏度特别高，可达到放射免疫的分析水平。
而使用一般的免疫学检测技术（如ELISA、放射免疫沉淀）检测时，由于要求被检测蛋白可溶、要求抗体效价高、亲和力高和特异性强，往往并不容易达到目的。
而Western blot却没有这些缺点。
因此，Western blot广泛应用于生物样品中是否存在某一蛋白质（抗原）的检测。
也可用于粗略测定抗原蛋白的相对含量和抗原多肽链的相对分子量。
一、原理是SDS-PAGE电泳与免疫检测相结合的一种蛋白质检测方法。
强阴离子去污剂SDS与还原剂并用，通过加热使蛋白质解离，大量的SDS结合蛋白质，使其带相同密度的负电荷，在聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）时，不同蛋白质的迁移率仅取决于分子量。
然后将蛋白质转移到膜上，继而用抗体进行检测。
经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。
以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。
二、实验材料诱导与未诱导的带有口蹄疫病毒保护性抗原VP1与LTB融合蛋白基因的工程菌。
三、仪器、耗材与试剂（一）仪器、耗材DYY－6C电泳仪、DYCZ－24D垂直板电泳槽、封口机、DYCP－40C半干式转移电泳槽、5ml、1ml、200μl、50μl、10μl移液器及相应的Tip、50ml烧杯。
新华滤纸、PVDF 膜。
蛋白质电泳分子量标准(蛋白marker 14.4-97.4 kd)
蛋白质电泳分子量标准（蛋白marker 14.4-97.4 kd）【篇名】：探究蛋白质电泳分子量标准1. 引言在生物学研究中，蛋白质电泳是一种重要的实验方法，用于分离和分析蛋白质。
而蛋白质电泳分子量标准（蛋白marker）则是在蛋白质电泳实验中用来确定待测蛋白分子量的重要工具。
本文将探讨蛋白质电泳分子量标准的概念、应用以及其在生物学研究中的重要性。
2. 蛋白质电泳分子量标准的概念蛋白质电泳分子量标准是一系列已知分子量的蛋白质，它们被用作电泳实验中的参照物。
常见的蛋白marker包括14.4-97.4 kd等不同分子量的标准物质，通过蛋白电泳实验，可以通过蛋白marker的分离情况来确定待测蛋白的分子量。
3. 蛋白质电泳分子量标准的应用蛋白质电泳分子量标准可用于验证电泳实验的准确性，评估蛋白质分子的大小和形状，以及在分析未知蛋白质时提供参照标准。
通过与已知分子量的蛋白marker进行对比，未知蛋白的分子量可以被确定，从而为后续的生物学研究提供重要参考。
4. 蛋白质电泳分子量标准在生物学研究中的重要性在生物学研究中，蛋白质电泳分子量标准的应用极其重要。
它不仅可以帮助科研人员确定蛋白质标准品的分子量，还可以作为蛋白质分析实验的质量控制工具，确保实验结果的准确性和可靠性。
蛋白marker在蛋白质电泳实验中的使用，也有助于扩大科学家对蛋白质研究的视野，从而推动生物学领域的进步。
5. 个人观点作为生物学研究领域的从业人员，我深刻理解蛋白质电泳分子量标准的重要性。
对于生物学实验来讲，实验结果的准确性是至关重要的，而蛋白marker作为质量控制的一个重要环节，能够有效提高实验数据的可信度，也为科研人员提供更可靠的实验结果。
6. 总结蛋白质电泳分子量标准在生物学研究中具有重要作用。
通过对蛋白marker的使用，科研人员可以准确地确定蛋白质的分子量，从而为生物学研究提供可靠的数据和结果。
深入了解和掌握蛋白质电泳分子量标准的实验原理和应用方法，对于开展生物学研究具有重要的意义。
GE SDS marker kit说明书
LMW-SDS marker kit (17-0446-01)SDS低分子量标准试剂盒SDS低分子量标准试剂盒是由六种高纯度的已鉴定蛋白(分子量：14,400-97,000)的干粉混合物组成，用于SDS－PAGE电泳中分子量的测定。
通过比较待测蛋白和试剂盒中已知分子量蛋白的电泳迁移率，推出未知蛋白的分子量。
每瓶含有 576μg 蛋白混合物。
该试剂盒储存于2－8°C 。
SDS 低分子量标准 (14 000−97 000)蛋白分子量 来源 量（ug) Phosphorylase b 97 000 rabbit muscle 67 Albumin 66 000 bovine serum 83 Ovalbumin 45 000 chicken egg white 147 Carbonic anhydrase 30 000 bovine erythrocyte83 Trypsin inhibitor 20 100 soybean 80 α-Lactalbumin14 400bovine milk116两倍稀释后每个泳道上样3ul，采用自制的15％T，2.7%C凝胶在SE260电泳槽上20mA恒流电泳1小时55分钟,考染结果。
1. 重溶：按下述方法直接重溶，六种标准蛋白将溶于25％蔗糖溶液中，所以样品缓冲液中不必加入密度增强剂。
为了更好的重复性，避免反复冻溶蛋白溶液，最好将其分装，于-80ºC可保存3个月。
考马斯亮兰染色：对于Laemmli 胶,每支瓶加入 200 μl标准的1x样品缓冲液[0.0625 M Tris-HCl,2% SDS,10% (v/v) 甘油(可选的),0.1 M DTT 和 0.01% 溴酚蓝,pH 6.8]。
对于 PhastGel T M , ExcelGel T M 和 CleanGel T M 预制胶，每支瓶加入 200μl[10 mM Tris-HCl,2% SDS, 0.1 M DTT,0.01% 溴酚蓝和 1 mM EDTA, pH 8.0]。
换个姿势了解蛋白质Marker！
换个姿势了解蛋白质Marker！蛋白分子量标准，常称之为蛋白Marker。
在免疫印迹（Western blot）试验中，分子量Marker虽不起眼，但意义重大，是阳性对照，是大小的标准，是必须的。
只有Marker精确无误了，实验结果才有说服力。
除此之外，蛋白Marker还能够提示电泳是否正常，转移是否成功等信息。
在实验中经常会说“跑”电泳我们可以用“团队障碍跑”来描述蛋白质在凝胶中的运动体型大的阻碍大，跑的慢体型小的阻碍小，跑的快对于未知蛋白组我们可以根据它的停止时位置分析和区分其中蛋白质的大小这就要求我们设置一个特殊的赛道“Marker组”让具有指示性的蛋白质组（Marker）一起移动在相同的时间内与蛋白质“裁判”跑一样距离的其分子大小也是一致的Marker组的分子大小我们是知道的就可以根据目的蛋白的大小进行筛选再对目的蛋白进行后期的分离与检测蛋白质电泳示意图蛋白Marker可分为两大类：1、未预染的Marker按照包含的蛋白质分子量大小来区分，又可以分为：宽分子量蛋白Marker、高分子量蛋白Marker以及低分子量蛋白Marker2、预染的Marker按照染料颜色的多少可以分为：单色预染和多色预染。
【未预染的Marker】这是最简单，也是最准确的一种。
由于没有附带染料分子或者是标记分子，所示大小正好是蛋白原本的大小，是精确判断蛋白大小所必须的。
1、宽分子量蛋白Marker如果从实验室总体考虑的，就选范围尽量宽，条带分布比较均匀的，这样你的蛋白无论在哪个区间都容易判断，避免落在一段空白区域中。
不过条带越多，每次上样量也就越大。
拿到Marker后，如果买的是大包装，就应该考虑分装，尽量避免反复冻融。
另外，宽分子量蛋白Marker不一定每一条都能够看到，特别是小分子量蛋白。
如果侧重大蛋白，那小的可能就已经跑掉了。
2、高分子量蛋白Marker通常在检测大分子量蛋白时使用高分子量蛋白Marker。
3、低分子量蛋白Marker在一般的蛋白电泳当中，更常用的是低分子量蛋白Marker，除了有指示蛋白大小的作用以外，有时还可用作粗略的定量。
蛋白质分子量标准(14.4-116kd, 非预染)
蛋白质分子量标准(14.4-116kd, 非预染)
蛋白质分子量标准（14.4-116 kd，非预染）指的是一组用于电泳分析的标准蛋白质混合物，其分子量范围在14.4千道尔顿（kd）到116千道尔顿（kd）之间。
这些标准蛋白质通常用于凝胶电泳（如SDS-PAGE）中，以评估未知蛋白质的分子量大小。
这些标准蛋白质的分子量是已知的，因此可以通过与未知蛋白质在电泳凝胶上的迁移速度进行比较，来估算未知蛋白质的分子量。
这对于蛋白质研究和分析非常重要，因为分子量是蛋白质的一个重要属性，与其功能、结构和相互作用密切相关。
“非预染”指的是这些标准蛋白质没有预先用染料染色，因此在使用时需要与染料一起孵育，以便在凝胶上可视化。
常见的用于蛋白质染色的染料包括考马斯亮蓝和银染剂等。
请注意，具体的蛋白质分子量标准可能会因供应商和批次而异，因此在使用时应参考相关说明书和建议。
此外，对于某些特定的电泳条件和应用，可能需要使用不同分子量范围或类型的标准蛋白质。
SDSPAGE检测重组蛋白实验
SDSPAGE检测重组蛋白实验SDS-PAGE检测重组蛋白一、实验目的①掌握SDS-PAGE的基本原理；②掌握SDS-PAGE的凝胶制备方法；③掌握蛋白质的考马斯亮蓝染色法；④掌握测定重组蛋白分子量的方法。
二、实验原理：1、聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis），简称PAGE，是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质。
聚丙烯酰胺凝胶是由单体的丙烯酰胺（acrylamide）与甲叉双丙烯酰胺（bisacrylamide）聚合而成，这一聚合过程需要有自由基催化完成。
催化剂过硫酸铵（AP）可产生自由基，而加速剂四甲基乙二胺（TEMED）可催化过硫酸铵加速自由基的产生，这样就能够形成丙烯酰胺长链，同时甲叉双丙烯酰胺在不断延长的丙烯酰胺链间形成甲叉键交联，从而形成交联的三维网状结构。
氧气对自由基有清除的作用，在制备聚丙烯酰胺凝胶时通常要进行抽气，或者者用水或者正丁醇隔绝氧气。
聚丙烯酰胺凝胶的孔径能够通过改变丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺单体的浓度来操纵，丙烯酰胺的浓度能够在3~30%（V/V）之间。
低浓度的凝胶具有较大的孔径，如3%（V/V）的聚丙烯酰胺凝胶对蛋白质没有明显的阻碍作用，可用于SDS-PAGE的浓缩胶，也能够用于分离DNA。
高浓度凝胶具有较小的孔径，对蛋白质有分子筛的作用，能够用于根据蛋白质的分子量进行分离的电泳中，如10~20%（V/V）的凝胶常用于SDS-PAGE的分离胶。
聚丙烯酰胺凝胶具有下列突出的优点：（1）能够随意操纵胶浓度与交联度，从而得到不一致的有效孔径，用于分离不一致分子量的生物大分子；（2）能把分子筛作用与电荷效应结合在同一方法中，达到更高的灵敏度：10-9~10-12 mol/L；（3）由于聚丙烯酰胺凝胶是由-C-C-键结合的酰胺多聚物，侧链只有不活泼的酰胺基-CO-NH2-，没有带电的其他离子基团，化学惰性好，电泳时不可能产生“电渗”；（4）由于能够制得高纯度的单体原料，因而电泳分离的重复性好；（5）透明度好，便于照相、扫描或者复印。
超低分子量蛋白MARKER
Genia brand products are sold through Genia Life Sciences,Inc.
Genia Life Sciences,Inc. warrants that its products conform to the information contained in this and other Genia Life Sciences publications.Purchasermust determine the suitability of the product(s) for their particular use. Additional terms and conditions may apply.Product Specification 超低分子量蛋白MARKER
#C0213 15T(150ul)
Store at -20℃
建议使用效期：1 YEAR
储存条件：
-20℃有效期1年，避免反复冻融。
使用说明：1.开封后，溶于150ul 的1×上样缓冲液，于95℃水浴5min，可根据需要进行小量分装，每管10ul，-20℃贮存，
每次取一管使用，避免反复冻融。
2.使用前取分装后的小管室温融化后，95℃预热5min 即
可上样电泳，用考马斯亮蓝G-250染色后可见5条蛋白带。
产品描述：本产品包含3种多肽和2种低分子量蛋白质组成，分子量范围为3.3KD-20.1KD。
可以用来判断SDS-PAGE 上多肽和小蛋白的分子量。
本品为蛋白质和多肽混合物的冻干粉，每种蛋白含量约为15-22.5ug，配有一支1×上样缓冲液。
条带示意图：注意事项：
本产品为科研用试剂。
蛋白质marker
●使用方法
1. 首先按以下方法配制“稀释液”。
1 M DTT 5×Loading Buffer
* 稀释液可于室温下放置一个月左右。
2 μl 20 μlFra bibliotek2. 按以下方法稀释本制品。
Protein MW Marker（Low） 稀释液 灭菌蒸馏水
5 μl 22 μl 73 μl
* 20 倍的制品稀释液可在-20℃下保存 2～3 个月，但应 避免多次反复冻融。如果一次稀释量较多时，可以小 量分装后在-20℃下保存，以避免反复冻融。
●浓 度：12 μg/μl
●制品内容（约 200 次量）
Protein MW Marker（Low） 5×Loading Buffer 1 M DTT（Dithiothreitol）
50 μl 300 μl
30 μl
●制品说明
Protein Molecular Weight Marker（Low）是由 六种纯化好的不同分子量的蛋白质组成的，它的分 子量范围为：14.3 KDa～97.2 KDa。进行聚丙烯 酰胺凝胶电泳时，经考马斯亮蓝 R－250 染色后的 各种蛋白质的条带强度均一。每微升本制品的蛋白 量为 12 μg，稀释 20 倍后进行聚丙烯酰胺凝胶电 泳，每次取 5 μl（for SDS-PAGE mini gel）。以 每次使用 5 μl（20 倍稀释液）计算时本制品约可 使用 200 次。
以每次使用l20倍稀释液计算时本制品约可使用200保存条件制品原液可在20下长期保存制品的20倍稀释液可在20下保存个月制品的原液和制品的20倍稀释液都应避免多次反复冻融
蛋白质分子量标准（低）
Protein Molecular Weight Marker (Low)
蛋白质marker
●使用方法
1. 首先按以下方法配制“稀释液”。
1 M DTT 5×Loading Buffer
* 稀释液可于室温下放置一个月左右。
2 μl 20 μl
2. 按以下方法稀释本制品。
Protein MW Marker（Low） 稀释液 灭菌蒸馏水
5 μl 22 μl 73 μl
* 20 倍的制品稀释液可在-20℃下保存 2～3 个月，但应 避免多次反复冻融。如果一次稀释量较多时，可以小 量分装后在-20℃下保存，以避免反复冻融。
50 μl 300 μl
30 μl
●制品说明
Protein Molecular Weight Marker（Low）是由 六种纯化好的不同分子量的蛋白质组成的，它的分 子量范围为：14.3 KDa～97.2 KDa。进行聚丙烯 酰胺凝胶电泳时，经考马斯亮蓝 R－250 染色后的 各种蛋白质的条带强度均一。每微升本制品的蛋白 量为 12 μg，稀释 20 倍后进行聚丙烯酰胺凝胶电 泳，每次取 5 μl（for SDS-PAGE mini gel）。以 每次使用 5 μl（20 倍稀释液）计算时本制品约可 使用 200 次。
蛋白质分子量标准（低）
Protein Molecular Weight Marker (Low)
使用说明书
TaKaRa Code：D530A
●浓 度：12 μg/μl
●arker（Low） 5×Loading Buffer 1 M DTT（Dithiothreitol）
3. 均匀混合后，100℃加热处理 5 分钟，然后取 5 μl 进行 10％～15％的聚丙烯酰胺凝胶电泳 （for SDS-PAGE mini gel）。
4. 10%、12%、15%的聚丙烯酰胺凝胶电泳后，经 考马斯亮蓝 R-250 染色后的结果如下。
PH0307 彩虹预染超低分子量蛋白Marker (1.2-45KD)使用手册
PH0307|彩虹预染超低分子量蛋白Marker(1.2-45KD)(Rainbow Prestained Ultra Low Molecular Weight Protein Marker)Catalog No：PH0307Size：☐50ul Store at-20℃◆简介彩虹预染超低分子量蛋白质Marker可以直接观察蛋白电泳及清晰判断Western Blotting的转膜效果。
本产品包含3种多肽和3种低分子量蛋白质组成，分子量范围为 1.2kD-45kD，分子量大小为1.2kD，4.6kD，10kD，16kD，27kD，45kD(注：蛋白大小已在18%Tricine-SDS-PAGE中用非预染蛋白Marker标定过)。
◆保存-20℃保存，开封后有效期12个月◆使用参考1.超低分子量多肽的蛋白电泳较常规的蛋白电泳更为复杂，请仔细参阅说明书后再进行操作。
2.第一次收到产品后，室温彻底融化混匀，离心快甩将溶液收集到管底，根据需要适量分装，-20℃贮存，每次使用时取一管使用。
3.本蛋白Marker为即用型产品，使用前取一管Marker样品室温彻底融化后可以直接上样，不要加热。
一般说来，0.75mm×5mm（厚度×宽度）的加样孔上样5μl，其他规格梳子请适当调整上样量。
【注】如非必须，尽量使用厚度0.75mm的凝胶，这样会减少电泳后染色和脱色的时间。
4.制胶：先配制分离胶，聚合后再配制浓缩胶。
电泳时，80v跑30-60分钟左右，待指示前沿到达分离胶上沿时，把电压调至130-150v，至所有条带分离清楚后即可停止电泳。
整个电泳过程大约需要2-3个小时。
5.如果是较小的多肽（小于5KD），电泳之后可将胶置于固定液中固定30分钟，再进行染色，能得到较好的蛋白条带；如果不固定直接染色，小蛋白可能会不清楚。
6.染色：如果进行染色时效果不好或考虑其毒性，请选择本公司的考马斯亮蓝蛋白快速染色液，该产品具有染色快，无毒，灵敏性高等特点，是常规染色液的理想替代品。
高分子生物蛋白
蛋白分子量标准工作单位：蛋白质研究技术中心蛋白质制备与鉴定平台摘要蛋白分子量标准，顾名思义，其作用是用来指示蛋白质的分子量的大小。
非预染蛋白分子量标准是最简单，也是最准确的一种。
由于没有附带染料分子或者是标记分子，所示大小正好是蛋白原本的大小，是精确判断蛋白大小必须的，是生化实验室和生物物理实验室里的一种常规试剂，要求精确性和稳定性。
本成果基于蛋白质制备与鉴定平台的功能和强项，一方面参照目前市面上已有的蛋白Marker产品，调研蛋白条带蛋白信息，通过基因克隆或者直接购买原材料，准备相应蛋白。
另一方面根据自己平台的经验，选择一些性质稳定，表达量大的球型蛋白作为原材料，大大降低制作成本。
本平台通过采购以及规范化表达纯化的途径，成功研制出一批高精度、高稳定性、高适应性、低成本的非预染蛋白质分子量标准（10-116KDa），为平台、用户以及各实验室大大降低了在蛋白分子量标准方面的采购成本。
关键字蛋白分子量标准非预染蛋白分子量标准高稳定性低成本蛋白分子量标准分为未染蛋白分子量标准、预染蛋白分子量标准和修饰标记蛋白分子量标准三个级别。
未染色的蛋白分子量标准是最简单，也是最准确的一种。
由于没有附带染料分子或者是标记分子，所示大小正好是蛋白原本的大小，是精确判断蛋白大小必须的。
它又可分为低分子量、高分子量和宽分子量标准三个级别。
未染色的蛋白分子量标准属于比较常规的分子量标准，在生化实验室和生物物理实验室里，是最为常规的一类分子量标准。
预染蛋白分子量标准是一些纯化好的蛋白混合物，通过与染料共价耦联，在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。
预染蛋白分子量的出现方便了我们的实验，这种蛋白分子量标准可以帮助我们在电泳时、电泳后，以及转膜后监测电泳情况和估计迁移率。
预染蛋白标准可以分为两种：单色预染和多色预染。
预染蛋白分子量标准占据蛋白分子量标准的绝大部分市场。
特殊标记蛋白标准，如GST-, HA-, c-myc-, His6-以及生物素标记蛋白标准。
超低分子量蛋白质Marker(3.3kD-20. 1kD)说明书
第1页共3页
夹层胶 10%/2mL 0.407mL / 0.667mL / 0.926mL
浓缩胶 4%/2mL 0.160mL / 0.496mL / 1.344mL
10%APS TEMED
40µL 5µL
40µL 5µL
40µL 5µL
北京索莱宝科技有限公司
20μL 3µL
20μL 3µL
凝胶制备及染色注意事项: 1. 先配制分离胶，聚合后再配制夹层胶，最后配制浓缩胶，3种胶的制胶体积比为4:1.5:1。电泳时，30v 跑1-2小时后，待指示前沿到达分离胶上沿时，把电压调至100v，至电泳结束，整个电泳过程大约需要6-8 小时。 2. 由于多肽所含的氨基酸数目较少，因此如该多肽含有过多的极性氨基酸(碱性或酸性)，则会影响其在 SDS-PAGE 图上的条带迁移率，即其表观分子量可能和多肽的氨基酸理论推算分子量有一定距离。 3. 由于 SDS-PAGE 的图谱上，蛋白质对数分子量和迁移率成正比直线关系的分子量范围为 15,000-200,000， 因此对于分子量小于 10000 的蛋白质或多肽的分子量，只能根据标准分子量进行估计，推断其是否落入预 测的分子量范围。 4. 由于超低分子量多肽（3000 及 3000 以下），极易从凝胶上浸出，因此染色及脱色时间不宜太长，脱色后 凝胶也不宜在水中浸泡保存过久，否则条带会消失。 5. 电泳之后可将胶置于固定液中固定20分钟，再进行染色，能得到较好的蛋白条带；如时间不允许，也可 不进行固定直接染色。如果使用配方7进行染色时效果不好或考虑其毒性，请选择本公司的考马斯亮蓝蛋白 胶快速染色液(货号:P1300)，该产品具有染色快，无毒，灵敏性高等特点，是常规染色液的替代品。
凝胶的配置方法:
49.5%T 3%C 49.5%T 6%C 凝胶缓冲液 甘油 ddH2O
不同花源蜂蜜蛋白质组分及提取方法的比较
法适合提取枣花蜜、荆条蜜、洋槐蜜和油菜蜜蛋白质，而龙眼蜜和土蜂蜜适合用硫酸酸钠沉淀法分离,2种方 法获得的6种蜂蜜蛋白在SDS-CAGE和RP-HPLC图谱中％现明显的分子质量和疏水性差异。这为基于蛋白质 差异构建蜂蜜花源鉴别技术奠定理论基础。 关键词蜂蜜；蛋白质；蛋白质提取；电泳；反相高效液相色谱
京索莱宝科技有限公司;牛血清蛋白（纯度% 99% ），
美国Amresca公司；考马斯亮蓝G-250和R-250、丙烯
酰胺、N，N-亚甲叉双丙烯酰胺、十二烷基硫酸钠、三
甲基甲烷、甘氨酸，西科昊生物工程有限公司;'
酸钠、三氟乙酸（ 级）、乙睛（色谱级）、A/NO3、
Na2C（O、乙二胺四乙酸二钠，天津科密欧化学试剂有
透析袋中透析4次，透
5 000 Do滤膜超滤浓
缩，收 缩蜂蜜 液,然后真空干燥 干粉，置于
-20 C保存备用％
1.3.3 硫酸-Z酸钠沉淀法提取蜂蜜蛋白质 参考AOAC方法［14(采用 -鸨酸钠沉淀法提取
蜂蜜蛋白％ 12g蜂蜜于50 mL离心管中，加入4 mL去
离子水混匀，将2 mL 100 mg/mL鹄酸钠溶液和2 mL
蜂蜜是大自然赐予人类的珍贵礼品,富含葡萄
糖、果糖、
、氨基酸、维生素、微元 酚类等
多种营养物质，在菌、抗氧化、
、抗突变
和消炎等方面具有独特的生理 '一3」。我国是世
界蜂蜜生产大国，洋槐蜜、荆条蜜、油菜蜜、枣花蜜、龙
眼蜜等大 花种蜂蜜深受国内外 者青睐％然
而，现行蜂蜜标准中缺乏有效区分蜂蜜花源的内在质
,利因 使，在商品 较高蜂蜜品种 中掺入廉价蜂蜜的现象 存在'4「5因此，亟需加
乳酸菌表层蛋白的分离及其结构和性质
乳酸菌表层蛋白的分离及其结构和性质朱晓;胡斌;李景艳;刘慧博;卢蓉蓉【摘要】对自主拥有的多株乳酸菌进行了表层蛋白的分离和鉴定，并对其结构和性质进行了研究。
采用LiCl溶液进行提取，经SDS-PAGE检测，确定嗜酸乳杆菌fb116、嗜酸乳杆菌fb115和瑞士乳杆菌fb213携带表层蛋白。
采用差示扫描量热仪（DSC）测定，其变性温度分别为63．67℃，61．98℃和59．78℃。
它们的氨基酸组成大致相同，疏水氨基酸含量高达45％，酸性氨基酸含量在21％左右，远高于碱性氨基酸。
圆二色谱法（CD）分析显示，其二级结构相似，α-螺旋和B-折叠约占34％和12％。
去除表层蛋白之后，3株菌株的自动聚集能力和表面疏水性出现下降，这提示表层蛋白的存在有助于乳酸菌黏附性能的发挥。
%In the present study several laetobacillus carrying surface layer proteins had been screened from those owned by our laboratory. They were Lactobacillus acidophilus fbll6, Lactobacillus acidophilus fbll5 and Lactobacillus helveticus fb213. The thermal analysis of the lyophilized surface layer proteins were performed by differential scanning calorimetry （DSC）. DSC analysis showed one phase transition with maxima located at ca. 63.67℃ , 61.98℃ and 59.78℃for these three proteins. The amino acid compositions of the three proteins were determined mostly the same, which had a high content （45%） of hydrophobic amino acids and a higher content （24%）of acidic amino acids then basic ones. By circular dichrosim （CD） spectra the secondary structures of the proteins were predicted to be composed similarly of 34% alpha-helix and 12% beta - sheet. After removal of surface layer proteins, the autoaggregation percentage and the cell surfacehydrophobicity of the three lactobacillus were reduced. It was implied that the surface layer proteins played a role in adhesion property of Lactobacillus.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2011(037)010【总页数】6页(P19-24)【关键词】乳酸菌;表层蛋白;二级结构;表面性质;氨基酸组成【作者】朱晓;胡斌;李景艳;刘慧博;卢蓉蓉【作者单位】江南大学食品学院,江苏无锡214122;江南大学食品学院,江苏无锡214122;江南大学食品学院,江苏无锡214122;江南大学食品学院,江苏无锡214122;江南大学食品学院,江苏无锡214122【正文语种】中文【中图分类】TS252.54大多数细菌细胞壁的表面存在次晶格阵列结构，透明、匀称、高度多孔且孔径均一。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
低分子量蛋白质Marker（14.4kD-97.4kD)使用说明
货号：PR1400
规格：20T
保存：-20℃可保存至少一年。
避免反复冻融，建议分装保存。
产品简介：
低分子量蛋白质Marker包含6种蛋白质混合物的冻干粉，分子量范围为14.4kD-97.4kD，每种蛋白的含量约为20-30μg。
经过SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶）电泳后，用考马斯亮蓝染色可以得到分布均匀密度相近的6条带。
可以用来判断SDS-PAGE电泳后蛋白质的分子量。
使用说明：
1.开封后，溶于400µL体积的1×蛋白上样缓冲液（含巯基还原剂），于沸水浴中加热5分钟，冷却后可根据需要进行小量分装，每管20µL，-20℃贮存，每次取一管使用。
2.如长期贮存后使用，使用前最好取分装后的小管沸水浴预热3-5分钟后再上样电泳，用考马斯亮蓝G-250染色后可见6条蛋白带(见下示意图)。
注意事项：
1.建议分离胶浓度12%，浓缩胶浓度5%，制胶时先配制分离胶，聚合后再配制浓缩胶。
电泳时，80v电压大约跑1小时后，待指示剂沿到达分离胶上沿时，将电压调至120v，直到电泳结
束。
整个电泳过程大约需3-4个小时。
2.电泳之后可将胶进行染色观察，如果使用配方进行染色时效果不好或考虑其毒性，请选择考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液，该试剂具有染色快，无毒，灵敏性高等特点，是常规染色液的替代品。
相关试剂：
P10154×蛋白上样缓冲液（含DTT）
P10164×蛋白上样缓冲液（含巯基还原剂）
T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液
P1300-1SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
P1300-500考马斯亮蓝快速染色液。