猪脾中DNA的提取及含量测定
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构完整性。
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12
核酸提取的主要步骤：
1）破碎细胞； 2）去除与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂
类等生物大分子； 3）去除其它不需要的核酸分子； 4）沉淀核酸，去除盐类，有机溶剂等杂质。
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13
☺ 核酸提取的方案，应根据具体生物 材料和待提取的核酸分子的特点而定。
☺ 对于某特定细胞器中富集的核酸分 子，事先提取该细胞器，然后提取目的 核酸分子的方案，可获得完整性和纯度 两方面质量均高的核酸分子。
1）用1M 氯化钠提取,得到的DNP粘液; 2) 与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡,使乳化; 3) 离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相 及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中; 4) 用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.
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17
（2）阴离子去污剂法:
用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可 以直接从生物材料中提取DNA。
猪脾中DNA的提取
指导教师：滕利荣
Email:tenglirong@
2005.03
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1
二十世纪是 物理、化学和电子科学 的世纪
二十一世纪是 生命科学 的世纪
生命是 ？
生命 = 核酸 + 蛋白质
二十一世纪是核酸、蛋白质的世纪
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2
DNA提取的意义：
1、用于研制核酸类药物及保健品 2、用于基因诱变 3、用于DNA克隆 4、用于DNA测序 5、用于PCR扩增
.
14
2.细胞的破碎
有坚硬的细胞壁的细胞，首先要破碎细胞。方法 有三种：
①机械方法：超声波处理法、研磨法、匀浆法； ②化学试剂法：用SDS处理细胞； ③酶解法：加入溶菌酶或蜗牛酶，都可使细胞壁 破碎。
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15
高等动物的DNA 主要存在于细胞核与线粒体中， 所以提取时有两个困难（高等植物与此类似）：
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7
1、核酸的理化性质
☺ DNA则为白色类似石棉样的纤维状物。
☺ 核酸和核苷酸 大都呈酸味（除肌苷酸、鸟苷酸具 有鲜味外）。
☺ DNA、RNA和核苷酸都微溶于水，不溶于乙醇、氯 仿等有机溶剂。
☺ DNA钠盐在水中为10g/L，呈黏性胶体溶液。 RNA钠 盐在水中溶解度可达40g/L。
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8
☺ 在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性 或弱碱性溶液中较稳定。
④ 5%SDS（W/V）：6gSDS溶于100ml45%乙 醇中；
☺ DNA溶液的粘度很大，而RNA溶液的粘度小 得多。核酸发生变性或降解后其粘度降低。
☺ 核酸受到强大离心力的作用时，可从溶液中
沉降下来，其沉降速度与核酸的大小和密度有 关。
.
9
核酸提取的原理
☺ 核酸包括DNA、RNA两种分子，在细胞中都是以与 蛋白质结合的状态存在，用DNP和RNP 表示；
☺ DNP和RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影 响而不同。
由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或 配位键结合,而阴离子去污剂能够破坏这种价键,所 以常用阴离子去污剂提取DNA。
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18
（3）苯酚抽提法:
苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的 降解作用。
用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 连 接键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团 与苯酚相似相溶。
1）破碎细胞难，从处死动物分离组织器官到 破碎细胞费时长。在长时间内DNA可能会被DNase 降解；
2）因分子量大，在使用组织匀浆器破碎组织 时易造成DNA 断裂；
对不同生物材料，要根据具体情况选择适当 的分离提取方法。
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3.DNA提取的几种方法 (1)浓盐法
利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者 分离。
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3
提取DNA的主要来源：
1、动物组织及器官 脾、肝、胸腺、鱼类精子等。
2、植物 种子的胚芽等
3、微生物 细菌、酵母菌等
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4
核酸的存在形式：
☺ 核酸包括DNA、RNA两种分子，在细胞中都是以 与蛋白质结合的状态存在；
☺ 真核生物的染色体DNA为双链线性分子；
☺ 原核生物的“染色体”、质粒及真核细胞器 DNA为双链环状分子；
.
10
☺ 从不同材料中提取DNA的方法不同，分离 提取的难易程度也不同。
☺ 从高等动植物及细菌中提取DNA难度大一 些。由于其DNA 分子量较大。因此易被 机械张力剪断。
☺ 细菌DNA，除核DNA 外，还有质粒DNA 等。
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11
☺ 对于低等生物。如从病毒中提取DNA 比较容易， 多数病毒DNA 分子量较小，提取时易保持其结
☺ 有些噬菌体DNA有时为单链环状分子；
☺ 病毒的DNA、RNA分子，其存在形式多种多样， 有双链环状、单链环状、双链线状及单链线状 等。
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5
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6
核酸的分布：
☺ 95%的真核生物DNA主要存在于细胞核内， 其它5%为细胞器DNA，如线粒体、叶绿体等。
☺ RNA分子则主要存在于细胞质中，约占75%， 另有10%在细胞核内，15%在细胞器中。
剪刀、镊子。
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21
（3）试剂：
① 20×SSC：175.2gNaCL，88.2g柠檬酸 钠•2H2O，PH=7.0加水至1000ml；
② 1×SSC，0.1×SSC由①作相应的稀释 得来；
③ NaCL-Na2EDTA 液 ： 8 . 7 7 gNaCL，3.72g Na2EDTA 溶 于 8 0 0 ml 蒸 馏 水 中 ， 用 固 体 NaOH 调 PH=8后定容至1000；
蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离 心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含 DNA 的水相。
利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀 DNA 。此法的特点是使提取的DNA保持天然状 态。
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19材料，仪器和试剂： （1） 实验材料：新鲜猪脾： （2）仪器： 量筒：10ml 、100ml 3个； 烧杯：100ml 2个、250ml 2个； 磨口锥形瓶： 250ml 1个、500ml 1个； 移液管：1ml 1支、10ml 1支； 滴管、玻棒、离心机、电动搅拌器、台秤、
☺ DNP在低浓度盐溶液中，几乎不溶解，如在0.14 mol/L的氯化钠溶解度最低，仅为在水中溶解度 的1%，随着盐浓度的增加溶解度也增加，至 1mol/L氯化钠中的溶解度很大，比纯水高2倍。
☺ RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响较 小，在0.14mol/L氯化钠中溶解度较大。因此， 在提取时，常用此法分离这两种核蛋白。
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核酸提取的主要步骤：
1）破碎细胞； 2）去除与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂
类等生物大分子； 3）去除其它不需要的核酸分子； 4）沉淀核酸，去除盐类，有机溶剂等杂质。
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☺ 核酸提取的方案，应根据具体生物 材料和待提取的核酸分子的特点而定。
☺ 对于某特定细胞器中富集的核酸分 子，事先提取该细胞器，然后提取目的 核酸分子的方案，可获得完整性和纯度 两方面质量均高的核酸分子。
1）用1M 氯化钠提取,得到的DNP粘液; 2) 与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡,使乳化; 3) 离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相 及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中; 4) 用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.
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（2）阴离子去污剂法:
用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可 以直接从生物材料中提取DNA。
猪脾中DNA的提取
指导教师：滕利荣
Email:tenglirong@
2005.03
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二十世纪是 物理、化学和电子科学 的世纪
二十一世纪是 生命科学 的世纪
生命是 ？
生命 = 核酸 + 蛋白质
二十一世纪是核酸、蛋白质的世纪
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DNA提取的意义：
1、用于研制核酸类药物及保健品 2、用于基因诱变 3、用于DNA克隆 4、用于DNA测序 5、用于PCR扩增
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2.细胞的破碎
有坚硬的细胞壁的细胞，首先要破碎细胞。方法 有三种：
①机械方法：超声波处理法、研磨法、匀浆法； ②化学试剂法：用SDS处理细胞； ③酶解法：加入溶菌酶或蜗牛酶，都可使细胞壁 破碎。
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高等动物的DNA 主要存在于细胞核与线粒体中， 所以提取时有两个困难（高等植物与此类似）：
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1、核酸的理化性质
☺ DNA则为白色类似石棉样的纤维状物。
☺ 核酸和核苷酸 大都呈酸味（除肌苷酸、鸟苷酸具 有鲜味外）。
☺ DNA、RNA和核苷酸都微溶于水，不溶于乙醇、氯 仿等有机溶剂。
☺ DNA钠盐在水中为10g/L，呈黏性胶体溶液。 RNA钠 盐在水中溶解度可达40g/L。
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☺ 在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性 或弱碱性溶液中较稳定。
④ 5%SDS（W/V）：6gSDS溶于100ml45%乙 醇中；
☺ DNA溶液的粘度很大，而RNA溶液的粘度小 得多。核酸发生变性或降解后其粘度降低。
☺ 核酸受到强大离心力的作用时，可从溶液中
沉降下来，其沉降速度与核酸的大小和密度有 关。
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核酸提取的原理
☺ 核酸包括DNA、RNA两种分子，在细胞中都是以与 蛋白质结合的状态存在，用DNP和RNP 表示；
☺ DNP和RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影 响而不同。
由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或 配位键结合,而阴离子去污剂能够破坏这种价键,所 以常用阴离子去污剂提取DNA。
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（3）苯酚抽提法:
苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的 降解作用。
用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 连 接键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团 与苯酚相似相溶。
1）破碎细胞难，从处死动物分离组织器官到 破碎细胞费时长。在长时间内DNA可能会被DNase 降解；
2）因分子量大，在使用组织匀浆器破碎组织 时易造成DNA 断裂；
对不同生物材料，要根据具体情况选择适当 的分离提取方法。
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3.DNA提取的几种方法 (1)浓盐法
利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者 分离。
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提取DNA的主要来源：
1、动物组织及器官 脾、肝、胸腺、鱼类精子等。
2、植物 种子的胚芽等
3、微生物 细菌、酵母菌等
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核酸的存在形式：
☺ 核酸包括DNA、RNA两种分子，在细胞中都是以 与蛋白质结合的状态存在；
☺ 真核生物的染色体DNA为双链线性分子；
☺ 原核生物的“染色体”、质粒及真核细胞器 DNA为双链环状分子；
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☺ 从不同材料中提取DNA的方法不同，分离 提取的难易程度也不同。
☺ 从高等动植物及细菌中提取DNA难度大一 些。由于其DNA 分子量较大。因此易被 机械张力剪断。
☺ 细菌DNA，除核DNA 外，还有质粒DNA 等。
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11
☺ 对于低等生物。如从病毒中提取DNA 比较容易， 多数病毒DNA 分子量较小，提取时易保持其结
☺ 有些噬菌体DNA有时为单链环状分子；
☺ 病毒的DNA、RNA分子，其存在形式多种多样， 有双链环状、单链环状、双链线状及单链线状 等。
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核酸的分布：
☺ 95%的真核生物DNA主要存在于细胞核内， 其它5%为细胞器DNA，如线粒体、叶绿体等。
☺ RNA分子则主要存在于细胞质中，约占75%， 另有10%在细胞核内，15%在细胞器中。
剪刀、镊子。
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（3）试剂：
① 20×SSC：175.2gNaCL，88.2g柠檬酸 钠•2H2O，PH=7.0加水至1000ml；
② 1×SSC，0.1×SSC由①作相应的稀释 得来；
③ NaCL-Na2EDTA 液 ： 8 . 7 7 gNaCL，3.72g Na2EDTA 溶 于 8 0 0 ml 蒸 馏 水 中 ， 用 固 体 NaOH 调 PH=8后定容至1000；
蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离 心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含 DNA 的水相。
利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀 DNA 。此法的特点是使提取的DNA保持天然状 态。
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19材料，仪器和试剂： （1） 实验材料：新鲜猪脾： （2）仪器： 量筒：10ml 、100ml 3个； 烧杯：100ml 2个、250ml 2个； 磨口锥形瓶： 250ml 1个、500ml 1个； 移液管：1ml 1支、10ml 1支； 滴管、玻棒、离心机、电动搅拌器、台秤、
☺ DNP在低浓度盐溶液中，几乎不溶解，如在0.14 mol/L的氯化钠溶解度最低，仅为在水中溶解度 的1%，随着盐浓度的增加溶解度也增加，至 1mol/L氯化钠中的溶解度很大，比纯水高2倍。
☺ RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响较 小，在0.14mol/L氯化钠中溶解度较大。因此， 在提取时，常用此法分离这两种核蛋白。