2015版中国药典培养基变更参照pdf
浅谈2015年版中国药典的重点变更-PDF (简)
2015 年版药典收载品种总数约为 5515 个，増幅达到 26.2%。
2010 版药
2015 年版药典
类别
典收载 总收载品种 新增品种 修订品种
中药
2165
化药
2139
药用辅料
132
生物制品
品种 通则、总论
131 10
小计
4567
通则(附录)
---
指导原则
---
2627 2617 约 271 145 14 约 5515 321 31
约 462 约 500
139 14 4 约 1201 29 15
约 400 149 132 62 8
约 751 145 8
不收载 品种
2 5 --6 --13 -----
4. 2015 年版药典的部份增加及修订的项目: 附录是药典的重要部份，药典的灵魂和水平均集中反映在附录中。本版是将三部 药典的附录合一，加强共性的系统化、完善化及规范化，新版 <中国药典> 的附 录调整为凡例、通则与方法、指导原则、药用辅料等单独成卷，为第四部。把以 往各部药典附录里相同的方法之间的归纳统一作为本版药典的工作重点，同时， 亦解决长期以来各部药典之间相同方法/通则要求不统一的问题。再且，附录对 药典以外的其他国家标准具同等法律效力。
4.6 二氧化硫残留的限制 通则里说明，除另有规定外，中药材及饮片(矿物类除外)的二氧化硫残留量不得 超过 150mg/kg (ppm)。
正文品种说明山药、牛膝、粉葛、天冬、天麻、天花粉、白及、白芍、白朮、党 参 10 味药材及其饮片二氧化硫残留量不得超过 400mg/kg(ppm)。
新版药典锐意加强科学监管，防止中药材加工过程中滥用或过度使用硫磺熏蒸，
2015版中国药典微生物检验
• 注：方法选择原则：根据供试品理化特性和微生物限度 标准等因素选择。
培养基适用性检查
• 胰酪大豆胨琼脂：金黄色葡萄球菌、 枯草芽孢杆菌、铜 绿假单胞菌、白色 念珠菌、黑曲霉 • 胰酪大豆胨肉汤：金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌、枯草 芽孢杆菌 • 沙氏葡萄糖琼脂、玫瑰红钠琼脂 、白色念珠菌、黑曲霉。
中国药典2015年版相关培养基变化无菌检查法通则1101chp2010chp2015硫乙醇酸盐流体培养基硫乙醇酸盐流体培养基改良马丁培养基胰酪大豆胨液体培养基tsb营养肉汤培养基胰酪大豆胨琼脂培养基tsa营养琼脂培养基沙氏葡萄糖液体培养基sdb改良马丁琼脂培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基sda培养基的适用性检查灵敏度检查无菌性检查中国药典2015年版相关培养基变化无菌检查法通则1101chp2010chp2015硫乙醇酸盐流体培养基硫乙醇酸盐流体培养基改良马丁培养基胰酪大豆胨液体培养基tsb营养肉汤培养基胰酪大豆胨琼脂培养基tsa营养琼脂培养基沙氏葡萄糖液体培养基sdb改良马丁琼脂培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基sda培养基的适用性检查灵敏度检查无菌性检查非无菌产品微生物限度检查
菌数报告规则
• 2、薄膜过滤法：计数方法同平皿计数法，每 张滤膜上的菌落数应不超过100cfu。菌数报告 规则以相当于 1g、1ml或10cm供试品的菌落数 报告菌数；若滤膜上无菌落生长，以﹤1报告 菌数（每张滤膜过滤1g、1ml或10cm 供试品 ），或﹤1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。 • 3、MPN法：记录每一稀释级微生物生长的管 数，从表3查对每1g或1ml供试品中需氧菌总数 的最可能数。
培养条件
• 描述方式：按计数方法适用性试验确认计 数方法进行供试品中需氧菌总数、霉菌和 酵母菌总数测定。 • 培养条件：胰酪大豆胨琼脂平板在30～ 35℃培养3-5天，沙氏葡萄糖琼脂平板在20 ～25℃培养5~7天；MPN法和供试品接种， 所有试验管在30～35℃培养3～5天。
2015版药典微生物修订内容
依科制药
新 依 科 兴 依 科
三、 制剂通则、品种项下要求【 无菌】 或 【 微生物限度】 检查的制剂（ 9类） ： 散剂、凝胶剂 、软膏剂、搽剂 、洗剂 、涂 膜剂 、鼻用制剂、气雾剂、喷雾剂 【 无菌 】 受热不稳定、制剂不能进行最终 灭菌的无菌工艺产品 用于手术、烧伤或严重创伤的局部给药制剂 应符合无菌检查法规定。 非无菌化学药品及生物制品制剂的微生物限度 标准（见表1 ） 按10个给药途径，以固体、液体性状分别给出 具体的限度标准要求。
依科制药
新 依 科 兴 依 科
修订后 耐胆盐的革兰氏阴性菌、大肠埃希菌、沙门菌、 铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、梭菌、白色 念珠菌 修订前 大肠菌群、大肠埃希菌、 沙门菌、 铜绿假单 胞菌、 金黄色葡萄球菌、梭菌、 白色念珠菌
依科制药
新 依 科 兴 依 科
增订内容 1 、除中药、化学药和生物制品的限度标准外， 增订了原敷料、中药提取物及饮片的微生物限 度标准。 修订内容 1 、菌数计数结果以10n表示； 2、 以需氧菌总数取代细菌数。以耐胆盐革 兰阴性菌取代大肠菌群。
新 依 科 兴 依 科
中药提取物
需氧微生物总 数 (CFU/g或ml)
控制菌
控制菌
10
3
10
2
#
中药饮片
#
#
不 得 检 出 沙 门 菌 （ 10g）耐胆盐革 兰 阴 性 菌 应 小 于 104（ 1g）
依科制药
计数结果
新 依 科 兴 依 科
2010版 供试品的细菌数、霉菌数和 酵母菌数其中任何一项不符 合该品种项下的规定，应从 同一批样品中随机抽样，独 立复试两次，以三次结果的 平均值报 告菌数。
依科制药
新 依 科 兴 依 科
浅谈2015年版中国药典的变更年版中国药典的变更
浅谈2015年版中国药典的变更1.基本情况:1950年1月卫生部成立第一届国家药典委员会，组成8个专家的小组团队，展开中国药典的编制，亦是我国最早的标准化机构。
第一部<中国药典>1953年版由卫生部编印发行。
至今已组建十屇药典委员会，并经已编制共九版中国药典(英文名称为Pharmacopoeia of The People’s Republic of China; 英文简称为Chinese Pharmacopoeia; 英文缩写为Ch.P.)。
中国药典是为保证药品产量、保障人民群众用药安全、有效、稳定、质量可控的技术法典，亦是药品研究、生产、经营、使用和监管的法定依据。
作为国家药品标准体系的核心及对外的竞争力，药典收载范围遂步扩大，由1953年(第一版)共531品种增加至现有的2010版(第九版)共4567种(包括有中药: 2165种(一部)，化学药: 2271种(二部)及生物药制品: 131种(三部))，当中涵盖了中药材、中药饮片、中药饮片、中成药、生物制品、药用辅料、凡例、通则及附录等等。
国家药品标准国家药品标准是由凡例与正文及其引用的附录共同构成。
并且对药典以外的其他国家标准具同等效力。
由此可见，药典是国家对药品监控及为企业建立质量体系的重要手段。
药典的法律地位:依照《药品管理法》规定:药品必须符合国家药品标准。
”“药品必须符合国家药品标准管理部门颁布的药典和药品标准为国家药品标准。
”“国务院药品监国务院药品监督督管理部门颁布的药典和药品标准为国家药品标准2.基本结构:凡例: 为正确使用<中国药典>进行药品质控的基本原则，是对正文、附录及与质量检定有关的共性问题的统一规定。
正文: 各品种项下收载的内容统称正文，是根据药物自身的理化与生物学特性，按照批准的来源、处方、制法、和运输、贮藏等条件所制定的、用以检测药品是否达到用药要求，并衡量其质量是否稳定均一的技术规定。
附录: 主要收载制剂通则、通用检测方法和指引原则。
2015版中国药典微生物检查方法及培养基变更参照
2015版中国药典微生物检查方法及培养基变更参照1.无菌检查法1.1变更内容1.1.1无菌检查方面，使用胰酪胨大豆肉汤（胰酪胨大豆液体培养基/大豆酪蛋白肉汤培养基）取代改良马丁培养基与硫乙醇酸盐流体培养基配合进行细菌和真菌的全面微生物检测。
1.1.2菌液制备环节，使用胰酪胨大豆肉汤、胰酪胨大豆琼脂取代营养肉汤、营养琼脂进行金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌和大肠埃希氏菌的菌液制备。
1.1.3菌液制备环节，使用沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基取代改良马丁培养基、改良马丁琼脂进行白色念珠菌和黑曲霉菌液的制备，同时对沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂的配方进行了变更。
1.1.4适用性试验中，胰酪胨大豆肉汤使用枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉进行灵敏度检查；硫乙醇酸盐流体培养基使用金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、生孢梭菌、铜绿假单胞菌进行灵敏度检查。
1.2培养基信息2010版2015版无菌检查/菌液制备——硫乙醇酸盐流体培养基无菌检查/菌液制备——改良马丁培养基菌液制备——改良马丁琼脂培养基菌液制备——营养肉汤菌液制备——营养琼脂无菌检查——0.5%葡萄糖肉汤培养基供试品制备——0.1%蛋白胨水培养基无菌检查/菌液制备——硫乙醇酸盐流体培养基无菌检查/菌液制备——胰酪胨大豆肉汤菌液制备——胰酪胨大豆琼脂菌液制备——沙氏葡萄糖琼脂菌液制备——沙氏葡萄糖肉汤无菌检查——0.5%葡萄糖肉汤培养基供试品制备——0.1%蛋白胨水培养基供试品制备——pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液1.3参考文件（国家药典委员会—中国药典2015版附录征求意见稿—1101无菌检查法）http://w w /cms/new scenter/new s/000603.html2.非无菌产品微生物限度检查2.1变更内容2.1.1供试品制备环节，除了pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液、pH7.6磷酸盐缓冲液外，添加了pH7.2磷酸盐缓冲液和胰酪胨大豆肉汤。
中国药典》2015年版通则目录及增修订内容
《中国药典》2015年版通则目录及增修订内容 0100 制剂通则 0101 片剂 0102 注射剂 0103 胶囊剂 0104 颗粒剂 0105 眼用制剂 0106 鼻用制剂 0107 栓剂 0108 软膏剂 0109 乳膏剂 0110 糊剂 0111 吸入制剂 0112 喷雾剂 0113 气雾剂 0114 凝胶剂 0115 散剂 0116 滴丸剂 0117 糖丸 0118 糖浆剂 0120 涂剂 0121 涂膜剂 0122 酊剂 0123 贴剂 0124 贴膏剂 0125 口服溶液剂口服混悬剂口服乳剂 0126 植入剂 0127 膜剂 0128 耳用制剂 0129 洗剂 0130 冲洗剂 0131 灌肠剂 0181 丸剂 0182 合剂 0183 锭剂 0184 煎膏剂(膏滋) 0185 胶剂 0186 酒剂 0187 流浸膏剂与浸膏剂 0189 露剂 0190 茶剂 0200 其他通则 0211 药材和饮片取样法(未修订) 0212 药材和饮片检定通则(第二增补本) 0213 炮制通则(未修订) 0251 药用辅料通则 0261 制药用水 0271 药包材通则(待定) 0272 玻璃容器(待定) 0291 国家药品标准物质通则(第二增补本) 0300 0301 一般鉴别试验(第二增补本) 0400 光谱法 0401 紫外-可见分光光度法 0402 红外分光光度法 0405 荧光分光光度法 0406 原子吸收分光光度法 0407 火焰光度法 0411 电感耦合等离子体原子发射光谱法 0412 电感耦合等离子体质谱法(增订) 0421 拉曼光谱法(新增) 0431 质谱法 0441 核磁共振波谱法 0451 X射线衍射法 0500 色谱法(未修订) 0501 纸色谱法 0502 薄层色谱法 0511 柱色谱法(未修订) 0512 高效液相色谱法 0513 离子色谱法 0514 分子排阻色谱法 0521 气相色谱法 0531 超临界流体色谱法(拟新增) 0532 临界点色谱法(拟新增) 0541 电泳法 0542 毛细管电泳法 0600 物理常数测定法 0601 相对密度测定法(未修订) 0611 馏程测定法 0612 熔点测定法 0613 凝点测定法 0621 旋光度测定法 0622 折光率测定法(未修订) 0631 pH值测定法 0632 渗透压摩尔浓度测定法 0633 黏度测定法 0661 热分析法(第二增补本) 0681 制药用水电导率测定法(未修订) 0682 制药用水中总有机碳测定法(未修订) 0700 其他测定法Other Assays 0701 电位滴定法与永停滴定法(未修订) 0702 非水溶液滴定法 0703 氧瓶燃烧法(未修订) 0704 氮测定法 0711 乙醇量测定法 0712 甲氧基、乙氧基与羟丙氧基测定法(未修订) 0713 脂肪与脂肪油测定法(未修订) 0721 维生素A测定法(未修订) 0722 维生素D测定法(未修订) 0731 蛋白质含量测定法 0800 限量检查法 0801 氯化物检查法(未修订) 0802 硫酸盐检查法(未修订) 0803 硫化物检查法(未修订) 0804 硒检查法(未修订) 0805 氟检查法(未修订) 0806 氰化物检查法 0807 铁盐检查法(未修订) 0808 铵盐检查法(第二增补本) 0821 重金属检查法(第一增补本) 0822 砷盐检查法(未修订) 0831 干燥失重测定法 0832 水分测定法 0841 炽灼残渣检查法(第二增补本) 0842 易炭化物检查法(未修订) 0861 残留溶剂测定法(未修订) 0871 甲醇量检查法 0872 合成多肽中的醋酸测定法(未修订) 0873 2-乙基己酸测定法(未修订) 0900 物理特性检查法 0901 溶液颜色检查法 0902 澄清度检查法 0903 不溶性微粒检查法 0904 可见异物检查法 0921 崩解时限检查法 0922 融变时限检查法(未修订) 0923 片剂脆碎度检查法(未修订) 0931 溶出度测定法(合并释放度测定法) 0941 含量均匀度检查法 0942 最低装量检查法 0951 吸入制剂微细粒子的空气动力学评价方法(原雾滴粒分布测定法) 0952 贴膏剂黏附力测定法 0981 结晶性检查法(未修订) 0982 粒度和粒度分布测定法(第一增补本) 0983 锥入度测定法 1000 分子生物学技术 1001 核酸分子鉴定法(待定) 1100 生物检查法 1101 无菌检查法 1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法 1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法 1107 非无菌药品微生物限度标准 1121 抑菌效力检查法(第三增补本、新增) 1141 异常毒性检查法 1142 热原检查法 1143 细菌内毒素检查法 1144 升压物质检查法 1145 降压物质检查法(未修订) 1146 组胺类物质检查法(新增) 1147 过敏反应检查法(未修订) 1148 溶血与凝聚检查法 1200 生物活性测定法 1201 抗生素微生物检定法(未修订) 1202 青霉素酶及其活力测定法(未修订) 1205 升压素生物测定法 1206 细胞色素C活力测定法(未修订) 1207 玻璃酸酶测定法(未修订) 1208 肝素生物测定法(第三增补本) 1209 绒促性素生物测定法 1210 缩宫素生物测定法 1211 胰岛素生物测定法(未修订) 1212 精蛋白锌胰岛素注射液延缓作用检查法(未修订) 1213 硫酸鱼精蛋白生物测定法(未修订) 1214 洋地黄生物测定法(未修订) 1215 葡萄糖酸锑钠毒力检查法(未修订) 1216 卵泡刺激素生物测定法 1217 黄体生成素生物测定法 1218 降钙素生物测定法 1219 生长激素生物测定法(未修订) 1401 放射性药品检定法(未修订) 1421 灭菌法(未修订) 1431 生物检定统计法(未修订) 2000 中药相关检查方法 2001 显微鉴别法(第二增补本) 2002 中药材DNA条形码分子鉴定法(新增) 2101 膨胀度测定法(第二增补本) 2102 膏药软化点测定法(未修订) 2201 浸出物测定法(未修订) 2202 鞣质含量测定法(第二增补本) 2203 桉油精含量测定法(未修订) 2204 挥发油测定法(未修订) 2301 药材和饮片杂质检查法 2302 灰分测定法(未修订) 2303 酸败度测定法(未修订) 2321 铅、镉、砷、汞、铜测定法(未修订) 2322 元素形态及其价态测定法（拟新增） 2331 二氧化硫残留量测定法 2341 农药残留量测定法（第二增补本+增订） 2351 黄曲霉毒素测定法（第二增补本+增订） 2400 中药注射剂有关物质检查法(拟修订) 2401 中药注射剂蛋白质检查法(待定) 2402 中药注射剂鞣质检查法(待定) 2403 中药注射剂树脂检查法(待定) 2404 中药注射剂草酸盐检查法(待定) 2405 中药注射剂钾离子检查法(待定) 2406 中药注射剂高分子聚合物检查法(待定) 3000 生物制品相关检查方法(待定) 3100 含量测定法 3101 固体总量测定法 3102 唾液酸测定法 3103 磷测定法 3104 硫酸铵测定法 3105 亚硫酸氢钠测定法 3106 氢氧化铝(或磷酸铝)测定法 3107 氯化钠测定法 3108 枸橼酸离子测定法 3109 辛酸钠测定法 3110 乙酰色氨酸测定法 3111 苯酚测定法 3112 间甲酚测定法 3113 硫柳汞测定法 3114 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯含量测定法 3115 O-乙酰基测定法 3116 己二酰肼含量测定法 3117 高分子结合物含量测定法 3118 人血液制品中糖及糖醇测定法 3119 人血白蛋白多聚体测定法 3120 人免疫球蛋白类制品IgG单体加二聚体测定法 3121 人免疫球蛋白类制品甘氨酸含量测定法 3122 重组人粒细胞刺激因子蛋白质含量测定法 3123 组胺人免疫球蛋白中游离磷酸组胺测定法 3124 IgG含量测定法 3200 化学残留物测定法 3201 乙醇残留量测定法 3202 聚乙二醇残留量测定法 3203 聚山梨酯80残留量测定法 3204 戊二醛残留量测定法 3205 磷酸三丁酯残留量测定法 3206 碳二亚胺(EDAC)残留量测定法 3207 游离甲醛测定法 3208 人血白蛋白铝残留量测定法 3300 微生物检查法 3301 支原体检查法 3302 病毒外源因子检查法 3303 鼠源性病毒检查法 3400 生物测定法 3401 免疫印迹法 3402 免疫斑点法 3403 免疫双扩散法 3404 免疫电泳法 3405 肽图检查法 3406 质粒丢失率检查法 3407 SV40核酸序列检查法 3408 外源性DNA残留量测定法 3409 抗生素残留量检查法(培养法) 3410 激肽释放酶原激活剂测定法 3411 抗补体活性测定法 3412 牛血清白蛋白残留量测定法 3413 大肠杆菌菌体蛋白质残留量测定法 3414 假单胞菌菌体蛋白质残留量测定法 3415 酵母工程菌菌体蛋白质残留量测定法 3416 类A血型物质测定法 3417 鼠IgG残留量测定法 3418 无细胞百日咳疫苗鉴别试验(酶联免疫法) 3419 抗毒素、抗血清制品鉴别试验(酶联免疫法) 3420 A群脑膜炎球菌多糖分子大小测定法 3421 伤寒Vi多糖分子大小测定法 3422 b型流感嗜血杆菌结合疫苗多糖含量测定法 3423 人凝血酶活性检查法 3424 活化的凝血因子活性检查法 3425 肝素含量测定法 3426 抗A、抗B血凝素测定法 3427 人红细胞抗体测定法 3428 人血小板抗体测定法 3429 猴体神经毒力试验 3500 生物活性/效价测定法 3501 重组乙型肝炎疫苗(酵母)体外相对效力检查法 3502 甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力检查法 3503 人用狂犬病疫苗效价测定法 3504 吸附破伤风疫苗效价测定法 3505 吸附白喉疫苗效价测定法 3506 类毒素絮状单位测定法 3507 白喉抗毒素效价测定法 3508 破伤风抗毒素效价测定法 3509 气性坏疽抗毒素效价测定法 3510 肉毒抗毒素效价测定法 3511 抗蛇毒血清效价测定法 3512 狂犬病免疫球蛋白效价测定法 3513 人免疫球蛋白中白喉抗体效价测定法 3514 人免疫球蛋白Fc段生物学活性测定法 3515 抗人T细胞免疫球蛋白效价测定法(E玫瑰花环形成抑制试验) 3516 抗人T细胞免疫球蛋白效价测定法(淋巴细胞毒试验) 3517 人凝血因子Ⅱ效价测定法 3518 人凝血因子Ⅶ效价测定法 3519 人凝血因子Ⅸ效价测定法 3520 人凝血因子Ⅹ效价测定法 3521 人凝血因子Ⅷ效价测定法 3522 重组人促红素体内生物学活性测定法 3523 干扰素生物学活性测定法 3524 重组人白介素-2生物学活性测定法 3525 重组人粒细胞刺激因子生物学活性测定法 3526 重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子生物学活性测定法 3527 重组牛碱性成纤维细胞生长因子生物学活性测定法 3528 重组人表皮生长因子生物学活性测定法 3529 重组链激酶生物学活性测定法 3600 特定生物原材料/动物 3601 无特定病原体鸡胚质量检测要求 3602 实验动物微生物学检测要求 3603 实验动物寄生虫学检测要求 3604 新生牛血清检测要求 3611 细菌生化反应培养基 8000 试剂和标准物质(待定) 8001 试药 8002 试液 8003 试纸 8004 缓冲液 8005 指示剂与指示液 8006 滴定液 8061 标准物质 9000 指导原则 9001 原料药与药物制剂稳定性试验指导原则(待定) 9011 药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则(待定) 9012 生物样品定量分析方法指导原则(待定) 9013 缓释、控释和迟释制剂指导原则(未修订) 9014 微粒制剂指导原则(待定) 9015 注射剂制备指导原则(拟新增，待定) 9101 药品质量标准分析方法验证指导原则 9102 药品杂质分析指导原则 9103 药物引湿性试验指导原则(未修订) 9104 近红外分光光度法指导原则(未修订) 9105 多晶型药品的质量控制技术与方法指导原则(新增) 9106 基于基因芯片技术的药物安全性和有效性评价技术指导原则(新增) 9201 药品微生物检验替代方法验证指导原则(未修订) 9202 微生物限度检查法应用指导原则 9203 药品微生物实验室质量管理指导原则(第三增补本) 9204 微生物鉴定指导原则(新增) 9205 药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则(新增) 9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则(新增) 9301 注射剂安全性检查法应用指导原则 9302 有害残留物限量制定指导原则(新增) 9401 中药生物活性测定指导原则 9501 正电子类放射性药品质量控制指导原则(未修订) 9502 锝[99mTc]放射性药品质量控制指导原则(未修订) 9701 药用辅料性能指标研究指导原则(第三增补本、拟新增) 9901 国家药品标准物质制备指导原则(第二增补本)。
2015年版《中国药典》微生物限度检查法洁净环境及计数培养基修订分析探讨
2015年版《中国药典》微生物限度检查法洁净环境及计数培养基修订分析探讨2015年版《中国药典》将于2015年7月起开始实施：该版药典对微生物限度检查法检查时的洁净环境、培养基及检查方法进行了修订。
其中洁净环境要求由10000级背景下的100级单向流（2010年版）修订为受控背景下的不低于B 级环境（2015年版）；计数培养基由营养琼脂/玫瑰红钠琼脂培养基（2010年版）修订为胰酪大豆琼脂培养基/沙氏葡萄糖琼脂培养基（2015年版）。
该文旨在分析2015年版中国药典与2010年版中国药典在非无菌产品微生物限度检查时洁净环境与计数培养基的异同点，为更规范执行2015年版中国药典提供参考。
标签：中国药典；2015年版；2010年版；洁净环境；培养基[Abstract] The Chinese Pharmacopoeia （2015 edition）will be implemented in July，2015 which have revised in some part，including clean environment and medium in microbial limit test. The clean environment was rectified from 10000 background plus 100 degree to control background plus A or B environment. The counting medium was changed from nutrient medium and rose bengal agar to trypticase soy agar （TSA）medium and sabouraud dextrose agar medium. In this part，we analyzed the differences of the clean environment and counting medium between 2010 and 2015 edition Chinese Pharmacopoeia for normative enforcement.[Key words] Chinese Pharmacopoeia；2010 edition；2015 edition；Clean environment；Medium微生物限度检查是用于检查非无菌制剂及其原料、辅料等是否符合规定的方法[1-2]。
《中华人民共和国兽药典》2015年版三部培养基部分增修订概况
［ 收稿 日期］２ ０ １ ７ — ０ ２ —１ ５ ［ 文献标识码 ］ Ａ ［ 文章编号］ １ ０ ０ ２ —１ ２ ８ ０（ ２ ０ １ ７ ）０ ５ — ０ ０ ６ ８ — ０ ５ ［ 中图分类号］ ￥ ８ ５ １ ． ６ ６
［ 摘
要］ 解读《 中华人 民共和国兽药典》 ２ ０ １ ５ 年版三部培养基质量标准的增修订 内容和特点 ， 以
・
６ ８‘
～
中国兽药杂 志 ２ ０ １ ７年 ５月第 ５ １ 卷第 ５ 期
ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ０ ｆ Ｖ ｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎ ａ ｒ ｖ Ｄ ｒ ｕ ｇ
———————— ———————— —
— — — — — — — — — — — — — — — — — — —
ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ｂ ｅ ｔ ｗｅ ｅ ｎ ｔ ｈ ｅ ｔ ｗｏ Ｖｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎ ａ ｙ ｒ Ｐｈ ａ ｒ ｍａ ｃ ｏ ｐ ｏ ｅ ｉ ａ ｏ ｆ ２ ０１ ５ ｅ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ２ ０１ ０ ｅ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ．Ｔ ｈ ｅ ａ ｔｉ ｒ ｃ ｌ ｅ ａ ｌ ｓ ｏ ｇ ａ ｖ ｅ ｓ ｏ ｍｅ
—
—
ｄ ｏ ｉ ： １ ０． １ １ ７ ５１ ／Ｉ Ｓ Ｓ Ｎ． １ ０ ０ ２—１ ２８ ０． ２ ０１ ７． ５． １ ４
《 中华 人 民共 和 国兽 药典 ｝ ２ ０ １ ５年 版 三 部 培 养基 部 分 增 修 订 概 况
万建 青 ， 朱 真， 杨挺英 ， 黄 小洁
（ 中 国 兽 医 药 品 监 察所 ， 北京 １ ０ ０ ０ ８ １ ）
便 广 大使 用者 了解 和掌 握培养 基 质量标 准 的变 化 ， 并 为《中华 人 民共 和 国兽 药典 ｝ ２ ０ ２ ０年版 的编 制
《中国药典》2015年版微生物培训
4.按制备方法分类
（1）商品化即用型配培养基 以即用形式或融化后即用形式置于容器（例如平皿、试管或其他容器）
内供应的液体、固体或半固体培养基： ——完全可即用的培养基 ——需重新融化后的培养基（如用于平板倾注技术） ——使用前需重新融化并分装（如倾注到平皿）的培养基 ——使用前需重新融化，添加物质并分装的培养基
（3）液体培养基：固体培养基的对应词，是微生物或动植 物细胞的液状培养基。它具有通气培养、震荡培养的优点。 在静止的条件下，在菌体或培养细胞的周围，形成透过养 分的壁障，养分的摄入受到阻碍。由于在通气或在振荡的 条件下，可消除这种阻碍以及增加供氧量，所以有利于细 胞生长，提高生产量。
3.按用途分类
在特定条件下培养基对测试菌株的反应。
培养基的定义和分类
培养基的分类依据
1.按组成成分分类 2.按状态分类 3.按用途分类 4.按制备方法分类
1.按组成成分分类
（1）纯化学培养基：有已知分子结构的纯度的化学成分配 制而成的培养基。
（2）未定义和部分定义的化学培养基：全部或部分由天然 物质、加工过的物质或其他不纯的化学物质构成的培养基。
（1）运输培养基：在取样后和实验室处理前保护和维持微 生物活性且不允许明显增值的培养基。运输培养基中通常 不允许包含使微生物增值的的物质，但是培养基应能保护 保护菌株。（例如：缓冲甘油-氯化钠溶液）
（2）保藏培养基：由于在一定期限内保护和维持微生物活 力，防止长期保存对其的不利影响，或使其在长期保存后 容易复苏的培养基。（例如：营养琼脂斜面）
02Part One 药品微生物的检验与控制
药品微生物（Pharmaceutical Microbiology）
药品环境对微生物的影响 消毒与灭菌 无菌保障技术 微生物监控 微生物检验
2015版中国药典微生物限度
1.4.2供试品检查
• 供试液制备
– ⑵ 水不溶性非油脂类供试品
• 取供试品， 用 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨 缓冲液，或 pH7.2 磷酸盐缓冲液，或胰酪 大豆胨液体培养基制备成 1:10 供试液。 分散力较差的供试品，可在稀释液中加入 表面活性剂如 0.1%的聚山梨酯 80，使供 试品分散均匀。若需要，调节供试液 pH 值至 6～8。必要时，用同一稀释液将供 试液进一步 10倍系列稀释。
1.3.3计数方法适用性试验
1. 供试液制备 2. 接种和稀释 3. 抗菌活性的去除与灭活 4. 供试品中微生物的回收
– 平皿法 – 薄膜过滤法 – 最可能数法（MPN 法）
5. 结果判断
1.4 供试品检查
• 1.4.1检验量
– 检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml
或cm²）。
– 除另有规定外,一般供试品的检验量为10g 或
• 需氧菌总数是指胰酪大豆胨琼脂培养基上生长的 总菌落数（包括真菌菌落数）；
• 霉菌和酵母菌总数是指沙氏葡萄糖琼脂培养基上 生长的总菌落数（包括细菌菌落数）。
• 若因沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的细菌使霉菌 和酵母菌的计数结果不符合微生物限度要求，可 使用含抗生素（如氯霉素、庆大霉素）的沙氏葡 萄糖琼脂培养基或其他选择性培养基（如玫瑰红 钠琼脂培养基）进行霉菌和酵母菌总数测定。
1.4.2供试品检查
• 供试液制备
– ⑷需用特殊方法制备供试液的供试品
• 膜剂供试品 • 肠溶及结肠溶制剂供试品 • 气雾剂、喷雾剂供试品 • 贴膏剂供试品
1.4.2供试品检查
1. 平皿法
– 平皿法包括倾注法和涂布法。 – 除另有规定外，取规定量供试品，按方法适用性
试验确认的方法进行供试液制备和菌数测定，每 稀释级每种培养基至少制备2个平皿。 – 培养和计数 除另有规定外，胰酪大豆胨琼脂培养 基平板在30～35℃培养3~5天，沙氏葡萄糖琼脂 培养基平板在20～25℃培养5 ~7天， 观察菌落 生长情况,点计平板上生长的所有菌落数，必要时 可适当延长培养时间至7 天进行菌落计数并报告 。菌落蔓延生长成片的平皿不宜计数。点计菌落 数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌 数报告规则报告菌数。 – 若同稀释级两个平皿的菌落数平均值不小于15， 则两个平皿的菌落数不能相差1 倍或以上。
《中国药典》2015年版微生物基本知识
供试品检查部分-计数标准
2010版
无规定
2015版
增加： 各品种项下要求执行的微生物限度标准解释如下： 101cfu为可接受的最大限度为20； 102cfu为可接受的最大限度为200； 103cfu为可接受的最大限度为2000；以此类推。 若供试品的需氧菌总数、霉菌及酵母菌总数的检查结果均符 合该品种项下的规定，判供试品符合规定；若其中任何一项不 符合该品种项下的规定，判供试品不符合规定。
不含中和剂及灭活剂的相应稀释液 替代供试液，按试验组操作。 中和剂、灭活剂及表面活性剂的稀 释液中加入规定量菌液
接种和稀释
消除供试品的抑菌活性的方法
（1）增加稀释剂和培养基的用量； （2）加入中和剂或灭活剂； （3）采用薄膜过滤法和冲洗； （4）综合上述措施。
●根据供试品须符合的微生物限度标准和菌数报告规则，在不影响
2015版
若因沙氏葡萄糖琼脂培养基 上生长的细菌使霉菌及酵母 菌的计数结果不符合微生物 限度要求，可使用含抗生素 （如氯霉素、庆大霉素）的 沙氏葡萄糖琼脂培养基或选 择性培养基（如玫瑰红钠琼 脂培养基）进行霉菌和酵母 菌总数测定。使用选择性培 养基时，应进行培养基适用 性检查。如采用MPN法，测 定结果为需氧菌总数。
微生物检查体系的调整
2010版
分类依据 质控分类 检验体系 项目1 按微生物类别分 细菌、真菌 选择培养、或者人为区分 细菌数 营养琼脂
2015版
按营养条件分 需气、厌气菌 直接与培养条件对应 需氧菌总数 胰酪大豆胨琼脂 （TSA）
项目2
霉菌及酵母菌总数 玫瑰红钠琼脂
容易造成漏检
霉菌及酵母菌总数 沙氏葡萄糖琼脂 （SDA)
供试品检查部分-结果判断
2010版
《中国药典》2015年版微生物测定修订情况
常州药检
一、微生物计数法
分别接种不大于100cfu的铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球 菌、枯草芽孢杆菌菌液至胰酪大豆胨琼脂培养基平 板，每一试验菌株平行制备2个平皿，30～35℃培养 不超过3天。同时，用相应的对照培养基代替被检培 养基进行上述试验。 分别接种不大于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉菌液至 胰酪大豆胨琼脂培养基平板，每一试验菌株平行制备 2个平皿，30～35℃培养不超过5天。同时，用相应 的对照培养基代替被检培养基进行上述试验。
常州药检
一、微生物计数法 计数培养基适用性检查
菌种：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽 孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉，不得超过5代。
常州药检
一、微生物计数法
常州药检
一、微生物计数法
常州药检
一、微生物计数法
取其新鲜培养物用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或 0.9无菌氯化钠溶液制成适宜浓度菌悬液。黑曲霉制 备时在缓冲液或氯化钠溶液中加入0.05%（v/v）聚山 梨酯80。 菌液在室温下2小时内使用，2～8℃时可在24h内使用， 黑曲霉孢子悬液可2～8℃保存，在验证过的贮存期内 使用。
MPN法
常州药检
一、微生物计数法
平皿法：包括倾注法和涂布法。每株菌每种培养基 至少制备2个平皿，以算术平均值计算。使用涂布 法应采用适宜的方法使培养基表面干燥，且每个 平皿接种的供试液不少于0.1ml。
常州药检
一、微生物计数法
薄膜过滤法：一般取相当于1g（ml、10cm2）的供试 品，（若供试品中所含的菌数较多时，供试液可 酌情减量）加至适量稀释液中，混匀，过滤。用 适量冲洗液冲洗。 每株菌每种培养基至少制备一张滤膜。 同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。
常州药检
药典2015版三部增修订内容
附件:《中国药典》2015年版（三部）增修订内容序号品种名称2015年版药典三部内容拟增修订内容1 A群脑膜炎球菌多糖疫苗2.3.1 配制用无菌、无热原乳糖和灭菌注射用水稀释原液。
每1次人用剂量含多糖应不低于30μg，乳,2.5-3.0mg。
2.3.1配制用适宜稀释剂稀释原液。
每1次人用剂量含多糖30μg，可加适量乳糖等。
2 A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗2.3.1 配制用无菌、无热原乳糖和灭菌注射用水稀释原液。
每1次人用剂量含A群多糖50μg、C群多糖50μg、乳糖5-10mg。
2.3.1配制用适宜稀释剂稀释原液。
每1次人用剂量含A群多糖50μg，C群多糖50μg，可加适量乳糖等。
3 A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗2.3.2配制用无菌、无热原乳糖溶液和灭菌注射用水或生理氯化钠溶液稀释原液即为半成品。
每1次人用剂量含A群多糖不低于10μg，C群多糖不低于10μg，乳糖5-10mg。
2.3.2配制用适宜稀释剂稀释原液。
每1次人用剂量含A群多糖10μg，C群多糖10μg，可加适量乳糖等4 ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗2.3.1 配制用无菌、无热原乳糖溶液和灭菌注射用水稀释原液即为半成品。
每1次人用剂量含A群多糖50μg，C群多糖50μg，Y群多糖50μg，W135群多糖50μg，乳糖2.5-10mg。
2.3.1 配制用适宜稀释剂稀释原液。
每1次人用剂量含A群多糖50μg，C群多糖50μg，Y群多糖50μg，W135群多糖50μg，可加适量乳糖等。
5 吸附白喉疫苗 2.1.4.1培养特性在吕氏琼脂培养基上生长的菌落应呈灰白色、圆形突起、表面光滑、边缘整齐。
在亚碲酸钾琼脂培养基上生长的菌落应呈灰黑色、具金属光泽。
在血琼脂培养基上生长的菌落呈灰白色、不透明、不产生α溶血素。
2.1.4.1培养特性在吕氏培养基上生长的菌落应呈灰白色、圆形突起、表面光滑、边缘整齐。
在亚碲酸钾琼脂培养基上生长的菌落应呈灰黑色、具金属光泽。
2015版药典培养基
大豆胨3 葡萄糖2.5
氯化钠5
取本品30g，加1L蒸馏水，加热溶解。
胰酪大豆胨琼脂培养基(STA)
胰蛋白胨15.0 琼脂15.0
大豆胨5.0 氯化钠5.0
取本品40.0g，加1L蒸馏水，加热溶解。
沙氏葡萄糖液体培养基
蛋白胨10.0
葡萄糖20.0
取本品30.0g，加1L蒸馏水，加热溶解。
取本品32g，加1L蒸馏水，加热溶解。
玫瑰红钠琼脂培养基
蛋白胨5 硫酸镁0.5
葡萄10 玫瑰红钠0.0133
磷酸二氢钾1 琼脂14
取本品30.5g，加1L蒸馏水，加热溶解。
胆盐乳糖培养基
蛋白胨20 磷酸氢二钾4
氯化钠5 磷酸二氢钾1.3
乳糖5 去氧胆酸钠0.5
取本品35.8g，加1L蒸馏水，加热溶解。
沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）
动物组织胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物10.0
葡萄糖40.0琼脂15.0
取本品65.0g，加1L水微温溶解。
麦康凯琼脂培养基
胰酶解明胶 17.0
胰酶解酪蛋白1.5
动物组织胃酶消化物1.5
乳糖10.0氯化钠10.0
混合胆盐1.5琼脂13.5
中性红0.03 结晶紫0.001
培养基名称
成分（g/l）
用法
PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液
蛋白胨1 磷酸氢二钠7.23
磷酸二氢钾3.56 氯化钠4.3
取本品16.09g，加1L蒸馏水，加热溶解。
硫乙醇酸盐流体培养基
胰酪胨15 L-胱氨酸0.5
酵母浸粉5 琼脂0.75
硫乙醇酸钠0.5 葡萄糖5
氯化钠2.5 刃天青0.001
取本品29.25g，加1L蒸馏水，加热煮沸使其完全溶解。
2015版药典培养基
紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基 颗粒 Violet Red Bile Glucose Agar
麦康凯液体培养基 MaConkey Broth
麦康凯液体培养基 颗粒 MaConkey Broth
麦康凯琼脂培养基 MaConkey Agar
HB4114-19 HBKP4114-19 HB0126-4 HBKP0126-4 HB0116-4 HBKP0116-4 HB8313-5 HBKP8313-5 HB6238-10 HBKP6238-10 HB4198-11 HBKP4198-11 HB4105-6 HBKP4105-6 HB4088-62 HB4128-22 HBKP4128-22
沙氏琼脂培养基(SDA) Sabouraud Agar
大豆酪蛋白琼脂（TSA）培养基平板（9cm） TSA
营养琼脂平板 9cm TSA
沙氏琼脂平板（9cm） Sabouraud Agar
含青霉素酶 TSA 平板（9cm） Tryptose Soya Agar
TSA 表面接触皿（65mm） TSA
TSA 表面接触皿（7.5cm） TSA
规格 250g 250g 1kg 250g 1kg 250g 10 个/包 10 个/包 10 个/包 10 个/包 10 个/包 10 个/包 10 个/包 10 个/包 10 个/包 10 个/包 10 个/包 10 个/包
价格(元) 产品说明及用途
120
用于医药工业洁净室（区）沉降菌的测试 150
HBPP5190-100
硫乙醇酸盐流体培养基
HBPP5191-100 HBPP5222-500 HBPP5222-250
中国药典2015版微生物检测所用菌种和培养基
肠道菌计数和肠杆菌科鉴别
10
麦康凯液体培养基
肠道致病菌的增菌培养
11
麦康凯琼脂培养基
肠道致病菌的选择性分离、培养
12
木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基
沙门氏菌、志贺氏菌的选择性分离培养
13
三糖铁琼脂培养基（TSI）
肠杆菌糖发酵及硫化氢反
14
溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基（十六烷基三甲基溴化铵培养基）
绿脓杆菌的选择性分离培养
15
甘露醇氯化钠琼脂培养基 （甘露醇盐琼脂培养基）
金黄色葡萄球菌选择性分离培养
16
哥伦比亚琼脂培养基
梭菌的选择性分离培养
17
梭菌增菌培养基
梭菌增菌培养
18
沙门菌增菌液体培养基
药品或生物制品中沙门氏菌选择性增菌
19
念珠菌显色培养基
念珠菌分离和鉴定
1.3抗生素检定培养基
编号
名称
用途
多粘菌素 B 效价测定
15
制霉素检定培养基
制霉素效价测定
16
麦迪/麦白霉素检定培养基
麦迪（白）霉素效价测定
17
阿奇霉素检定培养基
阿奇霉素效价测定
18
生芽孢琼脂斜面培养基
快速生芽孢
1.4支原体检查
编号
名称
用途
1
支原体半流体培养基
生物制品无菌试验，检查支原体
2
精氨酸支原体肉汤基础培养基
培养支原体
3
肺炎支原体肉汤基础培养基
制备药品制品的稀释液或冲洗液
9
PH7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液
制备药品制品的稀释液或冲洗液2.2ຫໍສະໝຸດ 生物限度检查编号名称
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
2015 版中国药典微生物检查方法及培养基变更参照
无菌检查法
1.1 变更内容
1.1.1 无菌检查方面，使用胰酪胨大豆肉汤（胰酪胨大豆液体培养基/大豆酪蛋白肉汤培养基）取代改良马丁培养基与硫乙醇酸盐流体培养基配合进行细菌和真菌的全面微生物检测。
1.1.2菌液制备环节，使用胰酪胨大豆肉汤、胰酪胨大豆琼脂取代营养肉汤、营养琼脂进行金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌和大肠埃希氏菌的菌液制备。
1.1.3菌液制备环节，使用沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基取代改良马丁培养基、改良马丁琼脂进行白色念珠菌和黑曲霉菌液的制备，同时对沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂的配方进行了变更。
1.1.4适用性试验中，胰酪胨大豆肉汤使用枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉进行灵敏度检查；硫乙醇酸盐流体培养基使用金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、生孢梭菌、铜绿假单胞菌进行灵敏度检查。
1.2 培养基信息
2. 非无菌产品微生物限度检查
2.1 变更内容
2.1.1供试品制备环节，除了pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液、pH7.6磷酸盐缓冲液外，添加了pH7.2磷酸盐缓冲液和胰酪胨大豆肉汤。
2.1.2菌液制备环节，使用胰酪胨大豆肉汤、胰酪胨大豆琼脂取代营养肉汤、营养琼脂进行金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、乙型副伤寒沙门氏菌和大肠埃希氏菌的菌液制备；使用沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基取代改良马丁培养基、改良马丁琼脂进行白色念珠菌和黑曲霉菌液的制备，同时对沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂的配方进行了变更；使用梭菌增菌培养基取代硫乙醇酸盐流体培养基进行生孢梭菌菌液的制备。
2.1.3微生物计数环节，使用胰酪胨大豆琼脂取代营养琼脂进行需氧菌计数；增加需氧菌的
MPN 法计数，该方法使用胰酪胨大豆肉汤；使用沙氏葡萄糖琼脂取代玫瑰红钠琼脂进行霉菌
和酵母菌总数测定，同时增加玫瑰红钠琼脂、沙氏葡萄糖琼脂(含抗生素)两种选择性培养基于
对因沙氏葡萄糖琼脂上生长的细菌使霉菌和酵母菌的计数结果不符合微生物限度要求情况下
的霉菌和酵母菌计数；取消了使用酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD)对酵母菌进行计数的试验环节。
同时2015版中使用“需氧菌”取代了以往的“细菌”，从而使得胰酪胨大豆琼脂计数所得不仅仅代表细菌，而是还包含真菌等其它在此培养基上生长的微生物菌落。
2.1.3 增加了耐盐革兰氏阴性菌的检验项目。
2.1.5简化了大肠埃希氏菌的检验流程。
2.1.6取消了对大肠菌群的检验。
2.1.7变更了沙门氏菌检验中前增菌、增菌、分离用的所有培养基类别。
2.1.8变更了铜绿假单胞菌检验中增菌、分离用的培养基类别，取消了绿脓菌素的直接试验。
2.1.9取消了金黄色葡萄球菌的选择性增菌，改为无选择性增菌，同时变更了分离培养基。