1.血液标本采集处理标准操作规程

血液标本采集及处理标准操作规程

目的：血清(ELISA或化学发光法检测蛋白表达检测)；血浆(游离核酸的检测)；有核细胞(循环肿瘤细胞的检测)。

适用范围：肿瘤病人血液标本采集及处理。

责任人：

操作流程：

1.仪器设备：

高速低温离心机、－80℃冰箱。

2.材料与试剂：

试剂：10×红细胞裂解液（Cat NO:420301；试剂公司：Biolegend）

胎牛血清（100ml；试剂公司：天津康源生物技术有限公司） DMEM(500ml；试剂公司:Thermo Cat NO:SH30033.01B)

DMSO(100ml；试剂公司:

材料：4ml血清真空采血管(黄盖无抗凝剂)

4ml血浆真空采血管(紫盖含抗凝剂)

移液器、50ml离心管、1ml冻存管、吸头等

3.样本采集：

3.1分离血清

3.1.1血清管(黄盖无抗凝剂)，标本于4℃，3300rpm离心10分钟。

3.1.2吸取血清分装于1.5ml 冻存管内，每管300 µl，分装4管，若

血清量较多，则将剩余血清全部加入最后一个冻存管中。

3.1.3贴条形码标签，-80℃储存。

3.2分离血浆

3.2.1血浆管(紫盖含抗凝剂)，标本于4℃，3300rpm离心10分钟。

3.2.2吸取血浆分装于1.0ml 冻存管内，每管300 µl，分装4管，若血浆量较多，则将剩余血清全部加入最后一个冻存管中。

3.2.3贴条形码标签， -80℃储存。

3.2.4采血管扣紧管盖，放存旁边，准备下一步分离有核细胞的操作。

3.3分离有核细胞

按每4ml全血需要配制40ml用量稀释红细胞裂解液。

3.3.1取50ml离心管, 加36ml去离子水，加4ml红细胞裂解液混匀。

3.3.2用移液器将分离血浆后剩余血液转移至装有裂解液离心管中，轻轻颠

倒混匀，室温静置10min（观察裂解效果适当延长裂解时间，液体呈现透明状为宜）。

3.3.3于4℃，800g离心5min，吸去上清，加入4mlDMEM轻轻吹打混匀

沉淀。

3.3.4于4℃，800g离心5min，吸去上清。

3.3.5将4ml细胞冻存液（400µlDMSO＋3600µl胎牛血清；血液和冻存液体积比为1:1）加入离心管里，轻轻吹打混匀，按1ml分装到4个冻存管里。

3.3.6贴条形码标签，放入细胞程序降温盒-80℃冰箱过夜，第二天转入液氮罐保存。

注：细胞冻存液应当新鲜配制，胎牛血清：DMSO=9:1