艾滋病检测技术与应用共81页
艾滋病的检测方法与应用课件
艾滋病的检测方法与应用课件一、引言艾滋病（AIDS）是由人类免疫缺陷病毒（HIV）引起的一种严重的传染性疾病，对人类健康造成了巨大威胁。
早期准确的检测对于艾滋病的诊断、治疗和预防至关重要。
本课件将详细介绍艾滋病的检测方法及其应用，帮助大家更好地了解这一重要领域。
二、艾滋病病毒（HIV）的基本特征HIV 是一种逆转录病毒，主要攻击人体的免疫系统，特别是CD4+T 淋巴细胞。
HIV 感染后，会在体内经历一个潜伏期，期间可能没有明显症状，但病毒仍在不断复制和破坏免疫系统。
当免疫系统受到严重损害时，就会发展为艾滋病，出现各种机会性感染和肿瘤。
三、艾滋病的检测方法（一）抗体检测1、酶联免疫吸附试验（ELISA）这是最常用的初筛试验之一。
通过检测血液中是否存在 HIV 抗体来判断是否感染。
ELISA 具有较高的敏感性和特异性，但可能会出现假阳性结果，因此初筛阳性后通常需要进行确证试验。
2、免疫印迹试验（Western blot）作为确证试验，用于确认 ELISA 初筛阳性的结果。
它能够检测出针对 HIV 不同蛋白的抗体，结果更加准确可靠。
（二）核酸检测1、病毒载量检测通过测量血液中HIV RNA 的拷贝数，反映病毒在体内的复制水平。
常用于监测治疗效果、评估疾病进展和判断预后。
2、核酸定性检测主要用于早期诊断，特别是在感染后的窗口期（即从感染到能够检测出抗体的时间段），此时抗体检测可能为阴性，但核酸检测有可能检测到病毒核酸。
（三）抗原检测检测血液中的 HIV 抗原，如 p24 抗原。
在感染早期，抗原先于抗体出现，因此抗原检测可缩短窗口期，但单独使用的敏感性相对较低，常与抗体检测联合应用。
（四）快速检测1、快速抗体检测使用试纸或试剂盒，操作简便，可在短时间内得到结果，适用于现场检测和基层医疗机构。
2、口腔黏膜渗出液检测采集口腔黏膜渗出液进行检测，无需采血，方便快捷，但准确性略低于血液检测。
四、艾滋病检测的应用（一）诊断结合临床症状、流行病学史和检测结果进行综合判断。
hiv 临床检测技术进展及应用
hiv 临床检测技术进展及应用HIV临床检测技术进展及应用HIV（Human Immunodeficiency Virus，人类免疫缺陷病毒）是一种危害人类健康的病毒，它会导致艾滋病（AIDS）的发生。
随着科学技术的不断进步，HIV的临床检测技术也在不断更新和完善，为准确检测HIV感染提供了更好的手段。
本文将就HIV临床检测技术的进展及应用进行探讨。
一、传统的HIV检测技术传统的HIV检测技术包括酶联免疫吸附法（ELISA）和西方印迹法（Western Blot）。
ELISA是最常用的HIV抗体检测方法，通过检测患者血清中是否存在HIV抗体来判断是否感染HIV。
而Western Blot则是用于确证ELISA检测结果的一种辅助检测方法，能够识别和鉴定特定蛋白质。
然而，传统的HIV检测技术存在着一定的缺陷，比如需要多次检测来确诊、耗时长、误差率高等。
因此，科研人员们一直在努力寻找更加准确、快速、便捷的HIV检测技术。
二、新型HIV检测技术近年来，随着生物技术的不断发展，新型的HIV检测技术不断涌现。
其中，核酸检测技术被认为是目前HIV检测的一项重要突破。
核酸检测技术指的是利用PCR（Polymerase Chain Reaction）等方法检测HIV病毒核酸，从而实现早期感染的准确诊断。
此外，流式细胞术（Flow Cytometry）也被广泛运用于HIV检测领域。
流式细胞术能够对血液样本中的细胞进行高通量、高灵敏度的检测，可以更快速地筛查出HIV感染者。
三、HIV检测技术的应用新型的HIV检测技术不仅提高了HIV感染的检测准确率和速度，也为HIV病毒的治疗和控制提供了更好的手段。
通过及时检测和诊断，可以让感染者尽早接受到抗病毒治疗，延缓疾病进展，提高生活质量。
此外，HIV检测技术的进步也为HIV预防工作提供了重要支持。
通过对易感染人群的定期检测，可以及早发现HIV感染者，采取有效措施阻断病毒传播链，有效降低HIV在人群中的传播风险。
艾滋病检验技术现状及应用
艾滋病主要是因为人免疫缺陷病毒感染导致的，造成人体免疫功能缺陷，疾病后期会继发肿瘤、中枢神经系统病变以及多重感染。
HIV可以通过血液传播、性传播、母婴传播、静脉吸毒等途径进行传播，艾滋病可以对人体的免疫系统造成严重破坏，从而使患者反复的发生感染性疾病，目前，对于艾滋病来说，均无疫苗预防，无特效药物解决该疾病，只能够根据不同的方案延长患者的生命，提升其生活质量，对HIV的感染程度进行控制，这也是临床中艾滋病的主要研究重点。
而想要控制艾滋病的病情进展速度，最重要的是做好及时检验，目前现有的检验方法较多，目前应用的常用方法包括以下几点。
临床中通过对患者的血清中的HIV抗体的检测是主要的一种检查是否存在艾滋病毒感染的一种方法，但是，检测方法的准确度也不尽相同，酶联免疫法是一种传统的艾滋病抗体的检测方法，化学发光免疫分析法是一种新兴的检测方法。
酶联免疫法：抗原或者抗体和固相载体表面结合，使其免疫活性得以维持。
抗原以及抗体可以和酶连接和酶标抗原、抗体，其免疫活性、酶活性均得以保留，在测定时，受体标本以及酶标抗原按不同步骤和固相载体表面抗原或抗体发生反应，通过洗涤，分开抗原抗体复合物和其他物质，最后可结合在固相载体上的酶量以及标本中的受检物质的量呈一定比例。
然后加入酶反应底物后，底物会被酶催化成有色产物，产物的量和标本中的受检物质的量具有直接联系，故可以观察颜色深浅进行定量分析。
化学发光免疫分析法：该方法的灵敏度以及特异性均较高，光信号持续时间长、检验方法简单、结果稳定性高、误差率低、安全性高、使用周期长，可监测各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶等，属于最新免疫测定技术，目前该技术广泛应用于临床免疫检测中。
HIIV抗体确证实验：①免疫印迹试验:《艾滋病检测技术规范》中,免疫印迹试验是常用的确证HIV的方法,被认为是对其他检测方法效能检验的金标准,免疫印迹试验相较酶联免疫法,针对不同H1V抗原组分检测,故特异度和灵敏度均居较高水平,但相较酶联免疫法,免疫印迹试验的步骤有较高的复杂性,少数会因误判和操作不当,引发假阳性。
艾滋病抗体快速检测技术应用
－保密，《艾滋病防治条例》
－任何一种法定传染病都要上报； －查重，掌握人群感染情况； －为后续服务提供凭证。 • 是不是快死了？
－慢性病、可以治疗
－“四免一关怀”政策
确证试验结果的解释
不 确 定 结 果
① HIV早期或晚 期感染； ② 非特异性反应， 是由各人体质差 异或试剂制作技 术等引起。
① 结合流行病 学史。 ② 结合临床症 状。 ③ 建议其4周 后复查一次， 连续2次。
详细讨论阳性结果的影响、行 为改变的意义、应注意的问题
介绍有关支持服务 鼓励参与复诊随访，做好接 受抗病毒治疗的准备 强调预防的意义；促进行为改变
阳 性 结 果
② 生物假阳性，体内存 在与HIV蛋白产生交叉反 应的其它蛋白； ③ 技术假阳性，由于试 剂质量或人为操作不当 引起。
确认阳性告知经常遇到的问题（1）
• 我是否会被隔离？
• 我的情况是否被人知道？ • 我的状况到底怎么样？ • 我以后应该怎样做？
确认阳性告知经常遇到的问题（2）
• 为什么要收集信息？
频次 共用注射器 静脉吸毒 吸毒
HIV抗体检测结果：
筛查试验阴性 筛查试验阳性 确证试验阴性 确证试验阳性 确证试验不确定
筛查试验结果的解释
• 核实最后一次高危行为已过三个月的 “窗口期”，可以认为没有感染HIV； 阴 • 如果没有度过三个月的“窗口期”， 性 不能排除HIV感染的可能，应在“窗口 结 期”过后再进行复查。
艾滋病抗体快速检测应用
提纲
• 艾滋病咨询检测的作用及意义 • HIV快速检测技术 • 生物安全与个人防护 • 检测前后咨询
艾滋病咨询检测的作用及意义
提高检测可及性
• 为了尽早、尽快发现感染者，《国务院关于进一步加强艾滋病防 治工作的通知》（国发【2010】48号），明确提出要进一步加强 监测检测网络建设，依托现有医疗卫生资源，配备必要的设备和 人员，扩大检测服务范围，推广使用快速简便的检测方法，提高 检测可及性。
HIV检测技术教学课件ppt
hiv检测技术的发展历程
初筛试验的出现
20世纪80年代初，出现了以酶联免疫法为代表的hiv初筛试验，大大提高了检测的灵敏度 和特异性。
确认试验的建立
随着免疫印迹技术和质谱分析技术的发展，确认试验逐渐建立并得到广泛应用，以鉴别病 毒株和判断病程进展。
快速检测技术
近年来，随着生物技术的不断发展，出现了以胶体金法为代表的快速检测技术，操作简便 、检测时间短、适用于现场快速检测。
化学发光法
原理
化学发光法是一种通过化学反应产生光信 号的检测方法。在反应过程中，HIV抗原 或抗体与特异性抗体结合，形成免疫复合 物，加入化学发光底物，产生光信号。通 过测量光信号的强度，确定待测样本中 HIV抗原或抗体的量。
VS
用途
化学发光法具有高灵敏度、高特异性和试 剂稳定性好的优点，适用于HIV确证实验 和病毒载量检测。
02
hiv检测技术种类
酶联免疫法
原理
酶联免疫法（ELISA）是一种基于抗原抗体反应的检测方法，将HIV抗原或抗体包 被在固相载体上，加入待测样本，通过抗原抗体反应形成复合物，加入底物显色 ，通过颜色深浅判断待测样本中HIV抗原或抗体的量。
用途
酶联免疫法广泛应用于HIV初筛实验，因其操作简便、检测成本低廉、试剂稳定 性好等优点，成为最常用的HIV检测方法之一。
防治策略
针对HIV感染的防治策略包括疫苗研发、抗病毒 治疗、行为干预等。
监测与控制
通过监测HIV感染的流行病学数据，制定有效的 防控措施，控制HIV感染的传播。
05
hiv检测技术的优缺点及注意事项
hiv检测技术的优点
早期发现
hiv检测技术可以尽早发现hiv感染，为治疗和预防提供及时帮助 。
艾滋病的检测技术与应用课件
艾滋病的检测技术与应用课件一、艾滋病的概述艾滋病，即获得性免疫缺陷综合征（AIDS），是由人类免疫缺陷病毒（HIV）引起的一种严重的传染性疾病。
HIV 病毒主要攻击人体免疫系统中的 CD4+T 淋巴细胞，导致免疫系统逐渐受损，使患者容易感染各种疾病，并可能引发恶性肿瘤，最终导致死亡。
艾滋病的传播途径主要包括性传播、血液传播和母婴传播。
在全球范围内，艾滋病仍然是一个严重的公共卫生问题，对人类健康和社会发展造成了巨大的威胁。
二、艾滋病检测的重要性早期检测和诊断艾滋病对于控制疫情、预防传播以及为患者提供及时有效的治疗至关重要。
首先，检测可以帮助感染者尽早发现自己的感染状况，及时接受抗病毒治疗。
早期治疗能够有效抑制病毒复制，延缓疾病进展，提高生活质量，延长生命。
其次，通过检测可以及时发现潜在的传染源，采取措施进行干预，从而有效控制艾滋病的传播。
再者，检测为艾滋病的监测和研究提供了重要的数据支持，有助于了解疫情的流行趋势和特点，为制定防控策略提供科学依据。
三、艾滋病的检测技术（一）抗体检测1、酶联免疫吸附试验（ELISA）这是最常用的初筛试验方法之一。
其原理是利用固相载体上包被的HIV 抗原，与待检血清中的抗体发生特异性结合，然后通过酶标记的二抗和显色底物来检测结合的抗体。
2、快速检测试剂包括免疫层析法和凝集法等。
快速检测试剂操作简便、快速，适用于现场检测和基层医疗机构。
（二）抗原检测主要检测 HIV 的 p24 抗原。
在感染早期，抗体尚未产生时，抗原检测可以更早地发现感染。
（三）核酸检测1、病毒 RNA 检测通过检测血浆中的 HIV RNA 拷贝数，不仅可以用于诊断，还能用于监测治疗效果和评估病毒载量。
2、病毒 DNA 检测常用于新生儿 HIV 感染的诊断。
（四）免疫印迹试验（WB）作为艾滋病的确证试验，用于对初筛阳性结果的确认。
四、艾滋病检测的样本类型（一）血液样本包括血清、血浆和全血。
其中，血清和血浆常用于抗体和抗原检测，全血可用于快速检测。
艾滋病检测方法与应用
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HIV检测试剂发展的历程
1985 1990 1992 1994 1994 1996 1996 1996 1997 1998 1998 1999 2002 2003
HIVRNA
p24 Ag
IgM AntiHIV
IgG Anti-HIV
012345678 Weeks post-infection
PDF 文件使用 "pdfFactory" 试用版本创建 ÿ
急性HIV感染阶段具有独特的 病毒和免疫学特征
• HIV快速高水平复制的阶段，表现为高水平的病毒 血症，HIV RNA可以高达104-106。
检测HIV Administration and
HIV screening of
抗体的EIA blood donations
The first therapy for AIDS
- azidothymidine (AZT) - is approved for
use in the USA
试剂starts
is detected (among injecting
drug users)
Brazil becomes the first developing country to provide antiretroviral therapy
through its public health system
The International Council of AIDS Service Organizations (ICASO) and the Global Network of People Living with HIV/AIDS are founded
艾滋病检测原理和技术规范PPT课件
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HIV抗体确证试验
Western Blot 免疫印迹法
■ 针对各种病毒蛋白的特异抗体 ■ 区分ELISA真阳性与假阳性 ■ 检测HIV-1和HIV-2
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HIV的主要基因及其产物 （HIV标志物）
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各种诊断试剂特性
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HIV抗体筛查试验
金标法
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硒标法
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明胶颗粒凝集试验
（Particle agglutination test，PA）
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三、艾滋病检测技术规范
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主要内容：
样品采集和处理 检测方法
（HIV抗体、病毒核酸、 病毒载量、CD4、HIV抗原检测）
安全防护、职业暴露 质量管理
（质量保证、质量控制、质量评价） 实验室质量考评 HIV诊断试剂质量评估
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PA的操作和结果判断
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第一次特异性结合 第二次特异性结合
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1 加入样品
加盖，37℃温育 洗板
2 加入酶标记物
加盖，37℃温育 洗板
3 加入底物
混匀，加盖，37℃温育
4 加入终止液 5 450/630nm下测定OD值
艾滋病检测技术及诊断
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HIV感染/AIDS的诊断
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样品的运送
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样品的运送
• 带螺帽、垫圈的血清冻存管。
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样品的运送
• 禁止使用EP管
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样品的运送
• 禁止使用内旋盖冻存管
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样品的运送
• 在冻存管外套带盖的第二层容器
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样品的运送
• 置于带冰袋的第三层容器中
警告: 12S规则违背
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质量控制
2、失控（13S）：当外部对照的S/CO值超过±3S范围时，系统处于失控状态，本次结果不能 被接受。
失控: 13S规则违背
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质量控制 • 质控图的分析及失控处理
实验室应建立质控图分析及失控情况处理的程序。当出现失控时， 必须找出发生问题的原因，找出解决问题的方法，并消除原因。
• 血清：根据需要，用不含抗凝剂的真空采血管抽取5~10ml静脉血，或一 次性注射器抽取静脉血，转移至无抗凝剂的试管中，室温下自然放置1~2 小时，待血液凝固、血块收缩后再用1500~3000r/min离心15分钟，吸 出血清，置于合适的容器中，备用。
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抗凝剂选择 • CD4+和CD8+T淋巴细胞检测：EDTA、肝素、枸橼酸钠 • 病毒分离、核酸检测： EDTA、枸橼酸钠
HIV核酸检测技术及应用
常用的病毒载量检测方法
主要核酸扩增和信号放大扩增两种方法 Q (,生物梅里埃) (，罗氏) m2000(，雅培) 440 (西门子) 国内：凯杰（匹基），科华，达安、东北
制药、万泰 丽珠、科华等
血浆样本
病毒载量分析仪
扩增技术 （ ,核酸序列依赖性扩增法）
引物1 延伸
逆转录酶 H和 引物 2延伸 逆转录酶 T7 聚合酶
初筛+复检+
补充试验（核酸试验）
定性检测试剂盒
试剂：必须是经国家食品药品监督管理总局注册批 准、在有效期内的试剂。严格按说明书操作。全球 目前正式用于临床诊断1 急性期感染的核酸检测试 剂比较少 公司生产的 1 核酸定性试剂盒 公司生产的M2000 1 定性检测试剂盒 公司生产的® ® ® 1 2.0
核酸检测在新版规范主要内容
u 新增补充试验的概念，补充试验包括抗体确证试验和核 酸试验（定性和定量试验）
u 新增核酸检测流程，对复检结果有反应的情况，增加了 可以选择核酸诊断的策略；对于抗体确证结果不确定和 疑似急性期感染的样品建议采用1 核酸试验。
u 修改了艾滋病感染产妇所生儿童感染早期感染检测流程
感染的自然史
急性感染期 无症状期 艾滋病期
感染后标志物变化时间
Reactivity
HIV RNA
p24 Ag
IgM AntiHIV
IgG Anti-HIV
012345678
Weeks post-infection
核酸检测的意义
耐药性 艾滋的“元凶”
核酸
缩短窗口期
指导治疗
病程 自然史
核酸检测的意义
核酸检测技术及应用
目录
核酸简介 核酸检测意义 核酸检测技术现状与发展 核酸检测质量控制 核酸检测流程（新规范） 核酸检测实例应用
HIV检测技术 ppt课件
对初筛呈阳性反应的样品，应使用原有试剂和另外一 种不同原理（或厂家）的试剂，或另外两种不同原理 或不同厂家的试剂进行复检试验。
如果初筛检测使用抗原抗体联合试剂，则复检必须包 括一种抗原抗体联合试剂。
艾滋病检测筛查实验室复检判定为阳性反应的样品， 确证实验室可以直接进行确证试验。
原有试剂＋另一 种原理初筛试剂
（3）快速检测（RT）及其它检测试验
优点:试验简便快速，适用于应急检测、门诊急 诊检测。不需专门设备和人员培训,一般可在 10～30分钟内得出结果。
缺点:肉眼判断较主观、价格较贵、结果不易保 存。
快速诊断试剂
（1）明胶颗粒凝集试验（PA） 将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作
用，混匀后保温（一般为室温）。当待检样品含有 HIV抗体时，经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗 原-抗体反应，根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判 读结果。
加样 温育 洗板 显色
标准化操作及流程
试剂准备、标本收集、测定方法和仪器操 作写出正确的“标准操作程序”(SOP)，所有 的实验技术人员在进行相关测定时，必须严格 按相应的SOP进行操作。
ELISA法结果判断
临界值概念: 将检测的阳性和（或）阴性对照的 OD值代入计算公式计算出来的判断阳性和阴性 结果的界值
吸附－穿入－脱壳－生物合成－组装成熟和释放
HIV-1通过gp120与靶细胞表面CD4分子和趋化因子受体结合
HIV感染后的血清学改变
HIV抗体检测目的
诊断：确定个体HIV感染状况而进行的检测，包括临床检 测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体 检等。
监测：了解不同人群HIV感染率及其变化趋势而进行的检 测，检测的人群包括各类高危人群和一般人群。
HIV核酸检测技术及应用精要
HIV定量检测的试剂盒
试剂：必须是经国家食品药品监督管理总局注册批准 、在有效期内的试剂。严格按说明书操作。 NASBA/Easy Q (Biomerieux,生物梅里埃) Cobas Amplicor/Taqman (Roche，罗氏)
第十三页，编辑于星期一：三点 五十二分。
“套式”PCR
5’ gag
第一轮PCR 产物
pol
env
3’
AAAAAA
Reverse primer 1 Forward primer 1
Reverse primer 2 Forward primer 2
第二轮PCR 产物
优点: 增加敏感性/特异性
缺点: 增加扩增偏差机会 需要增加操作过程 容易增加污染机会
RNA 引物1 延伸
T7启动子序列
RNase H 引物 1
逆转录酶
RNase H 和 引物 2延伸
逆转录酶
逆转录酶 引物 2
逆相 RNA 扩增物
逆转录酶 T7 RNA聚合酶
T7 RNA 聚合酶
AMV-RT (鸟肉瘤病毒逆转录酶):延伸形成RNA-DNA 杂交链 RNase H:降解杂交链中的RNA T7-RNA聚合:转录形成的RNA转录产物
第十四页，编辑于星期一：三点 五十二分。
琼脂糖凝胶电泳
β-actin
gag env
pol
第十五页，编辑于星期一：三点 五十二分。
In-house 荧光PCR
国内外文献报道以HIV RNA或前病毒DNA作为检测 目标，选择LTR、gag、pol等基因作为靶基因，建立 荧光PCR检测方法
A
200000
指体内复制的病毒的数量，反映体液 （一般是血浆）中HIV病毒的含量