实验十：血清醋酸纤维薄膜电泳 实验报告

实验十：血清醋酸纤维薄膜电泳

【实验名称】：血清醋酸纤维薄膜电泳

09救援一班第3大组李岚宇2009222336

室温：25°

（一）实验目的：

1.学习醋酸纤维薄膜电泳原理。

2.掌握血清醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质的技术。

3.熟悉血清蛋白组分定量方法，并确定血清中蛋白与球蛋白的比值。（二）实验原理：

血清绝大多数蛋白质的等电点在pH5.0～7.0。在pH8.6的巴比妥缓冲液中，血清蛋白全部带负电荷，在直流电场中向正电极移动，移动的速度与带电蛋白质颗

粒所带电荷成正比，与蛋白质颗粒的大小成反比。如果样品点在醋酸纤维薄膜的同

一条线上，电泳相同的时间，不同的蛋白质颗粒移动的距离不同，通过染色，薄膜

条上的血清的蛋白质被分离成不同的条带。将此薄膜条透明，可以进行扫描，或将

色带剪下，将颜色洗脱，进行比色，都能获得各色带所含蛋白质占血清总蛋白的百

分比，并可计算血清中清蛋白／球蛋白比值，正常值为1.5～2.5。

（三）实验材料与仪器：

1．实验仪器材料：1、醋酸纤维薄膜（2cm*8cm，厚度120μm）2、人血清；3、烧杯及培养皿数只；4、x光片；5、镊子；6、试管六只；7、电泳槽；8、

直流稳压电泳仪；9、7220型分光光度计；10、剪刀

2．实验试剂：1、巴比妥-巴比妥钠缓冲液：取两个大烧杯，分别称取巴比妥钠和巴比妥溶解于500ml蒸馏水中；2、染色液，可反复使用；3、漂洗液：取

乙醇45ml，冰醋酸10ml，混匀；4、浸出液：0.4mol/L NaOH溶液；

（四）实验步骤：

1、准备和点样

取一条醋酸纤维薄膜，侵入缓冲液中，完全侵泡后，用镊子轻轻取出，将薄膜

无光泽的一面向上，平放在干净滤纸上，再放一张干净滤纸吸取多余的缓冲液。

用X光片蘸取少量血清，然后轻轻于距离薄膜端1.5cm处接触，样品即成一条

线突于纤维膜上。待血清透入膜内，将薄膜放在电泳槽上。

2、电泳

接通电源，设定电泳电压为100V，通电50min.

3、染色漂洗

电泳完毕后，将薄膜侵泡在染色液中5min～10min.取出，用漂洗液漂至背景

无色。

4、定量

取出六只试管，将漂净的薄膜用滤纸吸干，剪下薄膜上各条蛋白质色带，另取

一条与各区带相近似宽的无蛋白质附着的空白薄膜，分别侵泡于4.0ml 0.4mol/L

NaOH 溶液中，然后用7200型分光光度计在650nm处比色，以空白条薄膜洗

出液为空白调零，测定各管的吸光度。

(五) 实验数据记录： 设各部分吸光率为

白A 、 1A ∂ 、2A ∂、βA 、γA γβA A A A A 21＋＋＋＋＝白总∂∂A

0.774A ＝总

白蛋白比率＝总白A A ＝0.651 ; 1α球蛋白比率＝总A A 1α＝0.049

2α球蛋白比率＝总A A 2α＝0.067; β球蛋白比率＝总A A β＝0.125

γ球蛋白比率＝总A A γ＝0.108

(六)实验讨论：

1.以血清为样品，和滤纸相比，用醋酸纤维薄膜电泳的优点是用时少，效果较明显。

2.为什么用pH 为8.6的巴比妥缓冲溶液来侵泡醋酸纤维薄膜，是因为人体正常血 液的pH 值为7..35～7.45，血清蛋白在碱性条件下带负电荷，在直流电场中向正 极流动。

3.本次试验结果中， γ 球蛋白测得的含量偏低，原因可能是在剪裁电泳带时遗漏 了一条薄膜没有剪下或剪裁时剪到其他蛋白质条，导致其他蛋白质含量偏高。另外 电泳时间较短，导致几种蛋白质分离不完全，不利于观察分析，应增大电压和增长 电泳时间。

2010年 9月16日