大豆磷脂酰胆碱细菌内毒素检查方法考察
大豆磷脂微生物限度检查法验证(DOC)
验证文件大豆磷脂微生物限度检测方法验证起草人起草日期审核人审核日期批准人批准日期文件编号目录1适用范围 ....................................................................................................................... - 1 - 2目的 ............................................................................................................................... - 1 - 3概述 ............................................................................................................................... - 1 - 4验证所需要的仪器设备及文件 ................................................................................... - 1 - 5可接受的限度范围标准 ............................................................................................... - 2 - 6测试方法 ....................................................................................................................... - 5 - 7异常情况处理 ............................................................................................................. - 15 - 8测试结果 ..................................................................................................................... - 15 - 9结论 ............................................................................................................................. - 15 - 10再验证周期 ............................................................................................................... - 16 - 11附表 ........................................................................................................................... - 16 -1适用范围本验证方案适用于大豆磷脂微生物限度检查法的验证。
乙醇冷冻法纯化分离大豆磷脂酰胆碱研究
time，freezing temperature，solid–liquid ratio and alcohol concentration. The results indicated that the optimal conditions for ethanol freeze–purify were：freezing time 6 h，freezing temperature –12℃， solid–liquid ratio 1∶8 and alcohol concentration 97.5%. Moreover，a proof test w脂技术有限公司，其理化 指标见表 1。
表 1 大豆粉末磷脂理化指标
酸价（mgKOH/g）
18
水分及可挥发物（%）
1.7
丙酮不溶物（%）
96.7
乙醚不溶物（%）
0.01
过氧化值（mmol/kg）
1.1
PC 含量（%）
22.8
1.2 试剂与仪器装置 1.2.1 试剂
磷脂酰胆碱标样：Sigma 公司；正己烷（色谱纯）， 异丙醇（色谱纯），95%乙醇，无水乙醇，氯仿，甲醇，丙 酮，乙醚，碘化钾，氢氧化钾，硫代硫酸钠，韦氏试剂及 常用指示剂：除说明外均为分析纯。 1.2.2 仪器装置
液比为 1 ∶ 6。
2.3.2 冷冻时间对纯化影响
按 1.3.4（2）方法，选用乙醇浓度为 95%，料液比
为 1 ∶ 8，冷冻温度 –17℃，分别选择冷冻时间 3 h、6 h、
12 h、24 h 进行实验，实验结果见图 4。
ҢէďĐ ԄďĐ
大豆磷脂微生物限度检查法验证(DOC)
验证文件大豆磷脂微生物限度检测方法验证起草人起草日期审核人审核日期批准人批准日期文件编号目录1适用范围 ....................................................................................................................... - 1 - 2目的 ............................................................................................................................... - 1 - 3概述 ............................................................................................................................... - 1 - 4验证所需要的仪器设备及文件 ................................................................................... - 1 - 5可接受的限度范围标准 ............................................................................................... - 2 - 6测试方法 ....................................................................................................................... - 5 - 7异常情况处理 ............................................................................................................. - 15 - 8测试结果 ..................................................................................................................... - 15 - 9结论 ............................................................................................................................. - 15 - 10再验证周期 ............................................................................................................... - 16 - 11附表 ........................................................................................................................... - 16 -1适用范围本验证方案适用于大豆磷脂微生物限度检查法的验证。
大豆磷脂中磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺的测定
大豆磷脂中磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺的测定
按照大豆磷脂《2020版中国药典》的方法，建立大豆磷脂中磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺的
测定方法。
一、样品配制
取磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、溶血磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰胆碱对照品各适量，用三氯甲烷/乙醇=2/1溶解，制成每Im1.含上述对照品分别
50ug.IOOug.100ug>200ug.200ug>200ug的混合溶液
二、分析条件
色谱柱：Kromasi1.100-5-SI1.ICA(4.6*25Omm,5μm,PN：M05SIA25)
流动相：
流动相A：甲醇/水/冰醋酸/三乙胺=85/15/0.45/0.05,V/V
流动相B：正己烷/异丙醇/流动相A=20∕48∕32,V/V
时间∕min A/%B∕%
01090
203070
35955
361090
411090
流速：1..0m1.∕min
进样量：20μ1.
柱温:40℃
检测器：蒸发光散射检测器(参考设置：漂移管温度72℃；载气流量2.0m1.∕min)
三、实验结果
标样图谱：
样品图谱:。
药用大豆磷脂PC90小包装有微生物内毒素检测
药用大豆磷脂PC90小包装有微生物内毒素检测药用大豆磷脂PC90小包装有微生物内毒素检测[8030-76-0]大豆磷脂系从大豆中提取精制而得的磷脂混合物。
按无水物计算，含氮（N）应为1.5%～2.0%，磷（P）不得少于2.7%，磷脂酰胆碱不得少于45.0%，磷脂酰乙醇胺不得过30.0%，磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺总量不得少于70%。
【性状】本品为黄色至棕色的半固体、块状体。
本品在或乙醇中易溶，在丙酮中不溶。
酸值本品的酸值（通则0713）应不大于30。
碘值本品的碘值（通则0713）应不小于75。
过氧化值本品的过氧化值（通则0713）应不大于3.0。
【鉴别】（1）取本品约10mg，加乙醇2ml，加5%氯化镉乙醇溶液1～2滴，即产生白色沉淀。
（2）取本品0.4g，加乙醇2ml，加硝酸铋钾溶液（取硝酸铋8g，加硝酸20ml使溶解；另取碘化钾27.2g，加水50ml使溶解，合并上述两种溶液，用水稀释至100ml）1～2滴，即产生砖红色沉淀。
【检查】溶液的颜色取本品适量，加乙醇制成每1ml中含6mg的溶液，照紫外-可见分光光度法（通则0401），在350nm 的波特长测定吸光度，不得过0.8。
丙酮不溶物取本品1.0g，精密称定，加丙酮约15ml，搅拌使其溶解后，用G4垂熔玻璃坩埚滤过，残渣用丙酮洗涤，洗至丙酮几乎无色。
残渣在105℃干燥至恒重，不溶物不得少于90.0%。
己烷不溶物取本品10.0g，精密称定，加正己烷100ml，振摇使样品溶解，用在105℃干燥1小时的G4垂熔玻璃坩埚滤过，锥形瓶用正己烷25ml洗涤两次，洗液过滤后，G4垂熔玻璃坩埚于105℃干燥1小时，不溶物不得过0.3%。
残留溶剂取本品0.2g，精密称定，置20ml顶空瓶中，加水2ml，密封，作为供试品溶液；另取乙醇、丙酮石油醚与正己烷各适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中分别约含200μg、200μg、200μg、50μg、27μg的溶液，作为对比品溶液。
大豆磷脂酰胆碱的检测方法高效液相色谱法国家标准编制说明
《大豆磷脂酰胆碱的检测方法高效液相色谱法》国家标准编制说明１．工作简况（包括任务来源、协作单位、主要工作过程、国家标准主要起草人及其所做工作等）根据2007年国家标准计划要求，开展《大豆磷脂酰胆碱的检测方法高效液相色谱法》国家标准的制定，本标准由江南大学负责起草，编号20050652-T-449。
江南大学组成了《大豆磷脂酰胆碱的检测方法高效液相色谱法》标准起草小组，主要起草人为王兴国、金青哲、宋志华等，负责本标准制定的各项工作。
本标准制定主要工作过程为：1）本国家标准参考AOCS Ja 7b-91，根据GB/T 1.1-2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构与编写规则》、GB/T 20000.2-2001《标准化工作指南第2部分：采用国际标准的规则》、GB/T 20001.4-2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法》的规定进行本国家标准的编制工作,形成《大豆磷脂酰胆碱的检测方法高效液相色谱法》国家标准的征求意见稿。
2）征求国内若干具有代表性的科研院校和企业单位的意见，对返回的意见进行总结汇总和处理。
3）根据意见汇总和处理结果对本标准的征求意见稿进行修改，编制本标准的送审稿，同时对编制说明进行修改和补充。
报送全国粮油标准化技术委员会秘书处，由全国粮油标准化技术委员会秘书处组织全国范围内全体委员对本标准送审稿进行审查，并投票。
4）根据审查意见，对本标准送审稿作进一步的修改和完善，编制本标准报批稿。
上报国家标准技术审查机构，申请批准为国家标准。
２．国家标准编制原则和确定国家标准主要内容（如技术指标、参数、公式、性能要求、实验方法、检验规则等）的论据（包括试验、统计数据），修订国家标准时，应增列新旧国家标准水平的对比2.1标准编制原则由于国内、外贸易及科学技术的进步，要求我国标准化工作与国际标准接轨。
本标准的制定不仅要适应我国加入WTO后市场的需要，同时也要适应我国市场经济和粮食流通体制改革的总体要求，满足我国油脂加工生产和科研的需要。
生化药物质量标准中的生物检定及其进展
生长激素
重法和胫骨法
重组人胰岛素 小鼠或家兔血糖法 HPLC
降钙素
大鼠血钙法
HPLC
低分子肝素 血浆凝固法或家兔 分光光度法 全血凝固法
ChP2005 BP2007 ChP2005 BP2007 ChP2005 BP2007 BP2007
在本实验室已用理化测定代替生物测定 两种方法间具有良好相关性（P﹤0.01）的品种
活性测定分类
活性测定---定量：质量标准中生物效价 测定（HCG、HMG、肝素）
---半定量 ---定性
活性测定------半定量
半定量------当理化测定占主导地位，生物效价 测定降为辅助作用，只用于活性检查，设定限 值，采用半定量方法，不需精确的生物统计， 尽可能减少实验动物用量
如治疗二型糖尿病新药重组人胰高血糖素类多 肽-1（7-36）质量标准中采用半定量方法（限 值为小鼠血糖降低应大于20%）进行活性检查
生化药名
生物测定方法
理化测定方法 收载标准
伟素
大鼠血脂清除率法 分光光度法
(Sulodexide)
重组绒促性素 幼小鼠子宫增重法 HPLC (rHCG)
重组卵泡刺激 幼大鼠卵巢增重法 HPLC 素(rFSH)
重组黄体生成 幼大鼠精囊增重法 HPLC 素(rLH)
企业标准 企业标准 企业标准 企业标准
BP2007版胰岛素采用HPLC法
ChP2005版二部，动物胰腺提取的胰岛素定量生物测定
中国药典2010年版二部生化药品专业科研项目
1、药品中氨基酸分析方法的研究（归纳分类）。（中检所负责） 2、蛋白质含量测定方法的规范化研究，增订附录。（上海所负
责） 3、人工肠液和胃液中所用酶试剂的标准化研究。（中检所和北
大豆磷脂检验操作规程
大豆磷脂检验操作规程1 目的：建立大豆磷脂检验操作规程。
2 适用范围：适用于大豆磷脂检验操作。
3 职责：检验人员对本规程的实施负责。
4 规程：4.1编制依据：《中国药典》2010年版二部P1183。
4.2 质量指标：见《大豆磷脂质量标准》。
4.3 仪器与用具：电子天平、水浴锅、PH计、紫外分光光度计、干燥箱。
4.4 试药与试液：乙醚、乙醇、丙酮、氯化镉、硝酸铋钾溶液、碘化钾、过氧化氢、钼酸铵硫酸试液、亚硫酸钠试液、对苯二酚、硫酸。
4.5 操作方法4.5.1.1 性状：本品为黄色至棕色的半固体或块状物。
本品在乙醚和乙醇中易溶，在丙酮中不溶。
4.5.1.2 酸值：本品的酸值应不大于30。
4.5.1.3 碘值：本品的碘值应不小于75。
4.5.1.4过氧化值：本品的过氧化值应不大于5。
4.5.2 鉴别4.5.2.1 化学反应：取本品约10mg，加乙醇溶液2ml 使溶解，加5%氯化镉乙醇溶液1-2滴，即产生白色沉淀。
4.5.2.2化学反应：取本品0.4g，加乙醇溶液2ml使溶解，加硝酸铋钾溶液（取硝酸铋8g，加硝酸20ml使溶解；另取碘化钾27.2g，加水50ml使溶解，合并上述两种溶液，加水稀释成100ml）1-2滴，即产生砖红色沉淀。
4.5.3.1 溶液的颜色：取本品，加乙醇制成每1ml中含6mg的溶液，照《紫外分光光度法检验操作规程》测定，在350nm的波长处测定吸收度，不得过0.8。
4.5.3.2 丙酮不溶物：取本品约1g，精密称定，加丙酮约15ml，充分搅拌后，用经105℃干燥1小时并称重的4号垂熔玻璃坩埚滤过，残渣用丙酮洗涤，至洗出的丙酮几乎无色。
残渣在105℃干燥至恒重，不溶物不得少于90.0%。
4.5.3.3 己烷中不溶物：取本品约10g，精密称定，加正己烷100ml，振摇使溶解，用经105℃干燥1小时并称重的4号垂熔玻璃坩埚滤过，容器用25ml正己烷洗涤两次，洗液滤过后，4号垂熔玻璃坩埚在105℃干燥1小是后，称重，不溶物不得过0.3%。
HPLC_RI法快速准确测定大豆磷脂酰胆碱含量
按 AOCS Ja7 - 86 进行 [ 2 ]。 硅胶板尺寸为 200 ×200 mm(青岛海洋化工厂) 。 展开剂 A 为氯仿 甲醇 - 氨水 (7 mol ·L - 1) (体积比 65 ∶30 ∶4) , 展开剂 B 为氯仿 - 甲醇 - 冰醋酸 - 水 (体积比 170 ∶ 25 ∶25 ∶6) 。 样品展开后将 PC 对应的斑点刮下 , 用高氯酸和硝酸消化 , 钼酸铵显色 , 乙酸丁酯萃 取 。 采用分光光度计在 310 nm 下测定吸光度 , 得到磷含量 。 以磷酸二氢钾为标样 , 得到吸光度对 磷含量的标准曲线 。 最后根据以大豆 PC 平均相对分子质量为基础得到的磷脂转化因子 , 将磷含量 换算成样品中 PC 的含量 。 重复测定 2 次 , 取平均值 。
Soybean PC standard
sPC - Std - 1 sPC - Std - 2 sPC - Std - 3 sPC - Std - 4 sPC - Std - 5
Table 1
表 1 PC 标准溶液浓度 Concentrations of phosphatidylcholine ( PC) standard solutions
1. 4 HPLC 分析
紫外检测器和示差折光检测器串联 , 自动进样 , 每次进样量 10μL 。 每个样品分析 2 次 , 得到的 峰面积取平均值 。 根据标准溶液 PC 浓度和色谱峰面积可得大豆 PC 标样和蛋黄 PC 标样在 UV 及 RI 检测器下的标准曲线 , 然后由实际样品的 PC 峰面积和各标准曲线可得大豆卵磷脂样品在 UV 检测器 和 RI 检测器及不同标样下的 PC 含量 。
卵磷脂分析方法很多 , 传统的薄层色谱测磷 ( TLC - P) 法是广泛被接受的定量分析方法 。 被美国 油脂化学协会 (AOCS) 收录为标准方法的二维 TLC - P 法是一种更准确的定量分析磷脂的方法 [ 2 ]。 这 种方法是在分离后收集各种磷脂 , 测定磷含量 , 再按照各类磷脂的平均相对分子质量计算出它们的 含量 。 但是这种方法步骤较烦琐 , 对操作技术要求较高 。 另外 , 如果有很多样品 , 定量分析需要很
饲料级大豆磷脂中磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇的检测研究
饲料级大豆磷脂中磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇的检测研究杨海锋;赵志辉;顾赛红;邢增涛【摘要】本研究探讨了应用高效液相色谱法同时检测饲料添加剂大豆磷脂中磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇的可行性.结果表明:应用液相色谱法检测三种主成分含量方法的相对标准偏差均小于4%.回收率均为96%～103%.该方法应用于测定饲料级大豆磷脂中磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇含量可行.【期刊名称】《中国饲料》【年(卷),期】2010(000)006【总页数】3页(P41-43)【关键词】大豆磷脂;磷脂酰胆碱;磷脂酰乙醇胺;磷脂酰肌醇;高效液相色谱法【作者】杨海锋;赵志辉;顾赛红;邢增涛【作者单位】上海市农科院农产品质量标准与检测技术研究所;上海市农科院农产品质量标准与检测技术研究所;上海市农科院农产品质量标准与检测技术研究所;上海市农科院农产品质量标准与检测技术研究所【正文语种】中文【中图分类】S816.17磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇是大豆磷脂中最重要的活性成分，其所占比重的高低，是衡量大豆磷脂品质优劣的一个重要标准（章慧芳和陆娅，2007）。
随着大豆磷脂市场需求的不断扩大，经常发生大豆磷脂产品的贸易纠纷。
广大生产企业和用户都希望对大豆磷脂中的有效成分磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇进行检验和检测。
国内外研究报道的大豆磷脂的检测方法主要是定磷法、薄层色谱法（TLC）、高效液相色谱法（HPLC）等（张颖颖等，2006；卜延刚等，2004）。
定磷法需要消化、显色等过程，操作繁琐、耗时。
薄层色谱法干扰因素多，灵敏度不高，显色后定量误差较大而主要用于定性分析。
高效色相色谱法以其高速、高效、高灵敏度、系统封闭避免不饱和键氧化等优点，受到普遍关注（董晓渭等，2000；Mounts和Nash，1990）。
然而由于研究者应用的前处理技术、检测方法都不相同（张德权等，2006；Rombaut等，2005；Singleton 和Stikeleather，1995；Becart等，1990），即使都使用HPLC技术，但分离柱、填料、流动相也存在差异，缺乏一个统一的标准。
不同形态大豆磷脂产品中溶血磷脂酰胆碱含量研究_王文高
粮食与油脂
2016 年第 29 卷第 2 期
不同形态大豆磷脂产品中溶血磷脂酰胆碱含量研究
王文高 1，朱天仪 1，王 波 2 （1. 上海良友（集团）有限公司技术中心， 上海 200333；
2. 上海金伴药业有限公司， 上海 201801） 摘 要：采用 HPLC–ELSD 法测定不同形态大豆磷脂产品中溶血磷脂酰胆碱（LPC）的含量，并通 过对原料、工艺、储存期等因素的研究来确定溶血磷脂酰胆碱含量的变化规律。浓缩磷脂产品中 LPC 含量约为 0.80%，大豆粉末磷脂中 LPC 含量为 1.35%，大豆磷脂一次醇溶产品中 LPC 含量为 2.87%，大豆磷脂二次醇溶产品中 LPC 含量为 12.88%。在 –20 ℃、避光储存条件下，各样品一年储 存期内 LPC 含量的变化不大。 关键词：溶血磷脂酰胆碱；含量；储存期
增加的水解、盐析以及活性炭脱色过程都是导致磷脂
发生水解转化为溶血磷脂的因素。LPC 含量的变化
提醒我们，提高产品中 PC 含量的同时，一定要注意所
采取的工艺条件对 LPC 含量的影响。
2.4.3 样品储存期 LPC 含量变化研究
我们按照药品的储存条件（–20 ℃，避光），分别研
究了大豆粉末磷脂、大豆磷脂一次醇溶产物、大豆磷
蒸发光检测（HPLC–ELSD）法测定不同形态大豆磷
色谱柱：Vennsil XBP Silica（4.6 mm×250 mm，
脂产品中溶血磷脂酰胆碱的含量，研究了不同形态大 5 μm）；
豆磷脂产品中溶血磷脂酰胆碱含量的变化规律。
流动相：流动相 A：甲醇 – 水 – 冰醋酸 – 三乙胺
1 材料与方法
（85∶15∶0.45∶0.05，V∶V∶V∶V），流动相 B：正己烷 –
大豆磷脂中磷脂酰胆碱的液相测定
2.6 重复性实验 精密量取 10 μl 样品液, 在设定的色谱条件下重复进样 6 次， 精密量取 10 μl 标准液进样 1 次， 记录峰面积。由见表 3 可见， 平 均含量为 100.39%， RSD=0.37%。结果表明该方法的重复性良好。 表 3 重复性实验结果
1 101.92 2 98.95 3 99.81 4 100.33 5 99.79 6 101.54 100.39 RSD(%) 0.35
2.7 回收率实验 精密吸取标准液和样品液各 5 份， 体积分别为 1ml， 混匀， 取混 合液 10μl 打入液相色谱仪中， 在设定的色谱条件下， 按外标法进 行峰面积测定， 计算回收率。表 4 中结果显示， 样品液中的 PC 含量 平均回收率为 99.9 %， RSD 测定的回收率均在 98 %～102 %之间， 为 1.18 %(RSD≤ 2.0 %)符合要求， 说明该检测方法回收率良好。 表 4 回收率实验结果
科技ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ坛
· 139 ·
大豆磷脂中磷脂酰胆碱的液相测定
邢晶晶 1 郝 旭 2 （1、 哈药集团生物工程有限公司， 黑龙江 哈尔滨 150025 2、 江西省萍乡市中医院制剂室， 江西 萍乡 337000 ） 摘 要:目的： 建立大豆磷脂中磷脂酰胆碱含量的高效液相色谱 （HPLC） 检测方法。方法： 采用高效液相色谱仪 （Agilent 1200 ） ，C18 柱 （ZOR BAX SB ， 150 x 4.6 mm, 5 μm， Agilent ） ， 流动相为正己烷 - 异丙醇 - 水 （7 : 7 : 2, V : V : V ） ， 流速为 1.0ml/ min， 检测波 长为 205 nm， 柱温为 30℃进行检测。结果： 磷脂酰胆碱浓度在 0.02751～0.43825 mg/ ml 范围内时， 线性关系良好， 回归方程的相关系数 r＝0.9972， 平均回收率 99.9 %， R SD=1.18 %。结论:用该方法检测大豆磷脂中磷脂酰胆碱含量高效， 简便， 准确。 关键词:高效液相色谱； 大豆磷脂； 磷脂酰胆碱 大豆磷脂(phospholipid)是由大豆中的磷脂酰胆碱 (phosphatidylPC)、 磷脂酸乙醇胺(phosphatidyl ethanolamine， PE)、 磷脂酰肌 choline， 醇 (phosphatidylinositol， PI) 、 溶血磷脂酰胆碱 （lyso- phosphatidylcholine， LPC ） 与磷脂酸 (phosphatidic acid， PA)等组成的天然类脂混 其中的 PC 由于具有很好的分散、 乳化、 粘着、 润湿等特性， 在 合物[1]。 医药、 食品、 化工及其它行业得到广泛应用， 因此检测大豆中 PC 的 含量成为一项重要的指标[2]。目前， 国内外 PC 含量的主要检测方法 TLC ） 和高效液相色谱法 有薄层色谱法 （thin layer chromatography， (high performance liquid chromatography， HPLC)： TLC 对操作技术要 求较高， 易造成大豆磷脂各组分的交叉反应， 成功率偏低； HPLC 具 有 “两快、 三高、 一广” 的特点： 分析速度快、 载液流速快； 高效、 高压、 高灵敏度； 应用范围广[3]。 虽然 PC 含量的检测方法众多， 但还没有一 个统一的标准检测方法， 重复性较差。本文建立一种高效液相的方 法对 PC 的含量进行测定， 取得良好的效果。 1 仪器与试剂 1.1 仪器 电子天平 （ME104 梅特勒托利多） ； 高效液相色谱仪 (1200 美国 安捷伦公司 )；紫外检测器 （美国安捷伦公司） ； C18 柱 （ZORBAX SB， 150 × 4.6 mm, 5 cm 美国安捷伦公司 ） ；pH 计 （FE20 梅特 。 勒托利多 ） 1.2 试剂 PC 标准品 （中国药品生物制品检定所， 纯度大于 99%） ； 磷酸 、 异丙醇、 正己烷 （色谱纯 ） ； 无水乙醇、 丙酮 （分析纯 ） ； 水 （注射水 ） 。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 Agilent ZORBAX SB- C18 柱 (长度 × 直径： 150 × 4.6 mm， 5μm)，流动相为正己烷 - 异丙醇 - 水 （7 : 7 : 2, V : V : 粒径： V ） , 混匀后脱气 5 min， 流速为 1.0 ml / min， 检测波长为 205 nm， 柱温为 30℃， 进样量为 10μl。 2.2 标准液和样品液的配置 标准液的配置： 精密称取适量的 PC 标准品， 加流动相稀释制成 浓度为 0.1mg/ml 的溶液， 作为标准液。 样品液的配置： 原料为自制的大豆浓缩磷脂， 精密称取适量的 大豆浓缩磷脂溶于丙酮中， 获得真空干燥后丙酮不溶物， 再将丙酮 不溶物溶解于无水乙醇中， 离心后取上清， 用三氧化二铝对上清脱 色及过滤， 将滤液加无水乙醇定容至 20 ml。 2.3 线性关系考察 精密量取标准液 0.5， 1， 2， 4， 6， 8ml 至 10 ml 量瓶中， 加流动相 定容至刻度， 混匀。再各取 10 μl 上述溶液打入液相色谱仪中， 最 后用 PC 标准品面积 Y 对浓度 X （mg/ml ） 进行线性回归。 得到的回归 方程： Y=932X+628， r=0.9972， 结果表明 PC 标准品浓度在 0.02751～ 0.43825 mg/ml 范围内， 有良好的线性关系。 2.4 精密度考察 精密吸取 10 μl 标准液， 在设定的色谱条件下重复进样 8 次， 记录峰面积的结果见表 1， RSD=0.41%。 表 1 精密度检测结果
大豆磷脂酰胆碱细菌内毒素检查方法考察
大豆磷脂酰胆碱细菌内毒素检查方法考察肖婧薇; 王文佳; 何华红; 李薇【期刊名称】《《中国药业》》【年(卷),期】2019(028)016【总页数】4页(P41-44)【关键词】大豆磷脂酰胆碱; 细菌内毒素检查; 凝胶法; 显色基质法【作者】肖婧薇; 王文佳; 何华红; 李薇【作者单位】广东省广州市药品检验所医疗器械及药包材室广东广州 510610【正文语种】中文【中图分类】R917; R979.9大豆磷脂酰胆碱是大豆磷脂的主要活性成分，大豆磷脂作为天然乳化剂、增溶剂、分散剂广泛应用于药物注射剂中[1-2]，故大豆磷脂酰胆碱也是一种用于注射剂的药用辅料。
注射剂直接注入人体，其细菌内毒素的含量或限值有严格规定，所用辅料也必须符合相应规定。
2015年版《中国药典》尚未将大豆磷脂酰胆碱作为药用辅料收载，本研究中参照2015年版《中国药典（四部）》通则1143[3]154-157“细菌内毒素检查法”，全面考察了大豆磷脂酰胆碱的细菌内毒素检查方法，以进一步控制注射剂质量。
现报道如下。
1 仪器与试药仪器：TW12型六孔恒温水浴（德国Julabo公司）；MS3basic型旋涡混合器（德国IKA公司）；LKL164-03型内毒素定量仪（英国Lab Kinetics公司）；2-16KL型低温高速离心机（德国Sigma公司）。
试药：大豆磷脂酰胆碱（德国Lipoid GmbH，批号为579010-1150055-13，579010-1160058-15，579010-1160059-05，规格为原料，含量为98%）；细菌内毒素工作标准品（中国食品药品检定研究院，批号为150601-201580，规格为每支80 EU）；细菌内毒素检查用水（BET水，批号为1606290，规格为每支100 mL），鲎试剂 A（TAL，批号分别为 1606142，1607201，规格为每支0.1mL，灵敏度分别为0.25EU/mL和0.06EU/mL），鲎试剂 C（KCA，批号为1709140，规格为每支1.25 mL，灵敏度为50～0.005 EU/mL），均购自湛江安度斯生物有限公司；鲎试剂B（TAL，福州新北生物有限公司，规格为每支 0.1 mL，批号分别为 16031712，16020712，灵敏度分别为0.25 EU/mL和0.06 EU/mL）。
去内毒素的方法及检查方法
去内毒素的方法及检查方法注：这部分内容为内毒素的检测方法及去除方法。
热原(pyrogen)是微生物产生的内毒素，是由磷脂、脂多糖和蛋白质组成的复合物，微量即可引起恒温动物体温异常升高。
其中脂多糖具有很强的热原活性。
由革兰氏阴性杆菌产生的热原致热能力最强，真菌、病毒也可以产生热原。
【相关链接】热原的危害一、热原的性质及除去热原的方法1．高温法热原的耐热性能良好，60℃加热1h不被分解破坏，100℃不降解，但180℃3～4h、200℃60min或250℃30～45min可使热原彻底破坏。
因此耐热物品如玻璃制品、金属制品、生产过程中所用的容器和其它用具以及注射时使用的注射器等，均可采用此法破坏热原。
但在通常使用的注射剂热压灭菌条件下不足以破坏热原。
2．吸附法热原在水溶液中可被活性炭、石棉、白陶土等吸附而除去。
由于活性炭性质稳定、吸附性强兼具助滤和脱色作用，故广泛用于注射剂生产，但应注意吸附药液所造成的主药的损失。
3．超滤法热原分子量为1×106左右，体积较小，约1～5nm，可以通过一般滤器和微孔滤膜，但采用超滤法如用 3.0～15nm超滤膜可将其除去。
4．蒸馏法热原能溶于水但不挥发，但可随水蒸气的雾滴进入注射用水中，因此制备注射用水时，原水中的热原可经蒸馏除去，但需多次蒸馏，，并加有隔沫装置，单次蒸馏往往效果不理想。
5．酸碱法热原能被强酸、强碱、强氧化剂破坏。
玻璃容器及用具如配液用玻璃器皿、输液瓶等可用重铬酸钾硫酸清洁液或稀氢氧化钠处理，破坏热原。
6．其它包括离子交换法、凝胶滤过法、反渗透法等。
二、热原的检查方法《中国药典》2005年版规定热原检查采用家兔法，细菌内毒素检查采用鲎试剂法。
1．热原检查法由于家兔对热原的反应与人基本相似，目前家兔法仍为各国药典规定的检查热原的法定方法。
《中国药典》2005年版规定的热原检查法系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
大豆磷脂酰胆碱是大豆磷脂的主要活性成分，大豆 磷脂作为天然乳化剂、增溶剂、分散剂广泛应用于药物 注射剂中 犤１－２犦，故大豆磷脂酰胆碱也是一种用于注射剂 的药用辅料。注射剂直接注入人体，其细菌内毒素的含
量或限值有严格规定，所用辅料也必须符合相应规定。 ２０１５年版《中国药典》尚未将大豆磷脂酰胆碱作为药用 辅料收载，本研究中参照 ２０１５年版《中国药典（四部）》 通 则 １１４３犤３犦１５４－１５７“细 菌 内 毒 素 检 查 法 ”，全 面 考 察 了
犤２犦苏德模，马绪荣 ．药品微生物学检验技术犤Ｍ犦．北京：华龄出版社， ２００７：２１８－２２０．
犤３犦胡昌勤 ．药品微生物控制现状与展望 犤Ｊ犦．中国药学杂志， ２０１５，５０（２０）：１７４７－１７５１．
犤４犦杨晓莉，李 辉，绳金房，等 ．２０１５年版《中国药典》无菌检查 法解读 犤Ｊ犦．中国药业，２０１５，２４（２４）：７－１１．
人民卫生出版社，２０１５：６３． 犤７犦夏蕴琼，刘 将 ．盐酸氨溴索葡萄糖注射液无菌检查方法验
证 犤Ｊ犦．安徽医药，２０１２，１６（５）：６０３－６０４． 犤８犦闵 红，裴小龙，杨晓莉 ．３种规格注射用头孢地嗪钠无菌方
法学验证 犤Ｊ犦．安徽医药，２０１３，１７（５）：７６４－７６６． 犤９犦陈立光，雷震山，梁明泉，等 ．１８Ｆ－ＦＤＧ注射液的无菌检查及
ｓｏｙｂｅａｎ ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅｗａｓｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｂｙｇｅｌｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃｓｕｂｓｔｒａｔｅｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｂｅ
ｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｇｅｌｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆｓｏｙｂｅａｎ ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ ｗａｓａｔｏｒｌｅｓｓｔｈａｎ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｔｈｅｅｎｄｏｔｏｘｉｎ ｔｅｓｔｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒｓｏｙｂｅａｎ ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎ ｄｏｔｏｘｉｎｔｅｓｔｉｎｔｈｅｇｅｎｅｒａｌｒｕｌｅ１１４３ ｏｆＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ（２０１５ ｅｄｉｔｉｏｎ，ｖｏｌｕｍｅⅣ），ｔｈｅｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｔｅｓｔｆｏｒ
综上所述，ＭｇＳＯ４较聚山梨酯 ８０更能有效中和、去 除甲磺酸左氧氟沙星对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、 枯草芽孢杆菌、生孢梭菌的抑菌性，更适合用作喹诺酮 类抗菌药物的抑菌剂和中和剂，在无菌检查过程消除药 品的抑菌性。 参考文献：
犤１犦国家药典委员会 ．中华人民共和国药典（四部）犤Ｍ犦．北京： 中国医药科技出版社，２０１５．
２０１９年 ８月 ２０日 第 ２８卷第 １６期 Ｖｏｌ．２８牞Ｎｏ．１６牞Ａｕｇｕｓｔ２０牞２０１９
ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ
·研究· Ｄｒｕｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ
·检验检测·
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６－４９３１．２０１９．１６．０１３
大豆磷脂酰胆碱细菌内毒素检查方法考察
６２．５ ｇ／Ｌ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｂｏｔｈ ｇｅｌｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃｓｕｂｓｔｒａｔｅｍｅｔｈｏｄ ｃａｎ ｂｅｕｓｅｄ ｆｏｒｔｈｅｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎ ｔｅｓｔｏｆｓｏｙｂｅａｎ
ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｓｏｙｂｅａｎｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ；ｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｔｅｓｔ；ｇｅｌｍｅｔｈｏｄ；ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃｓｕｂｓｔｒａｔｅｍｅｔｈｏｄ
ＸＩＡＯ Ｊｉｎｇｗｅｉ，ＷＡＮＧ Ｗｅｎｊｉａ，ＨＥ Ｈｕａｈｏｎｇ，ＬＩＷｅｉ
（ＭｅｄｉｃａｌＤｅｖｉｃｅｓａｎｄＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＰａｃｋａｇｉｎｇ＜Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ＞ Ｒｏｏｍ，ＧｕａｎｇｚｈｏｕＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ ５１０１６０）
中国医药科技出版社，２诺酮类抗菌药物能螯合细 犤６犦胡 昌 勤 ．实 用 药 品 微 生 物 检 验 检 测 技 术 指 南 犤Ｍ犦．北 京 ：
菌所需的镁离子、钙离子等金属元素，故在最后少许冲 洗液中加入 ＭｇＳＯ４，并作用 ２０ｍｉｎ，结果有效中和、去除 了该药品的抑菌性 。 犤１３犦
第一作者：肖婧薇，女，硕士研究生，主管药师，研究方向为药理学及毒理学，（电话）０２０－８１７４４９４７（电子信箱）０２１３ｒａｉｎｙ＠１６３．ｃｏｍ。
檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨
每膜 ６００ｍＬ时，仍未能有效中和、去除注射用甲磺酸左
方法学验证 犤Ｊ犦．包头医学院学报，２０１８，３４（７）：９９－１０１． 犤１０犦张少锋，鄢 丹，唐慧英，等 ．微量量热法研究增溶性辅料
胶法和显色基质法的鲎试剂反应均无干扰作用。结论 凝胶法与基质显色法均可用于大豆磷脂酰胆碱的细菌内毒素检查。
关键词：大豆磷脂酰胆碱；细菌内毒素检查；凝胶法；显色基质法
中图分类号：Ｒ９１７；Ｒ９７９．９
文献标识码：Ａ
文章编号：１００６－４９３１牗２０１９牘１６－００４１－０４
ＢａｃｔｅｒｉａｌＥｎｄｏｔｏｘｉｎ ＴｅｓｔｆｏｒＳｏｙｂｅａｎ Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ
肖婧薇，王文佳，何华红，李 薇
（广东省广州市药品检验所医疗器械及药包材 ＜药理 ＞室，广东 广州 ５１０６１０）
摘要：目的 建立大豆磷脂酰胆碱细菌内毒素的检查方法。方法 按 ２０１５年版《中国药典（四部）》通则 １１４３“细菌内毒素检查法”，分别
采用凝胶法与显色基质法考察大豆磷脂酰胆碱细菌内毒素检查的可行性。结果 大豆磷脂酰胆碱质量浓度在 ６２．５ｇ／Ｌ及以下时，对凝