问:大鼠脑脊液抽取方法

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实验动物各种体液、骨髓的采集方法

一、消化液的采集(一) 唾液1. 直接抽取法在急性实验中，可用吸管直接插入动物口腔或唾液腺导管抽吸唾液，此法非常简单，但从口腔抽吸唾液会有杂质混入。

2. 制造腮腺瘘法在慢性实验中,收集狗的唾液，要用外科手术方法将腮腺导管开口移向体外，即以腮腺导管为中心，切成一直径约2～3cm的圆形粘膜片，将此粘膜片，与周围组织分开，穿过皮肤切口引到颊外,将带有导管开口的粘膜片与周围的皮肤缝合,腮腺分泌的唾液就流出颊外。

这种方法可以收集到较纯净的唾液。

(二)胃液1. 直接收集胃液法急性实验时，先将动物麻醉，将插胃管经口插入胃内,在灌胃管的出口连一注射器，用此注射器可收集到胃液,此法适用于狗等大型动物。

如是大鼠,需手术剖腹，从幽门端向胃内插入一塑料管，再由口腔经食道将一塑料管插入前胃，用pH7.5、35℃左右的生理盐水，以12ml/h的流速灌胃，收集流出液，进行分析。

2. 制备胃瘘法在慢性实验中,收集胃液多用胃瘘法,如全胃瘘法、巴氏小胃瘘法、海氏小胃瘘法等。

制备小胃是将动物的胃分离出一小部分，缝合起来形成小胃，主胃与小胃互不相通，主胃进行正常消化，从小胃可收集到纯净的胃液。

应用该法，可以待动物恢复健康后，在动物清醒状态下反复采集胃液。

(三)胰液和胆汁在动物实验中，主要是通过对胰总管和胆总管的插管而获得胰液或胆汁。

狗的胰总管开口于十二指肠降部，在紧靠肠壁处切开胰管，结扎固定并与导管相连，即可见无色的胰液流入导管。

大鼠的胰管与胆管汇集于一个总管，在其入肠处插管固定，并在近肝门处结扎和另行插管，可分别收集到胰液和胆汁。

有时也可通过制备胰瘘和胆囊瘘来获得胰液和胆汁。

二、脑脊液的采集(一)狗、兔脑脊液的采集通常采取脊髓穿刺法：穿刺部位在两髂连线中点稍下方第七腰椎间隙。

动物轻度麻醉后，侧卧位固定，使头部及尾部向腰部尽量弯曲，剪去第七腰椎周围的被毛。

消毒后操作者在动物背部用左手姆、食指固定穿刺部位的皮肤，右手持腰穿刺针垂直刺入，当有落空感及动物的后肢跳动时，表明针已达椎管内( 蛛网膜下腔)，抽去针芯,即见脑脊液流出。

一种简单实用的实验动物中药脑脊液采集方法

一种简单实用的实验动物中药脑脊液采集方法
马伟;马锋;田建英
【期刊名称】《宁夏医科大学学报》
【年(卷),期】2007(029)004
【摘要】为探寻一种简单实用的实验动物中药脑脊液采集方法,以兔和大鼠为实验对象,以枕外隆凸为标志,于颈部正中作纵行切口,经枕骨大孔抽取中药脑脊液.结果,大耳白家兔50只,成功率88%,脑脊液量平均700μL;SD大鼠30只,成功率73%,脑脊液量平均76μL.表明经枕骨大孔抽取脑脊液是一种简单实用的实验动物脑中药脊液采集方法.
【总页数】2页(P436-437)
【作者】马伟;马锋;田建英
【作者单位】宁夏医学院人体解剖学教研室,银川,750004;宁夏医学院人体解剖学教研室,银川,750004;宁夏医学院人体解剖学教研室,银川,750004
【正文语种】中文
【中图分类】R322-33
【相关文献】
1.一种实用的采集兔脑脊液方法 [J], 李惠勉;李建章;姚淑芬
2.一种简单实用的脑脊液细胞学检查染色法及其临床应用 [J], 戚其学;项永谦;徐万鹏
3.脉冲信号的有效采集：一种有效而实用的脉冲信号采集方法 [J], 曾泽民
4.一种简单的实验动物编号标记方法试验筛选 [J], 黄小琼;郑玉连;曾育培;郑佳琳;
武昕;饶子亮;王诺;严家荣;邝少松
5.一种实用的数据快速采集方法 [J], 董育红;秦建敏;杨盘洪
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实验动物体液采集方法

实验动物的体液采集方法一、血液的采集常用的采血方法有割（剪）尾采血、眼眶静脉丛采血、断头采血、心脏采血、颈静脉（动脉）采血、股动脉（静脉）采血、耳静脉采血、前肢头静脉才学、后肢小静脉采血等。

二、尿液的采集实验动物的尿液常用代谢笼采集，也可通过其他装置来采集。

（一）用代谢笼采集尿液代谢笼用于收集实验动物自然排出的尿液，是一种特别设计的为采集实验动物各种排泄物的密封式饲养笼，有的代谢笼除可收集尿液外，又可收集粪便和动物呼出的CO2。

一般简单的代谢笼主要用来收集尿液。

防在代谢笼内饲养的实验动物，可通过其特殊装置收集尿液。

（二）导尿法收集尿液施行导尿术，较适宜于犬、猴等大动物。

一般不需要麻醉，导尿时将实验动物仰卧固定，用甘油润滑导尿管。

对雄性动物，操作员用一只手握住阴茎，另一只手将阴茎包皮向下，暴露龟头，使尿道口张开，将导尿管缓慢插入，导尿管推进到尿道膜部时有抵抗感，此时注意动作轻柔，继续向膀胱推进导尿管，即有尿液流出。

雌性动物尿道外口在阴道前庭，导尿时于阴道前庭腹侧将导尿管插入阴道外口，其后操作同雄性动物导尿术。

用导尿法导尿可采集到没有污染的尿液。

如果严格执行无菌操作，可收集到无菌尿液。

（三）输尿管插管采集尿液一般用于要求精确计量单位时间内实验动物排尿量的实验。

剖腹后，将膀胱牵拉至腹腔外，暴露膀胱底两侧的输尿管。

在两侧输尿管近膀胱处用线分别结扎，于输尿管结扎处上方剪一小口，向肾脏方向分别插入充满生理盐水的插管，用线结扎固定插管，即可见尿液从插管滴出，可以收集。

采尿过程中要用38℃热生理盐水纱布遮盖切口及膀胱。

（四）压迫膀胱采集尿液实验人员用手在实验动物下腹部加压，手法既轻柔又有力。

当增加的压力使实验动物膀胱括约肌松弛时，尿液会自动流出，即行收集。

（五）穿刺膀胱采集尿液实验动物麻醉固定后，剪去下腹部耻骨联合之上，腹正中线两侧的被毛，消毒后用注射针头接注射器穿刺。

取钝角进针，针头穿过皮肤后稍微改变角度，以避免穿刺后漏尿，然后刺向膀胱方向，边缓慢进针边回抽，直到抽到尿液为止。

大鼠灌注固定取脑

大鼠灌注固定取脑大鼠灌注固定取脑准备物品：37℃的温生理盐水500ml、10%的中性甲醛或4%的多聚甲醛固定液500 ml、500 ml的输液瓶2个、输液管2副、三通1个,镊子、剪刀、止血钳各2把、灌注针(将12号注射用针头的针尖掐断磨钝圆、光滑即可)1个、麻醉剂、步骤1)将两个输液瓶中分别装满生理盐水和固定液并将输液管安装在生理盐水瓶上并调整好,使管内没有气泡。

2)将动物麻醉,数分钟后,待动物前后肢放松,即可准备灌注。

3)将已麻醉的动物仰卧在解剖台上,固定四肢,用左手持镊子夹起腹部皮肤,右手持剪刀自腹部剪一小口,由此沿腹中线和胸骨剑突中线向上将皮肤剪至下颌,分离皮下组织,将皮肤翻向两侧,再沿腹中线和胸骨中线向上剪开胸骨,沿膈肌向两侧剪开,并用止血钳将胸骨和胸部的皮肤钳紧,将止血钳翻向外侧以充分暴露心脏。

小心用镊子将心包打开,滴一些生理盐水保持湿润。

4)分离出主动脉,穿一根丝线,准备结扎灌针。

5)将左心室尖用眼科剪刀剪开一小口,将灌注针插入心室并送至主动脉内,用丝线结扎牢固,使之不能退出,打调节阀,灌注生理盐水,灌注时的灌流量约20 ml/分钟。

时,剪开右心耳,使血液排出。

观察肝脏逐渐变为白色为止6)旋转三通使之对准灌注液,开始灌注固定液。

固定液进大鼠血管后,逐渐出现四肢抽动,表明灌注液进入大鼠大脑,待抽动完全停止,全身组织器官变硬后即可取材。

7)取脑：枕骨大孔处用剪刀横断，小心地于枕骨大孔斜插入剪刀剪开顶骨，用止血钳掰断两边地顶骨，注意嗅球上地顶骨也要仔细去掉，用剪刀于一侧剪断视神经并探到颅底，就可以将整块的脑组织翘起。

取出的脑在同样固定液中4℃再固定4-6小时。

8)保存或切片注意事项：1、将灌注针插入主动脉内是灌注固定的关键,也是难点。

首先准确找到主动脉,这是此步骤的要点。

可用温生理盐水将胸腔内的血液冲洗干净,用眼科镊子轻轻夹住心外膜(夹的越少越好,以免影响取材)将心脏向左上方提起,即可看清主动脉,又可使灌注针很容易地插入主动脉内。

大鼠灌注固定取脑

优点：可用单人用注射器直接完成，不用输液管架，而且平均每只仅需5～10ml固定液，时间也仅为5～10min。
注意事项:1)开胸时不要伤到心脏 2)心脏穿刺最好用留置针,软,不宜穿通室间隔,见血即退针芯.插针部位是心尖部,方向向中线.3)生理盐水冲血管,到右心耳流出无色液体.4)多基甲醛固定成功的表现是SD鼠四肢抽搐.5)先断头再一步一步取脑6)根据你实验设计,需要切片的部位,有重点的取,常见的体表标志是前囟和外耳道.7)去颅骨后脑表面有一层硬脑膜,要去掉.
5 灌流：缓慢灌注PBS 10ml，见到老鼠两前肢及两肺变白可改灌注多聚甲醛，多聚甲醛的灌流也同PBS。
6 灌注成功的标志：刚开始灌注时老鼠剧烈抽动；成功后老鼠后肢绷直，尾部竖起成一直线；所灌注的脑组织白而硬。
7 取脑：分离除去后颈部肌肉，用弯镊小心取出脑组织。
8 后固定：灌流后的脑组织置于4％PFA置4度冰箱内进行后固定，时间>2h，过夜最好。
3.制作灌注装置，用两瓶塑料包装的生理盐水，一瓶底部开口，倒出盐水，倒置灌入多聚甲醛，悬挂，输液器链接，远端结一个三通后到一个输液器粗针头端
2. 经心脏行灌注固定：麻醉，剪开胸廓，见到搏动的心脏，心尖插入灌注针头，止血钳固定，剪开右心耳，开放静脉血，首先快速滴入生理盐水100－200ml，再注入4%多聚甲醛300-350ml固定液
大鼠灌注固定取脑科研实验
具体方法：
1. 配好4％多聚甲醛PBS缓冲液，配法：称取40g PFA溶于装有500ml DEPC水的玻璃容器（烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅拌至60～65℃，使成乳白色悬液。用1.0mol/L的NaOH直至7.0，使呈清亮状（滴加），再加入约500ml PBS，充分混匀（在冰浴或冷水浴中），可再检测一下pH，过滤后定容至1000ml，室温或4℃保存备用。

大鼠脑脊液抽取的新方法

图 1 大鼠固定示意图
收稿日期： 2011 － 06 － 28 * 基金项目：国家自然科学基金（ No． 30870854）；北京市教委科技创新平台项目（ PXM2011 _014226 _07 _000070 ）；北京市优秀人才基金 D
类（ 2011D005018000007）资助作者简介：任长虹（ 1974 －），女，博士。研究方向：神经生物学。E-mail： ren97hong2001@ yahoo． com． cn 通信作者：吉训明（ 1970 －），男，主任医师。研究方向：神经外科脑血管病的机制及治疗研究。E-mail： jixm70@ hotmail． com
櫴毷
第 29 卷第 1 期 2012 年 2 月
櫴櫴櫴櫴櫴毷技术·方法
实验动物科学 LABORATORY ANIMAL SCIENCE
Vol． 29 No． 1 February 2012
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櫴毷
大鼠脑脊液抽取的新方法*
任长虹1 高明清1，2 曹金强1，3 李宁1 Kevin K． W． Wang4 吉训明1
大鼠固定后通过触摸找到枕骨嵴occipitalcrest如果是初学者为了明确具体位置可以在此处用记号笔标识大鼠头部固定后如果角度适中隐约可见枕骨嵴后有一肌肉间隙以枕骨嵴下mm处的肌肉间隙处为进针点用手触摸有三角形凹陷进针角度与身体平行即针与头部的角度约为135图2针尖坡面向上缓慢向前进针到小脑延髓池cisternamagna深度约为cm
脑脊液（ Cerebro-Spinal Fluid，CSF）为无色透明的液体，充满在各脑室、蛛网膜下腔和脊髓中央管内，由脑室中的脉络丛产生［1］。若中枢神经系统发生病变，神经细胞代谢紊乱，将使脑脊液的性状和成分发生改变。因此，大鼠脑脊液常被用于脑损伤机制、生物标记物、药物治疗等研究领域中，但是，由于脑脊液提取过程复杂，且容易刺穿延髓致使大鼠死亡，脑脊液提取的成功率低也是许多实验室面临的问题。因此，本文将介绍一种简便易行的大鼠脑脊液的提取方法，为大鼠脑脊液的相关研究提供参考。

2.脑脊液、骨髓的采集

常用实验动物脑脊液、骨髓的采集脑脊液的采集麻醉犬，让犬处于侧俯卧位，使其头与尾尽量向腹中弯曲，用剪毛剪将第七腰椎周围被毛剪去，用3％碘酊和75％酒精严格消毒后，在犬背部客骨连线中点稍向下方摸到第七腰椎间隙（第七腰椎与第一荐骨之间）插入腰椎穿刺针头，当针达到管内时（蛛网膜下腔）可见到犬后肢有抽动，即证明穿刺针头已进入椎管。

此时不要再向下刺，以免损伤脊髓。

然后抽出穿刺针芯，可见透明的脑脊髓液慢慢滴出。

犬一次抽2～3ml，但抽好后，注入同样量的生理盐水，以保持原来脑脊椎里的压力。

(一)狗、兔脑脊液的采集通常采取脊髓穿刺法穿刺部位在两髂连线中点稍下方第七腰椎间隙。

动物轻度麻醉后，侧卧位固定，使头部及尾部向腰部尽量弯曲，剪去第七腰椎周围的被毛。

如果无脑脊液流出，可能是没有刺破蛛网膜。

轻轻调节进针方向及角度，如果脑脊液流的太快，插入针芯稍加阻塞，以免导致颅内压突然下降而形成脑疝。

(二)大鼠脑脊液的采集可采用枕大孔直接穿刺法在大鼠麻醉后，头部固定于定向仪上。

头颈部剪毛、消毒，用手术刀沿纵轴切一纵行切口(约2cm）用剪刀钝性分离颈部背侧肌肉。

为避免出血，最深层附着在骨上的肌肉用手术刀背刮开，暴露出枕骨大孔。

由枕骨大孔进针直接抽取脑脊液。

抽取完毕逢好外层肌肉、皮肤。

刀口处可撒些磺胺药粉，防止感染。

采完脑脊液后，应注入等量的消毒生理盐水，以保持原来脑脊髓腔的压力。

骨髓的采集1. 大鼠、小鼠骨髓的采集：用颈椎脱臼法处死动物,剥离出胸骨或股骨，用注射器吸取少量的Hank平衡盐溶液，冲洗出胸骨或股骨中全部骨髓液。

如果是取少量的骨髓作检查，可将胸骨或股骨剪断，将其断面的骨髓挤在有稀释液的玻片上，混匀后涂片凉干即可染色检查。

2. 大动物骨髓的采集：狗等大动物骨髓的采集可采取活体穿刺方法。

SD大鼠脑脊液采集方法的改进

SD大鼠脑脊液采集方法的改进朱奕昕;叶冬青;李晓莉【摘要】目的探索一种最适合初学者的快速、方便和无血污染的SD 大鼠脑脊液收集方法.方法取雄性SD大鼠45只,分成三组:第一组,经肌肉穿刺延髓池抽取法,第二组,经皮直接穿刺延髓池抽取法,第三组,直视下经硬脊膜穿刺延髓池抽取法.结果第一组共有13只大鼠成功获得80~140 μL的脑脊液,2只采集到血性脑脊液,成功率为87.6%;第二组共成功抽取脑脊液7只,成功率为46.7%;第三组共成功抽取脑脊液5只,成功率为33.3%.结论经肌肉穿刺延髓池抽取脑脊液法是一种适合初学者的方便快捷、无污染的SD大鼠脑脊液采集技术.%Objective To explore a rapid, convenient and non-polluting method of collecting cerebrospinal fluid (CSF)in Sprague Dawley(SD)rats for beginners. Methods Forty-five SD rats were divided into three groups—group 1(collecting CSF through neck muscles), group 2(collecting CSF through skin directly), and group3(collecting CSF through endorhachis). Results The successful rate of the CSF collection in the group 1 was 86.7%, group 2 was 46.7%,and group 3 is 33.3%. Conclusions The modified collection method of CSF by cisterna puncture through neck muscles in SD rats is simple,convenient,efficient and non-polluting,and is especially suitable for beginners.【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2018(028)004【总页数】3页(P113-115)【关键词】大鼠;脑脊液;采集技术【作者】朱奕昕;叶冬青;李晓莉【作者单位】东南大学附属中大医院神经内科,南京 210009;东南大学神经精神疾病研究所,南京 210009;东南大学附属中大医院神经内科,南京 210009;东南大学神经精神疾病研究所,南京 210009;东南大学附属中大医院神经内科,南京 210009;东南大学神经精神疾病研究所,南京 210009【正文语种】中文【中图分类】R-33脑脊液是动物实验研究中经常用到的标本，在脑损伤机制、生物标记物、药物治疗等研究领域有着不可替代的研究价值，但是由于鼠的脑室及蛛网膜下腔狭小，其内血管又很丰富，导致了脑脊液提取过程复杂，且容易刺穿延髓致使大鼠死亡，因此脑脊液采集的低成功率成了许多研究室面临的技术难题。

大鼠脑脊液、骨髓的采集方法

宝枫林
大鼠脑脊液、骨髓的采集方法
一、大鼠脑脊液的采集方法可以用枕骨大孔直接穿刺法
在大鼠麻醉后，头部固定于定向仪上。

头颈部剪毛、消毒，用手术刀沿纵轴切一纵行切口(约2cm）用剪刀钝性分离颈部背侧肌肉。

为避免出血，最深层附着在骨上的肌肉用手术刀背刮开，暴露出枕骨大孔。

由枕骨大孔进针直接抽取脑脊液。

抽取完毕逢好外层肌肉、皮肤。

刀口处可撒些磺胺药粉，防止感染。

采完脑脊液后，应注入等量的消毒生理盐水，以保持原来脑脊髓腔的压力。

二、骨髓的采集
1. 大鼠、小鼠骨髓的采集：用颈椎脱臼法处死动物,剥离出胸骨或股骨，用注射器吸取少量的Hank平衡盐溶液，冲洗出胸骨或股骨中全部骨髓液。

如果是取少量的骨髓作检查，可将胸骨或股骨剪断，将其断面的骨髓挤在有稀释液的玻片上，混匀后涂片凉干即可染色检查。

2. 大动物骨髓的采集：狗等大动物骨髓的采集可采取活体穿刺方法。

先将动物麻醉、固定、局部除毛、消毒皮肤，然后估计好皮肤到骨髓的距离，把骨髓穿刺针的长度固定好。

操作人员用左手把穿刺点周围的皮肤绷紧，右手将穿刺针在穿刺点垂直刺入，穿入固定后，轻轻左右旋转将穿刺针钻入，当穿刺针进入骨髓腔时常有落空感。

狗骨髓的采集，一般采用髂骨穿刺。

狗等大动物常用的骨髓穿刺点：胸骨：穿刺部位是胸骨体与胸骨柄连接处。

肋骨：穿刺部位是第5～7肋骨各点的中点。

胫骨：穿刺部位是股骨内侧、靠下端的凹面处。

如果穿刺采用的是肋骨，穿刺结束后要用胶布封贴穿刺孔，防止发生气胸。

SD大鼠脑脊液采集方法改进_杨子

图 1 经皮穿刺延髓池抽取脑脊液法
1.5 直视下划破硬脊膜抽取脑脊液法用质量分数为 3%戊巴比妥钠 (30 mg/kg, 腹腔注
射 )麻醉动物 , 然后参照王松军等 [ 2] 的方法操作。利用耳杆、门齿杆固定大鼠头部 , 头枕部剪毛 , 沿后正中线切一纵行切口 (约 2 cm), 钝性分离项部背侧肌肉。用手术刀背刮开附着在枕骨上的肌肉避免出血 , 暴露寰枕筋膜后 , 用蒸馏水冲洗创面 , 无菌棉球擦净后 , 用手术刀纵向划破硬脊膜 0.3 cm, 可见脑脊液流出 , 将 1 ml注射器置于破口处抽取脑脊液 , 见图 2。
按质量分数为 3%戊巴比妥钠 (30 mg/kg, 腹腔注
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中国职业医学 2011年 4月第 38卷第 2期 ChinOccupMed, April, 2011, Vol.38, No.2
射 )麻醉动物 , 然后参照富宏等[ 1] 的研究方法进行操作。将大鼠的头部尽量向胸部屈曲后 , 用手摸到枕骨隆凸与第 1颈椎之间的凹陷 (枕骨大孔 ), 左手固定位置 , 右手持针头 (1 ml注射器 ), 由此凹陷的正中线上 , 顺平行大鼠头部弯曲的角度 , 小心地刺入小脑延髓池 , 抽取脑脊液 , 见图 1。
1 材料和方法 1.1 动物
SD大鼠 30 只 (合格证号 :粤检证第 SCXK2008-
基金项目 :国家自然科学基金项目 (30972458, 30771786);广东省医学科研基金项目 (A2009060);卫生部卫生标准制 (修 )订项目 (20100303);清远市科技局项目(清科字 [ 2007] 59 号 )
关键词 :SD大鼠 ;脑脊液 ;采集技术中图分类号 :R135;R-33 文献标识码 :B

大鼠脑脊液骨髓的采集方法

大鼠脑脊液骨髓的采集方法步骤一：麻醉大鼠将大鼠置于麻醉箱中，使用一般常用的麻醉方法，如使用注射器将麻醉剂注射到大鼠体内，或将大鼠放入具有麻醉效果的气体环境中（如氧化乙烯、异氟醚等），使大鼠进入深度麻醉状态。

步骤二：准备工具和材料准备需要的实验器材和材料，包括注射器、微量注射器、针头、创口贴、消毒液、手套等。

步骤三：固定大鼠的头部将麻醉好的大鼠放到一块柔软的垫子上，然后将大鼠的头部固定在取样位置上，以保证操作时头部不会有移动。

步骤四：刮除毛发并消毒使用刀片或电动剃刀将取样部位的毛发刮除干净，并用消毒液进行彻底消毒，以避免感染。

步骤五：穿刺脊髓采用腰椎穿刺法，使用无菌注射器和针头将其插入到脊髓腔内。

刺穿脊髓后，抽取相应的脑脊液样品。

步骤六：收集脑脊液利用微量注射器收集抽取的脑脊液样品，注意避免气泡的产生。

收集足够的脑脊液样品用于后续实验。

步骤七：处理采集部位在完成采集后，将针头缓慢地拔出，然后用无菌纱布或创口贴轻轻按压采集部位，以止血，防止感染。

大鼠骨髓的采集方法：步骤一：麻醉大鼠将大鼠置于麻醉箱中，使用一般常用的麻醉方法，如使用注射器将麻醉剂注射到大鼠体内，或将大鼠放入具有麻醉效果的气体环境中（如氧化乙烯、异氟醚等），使大鼠进入深度麻醉状态。

步骤二：准备工具和材料准备需要的实验器材和材料，包括注射器、微量注射器、针头、创口贴、消毒液、手套等。

步骤三：固定大鼠的肢体将麻醉好的大鼠放到一块柔软的垫子上，然后将大鼠的肢体固定在取样位置上，以保证操作时肢体不会有移动。

步骤四：消毒使用适当的消毒液对骨髓采集部位进行消毒，以避免感染。

步骤五：穿刺骨髓用带有针头的注射器穿刺骨髓。

穿刺一般选择胫骨、肱骨或股骨中的一根较粗的部位，并确保穿刺角度和力度适合。

步骤六：采集骨髓通过注射器吸取骨髓样品，并将其收集在一支干燥、清洁的离心管中。

确保采集到足够的骨髓样本以供后续实验使用。

步骤七：处理采集部位在完成采集后，将针头缓慢地拔出，然后用无菌纱布或创口贴轻轻按压采集部位，以止血，防止感染。

大鼠灌注取脑

大鼠灌注取脑用途：1.用于常规HE染色，免疫组化分析。

2。

冰冻切片可以不做脑组织固定。

3.不可用于western blot和PCR.4。

如果观察脑组织的缺血、损伤或其它病变时,不作灌注固定，而是在取出脑组织后作固定，将大大影响效果.原理：心脏灌流术能够快速冲净血液并在动物死亡前进行组织的前固定，避免了组织的自溶现象，是脑组织切片观察的常用方法.多聚甲醛使组织蛋白发生交联，以保持蛋白的原位和表面结构不变，从而能使其对应的抗体准确检测其表达位置和量。

必要性:1.脑组织较软，且细胞成分不易保留，脑组织是较易软化的组织之一,血供也较为丰富，所以最好是在取脑组织前用4％多聚甲醛灌注固。

2.经前固定后，取脑操作时，可减少脑组织损伤.3.脑内血液都在，HE染色后，可去除红细胞背景影响.大鼠灌注取脑标准操作规程（SOP):流程：1)麻醉 2)开胸 3)心脏左心室穿针,剪开右心耳 4）生理盐水冲水 5)4％多基甲醛固定 6)取脑 7)保存或切片。

具体过程：大鼠经深度麻醉后，固定于自制的手术木板上，置于解剖盘中,开胸暴露并游离出心脏，经左心室插入灌流针并固定, 切开右心耳，先灌注冰冻无菌生理盐水（4℃)XmL，直到肝和肺脏颜色转白及右心房流出液澄清,后再灌注冰冻(4℃）4％多聚甲醛XmL，断头取脑，多聚甲醛浸泡固定24小时。

Tips:1。

多聚甲醛的配置：一般方法为：4％多聚甲醛PBS缓冲液配法：称取40g PFA溶于装有500mlDEPC水的玻璃容器（烧杯或烧瓶)中，持续加热磁力搅拌至60～65℃,使成乳白色悬液。

用1。

0mol/L的NaOH 值至7.4，使呈清亮状（滴加），再加入约500ml PBS,充分混匀（在冰浴或冷水浴中），可再检测一下pH，过滤后定容至1000ml,室温或4℃保存备用。

简便方法：先配好PBS，称好相应的多聚甲醛，37℃水浴或温箱密封放置2天，就能全溶。

若是很急,55℃水浴一天,期间不时震荡。

提取大鼠骨髓的方法

提取大鼠骨髓的方法
提取大鼠骨髓的方法包括以下步骤：
1. 选取适当的实验动物，如SPF级、体重100~150g的SD大鼠。

2. 将大鼠断颈处死，然后将其置于体积分数为75%的乙醇中浸泡5分钟进行消毒。

3. 将工作台进行紫外消毒，并用通风机通风3分钟，以保持无菌环境。

4. 用75%酒精擦拭操作台和双手，确保无菌操作。

5. 准备好所需的工具，如大剪刀、止血钳、眼科剪刀、眼科镊子以及干净的培养皿。

6. 将大鼠仰卧放置在超净台内的干净培养皿上。

7. 使用眼科镊子沿腹股沟处提拉大鼠皮肤，并用眼科剪刀剪开腹股沟皮肤，暴露出腿部肌肉。

8. 从关节处将大鼠大腿剪下，并除去骨表面附着的软组织。

9. 如果剪刀不易将骨表面肌肉组织剔除干净，可以使用无菌纱布擦拭，以便更方便地剔除肌肉组织，提高所分离细胞的纯度。

10. 用无菌PBS浸泡清洗骨骼。

11. 用眼科剪剪断两端骨骺，显露骨髓腔。

12. 将骨骼放置在10ml含体积分数为10%胎牛血清的新鲜DMEM完全培养液的无菌培养皿中。

13. 使用注射器吸取完全培养液冲洗骨髓腔，重复冲洗3次，然后反方向冲洗3次，直至骨髓腔冲洗液变清亮。

14. 吹打细胞悬液，以便分散细胞。

15. 将骨髓悬液收集至15ml离心管中，在1000r/min室温下离心5分钟。

完成以上步骤后，即可提取到大鼠的骨髓细胞。

请注意，实验应在无菌条件下进行，以避免污染样本。

两种采集SD大鼠脑脊液方法的比较_cropped

疡的发生10 。

胃缺血- 再灌注引起急性胃黏膜损伤的机制, 主要与细胞内钙超载、氧自由基过量生成、白细胞浸润等因素有关。

已有研究报道SS 对胃黏膜损伤具有保护作用,可能与对抗自由基引起的损伤有关2 。

胃缺血- 再灌注后胃窦黏膜内D 细胞通过分泌SS ,一方面抑制胃酸的分泌, 减轻溃疡的程度;另一方面, SS 可通过增强细胞对抗自由基引起的损伤而对胃黏膜起保护作用。

SS 的增多,可能是机体自然抗病的一种局部反应。

综上所述, 本实验结果提示: 胃窦黏膜D 细胞通过分泌SS 参与了大鼠GI - RI 的过程。

duced by ischemia - re perf usion in the rat : r ole of leukocytes on ulcer2 ation in rat stomachJ . Lif e Sci ,1996 ,59 (19) :295 - 301 .周吕主编. 胃肠生理学基础与临床M. 北京:科学出版社, 1998 . 73 - 97 .詹静海,石爱荣. 大鼠实验性肠系膜上动脉闭塞性休克时胃窦粘膜D 和G 细胞免疫组织化学研究J . 解剖学报, 1990 , 21(2) :200 - 204 .Park SM , Park H S. G -and D -cell populations , serum and tissu ec oncentrations of gastrin and somatostatin in patients w ith pe ptic ulcerdiseasesJ . K orean J I ntern Med ,1993 ,8 (1) :1 - 7 .K armeli F , Eliakim R , Okon E , et al . S omatastatin e f fectivly prevents ethanol - and NSAI D - induced gastric muc osal damage in rats J .D ig D is Sci ,1994 ,39 (3) :617 - 625 .卢十一,石爱荣. 大鼠实验性胃溃疡自愈期间胃窦黏膜G、D 细胞变化的免疫组织化学研究J . 解剖学报,1990 ,21 ( 3) : 302 -306 .Low M J . Clinical endocrinology and metabolism. The somatostatin neu2r oendocrine system :physiology and clinical relevance in gastr oint esti2nal and pancreatic disorders J . Best Pract Res Clin EndocrinolMetab ,2004 ,18 (4) :607 - 622 .收稿日期:2005 - 06 - 26 修回日期:2005 - 07 - 10 56789参考文献:1 Mythen MG ,Webb AR. I ntra - operative gut muc osal hypoperfusion isassociated w ith increased post - operative c omplications and c ost J .I ntensive Care Med ,1994 ,20 (2) :99 - 104 .李铁,张席锦. 生长抑素对胃黏膜的保护作用可能与清除自由基有关J . 生理学报,1994 ,46 (4) :369 - 374 .M orris JB , G uerrer o NH , F urth EE ,et al . S omatostatin attenuates isch2 emic intestinal injuryJ . A m J Surg ,1993 ,165 (6) :676 - 680 . Wada K , K amisaki Y , K itano M , e t al . A ne w gastric ulcer m odel in2 1023本文编辑:吴进4两种采集SD 大鼠脑脊液方法的比较Ξ曹远东1 ,章龙珍1 ,王梅申2 ,唐天友1 ,苏卫红1(1. 徐州医学院肿瘤防治研究所放射治疗科,江苏徐州221006 ;2. 徐州医学院解剖学实验室,江苏徐州221002)摘要:目的比较实验S D 大鼠脑脊液采集的两种方法。

大鼠脑脊液抽取操作流程

大鼠脑脊液抽取操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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两种采集SD大鼠脑脊液方法的比较

两种采集SD大鼠脑脊液方法的比较
曹远东;章龙珍;王梅申;唐天友;苏卫红
【期刊名称】《徐州医学院学报》
【年(卷),期】2005(025)004
【摘要】目的比较实验SD大鼠脑脊液采集的两种方法.方法SD大鼠分为2组,采用经侧脑室穿刺和经枕大孔穿刺法采集脑脊液,比较2种方法穿刺成功率.结果经枕大孔穿刺法成功率明显高于经侧脑室穿刺法.结论经枕大孔穿刺法进针直观、简便、损伤小,明显提高一次性穿刺成功率,并有效减少并发症的发生.
【总页数】3页(P317-319)
【作者】曹远东;章龙珍;王梅申;唐天友;苏卫红
【作者单位】徐州医学院肿瘤防治研究所放射治疗科,江苏,徐州,221006;徐州医学
院肿瘤防治研究所放射治疗科,江苏,徐州,221006;徐州医学院解剖学实验室,江苏,徐州,221002;徐州医学院肿瘤防治研究所放射治疗科,江苏,徐州,221006;徐州医学院
肿瘤防治研究所放射治疗科,江苏,徐州,221006
【正文语种】中文
【中图分类】Q95-34+1
【相关文献】
1.两种方法建立SD大鼠黄褐斑模型的比较实验研究 [J], 邓志博;何施逸;王乾力;李韫韬;胡乔莉;杜永洪
2.脑脊液常规与细胞学两种方法检测脑脊液白细胞计数结果的比较 [J], 刘强;牛晓
艳;何学仙;王振海
3.两种常用染色方法在性成熟SD大鼠阴道涂片中的比较研究 [J], 白春霞;孙国娟;谢萍;冯俭;蒋川
4.SD大鼠肾小管上皮细胞两种原代培养及传代方法的比较 [J], 杜胜华;唐德燊;刘华锋
5.SD大鼠脑脊液采集方法的改进 [J], 朱奕昕;叶冬青;李晓莉
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鼠脑含水量测定

1．脑含水量测定
采用干湿重法，即将缺血再灌注24h后的大鼠行过量麻醉，直接断头后取脑，去除嗅球、小脑和低位脑干，分离左右大脑半球，立即称湿重，然后放入110℃电烤箱中24h烤干，再迅速称脑组织干重。

计算脑含水量(%)=(湿重一干重)/湿重×100%。

2．脑组织SOD、MDA含量测定
脑组织标本及匀浆的制备：
（1）脑缺血2h再灌注24h后，快速断头取脑；
（2）用冰生理盐水漂洗干净后，小心去除软脑膜，取缺血侧脑组织约300mg 的额、顶叶脑皮质(电子天平称重);
（3）加入9倍于样品重量的缓冲液，匀浆制成10%(W/V)的组织匀浆液;
（4）置于低温离心机中，以3500r/min在4℃温度下10min；
（5）取上清液-20℃以下保存，并于一周内测定。

3．脑组织匀浆蛋白含量测定
（1）检测方法:双缩脉法测定。

（2）操作步骤，按表1操作
表1脑组织匀浆蛋白含量测定的操作步骤。