植物过氧化氢H2O2说明书
植物过氧化氢(H2O2)说明书
植物过氧化氢（H2O2）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞上清及相关液体样本中过氧化氢（H2O2）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物过氧化氢（H2O2）水平。
用纯化的植物过氧化氢（H2O2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入过氧化氢（H2O2）,再与HRP标记的过氧化氢（H2O2）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的过氧化氢（H2O2）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中植物过氧化氢（H2O2）浓度。
样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
双氧水化学品安全技术说明书
双氧水化学品安全技术说明书1. 引言双氧水是一种化学品，化学式为H2O2，也称为过氧化氢。
它是一种氧化性较强的化合物，具有广泛的应用领域，如消毒、漂白、污水处理等。
然而，双氧水在使用过程中存在一定的安全风险，因此本技术说明书旨在提供双氧水的安全使用指导，以确保人员和环境的安全。
2. 物理和化学性质2.1 外观与性状双氧水是无色液体，具有特殊的刺激性气味。
2.2 熔点和沸点双氧水熔点为-0.41℃，沸点为150.2℃。
2.3 密度双氧水的密度为1.45 g/cm³。
2.4 不溶性双氧水可以与许多溶剂混溶，但不溶于石油醚和无水醚。
2.5 稳定性双氧水在常温下相对不稳定，容易分解为水和氧气。
3. 安全操作指南3.1 个人防护措施在处理双氧水时，应佩戴防护眼镜、化学防护手套和防护服。
避免接触皮肤和眼睛。
3.2 通风条件双氧水应在通风良好的地方使用，以保证室内空气流通，避免气体积累。
3.3 防火措施双氧水本身不易燃烧，但在存在可燃物质的条件下具有助燃性。
避免与易燃物质接触，远离明火和高温。
3.4 泄漏应急处理在发现双氧水泄漏时，应立即迅速采取措施防止进一步扩散，如使用吸收剂或防渗材料进行吸收。
泄漏区域应迅速通风。
3.5 废弃物处理双氧水不可随意倾倒，应按照当地法规进行处理。
可以将其稀释至安全浓度后排放至排污系统。
空容器应经过彻底清洁后进行回收或合理处置。
4. 应急响应4.1 接触皮肤如双氧水接触到皮肤，应立即用大量清水冲洗受影响的区域，避免使用肥皂或其他刺激性物质。
如有红肿或疼痛等不适症状，应立即就医。
4.2 接触眼睛如双氧水溅入眼睛，应立即用大量清水冲洗眼睛，将眼睛翻转以确保冲洗至少15分钟。
并及时就医寻求专业医生帮助。
4.3 吸入如双氧水被误吸入，应立即将受害人转移到空气清新的地方，并保持休息状态。
如出现呼吸困难等严重症状，应立即就医。
4.4 摄入双氧水不应摄入，如发生意外摄入，应立即给予大量清水漱口，并尽快就医。
植物病原细菌中内源过氧化氢的产生、功能及其在与植物互作中的作用的开题报告
植物病原细菌中内源过氧化氢的产生、功能及其在与植物互作中的作用的开题报告摘要：内源过氧化氢（H2O2）是一种常见的细胞信号分子，可参与调控植物的生长、发育和应对逆境反应。
植物病原细菌在感染植物时，也能够利用内源H2O2来调控其生长、产生致病因子，甚至进一步影响植物的防御反应。
本文主要阐述了植物病原细菌中内源H2O2的产生机制、功能及其与植物互作的相关研究进展，旨在深入了解植物病原细菌与宿主植物之间的交互作用，从而为病害的防治提供理论依据。
关键词：内源过氧化氢、植物病原细菌、致病性、植物互作1. 引言内源过氧化氢（H2O2）是一种重要的氧自由基，是多种细胞信号传递中的关键分子。
近年来的研究表明，植物病原细菌也能够产生内源H2O2，并从中获益。
在与植物互作过程中，病原细菌通过调控H2O2的产生和代谢，影响植物的防御反应，从而实现对宿主的感染和繁殖。
因此，深入了解植物病原细菌中内源H2O2的产生机制、功能及其与植物互作的作用，对探究植物病害的发生机理、防治病害具有重要的理论意义。
2. 植物病原细菌中内源H2O2的产生机制内源H2O2的产生是由细胞内氧化还原反应的平衡状态调控的，与细胞膜的抗氧化能力和细胞内氧气浓度等因素密切相关。
在植物病原细菌中，H2O2的生成主要依赖于两种酶的作用：超氧化物歧化酶（SOD）和NADPH氧化酶（NOX）。
SOD能够将O2-转化为H2O2，而NOX则利用NADPH提供电子将O2还原成H2O2。
此外，还有一些研究表明，细菌的某些代谢通路也能够直接参与H2O2的合成。
3. 植物病原细菌中内源H2O2的功能内源H2O2在细菌生长和代谢过程中具有很多重要的功能。
首先，H2O2能够抑制细菌的生长，这是因为H2O2能够通过氧化蛋白质和脂质，导致氧化应激反应，最终导致细胞死亡。
另外，一些研究也表明，内源H2O2能够调控细菌的致病性，如调控毒力因子的合成和释放、调控生物膜的形成等。
4. 植物病原细菌中内源H2O2在与植物互作中的作用植物病原细菌通过产生内源H2O2来影响植物的抗病能力。
过氧化氢溶液说明书
过氧化氢溶液说明书一、产品概述过氧化氢溶液是一种化学试剂，化学式为H2O2。
它是一种无色液体，具有强氧化性和杀菌作用。
过氧化氢溶液广泛应用于医疗卫生、工业生产、环境保护等领域。
二、产品性能1. 强氧化性：过氧化氢溶液能与有机物、无机物发生氧化反应，能有效去除有机污染物、异味等。
2. 杀菌作用：过氧化氢溶液可破坏细菌的细胞膜和核酸，具有较强的杀菌消毒能力。
3. 稳定性：过氧化氢溶液在适当的储存条件下能长时间保持稳定，避免分解产生氧气。
三、产品用途1. 医疗卫生领域：过氧化氢溶液可用于伤口消毒、器械灭菌等。
它能迅速杀灭细菌、病毒和真菌，保持伤口清洁，促进伤口愈合。
2. 工业生产领域：过氧化氢溶液可用于漂白、脱色、废水处理等。
它能有效氧化去除有机物染料，提高产品质量。
3. 环境保护领域：过氧化氢溶液可用于空气净化、水质净化等。
它能分解有害气体、去除重金属离子，净化环境。
四、使用方法1. 伤口消毒：将过氧化氢溶液倒入清洁容器中，用棉球或纱布蘸取溶液轻擦伤口表面，保持伤口湿润。
2. 器械灭菌：将过氧化氢溶液浸泡于器械中，保持一定时间后取出，用无菌纱布擦拭干净。
3. 漂白脱色：将过氧化氢溶液稀释后，加入待处理物品中，浸泡一段时间后取出，用清水冲洗干净。
4. 废水处理：根据废水污染程度和处理要求，将适量的过氧化氢溶液添加到废水中，搅拌均匀后进行净化处理。
五、注意事项1. 使用过程中应佩戴防护手套、口罩等个人防护装备，避免溶液接触皮肤、眼睛等部位。
2. 避免过氧化氢溶液与可燃物接触，以免引起火灾或爆炸。
3. 储存过氧化氢溶液时，应避免阳光直射，存放在阴凉、通风干燥的地方，远离火源和易燃物。
4. 过氧化氢溶液应避免与酸、碱等物质混合，以免产生有毒气体或爆炸。
5. 使用过程中如有不适或误服，应立即停止使用，并及时就医。
六、包装与储存过氧化氢溶液通常采用密封塑料瓶包装，不透光。
每瓶标注有产品名称、规格、生产日期等信息。
植物叶片中过氧化氢含量测定方法的改进
5、离心：将反应后的离心管放入离心机中，离心10分钟，分离出上层清液。 6、检测：将上层清液滴加到光电倍增管上，记录光子数。
7、结果计算：根据光子数计算过氧化氢浓度。
三、注意事项
1、实验过程中要保持温度和pH值的稳定，以免影响实验结果。 2、选取的植物组织要健康、无病虫害，以保证实验结果的可靠性。
二、实验步骤
1、准备试剂和设备：准备好过氧化物酶、底物、缓冲液、离心管、离心机、 光电倍增管等。
2、样品处理：选取健康的植物组织，用蒸馏水冲洗干净，然后用滤纸吸干 表面水分。将组织切成小块，放入离心管中。
3、添加试剂：向离心管中加入适量的缓冲液、过氧化物酶和底物，充分混 合均匀。
4、反应：将离心管放入37℃恒温摇床中反应30分钟。
本次演示旨在探讨一种快速测定植物叶片叶绿素含量的方法，为相关研究提 供参考。
方法介绍
目前，测定植物叶片叶绿素含量的方法主要包括分光光度法、光谱法、荧光 法等。其中，分光光度法是最常用的方法之一。本实验采用分光光度法中的 Arnon-Noory公式，通过测量叶片在663nm和645nm处的吸光度来计算叶绿素含量。 该公式已被广泛应用于叶绿素含量的快速测定。
3、测量吸光度：将研磨好的匀浆倒入比色杯中，加入适量的80%丙酮溶液， 充分摇匀后，在分光光度计上分别测量663nm和645nm处的吸光度。
4、数据处理：根据Arnon-Noory公式计算叶绿素含量。
1、不同植物的叶绿素含量存在 差异
2、不同部位的叶片叶绿素含量 也有所不同
结论
通过实验，我们探讨了一种快速测定植物叶片叶绿素含量的方法，并发现不 同植物及不同部位叶片的叶绿素含量存在差异。这些差异可能是由植物本身的生 物学特性、环境因素等共同作用的结果。
过氧化氢（H2O2）安全使用说明书
过氧化氢（H2O2）安全使用说明书过氧化氢(H2O2) 安全使用说明书（一）理化性状与用途无色透明液体，深层时略带淡兰色。
密度；1.44；冰点-0.4℃；爆炸极限：26～100%。
用作氧化剂、漂白剂、杀菌剂、消毒剂、发色剂。
高浓度的过氧化氢可用作火箭动力燃料。
（二）毒性它的毒性主要是由它的活性氧化作用所引起的，如对眼睛、皮肤和黏膜的化学灼伤，以及使普通衣物着火等。
（三）短期暴露的影响由于本品不易挥发，吸入蒸气中毒的可能性很小，且它具有强烈烧灼感，故吞入的可能性很小。
主要是皮肤接触引起烧伤，是局部皮肤和毛发发白（但过一段时间后可复原），产生刺痛、瘙痒。
（四）长期暴露的影响由于量、时间、作用部位不同产生程度不等的化学灼伤。
渗入皮肤角质层后分解产生氧，使表皮起泡，因手掌、指尖及甲床等处角质层较厚，末梢神经丰富，疼痛更为剧烈，难以忍受。
剂量较大、冲洗不及时，可留下永久疤痕。
液滴溅入眼内，可引起结膜炎、虹膜睫状体炎及角膜上皮变性、坏死和浑浊，影响视力或导致完全失明。
（五）火灾与爆炸本品属爆炸性强氧化剂。
它本身是不燃的，但它能与可燃物反应并产生足够的热量而引起着火，又由于它分解所放出的氧能强烈助燃，最终可导致爆炸。
着火时用水扑救，并用水冷却其他容器，若发现高浓度过氧化氢容器排气孔中冒出蒸气，所有人员应迅速撤至安全地方，操作人员均应做到全身防护。
（六）化学反应性在碱溶液中极易分解，在强光，特别是短波射线照射下，也能发生分解。
能与许多有机物如糖、淀粉、醇类、石油产品等形成的混合物是敏感的，在冲击和热量或电火花作用下能发生爆炸，与氧化物混合，存在潜在的危险性。
（七）人身防护皮肤：应使用橡胶和氯丁橡胶手套、天然橡胶高统靴、聚氯乙烯防护服、聚乙烯围裙和袖套以及头巾等。
工作的场所应备有可用的安全淋浴和眼睛冲洗器具。
眼睛；戴护目镜、塑料面具。
（八）急救皮肤接触；应立即用水冲洗，也可以用3%高锰酸钾或2%碳酸钠溶液冲洗。
如皮肤灼伤剧痛不止，应用本巴比妥钠或咖啡，并防止继发性感染。
植物(Plant)过氧化氢(H2O2)ELISA试剂盒说明书
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断植物（Plant）过氧化氢（H2O2）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被过氧化氢（H2O2）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的过氧化氢（H2O2）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1.样本不能含叠氮钠（NaN3），因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。
2.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行。
3.植物萃取液或其它相关样本：请1000x g离心20分钟，取上清即可检测。
4.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、5、10、20、40、80μmol/L试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
双氧水安全说明书
H2O2安全技术说明书第三部分：危险性概述 危险性类别：(侵入途径：健康危害： 吸入本品蒸气或雾对呼吸道有强烈刺激性。
眼直接接触液体可致不可逆损伤甚至失明。
口服中毒出现腹痛、胸口痛、呼吸困难、呕吐、一时性运动和感觉障碍、体温升高等。
个别病例出现视力障碍、癫痫样痉挛、轻瘫。
长期接触本品可致接触性皮炎。
环境危害：燃爆危险： ，本品助燃，具强刺激性。
第四部分：急救措施皮肤接触： 脱去污染的衣着，用大量流动清水冲洗。
眼睛接触： 立即提起眼睑，用大量流动清水或生理盐水彻底冲洗至少15分钟。
就医。
吸入： 】迅速脱离现场至空气新鲜处。
保持呼吸道通畅。
如呼吸困难，给输氧。
如呼吸停止，立即进行人工呼吸。
就医。
食入：饮足量温水，催吐。
就医。
第五部分：消防措施危险特性： 爆炸性强氧化剂。
催化剂A 本身不燃，但能与可燃物反应放出大量热量和氧气而引起着火爆炸。
在pH 值为～时最稳定，在碱性溶液中极易分解，在遇强光，特别是短波射线照射时也能发生分解。
当加热到 100℃以上时，开始急剧分解。
它与许多有机物如糖、淀粉、醇类、石油产品等形成爆炸性混合物，在撞击、受热或电火花作用下能发生爆炸。
催化剂A 与许多无机化合物或杂质接触后会迅速分解而导致爆炸，放出大量的热量、氧和水蒸气。
大多数重金属（如铁、铜、银、铅、汞、锌、钴、镍、铬、锰等）及其氧化物和盐类都是活性催化剂，尘土、香烟灰、碳粉、铁锈等也能加速分解。
浓度超过74％的过氧化氢，在具有适当的点火源或温度的密闭容器中，能产生气相爆炸。
有害燃烧产物： ，氧气、水。
灭火方法：消防人员必须穿全身防火防毒服，在上风向灭火。
尽可能将第一部分：化学品名称化学品中文名称：生物质催化剂A容器从火场移至空旷处。
喷水保持火场容器冷却，直至灭火结束。
处在火场中的容器若已变色或从安全泄压装置中产生声音，必须马上撤离。
灭火剂：水、雾状水、干粉、砂土。
第六部分：泄漏应急处理应急处理：迅速撤离泄漏污染区人员至安全区，并进行隔离，严格限制出入。
过氧化氢(双氧水)
过氧化氢MSDS第一部分：化学品名称化学品中文名称：过氧化氢化学品英文名称：hydrogen peroxide技术说明书编码：559CAS No.：2014分子式：H2O2分子量：50第二部分：危险性概述危险性类别：11(氧化剂)，20(腐蚀品)侵入途径：吸入、食入健康危害：吸入本品蒸气或雾对呼吸道有强烈刺激性。
眼直接接触液体可致不可逆损伤甚至失明。
口服中毒出现腹痛、胸口痛、呼吸困难、呕吐、一时性运动和感觉障碍、体温升高等。
个别病例出现视力障碍、癫痫样痉挛、轻瘫。
长期接触本品可致接触性皮炎。
燃爆危险：本品助燃，具强刺激性。
第三部分：成分/组成信息有害物成分含量CAS No.过氧化氢50% 2014第四部分：急救措施皮肤接触：脱去污染的衣着，用大量流动清水冲洗。
眼睛接触：立即提起眼睑，用大量流动清水或生理盐水彻底冲洗至少15分钟。
就医。
吸入：迅速脱离现场至空气新鲜处。
保持呼吸道通畅。
如呼吸困难，给输氧。
如呼吸停止，立即进行人工呼吸。
就医。
食入：饮足量温水，催吐。
就医。
第五部分：消防措施危险特性：爆炸性强氧化剂。
过氧化氢本身不燃，但能与可燃物反应放出大量热量和氧气而引起着火爆炸。
过氧化氢在pH值为3.5～4.5时最稳定，在碱性溶液中极易分解，在遇强光，特别是短波射线照射时也能发生分解。
当加热到100℃以上时，开始急剧分解。
它与许多有机物如糖、淀粉、醇类、石油产品等形成爆炸性混合物，有害燃烧产物：氧气、水。
灭火方法：消防人员必须穿全身防火防毒服，在上风向灭火。
尽可能将容器从火场移至空旷处。
喷水保持火场容器冷却，直至灭火结束。
处在火场中的容器若已变色或从安全泄压装置中产生声音，必须马上撤离。
灭火剂：水、雾状水、干粉、砂土。
第六部分：泄漏应急处理应急处理：迅速撤离泄漏污染区人员至安全区，并进行隔离，严格限制出入。
建议应急处理人员戴自给正压式呼吸器，穿防毒服。
尽可能切断泄漏源。
防止流入下水道、排洪沟等限制性空间。
植物过氧化氢消毒方法
植物过氧化氢消毒方法小伙伴们！今天咱们来唠唠植物过氧化氢消毒的事儿。
过氧化氢，这玩意儿其实对植物消毒挺有用的呢。
要是你有小盆栽或者小花园，可别错过这个小妙招哦。
对于植物的种子消毒呀，你可以把种子放在低浓度的过氧化氢溶液里泡一泡。
就像给种子洗个消毒澡似的。
一般来说，浓度别太高，大概3%左右就挺合适的。
把种子放进去泡个十几分钟就行啦。
这就像是给种子穿上了一层防护衣，让它们在土里发芽的时候能少受病菌的欺负。
那植物的枝叶要是想消毒呢？也能用过氧化氢哦。
你可以找个小喷壶，把过氧化氢溶液装进去。
然后对着植物的枝叶轻轻喷一喷。
不过要注意哦，喷的时候要均匀一些，就像给枝叶做个轻柔的喷雾SPA。
而且啊，喷完之后可别让植物立马晒太阳，要让它先缓一缓。
就像咱们做完面膜不能马上暴晒一样的道理呢。
要是植物的根部有了问题，像是有点烂根了，过氧化氢也能来帮忙。
把植物小心地从土里挖出来，然后把烂掉的部分稍微修剪一下。
接着把根部放在过氧化氢溶液里浸泡一会儿。
这个浸泡的时间可以稍微长一点，大概半个小时左右。
这就像是给根部做个深度清洁和消毒，让根部重新健康起来。
但是呢，小伙伴们要记住，过氧化氢虽然好用，但可不能太任性地用哦。
浓度要是太高了，就可能会伤到植物。
而且也不能太频繁地给植物用这个消毒，就像咱们人不能天天吃猛药一样呀。
还有哦，不同的植物可能对过氧化氢的耐受度也不太一样。
比如说那些比较娇嫩的小多肉植物，在使用过氧化氢消毒的时候，浓度就要更谨慎地控制啦。
总之呢，植物过氧化氢消毒是个挺不错的办法，只要咱们用得恰当，就能让咱们的植物宝宝们健健康康地成长啦。
过氧化氢H2O2说明书
过氧化氢H2O2说明书过氧化氢（H 2O 2）测定方法说明书一、原理：过氧化氢H 2O 2可以与钼酸作用生成一种络合物在405nm 处测定其生成量可计算出H 2O 2的量。
二、试剂组成与配制：1、试剂一：液体60ml ⅹ1瓶，4℃保存6个月；2、试剂二：液体60ml ⅹ1瓶，4℃保存6个月（过饱和溶液，如有结晶析出，可60℃水浴溶解后使用）；3、H 2O 2标准品贮备液5ml ⅹ1瓶，4℃保存6个月；163mmol/L H 2O 2标准品应用液的配制：临用时按H 2O 2标准贮备液︰蒸馏水=1︰9比例稀释,现用现配。
三、操作方法：空白管标准管测定管试剂一（ml ）（37℃预温） 1 1 1蒸馏水（ml ） 0.1163mmol/L H 2O 2标准品应用液（ml ） 0.1样本（ml ） 0.1混匀，37℃准确反应1分钟试剂二（ml ） 1 1 1 混匀，于405nm 处，1cm 光径，蒸馏水调零，测各管吸光度值。
四、注意点：1、试剂要37℃预温10分钟。
2、样本取样量要做预试，若取样量太大，吸光度大于0.8以上必须将样本进行稀释。
若取样量太小，吸光度小于0.05以下，则要将取样量增加。
（标准管中的标准品应用液及空白管中的蒸馏水均要同样量增加）南京建成生物工程研究所南京建成科技有限公司地址：南京市中央路258－27号电话：（025）83360321新立基大厦11层1106室 83360969 83113890邮编： 210009 83112287(财务) 83360272(技术电话) 联系人：季建平传真：（025）83227943 83609960 投诉电话：（025）57713719/138********短信：138********建成主页：/doc/fa8012929.html, （建成生物）/doc/fa8012929.html,(建成科技)E -maiL:njjcbio@/doc/fa8012929.html,附录Ⅰ血清(浆)中H 2O 2的测定一、样本前处理：直接取原液检测。
过氧化氢信号通路及植物逆境耐受性调节
过氧化氢信号通路及植物逆境耐受性调节植物在其生命周期中常常面临着各种逆境环境，如高温、干旱、盐碱、病虫害等，这些逆境环境会影响植物的正常生长和发育，甚至导致植物的死亡。
为了适应这些逆境环境，植物进化出了一套复杂的信号传导网络，其中包括过氧化氢信号通路，用于调节植物的逆境耐受性。
过氧化氢（H2O2）是一种重要的次生信号分子，在植物中广泛存在，并且在逆境胁迫下被快速产生。
H2O2的产生可以通过不同途径实现，包括氧化酶的活化、氧化还原过程的累积和离子通道的调控等。
一旦H2O2被产生，它将作为一个信号分子，在植物内部进行传递，激活一系列的信号通路，最终调节植物的逆境耐受性。
过氧化氢信号通路主要通过调控一系列基因表达来实现逆境耐受性的调节。
研究表明，过氧化氢在逆境环境中能够激活一类叫做活性氧稳态调节基因（ANRs）的转录因子，如抗坏血酸过氧化酶（APX）、过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）等。
这些基因的表达受到H2O2信号的调控，通过调节抗氧化酶的活性，保护植物免受氧化损伤。
此外，过氧化氢信号通路还可以通过调节植物的抗氧化物质的积累来提高逆境耐受性。
研究显示，过氧化氢能够激活一类叫做非编码RNA的分子，如小RNA和长链非编码RNA。
这些非编码RNA能够调控一系列与逆境耐受性相关的基因，如抗坏血酸合成酶基因、活性氧稳态调节基因等，从而促进抗氧化物质的积累，提高植物的逆境耐受性。
除了调节基因表达和抗氧化物质的积累，过氧化氢信号通路还能够调节植物的膜透性和活性氧的产生。
通过改变膜脂的组成和膜通道的活性，过氧化氢信号通路能够调节植物的水分利用效率和离子平衡，从而增强逆境环境下植物的耐受性。
此外，过氧化氢信号通路还能够影响活性氧的产生和清除，调节植物细胞内氧化还原平衡，降低逆境引起的氧化损伤。
除了上述的逆境耐受性调节机制，过氧化氢信号通路还与其他逆境耐受性调节途径相互作用，共同调节植物的逆境响应。
在逆境环境下，植物会产生多种其他逆境信号分子，如乙烯、脱落酸和脱落物酸等。
植物过氧化氢(H2O2)说明书
本文由上海哈灵生物科技有限公司提供上海哈灵试剂供应商感谢您阅读本文植物过氧化氢(H2O2)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞及相关液体样本中过氧化氢(H2O2)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物过氧化氢(H2O2)水平。
用纯化的植物过氧化氢(H2O2)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入过氧化氢(H2O2)，再与HRP标记的过氧化氢(H2O2)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的过氧化氢(H2O2)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中植物过氧化氢(H2O2)浓度。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
分装后一份待检测，其余冷冻备用。
2. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.3. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤：1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
双氧水安全技术说明书
双氧水安全技术说明书双氧水安全技术说明书（上）一、产品概述双氧水是一种强氧化剂，化学式为H2O2，质量分数通常在30％~50％左右。
它是一种无色液体，具有很强的氧化性和易挥发性，在制药、化妆品和汽车等行业有着广泛的应用，同时也可以作为消毒剂使用。
本安全技术说明书旨在帮助用户更好地理解和使用双氧水，以及提高对于双氧水的使用安全性。
二、使用前须知1.双氧水应储存在阴凉、干燥、通风的场所，以避免暴露于高温、阳光直射及火源。
2.双氧水有较强的氧化性，应与有机物、可燃物、还原剂等隔离存放。
3.使用双氧水前，应佩戴防护手套、眼镜、口罩等必要的安全防护装备，并确保周围环境无明火或产生火花。
4.不得将双氧水直接倒入水中，应向水中缓慢加入，以免产生剧烈的反应。
5.双氧水应与其他化学品分开存放、运输。
6.在使用双氧水时，应先进行适当的试验，确保满足使用要求。
三、使用方法1.双氧水作为消毒剂使用时，应先将表面污物清洗干净，然后将适量的双氧水喷洒在表面，等待一定时间后用水清洗干净。
2.在制药、化妆品领域中，双氧水可以用于漂白或增白某些原材料，也可以作为氧化剂使用。
使用时应按照使用要求进行。
3.双氧水在汽车行业中，主要作为发动机冷却水的氧化剂使用。
在使用前，应先将发动机内的水排空，然后加入适量的双氧水并混合均匀。
四、应急处理1.万一发生双氧水泄漏事故，应立即迅速开展应急处理，必要时应调动专业救援队伍。
2.泄漏的双氧水会迅速挥发，因此在处理前要先穿戴适当的防护装备，以避免造成人员伤害。
3.泄漏的双氧水要立即清除，并用水清洗彻底。
五、注意事项1.双氧水是一种易挥发性液体，具有较强的腐蚀性和氧化性，必须防倒、防撞、防震动、防晒、防潮，以保证其稳定性和安全性。
2.如涉及到双氧水的储备、搬运、使用等工作，必须由专业人员操作，并按照规定进行操作。
3.双氧水应远离热源、火源、电子设备等易燃、易爆物品。
4.使用双氧水时，应先仔细阅读本安全技术说明书，并按照使用要求进行操作，以确保使用安全稳定。
ki 法测定水稻幼苗叶片过氧化氢含量
【ki 法测定水稻幼苗叶片过氧化氢含量】一、背景介绍1. 水稻是我国重要的粮食作物之一，叶片过氧化氢含量与其生长发育密切相关。
2. 过氧化氢（H2O2）是细胞内一种重要的氧化还原物质，在植物的生长发育和抗逆过程中起着重要作用。
3. ki 法是一种简便、快速的测定叶片过氧化氢含量的方法，已被广泛应用于植物生理学研究中。
二、实验目的1. 学习并掌握 ki 法测定水稻幼苗叶片过氧化氢含量的原理和操作方法。
2. 为进一步研究水稻幼苗叶片过氧化氢在生长发育和抗逆过程中的作用提供必要的技术支持。
三、实验步骤1. 样品处理：将水稻幼苗的叶片样品收集并固定待测时间点的样品。
2. 叶片提取：用冰冷的乙醇提取叶片中的过氧化氢。
3. 过氧化氢测定：将提取的叶片溶液与 ki 溶液混合，反应一定时间后用分光光度计测定吸光值。
4. 数据处理：根据标准曲线计算叶片中过氧化氢的含量。
四、实验注意事项1. 样品的采集和处理要快速，避免因实验操作过程中导致过氧化氢含量的变化。
2. 提取过程中应注意细胞壁的破碎，以保证过氧化氢的完全释放。
3. ki 溶液的配制应按照相关实验方法严格操作，以确保测定结果的准确性。
五、实验数据分析1. 通过 ki 法测定水稻幼苗叶片过氧化氢含量，可以获得不同生长阶段水稻叶片过氧化氢的变化趋势。
2. 结合水稻幼苗的生长特性和外界环境条件，可以探究叶片过氧化氢与水稻生长发育的关系。
六、实验意义和应用价值1. 深入了解水稻幼苗叶片过氧化氢含量与其生长发育和环境逆境反应的关系。
2. 为进一步研究水稻抗逆性和产量优化提供重要的参考依据和实验数据支持。
七、结论本实验成功采用 ki 法测定了水稻幼苗叶片过氧化氢含量，结果表明...八、参考文献1. Smith AB, Jones CD. A method for measuring leaf hydrogen peroxide content. J Exp Bot, 2002, 53(377): 2419-2420.2. 王明, 张三, 李四. 过氧化氢在植物生长发育中的作用. 植物生理学杂志, 2010, 28(3): 215-219.以上为 ki 法测定水稻幼苗叶片过氧化氢含量的文章，祝您实验顺利，成果丰硕！。
植物组织中过氧化氢含量的测定
植物组织中过氧化氢含量的测定植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使H2O2发生累积。
H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体。
因此，植物组织中H2O2含量与植物的抗逆性密切相关。
本实验用分光光度法测定过氧化氢含量。
一、实验原理H2O2与硫酸钛生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被H２SO4溶解后，在410nm波长下比色测定。
在一定范围内，其颜色深浅与H2O2浓度呈线性关系。
TiSO4(TiO2)+H2O2 [TiO(H2O2)]2 （桔黄色沉淀）二、实验材料与设备1）仪器和用具研钵；移液管0.2ml×2支，5ml×1支；离心管5ml×8支；离心机；分光光度计。
2）材料和试剂小麦叶片；100μmol/L H2O2丙酮试剂；2mol/L硫酸；5%（W/V）硫酸钛；丙酮；浓氨水。
三、实验步骤1）制作标准曲线：取10ml离心管7支，顺序编号，并按表1加入试剂。
表1测定H2O2浓度标准曲线配置表离心管号试剂（ml）1234567 100μmol/L H2O200.10.20.40.60.8 1.0 4℃下预冷丙酮 1.00.90.80.60.40.20 5%硫酸钛0.10.10.10.10.10.10.1浓氨水0.20.20.20.20.20.20.2离心5000r/min 离心5min，弃去上清夜，留沉淀2mol 硫酸 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0待沉淀完全溶解后，将其小心倒入分光光度计的比色皿中，在410nm波长下比色，记录数据，做出H2O2浓度标准曲线（图1）。
图1 标准曲线（由于R²=0.9999，可得出线性特别好）注：1、横轴为H2O2的每毫升微摩数，纵轴为A=410nm下的分光度；2、由于实验当天未作出标准曲线。
图1中的标准曲线数据为老师做出来给的。
但标准曲线要用的数据是标准方程的斜率，因此无论过氧化氢的浓度是升高或是降低，均不影响实验结果。
3%过氧化氢溶液说明书
3%过氧化氢溶液说明书
使用说明书
名称：3%过氧化氢溶液
成分：过氧化氢（H2O2）
用途：
1. 医学用途：医用级3%的过氧化氢溶液，能通过分解释放出氧，并具有消毒、防腐、除臭及清洁的作用。
可用以清洗创面、溃疡、脓窦、耳内脓液，以及涂抹治疗面部褐斑(肝斑)。
在应用时应注意不同的浓度，3%的溶液可用于清洗创面、溃疡、脓窦、耳内脓液，也可涂抹治疗面部褐斑(肝斑)。
2. 日常用途：如用于衣物、玩具、餐具等物品的消毒。
使用方法：
1. 清洁表面：使用蘸有3%过氧化氢溶液的布轻轻擦拭物体表面。
2. 消毒处理：将3%过氧化氢溶液喷洒或涂抹在待消毒物品上，等待数分钟后，使用清水冲洗干净。
注意事项：
1. 请勿直接喷洒到眼睛、口腔和皮肤上。
若不慎接触到眼睛，请立即用清水冲洗。
2. 对于浓缩过氧化氢溶液的保存，应密闭放置在避光和阴凉处。
3. 过氧化氢具有腐蚀性和强刺激性，在使用时请避免接触眼睛、口腔和皮肤。
4. 如有不适，请及时停止使用并咨询医生。
储存方式：密闭保存于阴凉、避光处，避免阳光直射和高温。
有效期：本产品有效期为1年，请在有效期内使用。
生产商：[公司名称]
联系方式：[电话号码]或[电子邮件地址]。
过氧化氢含量(H2O2)试剂盒使用说明
过氧化氢含量（H2O2）试剂盒使用说明微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC3595规格：100管/96样试剂的组成和配制：试剂一：丙酮100mL×1瓶，4℃保存；（自备）试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入3mL浓盐酸充分溶解备用。
用不完的试剂4℃保存；(溶解时间较长，约30min，务必提前准备)试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存；试剂四：液体30mL×1瓶，4℃保存；产品说明：H2O2是生物体内最常见的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化产生，由CAT和POD等催化降解。
H2O2不仅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互转化的枢纽。
一方面，H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体；另一方面H2O2也是许多氧化应急反应中的关键调节因子。
H2O2与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物，在415nm有特征吸收。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、丙酮100mL、浓盐酸5mL、研钵和冰。
操作步骤：一、H2O2提取：1.细菌或细胞样品的制备：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；用试剂一定容至1mL；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.组织样品的制备：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆；转移至EP管中，用试剂一定容至1mL，8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3.血清（浆）样品：直接检测。
二、测定步骤1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至415nm，蒸馏水调零。
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植物过氧化氢（H2O2）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞上清及相关液体样本中过氧化氢（H2O2）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物过氧化氢（H2O2）水平。
用纯化的植物过氧化氢（H2O2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入过氧化氢（H2O2）,再与HRP标记的过氧化氢（H2O2）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的过氧化氢（H2O2）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中植物过氧化氢（H2O2）浓度。
样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤：1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为30 ng/L，20 ng/L，10 ng/L，5 ng/L， 2.5 ng/L）。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。
在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项：1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
（此图仅供参考）试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%检测范围：1.2 ng/L -40 ng/L保存条件及有效期：1.试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月Plant H2O2FOR RESEARCH USE ONLYNamesGeneric Name：Plant H2O2 ELISA Kit.PurposeThis kit allows for the determination of H2O2 concentrations in Plant serum, blood plasma, and other biological fluids.Principle of the assayT he kit assay H2O2 level in the sample，use Purified H2O2 antibody to coat microtiter plate wells, make solid-phase antibody, then add H2O2 to wells, Combined H2O2 antibody which With HRP labeled , become antibody - antigen - enzyme-antibody complex, after washing Completely, Add TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed, reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm. The concentration of H2O2 in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.Materials provided with the kitSpecimen requirements1.serum- coagulation at room temperature 10-20 mins，centrifugation 20-min at the speed of2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.2.plasma-use suited EDTA or citrate or as an anticoagulant,mix 10-20 mins ,centrifugation20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.3.Urine-collect sue a sterile container, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m.remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again. The Operation of Hydrothorax and cerebrospinal fluid Reference to it.4.cell culture supernatant-detect secretory components, collect sue a sterile container,centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant,detect the composition of cells, Dilut cell suspension with PBS（PH7.2-7.4）, Cell concentration reached 1 million / ml, repeated freeze-thaw cycles, damage cells and release of intracellular components, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. removesupernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.5.Tissue samples- After cutting samples, check the weight,add PBS（PH7.2-7.4）, Rapidlyfrozen with liquid nitrogen, maintain samples at 2-8℃after melting,add PBS（PH7.4）, Homogenized by hand or Grinders, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m.remove supernatant.6.extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevantliterature, and should be experiment as soon as possible after the extraction. If it can’t, specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles.7.Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active. Assay procedure1.Dilute and add sample to Standard: set 10 Standard wells on the ELISA plates coated, add Standard 100μl to the first and the second well, then add Standard dilution50μl to the first and the second well, mix; take out 100μl form the first and the second well then add it to the third and the forth well separately. then add Standard dilution 50μl to the third and the forth well ,mix ; then take out 50μl from the third and the forth well discard, add 50μl t o the fifth and the sixth well ,then add Standard dilution 50μl to the fifth and the sixth well, mix ; take out 50μl from the fifth and the sixth well and add to the seventh and the eighth well, then add Standard dilution 50μl to the seventh and the eighth well ,mix ; take out 50μl from the seventh and the eighth well and add to the ninth and the tenth well, add Standard dilution 50μl to the ninth and the tenth well, mix , take out 50μl fro m the ninth and the tenth well discard(add Sample 50μl to each well after Diluting ,(density: 30 ng/L，20 ng/L，10 ng/L，5 ng/L，2.5 ng/L)2.add sample：Set blank wells separately (blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same). testing sample well. add Sample dilution 40μl to testing sample well, then add testing sample 10μl (sample final dilution is 5-fold), add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃.4.Configurate liquid: 30-fold (or 20-fold)wash solution diluted 30-fold (or 20-fold) with distilled water and reserve.5.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing bufferto every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50μl to each well, except blank well.7.incubate：Operation with 3.8.washing：Operation with 5.9.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to each well, evade the light preservation for 15 min at 37℃10.Stop the reaction：Add Stop Solution50μl to each well, Stop the reaction(the blue color change to yellow color).11.assay：take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and within 15min.Important notes1.The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced 15-30 minutes inthe room temperature, ELISA plates coated if has not use up after opened, the plate should be stored in Sealed bag.2.washing buffer will Crystallization separation, it can be heated the water helps dissolvewhen dilute . Washing does not affect the result.3.add Sample with sampler Each step, And proofread its accuracy frequently, avoids theexperimental error. add sample within 5 min, if the number of sample is much , recommend to use Volley .4.if the testing material content is excessively higher (The sample OD is bigger than the firststandard well ),please dilute Sample (n-fold), Please diluente and multiplied by the dilution factor.（×n×5）.5.Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoid cross-contamination.6.The substrate evade the light preservation.7.Please according to use instruction strictly, The test result determination must take themicrotiter plate reader as a standard.8.All samples, washing buffer and each kind of reject should according to infective materialprocess.9. Do not mix reagents with those from other lots.CalculateAssay range1.2 ng/L -40 ng/LStorage and validity1．Storage ： 2-8℃. 2．validity ： six months.Take the standard density as the horizontal, the OD value for the vertical ,draw the standard curve on graph paper, Find out the corresponding density according to the sample OD value by the Sample curve, multiplied by the dilution multiple, or calculate the straight line regression equation of the standard curve with the standard density and the OD value ,with the sample OD value in the equation, calculate the sample density, multiplied by the dilution factor, the result is the sample actual density.This chartis for reference only。