基因表达沉默技术
RNA介导的基因沉默技术研究
RNA介导的基因沉默技术研究基因沉默是基因表达调控的一种机制，它通过阻断基因转录或抑制已经转录的mRNA的翻译来抑制基因表达。
RNA介导的基因沉默技术采用了RNA作为调控基因表达的工具。
这种技术广泛应用于基因功能研究、疾病治疗和农作物改良等领域。
RNA介导基因沉默技术主要分为siRNA、miRNA和shRNA三类。
1. siRNAsiRNA是20-25个核苷酸的双链RNA，它通过与靶基因mRNA特异性杂交，介导RNA诱导靶基因沉默。
这个过程通过小核RNA和RISC( RNA-Induced Silencing Complex)协同完成。
当siRNA与mRNA杂交后，RISC会切断mRNA形成不完整的片段，导致mRNA降解或翻译抑制。
siRNA技术可以实现精准靶向，对于多种疾病治疗具有潜在的应用价值。
但是，siRNA技术的缺点是需要选择合适的RNA靶点，并且siRNA的短寿命和难以穿透细胞膜限制了其广泛应用。
2. miRNAmiRNA是20-24个核苷酸的单链RNA，它通过特异性结合目标mRNA，同时与RISC结合，引导RISC切割目标mRNA分子。
同时，miRNA还可以通过直接结合靶标的5’端和3’端调控mRNA 的效率和速度。
miRNA广泛参与基因表达调控，可以调控20000多种基因的表达。
miRNA的缺点是具有很高的复杂性和不确定性。
miRNA靶基因的预测算法准确性存在差异，miRNA同靶基因的作用机制还需要进一步研究。
3. shRNAshRNA是基于RNA干扰技术的新型分子，可以在基因水平靶向RNA，抑制基因表达。
shRNA是单链RNA，具有RNAi引发靶基因沉默的功能。
其优点是技术简单，稳定性较好，可以长期干扰一个基因，生成稳定的RNAi信号。
但是，shRNA技术的缺点是仍然存在一些安全性问题和非特异性靶向的可能性。
实现精准稳定靶向仍然是一个需要解决的问题。
RNA介导的基因沉默技术具有广泛的研究和应用前景。
编辑性基因沉默技术的应用
编辑性基因沉默技术的应用编集性基因沉默技术的应用随着基因科学的发展，编辑性基因沉默技术在生物医学领域中得到越来越广泛的应用，为我们开启了新的治疗方法。
那么，到底什么是编辑性基因沉默技术？它有哪些应用？本文将详细介绍。
一、编辑性基因沉默技术是什么编辑性基因沉默技术是一种通过修改基因表达，来达到治疗某些疾病的方法。
它的核心思想是通过编写一段能够识别某个基因序列的RNA，将其引导到该基因的位置，并引发基因的自我沉默（即禁止基因表达），从而达到治疗目的。
它可以在胚胎或者已经出生的个体中实现。
在具体的实践中，科学家们借鉴了CRISPR-Cas9技术的原理，对具体的基因序列进行精确的识别和修改。
二、编辑性基因沉默技术的应用编辑性基因沉默技术的应用非常广泛，下文将就几个比较典型的案例进行阐述。
1. 治疗疾病编辑性基因沉默技术可以用来治疗一些疾病，如癌症、血液病和肌少症等等。
以癌症为例，科学家们利用该技术将一些蛋白质基因的表达禁止，从而达到控制肿瘤生长的目的。
此外，该技术还可以用来治疗一些人类遗传疾病，例如先天性免疫缺陷病和红斑性狼疮等。
2. 动物基因编辑编辑性基因沉默技术还可以用来编辑动物的基因，从而实现一些有趣的目的。
例如，科学家们可以编辑虫子的基因，使其变成基因描述马的耳朵或者猫眼睛的虫子，或者使其变成闪耀的荧光虫子，为科学家们的研究提供有效的工具。
3. 基因性别鉴定编辑性基因沉默技术还可以用来实现基因性别鉴定。
在人类的基因中，男性和女性都有一条性染色体，分别是XY和XX。
科学家可以通过沉默其中一个性染色体上的基因来推断出该个体的基因性别。
这对于一些疾病的研究和治疗都非常有价值。
三、编辑性基因沉默技术的优势相较于其他基因编辑技术，编辑性基因沉默技术有以下几个优势：1. 准确性高编辑性基因沉默技术可以精确地识别基因序列，从而对其进行修改，并禁止其表达。
这种修改的准确性非常高，因此可以有效地控制治疗效果，不会引发额外的不良反应。
基因沉默的原理及其应用
基因沉默的原理及其应用1. 基因沉默概述基因沉默是指通过特定的机制，使得基因表达降低或完全抑制的现象。
它是维持细胞内基因表达稳定性的重要机制之一。
基因沉默的方式主要包括DNA甲基化、组蛋白修饰、RNA干扰等。
基因沉默在生物学研究、基因治疗以及农业生产等方面具有广泛的应用前景。
2. 基因沉默的原理2.1 DNA甲基化DNA甲基化是一种通过在DNA分子上添加甲基基团来改变基因表达的方式。
在DNA甲基化过程中，甲基转移酶将甲基基团转移到DNA分子上，从而使得DNA的结构发生改变，导致基因的表达发生变化。
DNA甲基化通常会导致基因的沉默，而去甲基化则可以解除基因的沉默。
2.2 组蛋白修饰组蛋白修饰是一种通过改变染色质的结构和构象来调控基因表达的方式。
组蛋白是染色质的主要组成部分之一，它可以通过添加或去除特定的化学修饰基团来改变染色质的结构。
这些修饰可以影响DNA与组蛋白之间的相互作用，从而影响基因的转录和表达水平。
2.3 RNA干扰RNA干扰是一种通过引入外源性的RNA分子来抑制特定基因表达的方式。
在RNA干扰过程中，外源性的RNA分子与目标基因的mRNA序列互补配对，形成RNA复合体，并通过RNA酶的作用将目标基因的mRNA降解或抑制其翻译过程。
这种方式可以有效地沉默目标基因，从而改变基因表达的水平。
3. 基因沉默的应用3.1 基因功能研究基因沉默技术为研究基因的功能提供了重要的工具。
通过使用RNA干扰技术，可以特异性地沉默目标基因，然后观察沉默后的细胞或生物体的表型变化，从而揭示该基因在生物体中的功能和作用机制。
3.2 基因治疗基因沉默技术在基因治疗方面具有潜在的应用价值。
通过选择性地沉默致病基因，可以抑制其表达，从而达到治疗疾病的目的。
例如，通过沉默癌细胞的关键基因，可以达到抑制肿瘤生长的效果。
3.3 农业生产基因沉默技术在农业生产中也有广泛的应用前景。
通过沉默特定基因，可以改变农作物的性状，使其具有更好的抗病性、耐逆性以及产量的提高。
基因沉默的技巧
基因沉默的技巧基因沉默是一种控制基因表达的方法，通过阻断特定基因的转录或翻译过程来抑制基因的功能。
这项技术可以帮助我们研究基因的功能以及疾病的发生机制，并且可以在基因治疗和生物工程中应用。
基因沉默的技巧主要有两种：RNA干扰（RNA interference，RNAi）和CRISPR/Cas9。
下面将详细介绍这两种技术及其应用。
1. RNA干扰（RNAi）：RNA干扰是一种通过RNA分子的相互作用来抑制特定基因表达的技术。
它利用小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）或microRNA（miRNA）与靶基因的mRNA结合，形成双链RNA复合体，在细胞内启动RNA降解机制，降解靶基因的mRNA，从而阻断靶基因的转录和翻译。
在实验室中，研究者可以合成特定靶向基因的siRNA或miRNA，并将其转染入细胞中。
为了提高转染效率，研究者通常会使用载体或转染试剂，帮助siRNA 或miRNA进入细胞内。
RNA干扰技术的优点是简便易行、基因特异性高，可以在多种细胞类型中应用，而不仅限于哺乳动物细胞。
在生物医学研究中，RNA干扰技术被广泛应用于基因功能研究、基因治疗、疾病模型的建立等方面。
通过沉默特定基因，研究者可以研究该基因的功能以及与其相关的信号通路；通过沉默病理基因，研究者可以评估基因治疗的潜力，并寻找治疗疾病的新靶点。
2. CRISPR/Cas9：CRISPR/Cas9是一种基因组编辑技术，也可以用于基因沉默。
它利用Cas9蛋白与特定的导向RNA（gRNA）形成复合物，通过与靶基因的DNA序列互补配对，引导Cas9蛋白在特定位点上切割DNA，导致DNA双链断裂。
然后细胞内的修复机制会修复该断裂，并可能导致基因沉默。
CRISPR/Cas9技术的优点是高效、精准、灵活，并且可以在多种生物体内应用。
研究者可以设计特定的gRNA，使其与靶基因的DNA序列完全互补配对，从而实现对该靶基因的沉默。
RNA介导基因沉默及其在基因表达调控中的作用研究
RNA介导基因沉默及其在基因表达调控中的作用研究基因表达调控是生物体内许多生物过程的调控基础，包含基因激活与沉默两个方面。
对于人们如何理解和掌握基因表达调控过程，RNA介导的基因沉默技术为人们提供了很好的契机。
RNA介导基因沉默是通过RNA干扰技术以实现基因的靶向沉默，这个方法基本上已经成为了一个点对点的路径。
这个方法不仅对研究复杂生物生理学以及疾病具有重要的应用价值，并且已经被广泛地应用于研究复杂生物学进程的调节机制。
RNA介导基因沉默技术简介RNA介导基因沉默技术是通过RNA干扰技术以实现基因的精准靶向沉默的。
RNA干扰分别有siRNA和miRNA两种基本类型，其中siRNA是经过高浓度体外合成的双链RNA，与mRNA的序列完全相反，可以通过介导agoshRNA-DICER 复合物来形成出局的mRNA，达到干扰mRNA基因沉默的目的； miRNA的干扰作用主要是介导RISC复合物作用于靶向RNA的剪切降解或者是翻译抑制。
RNA介导基因沉默技术的应用价值RNA介导基因沉默技术不仅仅被应用到了许多基础研究领域，同时也已经在生物医学研究领域中展现出了其广泛的应用价值。
1. 用于高通量筛选药物靶点RNA干扰技术在高通量筛选药物靶点这一研究领域具有越来越重要的作用。
在新药开发当中，高通量药物靶点筛选技术被广泛应用，而RNA介导基因沉默技术又成为了其中一项重要的技术手段之一。
通过基因沉默技术，可以快速筛选出足够的生物靶点来发现新型高效的药物。
2. 用于全基因组表达谱的分析以及生物进化的研究RNA介导基因沉默技术不仅可以通过基因沉默方法来分析全基因表达谱以及生物进化过程中的一些重要生物学问题，还可以通过细胞模型来研究分子调节过程并有效评估控制调节的结果。
大量的一些研究表明，RNA介导技术已经证实了在基因表达控制和剪接控制中具有重要的作用。
3. 用于疾病的诊断和治疗RNA介导技术在肿瘤治疗和病毒感染相关研究中的应用较为成熟完善，如用RNA介导技术来靶向肿瘤细胞上的抗癌基因，从而发挥肿瘤治疗的作用；同时用RNA介导技术来阻断病毒的繁殖过程，从而达到病毒感染治疗效果。
基因沉默的原理及应用
基因沉默的原理及应用一、基因沉默的原理基因沉默是指通过RNA干扰（RNA interference，简称RNAi）技术，特异性地抑制特定基因的表达。
基因沉默在生物学研究中具有重要的应用价值，其原理主要包括以下几个方面：1. siRNA的合成与靶向短干扰RNA（short interfering RNA，简称siRNA）是基因沉默的关键分子。
在细胞内，siRNA会与RNA诱导靶向耗竭（RNA-induced silencing complex，简称RISC）结合，形成RNA-蛋白复合体，然后通过匹配特定序列，将复合体定位到目标mRNA上，最终导致mRNA降解、剪接或抑制翻译。
2. miRNA的生成和功能微小RNA（microRNA，简称miRNA）是一类长度约为21-23个核苷酸的非编码RNA分子。
miRNA产生于细胞内，通过与RNA诱导靶向耗竭结合，实现对mRNA的调控。
miRNA主要通过与mRNA的3’非翻译区域互补配对，诱导mRNA的降解或抑制翻译，从而实现目标基因的沉默。
3. RISC的功能和调控RISC是RNA干扰过程中的一个重要复合体，其主要成员包括siRNA或miRNA，以及相关的蛋白质。
RISC在基因沉默中起到关键的作用，通过与靶向RNA结合，实现对mRNA的调控。
RISC中的蛋白质能够辅助siRNA或miRNA与靶向RNA的杂交，并促进靶向RNA的降解或抑制翻译。
二、基因沉默的应用基因沉默技术已经在许多领域展现出广阔的应用前景，一些典型的应用包括：1. 研究基因功能基因沉默可以通过抑制特定基因的表达，来研究该基因在生物体中的功能。
通过沉默特定基因后，研究人员可以观察到沉默基因对生物体的影响，从而揭示出特定基因在生物体发育、代谢、免疫等方面的作用，为相关研究提供有力的证据。
2. 治疗基因相关疾病基因沉默技术在治疗基因相关疾病方面具有巨大的潜力。
通过针对病因基因进行沉默，可以有效地抑制病因表达，从而达到治疗目的。
RNAi技术
RNAi技术1. 引言RNA干扰（RNA interference，简称RNAi）技术是一种基因沉默技术，通过利用小分子RNA分子调节基因的表达，从而实现对目标基因沉默的目的。
RNAi技术的出现，彻底改变了分子生物学的研究方法，为研究基因功能以及治疗基因疾病提供了新的手段和途径。
2. RNAi技术的原理RNAi技术基于RNA干扰生物过程中产生的一种自我保护机制，即小分子RNA分子干扰RNA的翻译过程。
在这个过程中，RNAi分子通过与RNA互补配对，形成RNA-RNA复合物，这种复合物在RNA酶的作用下被剪切成更小的RNA分子。
这些小RNA分子可以继续识别新的RNA，并在细胞中导致基因沉默（图1）。
图1 RNAi技术的原理示意图3. RNAi技术的应用3.1 RNAi技术在基因功能研究中的应用RNAi技术被广泛应用于分子生物学和细胞生物学的研究中。
通过设计和构建与目标RNA互补的RNAi分子，可以实现对该基因的瞬时或持续沉默。
这种方法可以用来研究基因在生物学过程中的功能以及相互作用，同时也可以用来筛选或验证药物靶标。
3.2 RNAi技术在疾病治疗中的应用由于RNAi技术可以实现对单一基因的沉默，因此它成为治疗基因疾病的一种有效手段。
通过将RNAi分子直接引入到体内，可以实现对特定疾病相关基因的沉默，从而治疗疾病（图2）。
图2 RNAi技术在疾病治疗中的应用示意图4. RNAi技术的优缺点4.1 优点（1）靶向性好：RNAi技术可以实现对特定基因的沉默，从而精确地调控基因表达。
（2）效率高：RNAi技术可以快速地实现基因沉默，因此在基因研究和药物研发中得到了广泛应用。
（3）安全性高：RNAi技术只对特定基因的表达产生影响，不会对细胞或机体整体产生不利影响。
4.2 缺点（1）技术复杂：RNAi技术需要专业知识和技术，因此需要专业技术人员操作。
（2）RNAi分子稳定性低：RNAi分子容易被降解，因此在RNAi技术的应用中需要结合载体和转染技术来增加RNAi分子的稳定性和转染效率。
RNA干扰技术的应用及其局限性
RNA干扰技术的应用及其局限性RNA干扰技术，简称RNAi技术，是一种基因沉默技术，可用于调控、研究基因表达，也被广泛应用于治疗基因疾病、抗癌等领域。
然而，RNAi技术也有其局限性，在应用过程中需要注意一些问题。
一、RNA干扰技术的应用1. 遗传功能研究：利用RNAi技术将特定基因的表达沉默，可以诱导基因敲除或部分失活，进而研究基因在生理生化过程中的作用。
2. 生物制药： RNAi技术被用于制备某些生物制剂，如抗癌药物和疫苗，以便更好地从疾病中恢复健康。
3. 治疗基因疾病： RNAi技术可以用于治疗基因疾病，例如肝胆疾病、糖尿病等。
它可以靶向特定的基因序列，然后暂时沉默目标基因，以达到缓解症状的效果。
4. 抗癌： RNAi技术被广泛用于抗癌领域。
它可以靶向肿瘤相关基因，抑制肿瘤细胞的增殖和扩散，从而达到治疗癌症的目的。
二、RNA干扰技术的局限性1. 不稳定性：RNAi技术的转染效果通常持续不久，因为RNAi只通过RNA干扰来降低特定基因的表达，而RNA的稳定性差，容易被酶降解，失去干扰作用。
2. 靶向效率低：RNAi技术需要非常精准的靶向，如果靶向错误，甚至可能有副作用。
然而，由于RNA序列相同或相似的基因广泛存在，靶向效率很低，而且RNAi技术只能消耗，无法低效的基因也可能因RNAi技术而被降低表达。
3. 难以转染： RNAi技术需要将RNA分子引入靶细胞内，但转染效率甚至低至1%-5%，特别是对于成体细胞。
因此，使用这种技术的疗法无法达到理想的治疗效果。
4. 免疫反应：RNAi技术还可能会诱导系统性的免疫反应，这可能会影响RNAi技术的应用，不能长时间使用。
三、掌握RNA干扰技术的注意事项1. 选择合适的靶向序列：选择合适的靶向序列是RNAi技术成功的关键。
靶向序列需要选择独特的、在细胞内广泛表达的基因，以提高干扰效率和减轻副作用。
2. 选择合适的信噪比检测方法：使用RNA干扰技术需要较死的检测方法来检测靶基因的表达或沉默，以监测RNAi技术的有效性和是否产生异常细胞反应。
沉默基因的原理及应用
沉默基因的原理及应用1. 沉默基因的定义沉默基因（Silencing Gene）是指可以通过RNA干涉（RNA interference, RNAi）技术降低或消除目标基因表达的基因。
RNA干涉是一种细胞内天然的基因调控机制，通过降解特定的mRNA分子来抑制目标基因的表达。
沉默基因技术的出现为基因功能研究和遗传改良提供了有力的工具。
2. 沉默基因的原理沉默基因的原理主要基于RNA干涉技术。
在细胞中，RNA干涉主要分为两个步骤：siRNA的合成和RISC（RNA-Induced Silencing Complex）的形成与作用。
2.1 siRNA的合成siRNA（small interfering RNA）是由双链RNA酶（Dicer）作用下产生的双链小分子RNA。
siRNA可以由来源于细胞内的长串RNA、预先合成的siRNA或经过外源RNA病毒转染所合成。
在细胞中，长串RNA被Dicer酶切割成约21-25个碱基对的双链siRNA，在此过程中Dicer酶与合成的siRNA共同组成RISC。
2.2 RISC的形成与作用RISC是由特殊的蛋白质组成的复合物，其中包含一个Dicer蛋白和一个Argonaute蛋白。
RISC能够识别并结合与siRNA序列互补的靶基因mRNA，在结合的过程中RISC将mRNA分子切割并降解，从而阻断目标基因的正常表达。
3. 沉默基因的应用沉默基因技术在多个领域都有重要的应用价值，主要包括基因功能研究、生物医学研究、农业遗传改良等。
3.1 基因功能研究沉默基因技术可以通过特异性地降低或消除目标基因的表达来研究基因在生物体内的功能。
通过沉默某个特定基因，研究人员能够观察到该基因缺失或受抑制后生物体的表型变化，并进一步了解该基因在生物体发育、代谢、免疫等方面的作用机制。
3.2 生物医学研究沉默基因技术在生物医学研究中的应用十分广泛。
研究人员可以通过沉默特定的致病基因来研究该基因与疾病之间的关系，并探索新的治疗方法。
RNA介导基因沉默技术为疾病治疗打开全新途径
RNA介导基因沉默技术为疾病治疗打开全新途径基因治疗作为一种新兴的治疗方式，日益受到科学家和医生的关注。
随着基因组学的飞速发展，科学家们发现通过控制基因的表达，可以有效地治疗各种疾病，包括癌症、遗传疾病和传染性疾病等。
然而，传统的基因治疗方法存在一些局限性，如难以特异性地靶向基因、特定细胞或组织，以及发生不可预测的副作用等。
为了解决这些问题，科学家们正在开发一种新型的治疗技术——RNA介导基因沉默技术。
RNA介导基因沉默技术是一种利用RNA干扰（RNA interference，简称RNAi）机制来抑制基因表达的方法。
RNAi作为一种天然的细胞调控机制，通过利用小片段的RNA（siRNA或miRNA）与特定的mRNA结合，来降低或抑制目标基因的表达。
这种技术可以精准地靶向特定基因，从而使得疾病治疗更加有效和可靠。
一方面，RNA介导基因沉默技术可以用于治疗癌症。
癌症是由于突变基因的异常表达导致的疾病，通过RNAi技术可以特异性地沉默异常表达的癌基因，从而达到治疗目的。
近年来，通过RNA介导基因沉默技术已经成功地治疗了多种类型的癌症，如乳腺癌、肺癌和肝癌等。
例如，一项研究表明，利用RNAi技术可以抑制HER2基因的表达，从而治疗HER2阳性的乳腺癌。
这种靶向治疗不仅可以减少对化疗的依赖，还能够降低不良反应的发生率。
另一方面，RNA介导基因沉默技术还可以用于治疗遗传疾病。
遗传疾病是由于基因突变或缺陷导致的疾病，通过RNAi技术可以校正或修复这些基因缺陷，从而实现治疗效果。
例如，珍妮森-格尔曼综合征是一种由于FMR1基因的突变而引起的神经发育障碍疾病，研究人员发现使用RNAi技术能够沉默这个基因，从而极大地改善了患者的症状。
此外，RNA介导基因沉默技术还可以用于抵抗传染性疾病。
传染性疾病是由病原体感染引起的疾病，通过RNAi技术可以选择性地抑制病原体的基因表达，从而减少病原体的复制和传播。
例如，研究人员通过将RNAi技术应用于病毒感染的细胞中，成功地抑制了病毒的复制，从而降低了病毒感染的程度。
沉默基因的三种方法
沉默基因的三种方法一、DNA甲基化DNA甲基化是沉默基因的一种重要机制。
这种机制是通过在DNA分子上附加甲基基团来实现的，从而导致DNA序列上的变化。
这种变化会影响基因的表达和功能。
当DNA被甲基化时，它将不再被转录成RNA，从而不会被翻译成蛋白质。
这意味着，甲基化可以通过阻止基因表达来沉默基因。
此外，DNA甲基化还可以通过影响DNA的三维结构来影响基因的表达。
因此，DNA甲基化是沉默基因的一个重要机制。
二、组蛋白修饰组蛋白修饰是另一种沉默基因的机制。
组蛋白是一种蛋白质，它可以包裹在DNA上，从而形成染色体。
组蛋白修饰是通过改变组蛋白的结构和功能来影响基因表达的。
这种修饰可以通过添加或去除化学基团来实现。
例如，添加乙酰基可以促进某些基因的表达，而去除乙酰基则可以使这些基因沉默。
此外，组蛋白修饰还可以通过影响DNA的可访问性来影响基因的表达。
因此，组蛋白修饰是沉默基因的另一个重要机制。
三、microRNA调控microRNA是一种短链RNA，它可以与靶基因的mRNA结合，从而抑制该基因的翻译和表达。
在这个过程中，microRNA会将靶基因的mRNA 降解或阻止其翻译成蛋白质。
因此，microRNA调控是沉默基因的第三种机制。
这种机制在许多生物过程中都扮演着重要角色，包括细胞增殖、分化和凋亡等。
沉默基因是一种重要的生物学现象，它对人体健康有着重要影响。
本文介绍了沉默基因的三种机制，包括DNA甲基化、组蛋白修饰和microRNA调控。
这些机制可以通过不同的方式来影响基因表达和功能，从而对人体健康产生影响。
对于科学家和医生来说，了解这些机制的作用和影响是非常重要的，可以帮助他们开发新的治疗方法和预防策略。
基因表达沉默技术
5
发现历史
antisense
1995年． ． ． ． ． ．
sense
注射
注射
秀丽线虫
基因表达沉默技术
6
． ． ． ． ． ． 1998年
反义RNA(antisense RNA)对基因抑制效应比较微弱； 而双链RNA（dsRNA）能够高效特异性阻断靶基因的 表达。
基因表达沉默技术
7
2006 Nobel Prize in Physiology or Medicine
基因表达沉默技术
4
基本概念
掌握
➢RNA 干 扰 (RNA interference, RNAi): 由 小双链RNA诱发的、同源mRNA高效特异性降 解的现象。
➢小干扰RNA: 具有干扰功能的这种短双链RNA
就 称 为 小 干 扰 RNA （ Small interfering
RNA,siRNA)。 基因表达沉默技术
基因表达沉默技术
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1）靶序列的调出
National Center for Biotechnology Information
基因表达沉默技术
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基因表达沉默技术
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基因表达沉默技术
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2）利用免费设计软件进行siRNA设计 Invitrogen Takara Oligoegine
基因表达沉默技术
靶
基因表达沉默技术
siRNA 在 ATP 参 与 下 形
成RISC复合体，被RNA
解旋酶解旋成单链，并
由其中的反义链指导移
至 靶 mRNA ， 靶 mRNA
被切割后诱发宿主细胞
针 对 这 些 mRNA 的 降 解
反应。
RNA基因沉默的原理及应用
RNA基因沉默的原理及应用1. 概述RNA基因沉默是一种常见的基因表达调控机制，它通过特定的RNA分子干扰来抑制基因的表达。
这一机制在生物学研究和疾病治疗等领域具有重要的应用价值。
本文将重点介绍RNA基因沉默的原理及其在基础研究和生物医学领域的应用。
2. RNA基因沉默的原理RNA基因沉默主要包括两种机制：小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）和microRNA（miRNA）。
2.1 小干扰RNA(siRNA)siRNA是由双链RNA或先导RNA（precursor RNA，pre-RNA）在细胞内被特定核酸酶剪切而产生的小分子RNA。
siRNA通过结合到特定的mRNA上，形成RNA诱导沉默复合物（RNA-induced silencing complex，RISC），RISC可以帮助降解mRNA，从而阻止其转录和翻译过程。
siRNA可以通过人工合成和转染等方式引入细胞内，用于研究基因功能和疾病治疗等领域。
2.2 微小RNA(miRNA)miRNA是一类由内源性基因转录产生的短小非编码RNA分子。
miRNA作为一种调控因子，可以与目标mRNA结合并抑制其翻译过程，从而影响基因表达。
miRNA在细胞分化、发育和疾病进程中发挥重要作用。
研究发现，miRNA与多种疾病的发生和发展密切相关，如癌症、心血管疾病等。
因此，miRNA具有潜在的临床应用价值。
3. RNA基因沉默的应用RNA基因沉默技术在基础研究和生物医学领域有广泛应用，下面将介绍其主要的应用方面。
3.1 基因功能研究通过沉默特定基因的表达，可以研究该基因在生物体内的功能。
siRNA或miRNA可以通过转染或基因敲除等方式引入细胞中，从而实现对目标基因的沉默。
这种方法广泛应用于生物学研究领域，帮助科学家了解基因的功能和调控机制。
3.2 疾病治疗RNA基因沉默技术在疾病治疗中有着巨大的潜力。
通过沉默特定基因的表达，可以干扰疾病相关基因的功能，从而达到治疗的目的。
基因沉默技术：治疗遗传性疾病的新希望
基因沉默技术：治疗遗传性疾病的新希望在医学的广阔天空中，基因沉默技术如同一颗新星，其光芒正在逐渐照亮治疗遗传性疾病的未来。
这项技术，被科学家们形象地比喻为“分子剪刀”，能够精确地剪除或修复导致疾病的基因序列，从而为患者带来新的希望。
首先，让我们来了解什么是基因沉默技术。
简单来说，它是一种通过特定的分子机制，使特定基因的表达受到抑制或完全停止的技术。
这就像是给有问题的基因按下了“静音键”，阻止它继续制造有害的蛋白。
那么，这项技术为何能成为治疗遗传性疾病的新希望呢？让我们来看几个例子。
首先，对于一些由单一基因突变引起的疾病，如囊性纤维化、镰状细胞贫血等，基因沉默技术可以直接针对这些突变基因进行干预，从根本上解决问题。
其次，对于一些复杂的多基因疾病，如癌症、心脏病等，虽然不能直接治愈，但基因沉默技术可以作为一种辅助治疗手段，帮助减轻症状或延缓病程。
当然，任何新技术的出现都会伴随着挑战和争议。
基因沉默技术的安全问题是人们关注的焦点之一。
毕竟，我们是在对生命的基本单位——基因进行操作，稍有不慎就可能引发严重的后果。
此外，如何确保技术的准确性和有效性，也是科学家们需要不断探索的问题。
尽管如此，我仍然对基因沉默技术抱有乐观的态度。
我相信，随着科学研究的深入和技术的进步，这些问题最终将得到解决。
而且，与其他治疗方法相比，基因沉默技术具有不可比拟的优势。
它不仅可以针对病因进行治疗，还可以实现个性化医疗，根据每个患者的具体情况制定治疗方案。
在我看来，基因沉默技术就像是一把双刃剑。
一方面，它为我们提供了治疗遗传性疾病的新途径；另一方面，它也带来了新的挑战和风险。
我们需要谨慎而明智地使用这项技术，确保它真正造福于人类。
最后，我想用一个比喻来结束这篇文章：基因沉默技术就像是一艘航船，正驶向未知的海域。
虽然前方可能充满了风浪和暗礁，但只要我们坚定信念、勇往直前，就一定能够到达理想的彼岸。
在这个过程中，科学家、医生和患者都需要携手合作，共同面对挑战、分享成果。
基因治疗中的基因敲除与基因沉默技术研究
基因治疗中的基因敲除与基因沉默技术研究基因治疗作为一个新兴的医学领域，正在革新传统的疾病治疗方法。
基因敲除和基因沉默技术是其中两个重要的研究方向，它们以调控基因表达为主要目标，通过修改或抑制异常基因功能，为疾病治疗提供了新的思路和方法。
基因敲除是基因治疗中的一项关键技术，它通过改变特定基因的DNA序列，从而阻断或抑制该基因的功能。
基因敲除通常包括两种主要方法：基因剪接和基因编辑。
基因剪接通过利用RNA干扰或核酸酶来诱导靶基因产生错配短片段，从而切断基因的转录和翻译，从而达到靶向敲除的目的。
而基因编辑则通过利用CRISPR-Cas9系统、锌指核酸酶或TALENs等蛋白质来直接修改特定基因的DNA序列，实现基因靶向敲除。
这些技术的发展为疾病治疗提供了更加精确和高效的手段，尤其是在遗传性疾病的治疗方面具有重要意义。
基因敲除技术的应用潜力巨大，可以被应用于各种疾病的治疗和预防。
例如，肿瘤基因疾病中的致病基因可以被敲除，达到抑制肿瘤生长的效果。
此外，基因敲除还可以被用于治疗遗传性疾病，如囊性纤维化、镰状细胞贫血等。
通过敲除致病基因的方法，科学家们尝试着纠正或修复异常基因，从而恢复正常细胞功能。
这为基因治疗提供了新的思路和方法。
与基因敲除相比，基因沉默技术则是通过抑制特定基因的表达来达到治疗效果。
基因沉默技术主要分为两类：RNA干扰（RNAi）和抗义核酸。
RNAi是一种由小分子RNA（siRNA）介导的细胞自救机制，可以抑制特定基因的表达。
通过合成或通过基因转染引入siRNA，可以靶向沉默特定基因。
抗义核酸则是通过合成突变核酸序列使其与特定基因的mRNA互补结合，从而阻断该基因的表达。
这些技术能够在细胞水平上调控基因表达，对于疾病的治疗和研究具有重要意义。
基因沉默技术广泛应用于疾病的治疗和研究。
例如，病毒感染常常通过抑制相关基因的表达来抑制病毒的复制和传播。
通过利用RNAi技术，病毒所需的宿主细胞因子可以被靶向沉默，从而减少病毒的感染能力。
沉默基因的原理及应用研究
沉默基因的原理及应用研究引言沉默基因是指在基因组中存在的一类特殊基因，其表达被抑制或降低，从而影响相关功能的正常发挥。
近年来，沉默基因的研究引起了广泛的关注，其原理和应用也逐渐得到了深入的探索。
本文将介绍沉默基因的原理以及其在生物科学研究和应用领域中的一些重要进展。
原理沉默基因的原理主要涉及RNA干扰（RNA interference）机制，即通过RNA分子的介入干扰基因表达的过程。
其一般过程包括以下几个关键步骤：1.siRNA产生： siRNA（小干扰RNA）是沉默基因的关键分子，在RNA干扰机制中发挥重要作用。
siRNA由一条双链RNA分子在细胞内产生，并被酶切成20-25个核苷酸的小片段。
2.RISC复合体形成： siRNA进入细胞质后，与RISC（RNA导向的RNA内切复合体）相结合，形成RISC复合体。
RISC复合体是发挥RNA干扰作用的关键复合物。
3.靶基因沉默： RISC复合体通过与靶基因mRNA相互作用，引发RNA降解或抑制翻译等过程，从而导致靶基因的表达受到抑制或降低。
应用研究沉默基因的发现为生物科学研究和应用领域带来了许多新的机会和挑战。
以下是一些目前常见的沉默基因应用研究领域和实际应用场景：1. 基因功能研究沉默基因技术为研究基因功能提供了一种有力的工具。
通过沉默基因的靶向抑制或降低，研究人员可以快速验证和分析基因对生物体发育、生长、代谢等过程的影响。
这种方法广泛应用于模式生物和植物等领域，可以帮助科学家们更好地理解基因的功能和相互作用。
2. 遗传病治疗沉默基因技术在遗传病治疗中也有广泛的应用前景。
许多遗传病都是由于某个基因表达异常或突变引起的，通过沉默具有病理性的基因，可以有效地减轻或治愈疾病症状。
例如，研究人员利用沉默基因技术成功治疗了一些遗传性失聪病例，为相关疾病的治疗提供了新的思路和方法。
3. 农作物改良沉默基因技术在农业领域中被广泛应用于农作物的改良和优化。
通过抑制特定基因的表达，可以提高作物的抗病性、耐逆性、产量等性状。
sirna原理
sirna原理
sirna是一种通过介导基因沉默来控制基因表达的技术。
其原
理是利用小分子RNA（siRNA）特异性地与目标mRNA序列
结合，形成RNA复合物，从而导致该mRNA降解或抑制其翻译过程。
siRNA由双链RNA片段组成，其中一个链被称为sense链，
与目标mRNA序列完全互补，另一个链被称为antisense链，
与sense链互补。
在细胞中，siRNA与RNA诱导沉默复合物（RISC）结合，并通过RISC的导引作用进入细胞质。
一旦进入细胞质，反义链被解开，sense链则与目标mRNA序列配对。
这种siRNA-mRNA配对导致RNA酶活性的激活，从而引发
目标mRNA的降解或抑制其翻译。
该技术的应用广泛，可以用于研究基因功能、验证药物靶点并治疗各种疾病。
通过选择性地沉默目标基因，sirna可以干扰
异常基因的表达，并从而实现对疾病的治疗。
此外，sirna还
可以被用于RNA干扰（RNA interference）技术中，通过降低
或消除特定基因的表达，来研究基因功能和寻找新的药物靶点。
总而言之，sirna通过特异性沉默目标基因的表达，为基因研
究和治疗提供了一种有效的手段。
其原理简单而直接，具有广泛的应用前景。
基因沉默原理
基因沉默原理基因沉默是指在细胞内通过特定的机制抑制基因的表达，从而影响蛋白质的合成和功能。
基因沉默是一种重要的遗传调控方式，对生物体的发育、生长、代谢和适应环境等方面起着重要作用。
基因沉默的机制主要包括转录后基因沉默（TGS）和转录前基因沉默（TGS）。
转录后基因沉默是指在基因转录后，利用RNA介导的DNA甲基化或染色质重构等方式抑制基因的表达。
而转录前基因沉默则是指通过RNA干扰（RNAi）等机制，在基因转录前抑制基因的表达。
基因沉默的实现主要依赖于RNA介导的机制。
在RNA介导的DNA甲基化中，RNA会与DNA结合形成双链RNA-DNA杂交，从而招募DNA甲基转移酶和其他辅助蛋白，最终导致DNA甲基化，使得基因表达受到抑制。
而在RNAi中，双链RNA会被酶切成短的siRNA或miRNA，这些小RNA分子会与靶基因的mRNA结合，从而导致mRNA的降解或翻译抑制，最终实现基因的沉默。
基因沉默在生物体内起着重要的调控作用。
首先，基因沉默可以帮助细胞对外界环境进行快速响应。
当生物体受到外界环境的刺激时，通过基因沉默可以迅速调整基因表达，从而适应新的环境。
其次，基因沉默还参与了生物体的发育和分化过程。
在胚胎发育中，基因沉默可以调控特定基因的表达，从而确保胚胎的正常发育。
另外，基因沉默还参与了生物体的免疫应答和抗病过程。
通过基因沉默，生物体可以抑制病原体的基因表达，从而增强自身的抵抗能力。
基因沉默的研究不仅对于理解生物体的遗传调控机制具有重要意义，同时也为疾病的治疗和基因工程技术的发展提供了重要的理论基础。
在疾病治疗方面，通过调控基因的沉默可以靶向性地抑制病原体的基因表达，从而实现疾病的治疗。
在基因工程技术方面，基因沉默可以帮助科学家对特定基因进行精准编辑和调控，从而创造出更加强大和适应性更强的生物体。
总的来说，基因沉默作为一种重要的遗传调控方式，对于生物体的发育、生长、代谢和适应环境等方面起着重要作用。
基因表达沉默技术在癌症治疗中的应用研究
基因表达沉默技术在癌症治疗中的应用研究随着现代医学技术的日益发展，癌症治疗也逐渐取得了重大进展。
然而，现有的治疗方式仍然存在很多限制，如药物耐受性、治疗副作用和缺乏精准性等。
因此，为了更好地治疗癌症，科学家们正在加紧研究基因表达沉默技术在癌症治疗中的应用。
基因表达沉默技术是指通过某种方法使特定基因的表达量减少或被完全抑制的技术。
其中，RNA干扰（RNAi）技术是最常用的一种。
RNAi是一种自然的现象，即小型RNA能够干扰靶向RNA的表达，从而抑制特定基因的表达。
科学家们通过合成siRNA（small interfering RNA）或shRNA（short hairpin RNA）并将其导入到癌细胞中，从而实现对特定基因的沉默。
实验证明，基因表达沉默技术在癌症治疗中具有广泛的应用前景。
一、基因表达沉默技术在癌细胞治疗中的应用基因表达沉默技术已被广泛应用于癌细胞的治疗。
例如，利用RNAi抑制肿瘤相关基因可以阻止癌细胞的增殖和扩散，从而达到治疗癌症的目的。
细胞外成分siRNA的递送是利用外源性的技术将siRNA传递到目标细胞中，以抑制特定基因的表达，从而实现治疗癌症的效果。
近年来，各种各样的靶向癌细胞的siRNA递送系统得到了广泛地研究和应用，如脂质体、聚合物、蛋白质骨架、去核肝素等。
二、基因表达沉默技术在肿瘤治疗中的应用基因表达沉默技术不仅可以治疗癌细胞，还可以治疗恶性肿瘤。
例如，在胃癌治疗中，科学家们利用siRNA技术抑制mTOR（靶向雷帕霉素）基因表达，从而阻止癌细胞增殖。
此外，基因表达沉默技术可以提高肿瘤细胞对放疗和化疗的敏感性，减少治疗副作用，提高治疗效果。
三、从基因表达沉默技术看癌症个体化治疗基因表达沉默技术扩展了治疗癌症的范围，使我们能够实现更精准的个体化治疗。
癌症的治疗效果受到许多因素的影响，包括肿瘤的个体化基因表达模式、癌细胞类型、患者的个人差异等。
基因表达沉默技术可以根据白细胞或组织细胞等来确定患者的基因表达模式，从而实现更精确的个体化治疗。
基因沉默的原理
基因沉默的原理
1.基因沉默的概念
基因沉默是指在转基因生物中，某些基因的表达水平降低到
几乎检测不到的程度，而另一些基因的表达水平则明显升高。
转
基因生物的某些性状与正常生物体完全相同，而另一些性状却显
著降低。
通过转基因技术，可以获得具有高表达或低表达的转基
因生物，但转基因生物不能正常繁殖后代。
目前，人们对此已有
较深入的了解。
基因沉默现象是指生物体在正常生理情况下，某
些基因或蛋白质在 mRNA水平上不表达甚至丧失表达水平的现象。
如一个细胞内有一种名为“沉默因子”的酶，它能够使 mRNA发
生降解。
当某种病毒感染细胞时，病毒基因组被破坏，同时病毒
中“沉默因子”大量减少，使 mRNA降解受阻，最后使细胞内原
有的正常基因及蛋白质不能正常表达。
2.基因沉默对人类健康的影响
1.一些与生殖有关的疾病，如男性不育、女性不孕等与基因
沉默有关。
2.基因沉默能促进癌症患者化疗及放疗后的康复。
3.基因沉默可使已被杀死的肿瘤细胞重新生长。
—— 1 —1 —。
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31
基本概念
• 反义寡核苷酸概念：正义链互补的一段核苷酸序 列，包括反义DNA和反义RNA。
反义DNA 技术
反义RNA 技术
32
反义抑制的主要机理
直接作用于靶 mRNA的SD序列或部分编码区，直 接抑制翻译，或与靶 mRNA结合形成双链 RNA， 从而易被RNA酶H降解。 mRNA 反义 核酸
40
Tysabri
2004 专治多发性硬化症
41
42
第三节 核酶技术
43
基本概念
核酶（ribozyme） ribonucleic acid enzyme 具有催化活性的 RNA ，化学本质是 RNA, 却 具有酶的催化功能。
44
历史由来
1982
切赫(T.R.Cech)（1947-），美国人, 他独立地发现发现四膜虫转录 产物rRNA前体，可切除自身的 413个核苷酸的内含子，使两个 外显子拼接起来，变成成熟的 rRNA分子。
取自小鼠受精卵发育第4，5天的胚胎细胞
能在体外培养，保留发育的全能性 1981 年 ， 马 丁 · 埃 文 斯 (Martin J ． Evans) 从正常的小鼠囊胚中 分离到了ES细胞。小鼠ES细胞的 分离和应用是ES细胞技术发展的 里程碑。
52
b. 同源重组技术应用
同源重组：是指发生在减数分裂或者有丝分裂过程中 相同或者相似DNA序列间的重组，通常通过一对同源分 子非姊妹染色体间的断裂而产生新的重组片段。
37
第二代修饰(2’-O-methyl,2’-O-methoxyethyl)
Resisting To Nucleases；not activating RNase H pathways 38
Macugen 哌加他尼
2001 主要用于治疗老年人中十分常见的视网膜黄斑退化症
39
Fuzeon
2003 新一代抗HIV新药，属于病毒的融合阻止剂类药物
siRNA 在 ATP 参 与 下 形 成RISC复合体，被RNA 解旋酶解旋成单链，并 由其中的反义链指导移 至 靶 mRNA ， 靶 mRNA 被切割后诱发宿主细胞 针 对 这 些 mRNA 的 降 解 反应。 10
重点
靶
siRNA siRNA实验设计
19 bp duplex
难点
21 nt
2 nt 3 overhangs
隆富集的倍数高 3~10 倍，真正使 得同源重组技术得以应用。
丙氧鸟苷
马里奥· 卡佩基安德(Mario R．Capechiand)
55
Oliver Smithies 奥利弗· 史密斯
Martin Evans 马丁· 埃文斯
Mario Capecchi 马里奥· 卡佩基
56
原理和操作流程
57
58
11
’
1）靶序列的调出
National Center for Biotechnology Information
12
13
14
2）利用免费设计软件进行siRNA设计
Invitrogen
Takara Oligoegine
15
软件的选择原则
1 、选择可读框内、翻译起始位点之后 50 ～100nt 的序列作为靶序列； 2、选择的靶位5’端之前的两个碱基为AA；
RNase H
33
反义核酸应用
论著超过１６０００篇。
•基因功能研究（ 1994年流行）
•如抗病毒或抗肿瘤基因治疗研究等领域。
34
1998年8月27日，美国食品药品管理局（FDA）正 式批准了由ISIS公司开发的全球第一个反义药物 “Vitravene” （福米韦生，fomivirsen）在美国 上市。 该药抗病毒作用较强，是更昔洛韦的1000倍，用 于治疗巨细胞病毒性视网膜炎和艾滋病人并发巨 细胞视网膜炎,有效率高达80%-90%。 Vitravene为注射剂，患者每月只需注射一次药物 （利用专用针头直接注射进眼球内），不良反应 有虹膜炎、玻璃体炎，发生率为25％，用糖皮质 激素治疗可缓解或消除其炎性反应。
1978年，Stephenson 和Zamecnik首次报道了
反义寡脱氧核苷酸可抑制劳斯肉瘤病毒RSV的 复制现象。 1984 年，Izant weintraub提出了“反义核 酸技术”的概念。 Inhibition of Rous sarcoma viralRNA translation by a specific
3、GC含量控制在35%～65%,最好50%左右；
4、碱基数目控制在19～21nt；
5、避免连续3个或3个以上的相同碱基； 7、靶序列同数据库进行BLAST同源性比对。
16
6、避免重复序列或回文结构以免形成发夹状结构；
我用的软件：siDirect
17
3）siRNA合成或表达
RNA聚合酶Ⅲ启动子（包括U6或H1）：
53
1985年，奥利弗· 史密塞斯(Oliver Smithies) 等首次报道在肿瘤细胞 中实现了人工打靶载体和内源 β球蛋白基因间的同源重组。
54
1988 年，卡佩基安德等发展了一
种称为“正负筛选”的策略，将
胸腺嘧啶激酶基因（ tk ）置于打 靶载体的外侧，作为筛选的负性
标记。这比单用阳性筛选正确克
5
发现历史
1995年． ． ． ． ． ．
antisense sense
注射
注射
秀丽线虫
6
． ． ． ． ． ． 1998年
反义RNA(antisense RNA)对基因抑制效应比较微弱；
而双链RNA（dsRNA）能够高效特异性阻断靶基因的
表达。
7
2006 Nobel Prize in Physiology or Medicine
基因表达沉默技术
药学系药物基因组学教研室
2010.06.18
1
教学内容及要求
1 2
RNA干扰 技术 反义核酸技术 核酶技术 基因敲除技术
重点
3
4
熟悉
2
参考资料
《基因工程及其分子生物学基础-基因 工程分册》，北京大学出版社，静国 忠编 自备材料（个人实践经验）
3
第一节 RNA干扰技术
4
基本概念
掌握
RNA 干 扰 (RNA interference, RNAi): 由 小双链 RNA 诱发的、同源 mRNA 高效特异性降 解的现象。
小 干 扰 RNA: 具 有 干 扰 功 能 的 这 种短双 链 RNA 就称为小干扰 RNA （ Small interfering RNA,siRNA)。
感想 1.意外=Key 2.科研选题：follow or create? 3.Pure scientist
60
作业
1. 简述RNAi实验设计流程
2. 简述马里奥· 卡佩基安德(Mario R．Capechiand)的“正负筛选”的策略
61
62
2１个硫代磷酸酯寡聚脱氧核苷酸组成 ５＇－ＧＣＧＴＴＴＧＣＴＣＴＴＣＴＴＣＴＴＧＣＧ－３＇
35
技术难点
提高有效性
a.避免内源性核酸酶对其降解 b.提高自身稳定性以及与靶分子的亲和力
H
deoxyribose
36
第一代硫代修饰（Phosphorothioate）
O
Resisting To Nucleases；Activating RNase H pathways
Andrew Z. Fire 安德鲁· 菲尔
Craig C. Mello 克雷格· 梅洛
8
RNAi现象的普遍性
随后陆续发现 RNAi 也存在于水稻、烟草、果 蝇、小鼠及人等几乎所有的真核生物中。
9
RNAi 机制
外 源 长 dsRNA 在 ATP 作 用下被RNaseⅢ Dicer切 割成 21nt 左右 、 由 正义 和反义链组成的siRNA
Protein: Western blot
17siRNA
Mock
24
5)合成or构建载体？
A. 化学合成siRNA： 瞬时转染 实验花费高 使用的时候，要用二乙基焦碳酸酯（DEPC）处理过的灭 菌蒸馏水溶解，这是因为siRNA易被RNA酶降解。
B.载体：为了长期观察基因沉默后的影响，需要长期表达 siRNA。
小结
1、RNAi技术： 基本概念； RNAi技术发展历史； RNAi机制； RNAi设计。 2、反义核酸技术： 基本概念； 技术应用。 3、核酶技术： 核酶概念； 核酶发展历史； 核酶技术应用。 4、基因敲除技术： 基因敲除技术的概念； 基因敲除技术的发展历史； 基因敲除技术的建立及技术流程。
59
C. 载体选择：易转染的细胞用质粒载体，难转染的细胞 用逆转录载体或慢病毒载体。
25
6）体外导入细胞
a.脂质体转染：
＋＋ ＋ ＋ ＋
－ － － － － ＋ －
具体操作步骤： 按照脂质体说明书进行
26
b.电穿孔导入：
27
c.病毒感染（以腺病毒为例）：
28
29
第二节 反义核酸技术
30
历史由来
转录起始点明确； 转录生成小RNA； 转录产物无polyA尾； 转录终止为5个连续的U。
18
19
20
21
3 mg/ml 正向引物 1 μl 3 mg/ml 反向引物 1 μl 90°C 4 min 70°C 10 min 室温
22
4) siRNA working?
23
mRNA:Real-time PCR