血涂片制备染色及白细胞形态

血涂片制备
推片 血液
载玻片
一张满意的血涂片应厚薄均匀
头
体
尾
将推片匀速向前，勿停顿。涂 片的厚薄取决于速度和角度。
涂片干燥后用铅笔在血涂片的头
部写上姓名和编号
B 123
李 四
2. 血 涂 片 染 色
涂片干燥后加瑞氏染色Ⅰ液58滴覆盖整个血膜1分钟
再加瑞氏染色Ⅱ液5-8滴，Ⅰ 液和Ⅱ液充分混匀静置5分钟
血涂片制备、染色及白 细胞形态观察
实验内容
• 1.血涂片制备 • 2.血涂片染色 • 3.正常白细胞形态观察
目的：掌握血涂片的制备方法、瑞吉氏染色方 法，观察正常白细胞形态。
染色原理：根据不同种类细胞及细胞的不同成分 ，对酸性及碱性染料结合能力不同， 而使各种细胞呈现各自的特点。
器材：载玻片、推片、染架、吸耳球、显微镜、 微量吸管、拭镜纸。
• 2.使用玻片：只能手持玻片边缘,切勿触及玻片 表面,以保持玻片清洁、干燥、中性、无油腻。
注 意 事 项 推片
• 3.良好的血涂片,厚薄适宜,头体尾分明,分 布均匀,边缘整齐, 两侧留有空隙。
血滴越大，角度越大，速度越大，血膜越厚。
• 4.血涂片干透后方可染色，否则染色过程中 血膜容易脱落。血涂片制好后最好立即固定 染色,以免细胞溶解和发生退行性变。
细胞核型 杆状
中性叶
圆形
粉红色
量多 细小 均匀 紫红色
2-5叶
嗜酸
圆形
不清
粗大整齐均匀橘黄色
2叶眼镜形
嗜碱
圆形
不清
量少 排列紊乱 不均紫黑色 覆盖核上
核形不清
单核
圆 椭圆
灰蓝色
细小尘土样紫红色
淋巴 圆 椭圆 透明 淡蓝色 多无 大细胞可有少量
肾型 马蹄形
圆 椭圆 肾形
红细胞
淡红色，无核的 圆形细胞，因红 细胞为双凹形， 故边缘部分染色 较深，中心较浅， 直径7-8μm。
中性分叶核粒细胞
体积略大于红细胞，细胞核被染成紫色分叶状，可 分2-5叶。直径10-12μm 。
嗜酸性粒细胞
略大于嗜中性白细胞，细胞核染成紫色，通常为2叶， 胞质充满嗜酸性大圆颗粒，被染成桔红色。直径1015 μm 。
嗜碱性粒细胞
体积略小于嗜酸性白细胞，细胞中有大小不等被染成紫 色的颗粒，颗粒数目较嗜酸性白细胞的颗粒少，核1-2叶， 染成淡蓝色。直径10-11 μm 。
血小板
形状不规则，一般呈圆形，比红细胞和白细胞小得多， 无细胞核，有质膜。 血小板在长期内被看作是血液中无功能的细胞碎片。
分析讨论
1. 本次实验的关键环节是什么？ 2. 同一标本不同组分类是否一致，原因分析。 3. 5种白细胞形态绘图。
Thank you for your attention !
单核细胞
体积最大，细胞圆形。胞质染成灰蓝色。核呈肾形或 马蹄形，染色略浅于淋巴细胞的核。直径14-20 μm 。
淋巴细胞
小淋巴细胞：与红细胞大小相似，圆形，核致密，染成 深紫色。周围细胞质嗜碱性，染成淡蓝。
大淋巴细胞：较大，核圆形。直径6-8 μm 。
细胞 中性杆
形态 圆形
胞质着色 粉红色
胞质内颗粒 量多 细小 均匀 紫红色
直接在无血膜处 流水冲洗3-5分钟
123
血涂片干燥后用油镜分 类计数200个白细胞
李 四
注 意 事 项 玻片
• 1.玻片清洗：新玻片常有游离碱质,因此应用 清洗液或10%盐酸浸泡24h,然后再彻底清洗。用 过的玻片可放入适量肥皂水煮沸20min,再用热 水将肥皂和血膜洗去,自来水反复冲洗,必要时 再置95%乙醇中浸泡1h,然后擦干或烤干备用。
注 意 事 项 染色
• 5.H+影响细胞染色,配制染液必须用优质甲醇,稀释染液 必须用缓冲液,近中性水冲洗,否则各种细胞染色反应异 常,致使细胞的识别困难,甚至造成错误。
• 6.染色时间与染液浓度、室温高低、细胞多少有关。染 液越淡、室温越低、细胞越多,染色时间越长或适当增 加染液量。
• 7.染液不可过少,以防蒸发干燥染料沉着于血涂片上难 冲洗干净。流水冲去染液,不能先倒掉染液,以免染料沉 着于血涂片上。冲洗时间不宜过久，以防脱色。
试剂：瑞吉氏染液、磷酸盐缓冲液、Βιβλιοθήκη Baidu柏油、 乙醇-乙醚溶液。
标本：抗凝血。
1. 血 涂 片 制 备
血液充分抗凝。
微量吸管虹吸取血7-8μl，置 血滴于载玻片一端。
左手持载玻片，右手持推片， 将推片置血滴前方，向后移 动到接触血滴，使血滴沿推
片边缘展开成线状。
血涂片制备
推片与载片呈30°～40°角，向另一端匀速地推出。
3. 血涂片的观察
低倍镜观察
1.染色情况(满意、偏酸、偏碱） 2.细胞分布情况 油镜下分类计数：体尾交界处。 油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。
李 四
123
中性分叶核粒细胞 嗜酸性粒细胞
中性杆状核粒细胞 嗜碱性粒细胞
单核细胞 淋巴细胞
正
中性杆状核粒细胞
常
细
胞
形
态
胞体：圆形，直径 10-15μm。 胞核：核形不一，呈S形、U形等，核凹陷程度大于核直径 的1/2，核最窄径大于最宽径的1/3。核色质粗糙成块。 胞浆：胞质量丰富，充满浅红色中性颗粒。